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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201410585553.8 (22)申请日 2014.10.28 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 104352850 A (43)申请公布日 2015.02.18 (73)专利权人 广西中医药大学 地址 530200 广西壮族自治区南宁市五合 大道13号 (72)发明人 银胜高 夏天 辛宁 郭敏 辛华 周江煜 龚名师 王柳萍 李红菊 (74)专利代理机构 广西南宁明智专利商标代理 有限责任公司 45106 代理人 黎明天 (51)Int.Cl. A61K 36/。
2、899(2006.01) A61P 25/22(2006.01) 审查员 尹瑶菲 (54)发明名称 竹茹提取物的提取方法 (57)摘要 本发明涉及医药技术领域， 特别涉及竹茹提 取物的提取方法。 该提取方法获得的竹茹提取物 可以用于制备抗焦虑药物。 本发明提供的竹茹提 取物能够有效治疗焦虑症。 权利要求书1页 说明书3页 CN 104352850 B 2018.04.27 CN 104352850 B 1.一种竹茹提取物， 其特征在于， 通过包括如下步骤获得： 步骤1： 取竹茹加水提取， 过滤后收集滤液， 经第一浓缩至相对密度为1.121.15， 获得 第一浸膏； 步骤2： 取所述第一浸膏与氯。
3、仿和正丁醇的混合溶液经Sevage法脱蛋白， 收集水层， 经 第二浓缩至相对密度为1.201.23， 获得第二浸膏； 步骤3： 取所述第二浸膏加入浓度为8095的乙醇醇沉2024h， 离心后收集沉渣， 加 入水搅拌溶解， 经第三浓缩至相对密度为1.121.18， 获得第三浸膏， 过滤后收集滤液， 即 得； 以g/mL计， 所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为1： 14， 所述沉渣与水的质量体积比为 1 37。 2.根据权利要求1所述的竹茹提取物， 其特征在于 步骤1中， 以g/mL计， 所述竹茹与水 的质量体积比为1 1020。 3.根据权利要求1所述的竹茹提取物， 其特征在于 所述第一浓缩、 第。
4、二浓缩或第三浓 缩为在7080， 真空度为0.040.06MPa的条件下浓缩。 4.根据权利要求1所述的竹茹提取物， 其特征在于 所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体 积比为5 1。 5.根据权利要求1所述的竹茹提取物， 其特征在于 步骤2中所述第一浸膏与所述混合 溶液的体积比为1 1。 6.根据权利要求1所述的竹茹提取物， 其特征在于， 步骤2中所述收集水层后、 所述第二 浓缩前还包括经300目滤布过滤的步骤。 7.根据权利要求1所述的竹茹提取物， 其特征在于 步骤3中所述离心为在3000rpm的条 件下离心30min。 8.根据权利要求17任一项所述的竹茹提取物在制备抗焦虑药物中的应用。 权 利。
5、 要 求 书 1/1 页 2 CN 104352850 B 2 竹茹提取物的提取方法 技术领域 0001 本发明属于医药技术领域， 具体涉及一种竹茹提取物的提取方法。 背景技术 0002 焦虑症 （Anxiety） 是一种以焦虑情绪为主的神经症， 主要表现为发作性或持续性 焦虑、 紧张、 惊恐不安等， 伴有一系列躯体症状和病理变化， 发病机制复杂， 主要涉及神经递 质-受体、 神经调质-受体、 神经内分泌网络的精细调节。 0003 竹茹为禾本科植物青秆竹Bambusa tuldoides Munro、 大头典竹Sinocalamus beecheyanus (Munro) McClure va。
6、rpubescens P F Li或淡竹Phyllostachys nigra (Lodd.) Munro varhenonis (Mitf.) Stapf ex Rendle的茎秆的干燥中间层。 竹茹临床 运用历史悠久， 始载于 金匮要略 ， 名为 “竹皮” ， 其味甘， 性微寒， 归肺、 胃经， 具有清热化 痰， 除烦止呕的功能， 主要含有木栓酮、 羽扇豆烯酮及其同系物为主的五环三萜类化合物 等， 具有抗自由基、 抗氧化、 抗疲劳、 抗肿瘤、 降血压等生理和药理活性， 主要用于治疗烦热 呕吐、 呃逆、 痰热咳喘、 恶阻、 胎动、 惊痫等。 但用竹茹或竹茹提取物制备抗焦虑药物尚未见 报道。 。
