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1、(10)授权公告号 CN 102225085 B (45)授权公告日 2012.09.05 CN 102225085 B *CN102225085B* (21)申请号 201110166082.3 (22)申请日 2011.06.20 A61K 36/28(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61K 135/00(2006.01) (73)专利权人 黑龙江大学 地址 150080 黑龙江省哈尔滨市南岗区学府 路 74 号 (72)发明人 张彦龙 赵洪柱 曾伟民 赵丹丹 雷虹 刘振东 邱佳 (74)专利代理机构 哈尔滨市松花江专利商标事 务所 23109 代理人 韩末洙 C。
2、N 1686295 A,2005.10.26, CN 101817816 A,2010.09.01, CN 101925360 A,2010.12.22, CN 101381363 A,2009.03.11, CN 102079745 A,2011.06.01, CN 1463970 A,2003.12.31, 王敏等 . 水飞蓟茎叶化学成分研究 .黑龙 江医药科学 .2010, 第 33 卷 ( 第 1 期 ), (54) 发明名称 一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方 法 (57) 摘要 一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方 法， 涉及水飞蓟总黄酮的提取方法。综合利用水 飞蓟秸秆， 增。
3、加水飞蓟资源综合利用效率， 投资 回收期短， 拓宽了水飞蓟总黄酮的来源。将水飞 蓟秸秆粉碎体用乙醇提取得提取液， 然后浓缩得 醇沉物， 将醇沉物洗涤后溶解至乙醇中， 再脱色 和浓缩即可。本发明将水飞蓟秸秆再利用， 为循 环经济项目， 可刺激农民发展水飞蓟种植业， 提高 水飞蓟秸秆附加值， 增加农民收入， 经济和社会效 益明显。本发明的水飞蓟总黄酮提取物， 质量百 分浓度为 60 70， 产品收率为水飞蓟秸秆的 0.1 -0.2。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 张贵峰 权利要求书 1 页 说明书 5 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 。
4、页 说明书 5 页 1/1 页 2 1. 一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特征在于从水飞蓟秸秆中提取 水飞蓟总黄酮的方法是通过以下步骤实现的 ： 一、 将干燥的水飞蓟秸秆粉碎， 得水飞蓟秸秆 粉碎体， 然后将水飞蓟秸秆粉碎体加入提取罐中， 再向提取罐中加入工业乙醇， 浸泡 90 120min， 然后加热至 70 80， 保温逆流提取 2 2.5h， 再过滤除杂， 得提取液， 其中水飞 蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 6 10mL ； 二、 将提取液打入浓缩罐， 加热至 80 85， 保温至提取液中乙醇体积含量低于 20 后， 过滤， 得醇沉物 ； 三、 用体积分数为。
5、 10 20乙醇洗涤醇沉物 2 3 次， 然后用体积分数为 90乙 醇溶解醇沉物得溶液， 然后用树脂柱将溶液脱色得脱色液， 再将脱色液减压浓缩至比重 1.13-1.15 的浓缩物， 再干燥， 得水飞蓟总黄酮提取物 ； 步骤三中采用 MCI 树脂柱将溶液脱色得脱色液， 该树脂为日本三菱公司生产的属于反 相分离机制的高分子材料。 2. 根据权利要求 1 所述的一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特征在于 步骤一中水飞蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 7 9mL。 3. 根据权利要求 1 所述的一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特征在于 步骤一中水飞蓟秸秆粉碎体质量。
