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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710121659.6 (22)申请日 2017.03.02 (71)申请人 南京柯菲平盛辉制药有限公司 地址 211200 江苏省南京市溧水经济技术 开发区(南区)水保路28号 (72)发明人 苏梅 仇亚男 (51)Int.Cl. A61K 31/58(2006.01) A61P 9/10(2006.01) (54)发明名称 一种丹参酮A磺酸钠杂质在治疗急性心肌 缺血中的应用 (57)摘要 本发明涉及一种丹参酮A磺酸钠杂质在医 药中的新用途。 本发明提供了一种丹参酮A磺 。
2、酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺 血中的新应用。 权利要求书1页 说明书5页 CN 108524526 A 2018.09.14 CN 108524526 A 1.一种如式 所示的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺血中 的应用 。 2.根据权利要求1所述的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺 血中的应用， 其特征是， 所述的治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺血中的应用为在治疗心 肌损伤血清标志蛋白CK-MB、 AST、 LDH中的应用。 3.根据权利要求1所述的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺 血中的应用， 其特征是， 所述的治疗异丙肾上腺素。
3、所致急性心肌缺血中的应用为在治疗急 性心肌缺血血清氧化及内源性抗氧化酶水平中的应用。 4.根据权利要求1所述的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺 血中的应用， 其特征是， 所述的治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺血为在治疗心肌组织ATP 酶中的应用。 5.根据权利要求1所述的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺 血中的应用， 其特征是， 所述的治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺血为在治疗左心室功能 中的应用。 6.根据权利要求1所述的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺 血中的应用， 其特征是， 所述的治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺血为在治疗心肌梗死中 的应。
4、用。 7.根据权利1-6任一权利要求所述的丹参酮A磺酸钠杂质在治疗异丙肾上腺素所致 急性心肌缺血中的应用， 其特征是， 所述的一种丹参酮A磺酸钠杂质与可药用载体制备成 口服制剂或注射剂。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108524526 A 2 一种丹参酮A磺酸钠杂质在治疗急性心肌缺血中的应用 技术领域 0001 本发明涉及一种丹参酮A磺酸钠杂质在医药中的新用途， 具体地说是在对异丙 肾上腺素所致急性心肌缺血中的新应用。 属于医药技术领域。 背景技术 0002 心肌缺血， 是指心脏的血液灌注减少， 导致心脏的供氧减少， 心肌能量代谢不正 常， 不能支持心脏正常工作的一种病理状态。 。
