9,10二羟基硬脂酸DHSA在制备防治糖尿病药物中的用途.pdf

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1、(10)授权公告号 CN 101822662 B (45)授权公告日 2011.06.08 CN 101822662 B *CN101822662B* (21)申请号 201010165714.X (22)申请日 2010.04.30 A61K 31/20(2006.01) A61P 3/10(2006.01) A61P 5/50(2006.01) A61P 3/04(2006.01) (73)专利权人 中国人民解放军总医院 地址 100853 北京市海淀区复兴路 28 号 (72)发明人 薛长勇 张月红 刘英华 张永 徐庆 张新胜 景洪江 张荣欣 王觐 于晓明 刘钊 贺源 杨雪艳 李婧 (7。

2、4)专利代理机构 北京北新智诚知识产权代理 有限公司 11100 代理人 程凤儒 CN 1452461 A,2003.10.29,说明书第5页第 6 段， 第 6 页第 2 段， 第 6 段至第 7 页第 1 段 . ROILA AWANG et al.monoglycerides from 9， 10 dihydroxystearic acid for the cosmetic industry.Journal of Oil Palm Research .2009, 第 21 卷 636 641. 艾买提江萨伍提 . 反 -9， 10- 二羟基硬脂 酸的合成 .精细化工 .2009, 第 2。

3、6 卷 ( 第 7 期 ),724 728. (54) 发明名称 9,10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备防治糖尿 病药物中的用途 (57) 摘要 本发明公开了9， 10-二羟基硬脂酸(DHSA)的 新用途， 具体地说是在制备防治糖尿病药物中的 用途。本发明提出了 DHSA 的一种新的用途。其可 以有效的降低血糖含量、 提升胰岛素敏感度， 在 2 型糖尿病和肥胖治疗中有极高的应用前景。由于 DHSA 具有降低血糖和体重的双重作用， 且为制备 药物时为口服制剂， 既有希望用于肥胖的治疗， 也 有望用于糖尿病的治疗。由于肥胖和糖尿病的发 病率在增加， 这样的患者不断增加， 因此， DHSA 。

4、如 果应用于 2 型糖尿病和肥胖的治疗， 将具有双重 的社会效益和经济效益。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 杨云云 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 5 页 附图 2 页 CN 101822662 B1/1 页 2 1.9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备防治糖尿病药物中的用途。 2.9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备提高糖尿病患者 PPAR- 活性药物中的用途。 3.9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备增加糖尿病患者胰岛素敏感度药物中的用途。 4.9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA。

5、) 在制备降低糖尿病患者血糖药物中的用途。 5. 根据权利要求 1 至 4 中任意一项所述的用途， 其特征在于， 9， 10- 二羟基硬脂酸与药 剂学上可接受的辅料制成口服剂型。 6. 根据权利要求 5 所述的用途， 其特征在于， 所述口服剂型为片剂、 胶囊剂、 颗粒剂或 口服液。 7. 根据权利要求 1 至 4 中任意一项所述的用途， 其特征在于， 9， 10- 二羟基硬脂酸与药 剂学上可接受的辅料制成注射剂型。 权 利 要 求 书 CN 101822662 B1/5 页 3 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备防治糖尿病药物中的用 途 技术领域 0001 本发明涉及 9， 10。

6、- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 的新用途， 具体地说是 DHSA 在制备防治 糖尿病药物中的用途。 背景技术 0002 DHSA的化学结构 ： DHSA是由18个碳原子和2个羟基组成的长链饱和脂肪酸， 其化 学结构如下 ： 0003 0004 DHSA 常规用途 ： 在工业方面主要用于增塑剂、 脱膜剂、 表面活性剂和化学中间体 等方面。近年研究结果提示其结构类似物 9- 羟基硬脂酸促进癌细胞凋亡， 有可能用于癌症 的治疗。 0005 目前糖尿病治疗辅助药物有 ： 双胍类， 减少通过减少肝脏葡萄糖的输出而降低血 糖 ； 磺脲类， 刺激胰岛 B 细胞分泌胰岛素， 增加体内胰岛素水平 ； 噻唑烷二酮。