6、与工业乙醇体积的比例为 1g 8mL。 4. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特 征在于步骤三中用 2 3 倍量的体积分数为 10 20乙醇洗涤醇沉物 2 3 次。 5. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特 征在于步骤三中用 5 6 倍量的体积分数为 90乙醇溶解醇沉物得溶液。 6. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特 征在于步骤三中用树脂柱将溶液脱色， 溶液体积为树脂柱体积的 50。 7. 根据权利要求 1、 2 或 3 所述的一种从水飞。
7、蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其特 征在于步骤三中干燥方式为 ： 将浓缩物在真空度 0.01 0.09MPa， 送入蒸汽， 在温度 70 75下干燥。 权 利 要 求 书 CN 102225085 B 2 1/5 页 3 一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法 技术领域 0001 本发明涉及一种水飞蓟总黄酮的提取方法。 背景技术 0002 水飞蓟是菊科草本植物， 原产于地中海地区， 上世纪 80 年代从德国引进我国， 在 江苏、 陕西、 东北等地引种栽培。 水飞蓟总黄酮是从水飞蓟种子中提取的一类黄酮木脂素类 化合物， 具有预防和治疗肝病的药理活性， 临床广泛应用。 国内外对水飞蓟的开发利。
8、用多是 从果实中提取水飞蓟总黄酮， 经进一步纯化和化学改性后制成各种制剂。 到目前为止， 未曾 有从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的报导。 水飞蓟作为药用经济作物在我国的种植面积 逐年增加， 其秸秆目前主要作为饲料或燃料， 其综合利用价值有待进一步开发。 发明内容 0003 本发明的目的是为了提供一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 综合利 用水飞蓟秸秆， 增加水飞蓟资源综合利用效率， 投资回收期短， 拓宽了水飞蓟总黄酮的来 源。 0004 本发明的一种从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法是通过以下步骤实现的 ： 一、 将干燥的水飞蓟秸秆粉碎， 得水飞蓟秸秆粉碎体， 然后将水飞蓟秸秆粉碎体。
9、加入提取罐 中， 再向提取罐中加入工业乙醇， 浸泡 90 120min， 然后加热至 70 80， 保温逆流提 取 2 2.5h， 再过滤除杂， 得提取液， 其中水飞蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 6 10mL ； 0005 二、 将提取液打入浓缩罐， 加热至 80 85， 保温至提取液中乙醇体积含量低于 20后， 过滤， 得醇沉物 ； 0006 三、 用体积分数为 10 20乙醇洗涤醇沉物 2 3 次， 然后用体积分数为 90 乙醇溶解醇沉物得溶液， 然后用树脂柱将溶液脱色得脱色液， 再将脱色液减压浓缩至比重 1.13-1.15 的浓缩物， 再干燥， 得水飞蓟总黄酮提取物。 0。
10、007 本发明步骤一中将干燥的水飞蓟秸秆粉碎成小于 1cm 的小段。步骤三中采用 MCI 树脂 ( 日本三菱公司生产的属于反相分离机制的高分子材料 ) 柱将溶液脱色得脱色液。步 骤三中用 2 3 倍量的体积分数为 10 20乙醇洗涤醇沉物， 分别洗涤 2 3 次。步骤 三中用 5 6 倍量的体积分数为 90乙醇溶解醇沉物得溶液。步骤三中用树脂柱将溶液 脱色， 溶液体积为树脂柱体积的 50。步骤三中的干燥方式为 ： 将浓缩物在真空度 0.01 0.09MPa， 送入蒸汽， 在温度 70 75下干燥， 得的干燥物再经粉碎后， 得水飞蓟总黄酮提 取物。 0008 本发明的从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄。