7、发明内容 0004 本发明的目的是提供一种竹茹提取物的提取方法。 该提取方法获得的竹茹提取物 可以用于制备抗焦虑药物。 0005 为了实现上述发明目的， 本发明提供以下技术方案： 0006 本发明提供了一种竹茹提取物的提取方法， 包括如下步骤： 0007 步骤1 ： 取竹茹加水提取， 过滤后收集滤液， 经第一浓缩至相对密度为1.12 1.15， 获得第一浸膏； 0008 步骤2 ： 取所述第一浸膏与氯仿和正丁醇的混合溶液经Sevage法脱蛋白， 收集水 层， 经第二浓缩至相对密度为1.201.23， 获得第二浸膏； 0009 步骤3 ： 取所述第二浸膏加入浓度为8095的乙醇醇沉2024h， 。
8、离心后收集沉 渣， 加入水搅拌溶解， 经第三浓缩至相对密度为1.121.18， 获得第三浸膏， 过滤后收集滤 液， 即得； 以g/mL 计， 所述第二浸膏与乙醇的质量体积比为1:14， 所述沉渣与水的质量体 积比为1 37。 0010 Sevage法： 利用蛋白质在三氯乙烷等有机溶剂中变性的特点， 将提取液与Sevage 试剂氯仿 正丁醇5 1(V/V) 按照体积比为1 1 混合， 振荡， 离心， 变性后的蛋白质介于 提取液与Sevage试剂交界处。 此法的优点是条件温和， 不会引起多糖的变性。 0011 本发明中， 所述竹茹为禾本科植物青秆竹Bambusa tuldoides Munro、 。
9、大头典竹 Sinocalamus beecheyanus (Munro) McClure varpubescens P F Li或淡竹 Phyllostachys nigra (Lodd.) Munro varhenonis(Mitf.) Stapf ex Rendle的茎秆的 干燥中间层。 说 明 书 1/3 页 3 CN 104352850 B 3 0012 本发明步骤1中， 以g/mL 计， 所述竹茹与水的质量体积比为1 1020。 0013 所述第一浓缩、 第二浓缩或第三浓缩为在7080， 真空度为0.040.06MPa 的 条件下浓缩。 0014 所述混合溶液中氯仿和正丁醇的体积比为。
10、5 1。 0015 本发明步骤2 中所述第一浸膏与所述混合溶液的体积比为1 1。 0016 步骤2 中所述收集水层后、 所述第二浓缩前还包括经300 目滤布过滤的步骤。 0017 本发明步骤3 中所述离心为在3000rpm 的条件下离心30min。 0018 本发明还提供了上述提取方法获得的竹茹提取物。 0019 本发明还提供了上述提取方法获得的竹茹提取物在制备抗焦虑药物中的应用。 0020 本发明提供了一种竹茹提取物的提取方法。 该提取方法获得的竹茹提取物可以用 于制备抗焦虑药物。 本发明提供的竹茹提取物能够有效治疗焦虑症。 具体实施方式 0021 为了使本领域的技术人员更好地理解本发明的技。
11、术方案， 下面结合具体实施例对 本发明作进一步的详细说明。 0022 本发明提供的竹茹提取物的提取方法中， 所用原料及试剂均可由市场购得。 0023 实施例1： 0024 取竹茹药材100g， 粉碎后加10 倍量水， 煎煮60分钟， 提取液过滤， 在温度为80， 真空度为0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度1.15(80)， 加入同体积的氯仿和正丁醇的混 合溶液 （氯仿和正丁醇的体积比为5 1） ， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为80， 真 空度为0.06MPa的条件下浓缩至相对密度为1.23(80)， 获得浸膏18g， 加入4倍量80乙醇 醇沉， 静置24 小时， 收集沉渣离心， 。
