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1、(10)授权公告号 CN 1965834 B (45)授权公告日 2012.01.25 CN 1965834 B *CN1965834B* (21)申请号 200510016147.0 (22)申请日 2005.11.18 A61K 31/496(2006.01) A61K 47/04(2006.01) A61P 31/04(2006.01) (73)专利权人 天津瑞普生物技术股份有限公司 地址 300300 天津市东丽开发区六经路六号 (72)发明人 李旭东 鲍恩东 苏建东 CN 1288725 A,2001.03.28, 权利要求 1. CN 1214322 A,1999.04.21, 说。
2、明书第 3 段 . 赵林、 谭欣 . 水的六环结构及其对 溶菌酶热变性的影响 . 天津大学学报 33 1.2000,33(1),14-16. 张建平等 . 水分子团簇结构的改变及其生物 效应 . 化学通报 4.2004,(4),278-282. (54) 发明名称 一种含有六环水的兽用恩诺沙星溶液 (57) 摘要 本发明属于兽药的技术领域， 涉及一种畜禽 抗菌药物以恩诺沙星为原料制备一种广谱抗菌溶 液， 恩诺沙星溶液以六环水为载体， 经冷冻制备的 六环水加注恩诺沙星溶液中， 水分子簇的体积变 小， 相应的水的粘度、 表面张力等有所下降， 使恩 诺沙星扩散阻力降低， 促进药物释放， 发明恩诺沙 。
3、星溶液药物释放速率和释放量都有所提高， 六环 水对于细胞有很强的亲和力， 用于畜禽细菌和支 原体感染， 能够显著提高药物的疗效， 对于疾病的 恢复有较快的促进作用。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 何朝辉 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 CN 1965834 B1/1 页 2 1. 一种畜禽抗菌药物， 包含 ： 六环水， 恩诺沙星 ： 化学名称为 1- 环丙基 -6- 氟 -4- 氧 代-1， 4-二氢-7-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸， 分子式为C19H22FN3O3， 分子量为359.4， 化学结构式为。
4、 ： 其特征在于以六环水为载体制备恩诺沙星溶液， 所述六环水是选用净化的水， 即纯净 水做为原水， 一般市售合格纯净水， 电导率小于 20s/cm 即可， 静置数小时后缓慢冷冻， 降 温速率为 2-5 /h， 冷冻最低温度达 -30 -50， 使水充分结晶， 而后再解冻， 其解冻过程 在低于 10的条件下进行， 溶化的水及时收集储存在 4-10的温度环境中， 即得到的六环 水。 2. 根据权利要求 1 所述的畜禽抗菌药物， 其特征在于制备步骤如下 ： a、 将恩诺沙星 25g 加人适量六环水使之充分稀释、 搅拌均匀 ； b、 加入 40氢氧化钠溶液 10-40ml， 使之溶解 ； c、 加注六。
5、环水至全量 1000ml， 调解 PH 至 9.5-10.5 ； d、 再加人 EDTA-2Na0.5-1.5g， 充分搅拌均匀 ； e、 用高压灭菌柜灭菌 120、 30 分钟， 中间体检验合格后灌装压盖， 即得到含六环水的 恩诺沙星溶液。 权 利 要 求 书 CN 1965834 B1/5 页 3 一种含有六环水的兽用恩诺沙星溶液 技术领域 0001 本发明属于兽药的技术领域， 涉及以恩诺沙星为原料制备一种广谱抗菌药， 用于 畜禽细菌和支原体感染的兽用药剂及其制法。 背景技术 0002 水是所有生物中最重要的成分， 生物体一般含水量都在 60以上 ； 食品中除干制 品之外， 含水量都在65。