5、冠状动脉粥样硬化导致的冠脉狭窄或闭塞是 引起心肌缺血最主要、 最常见的病因， 进而导致心肌缺血缺氧， 由此引起的心脏病即大家常 说的 “冠心病” ， 所以冠心病是心肌缺血的 “罪魁祸首” 。 心肌缺血严重危害中老年人的健康， 近年来随着社会的进步和人民生活水平的提高， 心肌缺血在我国的患病率呈现逐年上升的 趋势， 并且呈现逐渐年轻化的趋势， 一些20-30岁的年轻人也出现心肌缺血的表现。 心血管 疾病是威胁人类生命健康的重大疾病， 而心肌缺血性疾病又是心血管疾病中的焦点， 并可 发展为心律失常、 心肌梗死。 因而， 如何切实有效地减轻因心肌缺血引起的损伤已经成为当 今医学界面临的一个热点问题。。
6、 0003 丹参酮A磺酸钠， 为唇形科植物丹参(salvia miltiorrhza)中分离的二萜醌类 化合物丹参酮A， 经磺化而得到的水溶性物质。 为砖红色结晶性粉末； 无臭， 味微苦， 临床 上用于冠心病、 心绞痛、 心肌梗死的辅助治疗。 0004 现有的专利文献报道丹参酮A磺酸钠具有抑制肌腱粘连的发生及其进展的作用 （专利号201510238176 .5） 。 丹参酮A磺酸钠能促进多能诱导干细胞增殖 （专利号 201610104767.8） 。 在眼科用药上， 西罗莫司、 黄芪多糖、 丹参酮A磺酸钠和生地黄提取物， 按通常的方法制作成眼部外用制剂， 适用于治疗葡萄膜炎、 角膜移植后排斥反。
7、应等眼部。 0005 羟基丹参酮A磺酸钠 （结构式如式1所示） 通常在丹参酮A磺酸钠原料及丹参酮 A磺酸钠制剂有关物质检查时作为杂质对照品的一种应用， 秦引林等在专利 （公开号CN 1844113A） 中报道了这种化合物的相关情况。 0006 羟基丹参酮A磺酸钠是丹参酮A磺酸钠的一种杂质， 文献报道中主要是对丹参酮 A磺酸钠原料和制剂中的羟基丹参酮A磺酸钠含量进行检测和控制从而保证丹参酮A磺 酸钠制剂临床使用的安全性和有效性。 0007 目前， 关于丹参酮A磺酸钠杂质的成分在急性心肌缺血领域的应用尚未见相关 报道。 说 明 书 1/5 页 3 CN 108524526 A 3 发明内容 000。
8、8 本发明提供了一种如式1所示的丹参酮A磺酸钠杂质在制药方面的新用途， 即在 治疗异丙肾上腺素所致急性心肌缺血药物中的应用。 0009 本发明还提供了丹参酮A磺酸钠杂质在治疗心肌损伤血清标志蛋白CK-MB、 AST、 LDH 中的应用。 0010 本发明还提供了丹参酮A磺酸钠杂质在治疗急性心肌缺血血清氧化及内源性抗 氧化酶水平中的应用。 0011 本发明还提供了丹参酮A磺酸钠杂质在治疗心肌组织ATP酶中的应用。 0012 本发明还提供了丹参酮A磺酸钠杂质在治疗左心室功能中的应用。 0013 本发明还提供了丹参酮A磺酸钠杂质在治疗心肌梗死中的应用。 0014 本发明还通过动物模型和细胞实验来说明。
9、丹参酮A磺酸钠杂质在急性心肌缺血 领域中的应用。 0015 所述的丹参酮A磺酸钠杂质可由多种途径进行个体给药， 给药途径包括口服、 静 脉注射等。 相应地， 所述的丹参酮A磺酸钠杂质可以与药用载体制备成口服制剂和注射 剂。 0016 下面通过实施例对本发明做进一步的描述， 但并非用来限制本发明的有效范围。 具体实施例 0017 实施例1丹参酮A磺酸钠杂质 （以下简称杂质A） 在异丙肾上腺素 （ISO） 诱导的急 性心肌缺血模型中的应用 雄性SD大鼠， 体重220-240g， 测定大鼠肢导联II导心电图， 将心电图正常的大鼠随机分 为以下各组 （n=12） ： 空白对照组： 尾静脉注射5%葡萄糖。
10、注射液(G.S)， 连续15天， 其中第14天皮下注射(sc) 生理盐水， 连续2天； ISO模型组： 尾静脉注射G.S， 连续15天， 其中第14天开始sc ISO(65mg/kg)， 连续2天； 杂质A高剂量组： 尾静脉注射杂质A 16mg/kg， 连续15天， 其中第14天开始sc ISO(65mg/ kg)， 连续2天； 杂质A中剂量组： 尾静脉注射杂质A 8mg/kg， 连续15天， 其中第14天开始sc ISO(65mg/ kg)， 连续2天； 杂质A低剂量组： 尾静脉注射杂质A 4mg/kg， 连续15天， 其中第14天开始sc ISO(65mg/ kg)， 连续2天； 说 明 。