12、回收乙醇， 再加入7倍量水搅拌溶解， 在温度为80， 真 空度为0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度1.18(80)， 过滤， 喷雾干燥， 即得竹茹提取物 4.5g。 0025 对获得的竹茹提取物进行检测， 结果如下： 0026 竹茹多糖的鉴别： 鉴别方法为苯酚-硫酸试剂反应(阳性)， 本发明提供的竹茹提取 物中含有竹茹多糖。 0027 竹茹多糖含量： 47.1 ( 用苯酚- 硫酸法测定) （参考 中国药典 2010年版二部） 0028 实施例2： 0029 取竹茹药材100g， 粉碎后加20 倍量水， 煎煮40分钟， 提取液过滤， 在温度为70， 真空度为0.04MPa 的条件下浓缩至相对。
13、密度1.12(80)， 加入同体积的氯仿和正丁醇的混 合溶液 （氯仿和正丁醇的体积比为5 1） ， 除去中间白色絮状沉淀， 取水层在温度为80， 真 空度为0.05MPa的条件下浓缩至相对密度为1.20(80 )， 获得浸膏19g， 加入3倍量95乙 醇醇沉， 静置24 小时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入5倍量水搅拌溶解， 在温度为80， 真空度为0.04MPa 的条件下浓缩至相对密度1.12(80)， 过滤， 喷雾干燥， 即得竹茹提取物 5.1g。 0030 对获得的竹茹提取物进行检测， 结果如下： 0031 竹茹多糖的鉴别： 鉴别方法为苯酚- 硫酸试剂反应( 阳性)， 本发明提供的。
14、竹茹提 取物中含有竹茹多糖。 说 明 书 2/3 页 4 CN 104352850 B 4 0032 竹茹多糖含量： 49.3 (用苯酚- 硫酸法测定) （参考 中国药典 2010年版二部） 0033 实施例3： 0034 取竹茹药材100g， 粉碎后加15 倍量水， 煎煮30分钟， 提取液过滤， 在温度为75， 真空度为0.05MPa 的条件下浓缩至相对密度1.13(80)， 加入同体积的氯仿和正丁醇的混 合溶液 （氯仿和正丁醇的体积比为5 1） ， 除去中间白色絮状沉淀， 收集水层， 经300目滤布过 滤， 滤液在温度为80， 真空度为0.04MPa的条件下浓缩至相对密度为1.22(80 。
15、)， 获得浸 膏17g， 加入1倍量80乙醇醇沉， 静置24 小时， 收集沉渣离心， 回收乙醇， 再加入3倍量水搅 拌溶解， 在温度为80， 真空度为0.06MPa 的条件下浓缩至相对密度1.15(80)， 过滤， 喷 雾干燥， 即得竹茹提取物4.8g。 0035 对获得的竹茹提取物进行检测， 结果如下： 0036 竹茹多糖的鉴别： 鉴别方法为苯酚- 硫酸试剂反应( 阳性)， 本发明提供的竹茹提 取物中含有竹茹多糖。 0037 竹茹多糖含量： 50.9 (用苯酚- 硫酸法测定) （参考 中国药典 2010年版二部） 0038 临床试验： 0039 一、 一般资料 0040 60例焦虑症患者， 。
16、符合 中国精神障碍分类和诊断标准 第3版焦虑症的诊断标准， HAMA14 分。 无系统疾病、 无药物滥用史及过敏史， 无脑部器质性病变。 排除妊娠及哺乳期 妇女， 排除合并有严重的器官疾病， 排除伴有严重的躯体疾病的抑郁症患者。 其中男性27 例， 女性33 例， 年龄1860岁， 病程211个月， 平均病程5.41.5个月。 0041 二、 治疗方法 0042 本组病例均采用口服实施例1制备的竹茹提取物， 每日三次， 每次35g, 连续服 用8周。 允许患者同时使用常规剂量的唑吡坦、 佐匹克隆、 咪达唑仑、 阿普唑仑、 氯硝西泮等 改善睡眠， 均睡前服用， 连续使用不超过2周。 但禁用其他精。
17、神药物、 系统心理治疗和电痉挛 治疗等。 0043 三、 疗效评价 0044 抗焦虑疗效评价采用 中国精神障碍分类和诊断标准 第3版的焦虑量表( HAMA) ， 同时对血常规、 肝肾功能、 心电图等检查项目进行监测。 在治疗前与治疗后第4周及第8周 分别进行疗效评价。 0045 四、 临床效果 0046 本组病例在治疗前后， HAMA 总分分值差异显著(P 0.05) , 治疗后HAMA 总分分 值呈下降趋势， 第4周差异显著 ( P 0.05) ， 第8周差异非常显著( P 0.01)。 其中第4 周有效34例， 有效率56.7%； 第8 周累计有效55例， 累计有效率91.7%。 0047 提示本发明中的竹茹提取物对焦虑症具有显著的治疗效果。 说 明 书 3/3 页 5 CN 104352850 B 5 。