6、-90之间 ； 可以说水在我们的生活中起着非常重要的作用。 水有 许多特殊的性质， 近年来引起人们的关注。例如 ： 杂志 江西化工 1997 年第四期第 34 页 生命的水神奇的水 中介绍了具有六个水分子团结构的水， 即所谓 “六环水” ， 具有促进健 康的功能。 0003 天津大学学报 2000 年 1 月第 33 卷第 1 期收载的 水的六环结构及其对溶菌酶热 变性的影响 通过理论分析和实验证明了水的六环结构及其生物功能。 研究表明， 水经过低 温超声定频谱振后， 大多数呈六环和六笼形水分子簇存在， 这种水在生物蛋白、 核酸、 细胞 及组织活动中起到重要作用 ； 经 DSC 法实验证明， 。
7、用六环水水合溶菌酶时， 提高了其热抗变 性能力。 0004 化学通报 2004 年第四期收载的 水分子团簇结构的改变及其生物效应 概述了 近 30 年来从水分子团簇结构的发现到水分子簇的稳定结构及相关理论计算的研究进展 ； 总结了改变水分子团簇结构的四种方法， 包括外加磁场、 外加电场、 激光辐射以及直接加热 法， 分别讨论了这四种方法的作用机理， 介绍了水分子团簇结构变小后， 作用于生物体， 能 产生多种生物效应， 在很多方面能够改善生物体的生理机能。 0005 科学研究表明， 水分子团越小， 活性越大， 这种水喝起来越好喝， 反之亦然。 许多实 验证明， 改变水的结构时对生物的生理反应有很。
8、大的影响 ； 具有五个水分子或六个水分子 的小分子团结构的水， 即五环水和六环水， 对健康有很好的促进作用。 目前在兽用口服液的 制备工艺中， 纯净水是最常用的溶媒， 即将自来水进行一定的水处理后， 用做药物的溶媒。 然而科学研究表明， 在药物制作的过程中使用普通水， 由于水分子的结构， 使药物的生物利 用度不能得到最大限度的发挥。然而六环水能够保持较长时间的稳定性， 对于细胞有很强 的亲和力， 能够显著提高药物的疗效， 对于疾病的恢复有较快的促进作用。 0006 水是一种特殊的物质， 它具有很多功能。首先它是一种良好的溶剂， 它含有 O2、 CO2 等物质， 具有不同的PH值。 因此， 可以。
9、溶解很多矿物质， 为人体输送营养 ； 水体又是一个 “化 学场” ， 其中可以进行各种复杂的化学反应如酸碱反应、 氧化还原反应等， 同时， 还可以发生 溶解、 沉淀、 分解、 化合、 胶溶等化学作用， 在兽用口服液的制备工艺中， 纯净水是最常用的 溶媒。即将自来水进行一定的水处理后， 用作药物的溶媒。在药物制作的过程中使用普通 水， 由于水分子的结构及其排列等原因， 使药物的生物利用度不能得到最大限度的发挥。 0007 已知恩诺沙星化学名称为1-环丙基-6-氟-4-氧代-1， 4-二氢-7-(4-乙基-1-哌 嗪基)-3-喹啉羧酸， 分子式为C19H22FN3O3， 分子量为359.4， 化学。
10、结构见图。 该药物为微黄色 或类白色结晶性粉末， 无臭， 味微苦， 易溶于碱性溶液中， 在水、 甲醇中微溶， 在乙醇中不溶 ； 说 明 书 CN 1965834 B2/5 页 4 遇光渐变为橙红色。结构式为 ： 0008 0009 恩诺沙星的作用机理为在喹诺酮结构的 6 位上引入了氟原子， 从而增强了药物与 细菌靶位的亲和力， 且扩大了抗菌谱， 1 位上的环丙基能促进药物的组织渗透性。恩诺沙星 在动物体内代谢为环丙沙星来发挥抗菌活性， 与其他喹诺酮类药的抗菌机理相同， 恩诺沙 星以细菌的脱氧核糖核酸 (DNA) 酶为靶细菌的双股 DNA 扭曲成为袢状或螺旋状 ( 称为超螺 旋 )， 使 DNA。