11、书 2/5 页 4 CN 108524526 A 4 末次sc ISO或N.S后， 大鼠禁食不禁水， 12h后称重， 3%水合氯醛溶液麻醉(1ml/100g， ip)， 待动物麻醉后测试其心电图， 关注ST段及T波变化。 右颈总动脉插PE管入左心室， 测定 左心室功能： 心率(HR)、 左心室终末舒张压(LVEDP)、 左心室收缩压(LVSP)、 左心室内压最大 上升速率(LV dp/dtmax)、 左心室内压最大下降速率(LV -dp/dtmax)。 随后左颈总动脉插管 取血， 3000r/min离心10min， 取上清-20冰箱保存备用， 生化指标测定时取出冰冻的血清 恢复至室温， 按试剂。
12、盒说明书测定心肌损伤血清标志蛋白肌酸激酶同工酶(CK-MB)、 谷草转 氨酶(AST)、 乳酸脱氢酶(LDH)以及血清氧化及内源性抗氧化酶： 丙二醛(MDA)、 超氧化物歧 化酶(SOD)、 谷胱甘肽(GSH)、 谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)； 开胸摘取心脏， 剪去周围结缔组 织， 用冰生理盐水清洗， 滤纸吸干水分后称重。 而后取部分心脏组织置于-80冰箱保存， 待 测定生化指标之用； 部分心脏组织置于10%福尔马林内固定， 行心脏组织HE染色病理组织学 检查。 生化指标测定时取出冰冻的心肌组织， 称重， 按组织： 生理盐水=1： 9加入生理盐水研 磨制备10%组织匀浆， 1500r/min离。
13、心15min， 取上清按试剂盒说明书测量心肌组织ATP酶： Na +-K+-ATP酶、 Ca2+-ATP酶、 Mg2+-ATP酶。 结果见表1-4。 0018 说 明 书 3/5 页 5 CN 108524526 A 5 HE组织病理学结果显示， 空白对照组心脏组织形态基本正常， 大多数例心肌细胞排列 紧密， 核居中， 未见炎细胞浸润， 间质无水肿， 无出血， 心内膜、 心外膜无异常。 与空白对照组 相比， 模型对照组组心肌组织结构紊乱， 心肌纤维变性， 表现为浊肿、 空泡变， 心肌纤维灶性 坏死， 发生不同程度的断裂溶解， 也可见融合坏死， 间质增宽， 分布淡红色水肿液， 见大量慢 性炎细胞。
14、浸润， 表明造模成功。 与模型组相比， 其余杂质A高中低剂量组各组心肌组织病变 特征相同， 但病变程度都发生不同程度的减轻。 说 明 书 4/5 页 6 CN 108524526 A 6 0019 由上述试验结果可以看出， 杂质A在16mg/kg的剂量下对心肌缺血具有较好的治疗 作用， 杂质A组的血清损伤蛋白值低于模型组； 模型组SOD、 GSH、 GPx较对照组、 治疗组明显降 低 （P0.05） ； 杂质A在16mg/kg的剂量下心肌组织ATP酶与模型组相比显著升高 （P0.05） ； 对 大鼠左心室功能与模型组相比有显著差异 （P0.05） 。 可以看出给药后能够改善ISO造成的 急性心。
15、肌缺血， 具有治疗心肌缺血的作用。 0020 实施例2丹参酮A磺酸钠一种杂质 （以下简称杂质A） 对异丙肾上腺素诱导的H9C2心肌 细胞损伤的影响 细胞复苏后进行体外传代三次， 细胞的复苏、 换液、 传代严格按照相关SOP执行。 确保进 行接种时细胞生长状况处于最佳时期。 0021 将分离的心肌细胞接种于96 孔培养板中(细胞浓度1104个/mL)， 每孔100 L， 将 培养板在培养箱预培养24小时(37， 5%CO2的条件下)， 向培养板中加入100 l完全培养基 或含不同浓度受试样品的完全培养基， 对照组为100 l完全培养基， 模型组为加入异丙肾上 腺素 （终浓度10 mol/L） 50 l和完全培养基50 L， 给药组加入异丙肾上腺素 （终浓度10 mol/ L） 50 l与不同浓度的受试药(1 M、 2.5 M、 5 M、 10 M、 20 M和50 M)50 l， 于375% CO2 条件下继续培养48 h， 按试剂盒说明书用CCK-8法测定吸收度(A )值。 结果见表5。 0022 本研究表明， 杂质A在2.5 M和5 M浓度时对异丙肾上腺素致心肌细胞损伤有一定的抗 损伤作用， 与模型组比较有显著性差异 （P0.05） 。 说 明 书 5/5 页 7 CN 108524526 A 7 。