技术领域
本发明涉及一种植物组织培养方法，尤其涉及一种矮生麦冬的组织培养方法。
背景技术
矮生麦冬为百合科多年矮生常绿草本植物。叶片丛生，叶短株矮，喜荫，耐寒，不择土壤，适应性强。 矮生麦冬耐-18.9度以下低温，株高仅10~15厘米，喜欢温暖湿润、较阴蔽的地方，可在北方地区良好生长。矮生麦冬所形成的地被整齐，景观效果极佳，管理省工，无需修剪，是一种极为优秀的常绿草坪植物。
矮生麦冬的繁殖方法以分株为主，四季都可以进行，也可以进行播种，但是成活或发芽率不高。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种矮生麦冬的组织培养方法，该方法能够缩短矮生麦冬的繁殖周期，提高其成活率或发芽率。
为解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案为：
一种矮生麦冬的组织培养方法，包括以下步骤：以矮生麦冬当年生嫩叶为外植体，经过无菌接种于诱芽培养基上，形成愈伤组织后，利用愈伤组织块再进行继代培养，然后把诱导出来的小苗接种在壮苗培养基上进行壮苗培养，之后转接到生根培养基上进行生根诱导形成生根苗，生根苗经过炼苗驯化得到再生植株。
其中，该方法的具体操作步骤为：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年新生的嫩叶进行消毒灭菌处理；
步骤2，初代培养：将消毒后的叶片接种到MS+BA 0.5mg/L＋NAA0.5mg/L＋KT1.0mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L培养基上，培养基的PH值为5.5～5.8，MS培养基经过1.1kg/cm2高压消毒15～20分钟，在温度25±2℃黑暗培养30-35天，叶片形成愈伤组织，切下愈伤组织进入继代培养；
步骤3，继代培养：将切下的愈伤组织块接种到MS+BA 2.0mg/L＋NAA 0.2mg/L＋IAA0.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L培养基上，培养基的PH值为5.5～5.8， MS培养基经过1.1kg/cm2高压消毒15～20分钟，在温度25～30℃，光照强度1500～2000lux，每日光照12-14小时，培养20天时，愈伤组织上出现绿色芽苗，培养30-35天，芽苗长至2㎝时，切割扩大繁殖；
步骤4，壮苗培养：将继代培养基上切下的小苗接种到MS+BA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂5～7g/L培养基上，壮苗培养20-30天，将长至2～3㎝芽苗移入生根培养基培养；
步骤5，生根培养 ：将壮苗培养后的芽苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为25～28℃，光照强度1500lux，每日光照10小时，培养20-25天后，将形成白色短根的芽苗进行炼苗移栽；
步骤6， 炼苗移栽：将生根培养后的芽苗先在温度23±2℃的温室内放置3～5天，然后进行温床过渡移栽，移栽时，将幼苗用清水将根部琼脂清洗干净，种入苗床后，用清水浇灌，并喷施适量的800～1000倍的甲基托布津或1000倍多菌灵药液，以后每隔一周喷施一次，连续喷施3～4次。
其中，步骤1中，所述消毒灭菌处理为将叶片先以70%酒精浸泡15秒钟，再转入0.1%升汞溶液中灭菌1～3分钟，再用无菌水冲洗4～5遍。
其中，步骤6中，所述温床过渡移栽的过渡温床位于塑料大棚内，床宽1.2m，床四周砌高30㎝，床底整平。
有益效果：相比于现有技术，本发明矮生麦冬的培养方法通过采用组织培养的方法，使矮生麦冬的繁殖更为容易，大大缩短了矮生麦冬的繁殖周期，提高了其成活率或发芽率，有效的解决了播种繁殖慢和分株成活率低的问题。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
一种矮生麦冬的组织培养方法，包括以下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年刚萌发出的嫩叶，自来水冲洗后，在超净工作台上以70%酒精浸泡15秒钟，再转入0.1%升汞溶液中灭菌1分钟，倒去灭菌液，用预先准备好的无菌水冲洗4遍，沥干水后，将消毒后的叶片接种到诱芽培养基上；
步骤2，初代培养 ：