11、 形成超螺旋的酶称为 DNA 回旋酶。药物通过与细菌 DNA 回旋酶亚基 A 结合， 抑 制该酶的切割与连接功能， 对染色体造成不可逆损害， 阻止细菌细胞分裂而发挥抗菌作用。 同时， 它对细菌细胞壁有高度的渗透力并破坏细菌的胞膜。 因此， 恩诺沙星是通过双重抗菌 作用来达到溶菌、 杀菌的目的。 大量实验证实恩诺沙星对细菌、 支原体等引起的疾病疗效一 般要优于环丙沙星、 诺氟沙星及其他同类抗生素类药物。恩诺沙星在水中具有良好的溶解 性， 其为广谱抗菌药， 抗支原体效力比泰乐菌素、 硫酸粘菌素强。 主要用于犊牛大肠杆菌、 鼠 伤寒沙门氏菌感染、 猪白痢、 仔猪黄痢、 猪水肿病及家禽各种支原体感染。。
12、用法用量 ： 内服， 一次量， 每 1kg 体重， 犬、 猫 2.5-5mg， 禽 5-7.5mg， 一日 2 次， 连用 3-5 天。 0010 目前有关恩诺沙星的产品主要有恩诺沙星溶液， 是将恩诺沙星与适宜溶媒配制而 成的溶液， 含恩诺沙星 (C19H22FN3O3) 为标示量的 90.0 110.0， 性状为无臭、 微黄色澄 明液体。 0011 该药物的鉴别方法为 ： 0012 (1) 取本品适量， 加稀硝酸酸化， 调整溶液 pH 值到 6.5 9.0， 即有白色沉淀析出。 0013 (2) 取本品适量， 加碘化铋钾试液数滴， 即生成桔红色沉淀。 0014 (3)取含量测定项下的供试品溶。
13、液， 照分光光度法( 中华人民共和国兽药典 2000 年版一部附录 17 页 )， 在 2712、 3222、 3342nm 处有最大吸收。 0015 pH 值应为 10.5 12.0(中华人民共和国兽药典 2000 年版一部附录 40 页 ) 0016 含量测定方法如下 ： 取在 105干燥至恒重的恩诺沙星对照品 25mg， 精密称定， 置 500ml 量瓶中， 加氢氧化钠溶液 (0.1mol/l)10ml， 振摇使溶解， 用水稀释至刻度， 摇匀 ； 精密 量取 10ml， 置 100ml 量瓶中， 用水稀释至刻度， 摇匀， 即得。 0017 供试品溶液的制备 ： 精密量取本品适量 ( 约相。
14、当于恩诺沙星 25mg)， 加水制成每 1ml 中约含恩诺沙星 5ug 的溶液， 摇匀， 即得。 0018 测定法 ： 吸取上述两种溶液， 照分光光度法 (中华人民共和国兽药典 2000 年版 一部附录 17 页 )， 在 271nm 的波长处分别测定吸收度， 根据二者吸收度比值， 计算， 即得。 0019 恩诺沙星溶液制备方法 ： 洗瓶 ： 首先将 12-15ml 西林瓶粗洗、 精洗， 100烘干 30 分钟， 冷却待用。 0020 1、 将恩诺沙星 25g 加入适量纯化水使之充分稀释、 搅拌均匀。 0021 2、 加入 40氢氧化钠溶液 10-40ml， 使之溶解。 说 明 书 CN 19。
15、65834 B3/5 页 5 0022 3、 加注纯化水至全量 1000ml， 调解 PH 至 9.5-10.5。 0023 4、 再加入 EDTA-2Na 0.5-1.5g， 充分搅拌均匀。 0024 5、 用高压灭菌柜灭菌 120， 30 分钟， 中间体检验合格后灌装压盖。 0025 以上所述的即为恩诺沙星溶液现有的制备工艺及检测方法， 但是现有恩诺沙星溶 液存在着释放速度慢、 血药高峰浓度存在时间短、 生物利用度差等问题。 发明内容 0026 本发明的目的在于提供一种用六环水制备的具有释放速度快、 血药高峰浓度时间 长、 生物利用度高的恩诺沙星溶液兽用制剂。 0027 为了达到上述目的，。