11、酮的方法， 以水飞蓟秸秆为原料， 采用 乙醇为溶剂， 树脂脱色提取水飞蓟总黄酮。 其中采用高浓度乙醇(95)从水飞蓟秸秆中提 取， 用低浓度 (10 20 ) 乙醇洗涤除去杂质 ( 步骤二的操作 )。 0009 本发明综合利用水飞蓟秸秆， 用乙醇为溶剂从中提取水飞蓟总黄酮， 拓宽了水飞 说 明 书 CN 102225085 B 3 2/5 页 4 蓟总黄酮的来源， 增加水飞蓟资源综合利用效率。将水飞蓟秸秆再利用， 为循环经济项目， 可刺激农民发展水飞蓟种植业， 提高水飞蓟秸秆附加值， 增加农民收入， 经济和社会效益明 显。 0010 本发明从水飞蓟秸秆中提取的水飞蓟总黄酮提取物， 经紫外法测定。
12、质量百分浓度 为 60 70， 产品收率为水飞蓟秸秆的 0.1 -0.2。 具体实施方式 0011 本发明技术方案不局限于以下所列举具体实施方式， 还包括各具体实施方式间的 任意组合。 0012 具体实施方式一 ： 本实施方式为从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其是 通过以下步骤实现的 ： 一、 将干燥的水飞蓟秸秆粉碎， 得水飞蓟秸秆粉碎体， 然后将水飞蓟 秸秆粉碎体加入提取罐中， 再向提取罐中加入工业乙醇， 浸泡 90 120min， 然后加热至 70 80， 保温逆流提取 2 2.5h， 再过滤除杂， 得提取液， 其中水飞蓟秸秆粉碎体质量与 工业乙醇体积的比例为 1g 6 10mL 。
13、； 0013 二、 将提取液打入浓缩罐， 加热至 80 85， 保温至提取液中乙醇体积含量低于 20后， 过滤， 得醇沉物 ； 0014 三、 用体积分数为 10 20乙醇洗涤醇沉物 2 3 次， 然后用体积分数为 90 乙醇溶解醇沉物得溶液， 然后用树脂柱将溶液脱色得脱色液， 再将脱色液减压浓缩至比重 1.13-1.15 的浓缩物， 再干燥， 得水飞蓟总黄酮提取物。 0015 本实施方式步骤一中干燥的水飞蓟秸秆中含水量低于 10 ( 质量 )， 是可以用手 很容易折断的。 0016 本实施方式综合利用水飞蓟秸秆， 用乙醇为溶剂从中提取水飞蓟总黄酮， 拓宽了 水飞蓟总黄酮的来源， 增加水飞蓟资。
14、源综合利用效率。 将水飞蓟秸秆再利用， 为循环经济项 目， 可刺激农民发展水飞蓟种植业， 提高水飞蓟秸秆附加值， 增加农民收入， 经济和社会效 益明显。 0017 本实施方式中秸秆中叶绿素含量比种子中要高得多， 种子中主要含有油脂等其他 成分， 所以本实施方式的提取方法区别于从种子中采用压榨方式提取总黄酮的方法。 0018 具体实施方式二 ： 本实施方式与具体实施方式一不同的是步骤一中浸泡 100min。 其它步骤及参数与具体实施方式一相同。 0019 具体实施方式三 ： 本实施方式与具体实施方式一或二不同的是步骤一中加热至 75。其它步骤及参数与具体实施方式一或二相同。 0020 具体实施方。
15、式四 ： 本实施方式与具体实施方式一、 二或三不同的是步骤一中水飞 蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为1g79mL。 其它步骤及参数与具体实施方 式一、 二或三相同。 0021 具体实施方式五 ： 本实施方式与具体实施方式一、 二或三不同的是步骤一中水飞 蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 8mL。其它步骤及参数与具体实施方式 一、 二或三相同。 0022 具体实施方式六 ： 本实施方式与具体实施方式一至五之一不同的是步骤一中将干 燥的水飞蓟秸秆粉碎成小于 1cm 的小段。其它步骤及参数与具体实施方式一至五之一相 说 明 书 CN 102225085 B 4 3/5 页 5 同。。