将消毒后的叶片接种到MS+BA 0.5mg/L＋NAA0.5mg/L＋KT1.0mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂5g/L培养基上，培养基的PH值5.6，MS培养基经过1.1kg/cm2高压消毒20分钟，在温度25±2℃黑暗培养20天左右叶片开始愈伤化，到第30天，叶片大多已形成愈伤组织，切下愈伤组织进入下一阶段的继代培养；
步骤3，继代培养：
将切下的愈伤组织接种到MS+BA 2.0mg/L＋NAA 0.2mg/L＋IAA0.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂5g/L培养基上，培养基的PH值5.6，MS培养基经过1.1kg/cm2高压消毒20分钟，在温度25～30℃，光照强度1500～2000lux，每日光照12小时，20天左右，愈伤组织上出现绿色芽苗，至30天左右，芽苗达到2㎝左右，切割以扩大繁殖；
步骤4，壮苗培养：
将继代培养基上切下的小苗接种到MS+BA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂5g/L培养基上，壮苗培养20天左右，将健壮的小苗移入生根培养基培养；
步骤5，生根培养：
将长至2㎝左右的无根苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋0.3%活性炭＋蔗糖20g/L，在温度为25～28℃，光照强度1500lux，每日光照10小时，15天左右可见芽苗上有白色短根形成，经25天左右，进行炼苗移栽；
步骤6，炼苗移栽：
将生根培养后的芽苗先在温度23±2℃之间的温室内拧松瓶盖放置3天，然后进行温床过渡移栽，过渡苗床（即温床）可建在普通单体的塑料大棚内，床宽1.2m左右，床四周砌高30㎝，床底整平，24小时后即可移栽小苗，移栽时，将幼苗从瓶内取出，用清水将根部琼脂清洗干净，同时应尽量减少伤根，种入苗床后，选择清水浇灌，并喷施1000倍的甲基托布津药液，以后每隔一周喷施一次，连续3次，全封闭管理一周左右，在20天左右可以逐步通风，并除去覆盖物。
实施例2
一种矮生麦冬的组织培养方法，包括以下步骤：
步骤1，消毒灭菌：
选取当年刚萌发出的嫩叶，自来水冲洗后，在超净工作台上以70%酒精浸泡15秒钟，再转入0.1%升汞溶液中灭菌3分钟，倒去灭菌液，用预先准备好的无菌水冲洗5遍，沥干水后，将消毒后的叶片接种到诱芽培养基上；
步骤2，初代培养：
将消毒后的叶片接种到MS+BA 0.5mg/L＋NAA0.5mg/L＋KT1.0mg/L+蔗糖30g/L＋琼脂7g/L培养基上，培养基的PH值为5.8，MS培养基经过1.1kg/cm2高压消毒20分钟，在温度25±2℃黑暗培养20天左右叶片开始愈伤化，到第33天，叶片大多已形成愈伤组织，切下愈伤组织进入下一阶段的继代培养。
步骤3， 继代培养：
将切下的愈伤组织块接种到MS+BA 2.0mg/L＋NAA 0.2mg/L＋IAA0.5mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L培养基上，培养基的PH值为5.8，MS培养基经过1.1kg/cm2高压消毒20分钟，在温度25～30℃，光照强度1500～2000lux，每日光照14小时，23天左右，愈伤组织上出现绿色芽苗，至33天左右，芽苗达到2㎝左右，切割扩大繁殖；
步骤4，壮苗培养：
将继代培养基上切下的小苗接种到MS+BA0.5mg/L+NAA0.2 mg/L＋蔗糖30g/L＋琼脂7g/L培养基上，壮苗培养30天左右，将健壮的小苗移入生根培养基培养；
步骤5，生根培养：
将长至3㎝的无根苗转移到生根培养基上培养，生根培养基为1/2MS＋IBA0.5mg/L＋0.3%活性炭＋蔗糖20g/L基本培养基，在温度为25～28℃，光照强度1500lux，每日光照10小时， 10天左右可见白色短根形成，经20天左右，进行炼苗移栽；
步骤6，炼苗移栽：
将生根培养后的芽苗先在温度23±2℃之间的温室内拧松瓶盖放置5天，然后进行温床过渡移栽，过渡苗床（即温床）可建在普通单体的塑料大棚内，床宽1.2m左右，床四周砌高30㎝，床底整平，24小时后即可移栽小苗，移栽时，将幼苗从瓶内取出，用清水将根部琼脂清洗干净，同时应尽量减少伤根，种入苗床后，选择清水浇灌，并喷施1000倍多菌灵药液，以后每隔一周喷施一次，连续4次，全封闭管理一周左右，在20天左右可以逐步通风，并除去覆盖物。