16、 本发明提供一种畜禽抗菌药物， 包含 ： 六环水， 其特征在于以 六环水为载体以微溶或溶于六环水的抗菌药物为活性成分， 制备畜禽抗菌药物。 0028 所 述 的 畜 禽 抗 菌 药 物， 包 含 ： 六 环 水， 恩 诺 沙 星 ( 化 学 名 称 为 1- 环 丙 基-6-氟-4-氧代-1， 4-二氢-7-(4-乙基-1-哌嗪基)-3-喹啉羧酸， 分子式为C19H22FN3O3， 分子量为 359.4。) 0029 化学结构式为 ： 0030 0031 其特征在于以六环水为载体制备恩诺沙星溶液。 0032 所述的恩诺沙星溶液， 其特征在于 ： 0033 a、 选用净化的水(即纯净水)作为原水。
17、， 一般市售合格纯净水， 电导率小于20s/ cm 即可， 静置数小时后缓慢冷冻， 降温速率为 2-5 /h， 冷冻最低温度达 -30 -50， 使水 充分结晶， 而后再解冻， 其解冻过程在低于 10下进行， 溶化的水及时收集储存在 4-10 的温度环境中， 即得到六环水 ； 0034 b、 将恩诺沙星 25g 加入适量六环水使之充分稀释、 搅拌均匀 ； 0035 c、 加入 40氢氧化钠溶液 10-40ml， 使之溶解。 0036 d、 加注六环水至全量 1000ml， 调解 PH 至 9.5-10.5 ； 0037 e、 再加人 EDTA-2Na 0.5-1.5g， 充分搅拌均匀 ； 00。
18、38 f、 用高压灭菌柜灭菌 120， 30 分钟， 中间体检验合格后灌装压盖， 即得到含六环 水的恩诺沙星溶液。 0039 g、 灯检、 化验、 贴签， 包装入库。 经过一个月时间低温(4)存储后， 分析测试结果 表明溶液的结构无明显变化。 0040 下面以实验说明本发明的治疗效果 ： 0041 1 材料与方法 0042 试验药品 ： 实验药物为用六环水制备的恩诺沙星溶液， 对照药物为普通水制备的 恩诺沙星溶液 说 明 书 CN 1965834 B4/5 页 6 0043 试验动物 ： 京白雏鸡 140 只 ( 抗鸡败血霉形体抗体阴性 )， 购自天津方大禽业发展 有限公司。将试验鸡随机平均分。
19、为 4 组， 试验前按常规饲养， 喂全价饲料， 不含任何抗菌药 物， 自由采食及饮水， 并进行临床观察， 在 35 日龄时用于试验。 0044 人工诱发鸡慢性呼吸道病 0045 霉形体菌种 ： 鸡败血霉形体强毒菌种 PG31， 由中国兽药监察所提供。使用时将菌种 接种于牛心消化汤中， 于50mL/L CO2条件下37培养7d， 用普通细菌计数法计数菌数， 稀释 成每1mL含活菌2.0亿的悬液。 接种量和接种途径 ： 经毒力测定， 确定对鸡接种量为0.5mL/ 只， 含活菌 1.0 亿个， 接种途径为滴鼻、 口服。 0046 接种前后鸡的临床症状观察 ： 主要观察试验鸡的精神状态、 食饮欲、 粪。
20、便性状、 呼 吸表现等。对死亡鸡进行尸体剖检， 取鼻、 气管分泌物和肺、 气囊等组织进行鸡败血霉形体 分离培养。采未死亡鸡血分离血清， 用平板凝集试验检测抗鸡败血霉形体抗体。 0047 试验性治疗 ： 接种鸡出现临床症状后， 对第 1 4 组鸡饮水给药， 连续 5d， 观察 30d， 记录各组鸡的临床表现与发病、 死亡情况， 对死亡鸡做鸡败血霉形体分离培养以确定 死亡原因。 0048 药物疗效评价指标 ： 检查中， 以未死亡鸡血清抗鸡败血霉形体抗体转为阳性者说 明人工感染成功。药物疗效用保护率表示， 凡在试验期间出现慢性呼吸道病的临床症状并 有部分鸡死亡， 尸体剖检有比较特征的病变， 并从鼻、。