16、 0023 具体实施方式七 ： 本实施方式与具体实施方式一至六之一不同的是步骤二中加热 至 80 82。其它步骤及参数与具体实施方式一至六之一相同。 0024 具体实施方式八 ： 本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是步骤三中用体 积分数为 15乙醇洗涤醇沉物 2 3 次。其它步骤及参数与具体实施方式一至七之一相 同。 0025 具体实施方式九 ： 本实施方式与具体实施方式一至七之一不同的是步骤三中用 2 3 倍量的体积分数为 10 20乙醇洗涤醇沉物 2 3 次。其它步骤及参数与具体实 施方式一至七之一相同。 0026 本实施方式中的 2 3 倍量是指乙醇体积是醇沉物体积的 2 3 倍。。
17、每次洗涤均 使用 2 3 倍量的体积分数为 10 20乙醇。 0027 具体实施方式十 ： 本实施方式与具体实施方式一至九之一不同的是步骤三中用 5 6 倍量的体积分数为 90乙醇溶解醇沉物得溶液。其它步骤及参数与具体实施方式一 至九之一相同。 0028 本实施方式中的 5 6 倍量是指乙醇体积是醇沉物体积的 5 6 倍。 0029 具体实施方式十一 ： 本实施方式与具体实施方式一至十之一不同的是步骤三中用 树脂柱将溶液脱色， 溶液体积为树脂柱体积的 50。其它步骤及参数与具体实施方式一至 十之一相同。 0030 具体实施方式十二 ： 本实施方式与具体实施方式一至十一之一不同的是步骤三中 采用。
18、 MCI 树脂柱将溶液脱色得脱色液。其它步骤及参数与具体实施方式一至十一之一相 同。 0031 本实施方式中 MCI 树脂为日本三菱公司生产的属于反相分离机制的高分子材料。 0032 具体实施方式十三 ： 本实施方式与具体实施方式一至十二之一不同的是步骤三中 的干燥方式为 ： 将浓缩物在真空度0.010.09MPa， 送入蒸汽， 在温度7075下干燥， 得 的干燥物。其它步骤及参数与具体实施方式一至十一之一相同。 0033 本实施方式中将干燥物再粉碎后， 即得水飞蓟总黄酮提取物。 0034 具体实施方式十四 ： 本实施方式为从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其 是通过以下步骤实现的 ： 。
19、一、 将含水量低于 10 ( 质量 ) 的干燥的水飞蓟秸秆粉碎， 得水飞 蓟秸秆粉碎体， 然后将水飞蓟秸秆粉碎体加入提取罐中， 再向提取罐中加入工业乙醇， 浸泡 120min， 然后加热至 75， 保温逆流提取 2h， 再过滤除杂， 得提取液， 其中水飞蓟秸秆粉碎 体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 8mL ； 0035 二、 将提取液打入浓缩罐， 加热至 80 82， 保温至提取液中乙醇体积含量低于 20后， 过滤， 得醇沉物 ； 0036 三、 用3倍量的体积分数为15乙醇洗涤醇沉物3次， 然后用6倍量的体积分数为 90乙醇溶解醇沉物得溶液， 然后用 MCI 树脂 ( 日本三菱公司生产的属。
20、于反相分离机制的 高分子材料)柱将溶液脱色得脱色液， 再将脱色液减压浓缩至比重1.13-1.15的浓缩物， 将 浓缩物在真空度 0.01 0.09MPa 下， 送入蒸汽， 在温度 70 75下干燥， 得水飞蓟总黄酮 提取物。 0037 本实施方式步骤一中干燥的水飞蓟秸秆中， 是可以用手很容易折断的。步骤三中 说 明 书 CN 102225085 B 5 4/5 页 6 是每次用 3 倍醇沉物体积的乙醇洗涤， 用 6 倍醇沉物体积的乙醇溶解。 0038 本实施方式利用紫外法测定提取得到的水飞蓟总黄酮提取物的质量百分浓度， 测 试参数 ： 波长选择 288nm， 无水乙醇为空白溶液。对照品溶液为 。