21、 气管分泌物及肺与气囊等组织中分离 到鸡败血霉形体 PG31 的判为霉形体感染死亡。 0049 0050 2 结果 0051 试验鸡的临床症状与病变 ： 试验鸡接种鸡败血霉形体后第 4d 开始表现精神沉郁， 食欲不振， 第 5d 出现明显的呼吸道症状， 如咳嗽、 喷嚏、 流鼻液等， 严重者呼吸困难， 病鸡张 口呼吸、 甩头、 呼吸罗音加重。有的病鸡眼湿润、 流泪， 后期个别鸡眼睑肿胀， 有粘液或脓性 分泌物。死亡鸡鼻窦粘膜水肿、 充血、 肥厚。窦腔内充有粘液或干酪样渗出物， 气管和喉头 内有粘液状物质， 气管粘膜增厚。肺和气囊、 支气管内有明显的卡他性炎症， 胸气囊灰色混 浊、 肥厚， 气囊内。
22、含有稍混浊的粘稠渗出物或干酪样物质， 有的鸡腹气囊也有同样的病变。 0052 死亡鸡病料中霉形体分离培养结果 ： 从各组死亡鸡的鼻分泌物、 气囊等材料中均 分离到鸡败血霉形体。 0053 未死亡鸡血清中抗鸡败血霉形体抗体检测结果 ： 从各组未死亡鸡的血清中均检测 到抗鸡败血霉形体抗体。 0054 各组鸡的保护率 见表 1 0055 六环水恩诺沙星溶液对鸡慢性呼吸道病的治疗效果 组别及药品 接种量 ( 亿 / 只 ) 药物浓度 (ml 药物 /L 水 ) 试验鸡 ( 只 ) 死亡鸡 ( 只 ) 保护率 ( ) 说 明 书 CN 1965834 B5/5 页 7 恩诺沙星六环 水组 1.0 45 。
23、35 5 85 恩诺沙星普通 水组 1.0 45 35 10 66.7 阳性对照 1.0 0 35 22 26.7 阴性对照 0 0 35 0 100 0056 从上表可以看出， 在药物浓度相同的情况下， 用六环水制成的恩诺沙星溶液的保 护率明显高于普通水制成的恩诺沙星溶液， 对鸡慢性呼吸道病有较好的疗效。 0057 发明效果 ： 在其它条件相同情况下， 与现有含纯化水恩诺沙星溶液相比， 将冷冻制 备的六环水加注恩诺沙星溶液中， 水分子簇的体积变小， 相应的水的粘度、 表面张力等有所 下降， 使恩诺沙星扩散阻力降低， 促进药物释放， 恩诺沙星溶液药物释放速率和释放量都有 所提高。六环水对于细胞。
24、有很强的亲和力， 生物利用度好， 用于畜禽细菌和支原体感染， 能 够显著提高药物的疗效， 对于疾病的恢复有较快的促进作用。 具体实施方式 0058 实施例 1 ： 1、 洗瓶 ： 首先将 12-15ml 西林瓶粗洗、 精洗， 100烘干 30 分钟， 冷却待 用。 0059 2、 选用净化的水 ( 即纯净水 ) 做为原水， 一般市售合格纯净水 ( 电导率小 于 20s/cm) 即可， 静置数小时后缓慢冷冻， 降温速率为 2-5 /h， 冷冻最低温度 达-30-50， 使水充分结晶， 而后再解冻， 其解冻过程在低于10的条件下进行， 溶化的 水及时收集储存在 4-10的温度环境中， 即得到六环水。
25、。 0060 3、 将恩诺沙星 25g 加人适量六环水使之充分稀释、 搅拌均匀。 0061 4、 加入 40氢氧化钠溶液 10-40ml， 使之溶解。 0062 5、 加注六环水至全量 1000ml， 调解 PH 至 9.5-10.5。 0063 6、 再加人 EDTA-2Na0.5-1.5g， 充分搅拌均匀。 0064 7、 用高压灭菌柜灭菌 120， 30 分钟， 中间体检验合格后灌装压盖， 即得到含六环 水的恩诺沙星溶液。 0065 8、 灯检、 化验、 贴签， 包装入库。 经过一个月时间低温(4)存储后， 分析测试结果 表明溶液的结构无明显变化。 0066 该方法工艺简单， 易于实现。 0067 实施例 2 ： 本发明药物， 可用于治疗犊牛大肠杆菌、 鼠伤寒沙门氏菌感染、 猪白痢、 仔猪黄痢、 猪水肿病及家禽各种支原体感染。使用方法为混饮， 每升水中加本发明药物 1 毫 升， 连用 3-5 天为一个疗程。 说 明 书 。