21、0.01mg/mL 的水飞蓟宾对照 品溶液。得到本实施方式的水飞蓟总黄酮提取物中质量百分浓度为 70， 产品收率为水飞 蓟秸秆的 0.13。其中， 测试过程中， 由本领域技术人员的公知常识可知， 供试品溶液 ( 即 本实施方式得到的水飞蓟总黄酮提取物溶液 ) 的浓度要配制适当， 使吸收值与对照品溶液 接近。 0039 具体实施方式十五 ： 本实施方式为从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其 是通过以下步骤实现的 ： 一、 将含水量低于 10 ( 质量 ) 的干燥的水飞蓟秸秆粉碎至小于 1cm 的小段， 得水飞蓟秸秆粉碎体， 然后将水飞蓟秸秆粉碎体加入提取罐中， 再向提取罐中 加入工业乙醇，。
22、 浸泡 120min， 然后加热至 75， 保温逆流提取 2h， 再过滤除杂， 得提取液， 其 中水飞蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 10mL ； 0040 二、 将提取液打入浓缩罐， 加热至 80 82， 保温至提取液中乙醇体积含量低于 20后， 过滤， 得醇沉物 ； 0041 三、 用 3 倍量的体积分数为 15乙醇洗涤醇沉物 3 次， 然后用 6 倍量的体积分数 为 90乙醇溶解醇沉物得溶液， 然后用 MCI 树脂 ( 日本三菱公司生产的属于反相分离机制 的高分子材料)柱将溶液脱色得脱色液， 再将脱色液减压浓缩至比重1.13-1.15的浓缩物， 将浓缩物在真空度0.010.。
23、09MPa下， 送入蒸汽， 在温度75下干燥， 得水飞蓟总黄酮提取 物。 0042 本实施方式步骤一中干燥的水飞蓟秸秆中， 是可以用手很容易折断的。步骤三中 是每次用 3 倍醇沉物体积的乙醇洗涤， 用 6 倍醇沉物体积的乙醇溶解。 0043 本实施方式利用紫外法测定提取得到的水飞蓟总黄酮提取物的质量百分浓度， 测 试参数 ： 波长选择 288nm， 无水乙醇为空白溶液。对照品溶液为 0.01mg/mL 的水飞蓟宾对照 品溶液。得到本实施方式的水飞蓟总黄酮提取物中质量百分浓度为 65， 产品收率为水飞 蓟秸秆的 0.18。其中， 测试过程中， 由本领域技术人员的公知常识可知， 供试品溶液 ( 即。
24、 本实施方式得到的水飞蓟总黄酮提取物溶液 ) 的浓度要配制适当， 使吸收值与对照品溶液 接近。 0044 具体实施方式十六 ： 本实施方式为从水飞蓟秸秆中提取水飞蓟总黄酮的方法， 其 是通过以下步骤实现的 ： 一、 将含水量低于 10 ( 质量 ) 的干燥的水飞蓟秸秆粉碎至小于 1cm 的小段， 得水飞蓟秸秆粉碎体， 然后将水飞蓟秸秆粉碎体加入提取罐中， 再向提取罐中 加入工业乙醇， 浸泡 120min， 然后加热至 75， 保温逆流提取 2h， 再过滤除杂， 得提取液， 其 中水飞蓟秸秆粉碎体质量与工业乙醇体积的比例为 1g 6mL ； 0045 二、 将提取液打入浓缩罐， 加热至 80 8。
25、2， 保温至提取液中乙醇体积含量低于 20后， 过滤， 得醇沉物 ； 0046 三、 用 2 倍量的体积分数为 15乙醇洗涤醇沉物 3 次， 然后用 5 倍量的体积分数 为 90乙醇溶解醇沉物得溶液， 然后用 MCI 树脂 ( 日本三菱公司生产的属于反相分离机制 的高分子材料)柱将溶液脱色得脱色液， 再将脱色液减压浓缩至比重1.13-1.15的浓缩物， 将浓缩物在真空度0.010.09MPa下， 送入蒸汽， 在温度75下干燥， 得水飞蓟总黄酮提取 物。 说 明 书 CN 102225085 B 6 5/5 页 7 0047 本实施方式步骤一中干燥的水飞蓟秸秆中， 是可以用手很容易折断的。步骤三中 是每次用 2 倍醇沉物体积的乙醇洗涤， 用 5 倍醇沉物体积的乙醇溶解。 0048 本实施方式利用紫外法测定提取得到的水飞蓟总黄酮提取物的质量百分浓度， 测 试参数 ： 波长选择 288nm， 无水乙醇为空白溶液。对照品溶液为 0.01mg/mL 的水飞蓟宾对照 品溶液。得到本实施方式的水飞蓟总黄酮提取物中质量百分浓度为 60， 产品收率为水飞 蓟秸秆的 0.10。其中， 测试过程中， 由本领域技术人员的公知常识可知， 供试品溶液 ( 即 本实施方式得到的水飞蓟总黄酮提取物溶液 ) 的浓度要配制适当， 使吸收值与对照品溶液 接近。 说 明 书 CN 102225085 B 7 。