7、类， 促进靶细胞 对胰岛素的反应， 改善胰岛素敏感型 ； - 糖苷酶抑制剂， 抑制碳水化合物在小肠上部的吸 收， 降低餐后血糖， 并通过对餐后糖负荷的改善而改善空腹血糖 ； 格列奈类， 刺激胰岛素早 期分泌。 0006 发明人提出一种 DHSA 的新用途， 即在制备防治糖尿病药物中的用途， 其与现有防 治糖尿病药物相比较优势在于， 其可以增加胰岛素敏感性、 降低血糖的同时可降低体重。 发明内容 0007 为了弥补现有技术的缺陷， 本发明的目的在于提出 DHSA 的新用途。 0008 为了实现上述目的， 本发明的具体技术方案如下 ： 0009 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备防治。

8、糖尿病药物中的用途。 0010 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备提高糖尿病患者 PPAR- 活性药物中的用途。 0011 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备增加糖尿病患者胰岛素敏感度药物中的用途。 0012 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备降低糖尿病患者血糖药物中的用途。 0013 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA) 在制备降低糖尿病患者体重药物中的用途。 0014 9， 10- 二羟基硬脂酸与药剂学上可接受的辅料制成口服剂型。所述口服剂型为片 说 明 书 CN 101822662 B2/5 页 4 剂、 胶囊剂、 颗粒剂或口服液。推荐使用片。

9、剂。 0015 9， 10- 二羟基硬脂酸与药剂学上可接受的辅料制成注射剂型。 0016 本发明是这样实现的 ： 0017 DHSA 的制备方法为本领域常规技术， 一般为 ： 在烧瓶中加入油酸后， 再加入甲酸、 过氧化氢， 加料时间为 15min。在整个反应过程中维持温度在 40， 反应四五小时后， 反复 水洗油层， 收集油层。在油层中加入 3mol/L NaOH 溶液 25mL， 于 100水浴加热 1h， 趁热加 入 3mol/L HCl 50mL， 剧烈搅拌， 析出白色沉淀。用水反复清洗使清洗液 pH 值为中性， 收集 沉淀物。在沉淀物中加入体积分数为 0.95 的乙醇 10mL， 加热。

10、溶解， 抽滤， 将滤液于 0析出 结晶， 抽滤， 将抽滤物用体积分数为 0.95 的乙醇 10mL 加热溶解， 于 0结晶， 抽滤。同样方 法再结晶 2 次， 最后得到白色结晶物， 晾干， 收率 68.8。将结晶物分别上液相 - 质谱联用 仪 (LC-MS)、 元素分析仪、 红外光谱仪和核磁共振仪进行分析和结构鉴定。最终鉴定结果为 9， 10- 二羟基硬脂酸。 0018 本发明发明人通过动物实验观察， 发现DHSA对KKAy糖尿病小鼠的体重、 血糖和胰 岛素敏感性均有显著地影响， 具体地说是对 KKAy 糖尿病模型小鼠饲喂含有 DHSA 的高脂饲 料， 以含有 4橄榄油高脂饲料及含 4玉米油高。

11、脂饲料作为对照组 ； 观察小鼠葡萄糖耐量 和胰岛素敏感度以及随时观察小鼠体重等。 结果显示， DHSA饲喂小鼠体重明显低于对照组， 血糖含量明显低于对照组小鼠， 且皮下注射胰岛素后， DHSA 饲喂小鼠血糖含量明显低于其 他各组， 说明 DHSA 可以明显提高胰岛素敏感性。 0019 利用不同浓度的 DHSA 培养用 PPAR-gamma 质粒、 PPRE-Luc 荧光素酶质粒和内对照 质粒 TK-Renilla 转染 CV-1 细胞， 测定荧光强度。以罗格列酮 (Rosiglitazone， Rosi) 作 为阳性对照， 以 DMSO 为阴性对照， 结果显示油酸代谢产物 DHSA 对 PPA。

12、R- 活性没有激活作 用， 但 DHSA 提高 CV-1 细胞 PPAR- 活性， 说明 DHSA 可能是通过提高 PPAR- 活性， 改善糖 尿病小鼠糖耐量和胰岛素敏感性的。 0020 由于 DHSA 的化学性质和物理性质， 在常温下， DHSA 呈白色固体状， 所以拟用 DHSA 制备药物时， 以便于口服的片剂为宜。 DHSA可结合药剂学上可接受的辅料制备成口服片剂、 胶囊剂、 颗粒剂等。 0021 推荐使用口服片剂， 具体 DHSA 制备口服片剂的制备工艺见图 3 所示， 片剂制备方 法为药学领域常规技术。 0022 动物实验所用剂量为 200mg/kg， 由此推算糖尿病患者服用 DHS。

13、A 的最佳剂量为 400mg 800mg/ 日。 0023 本发明的优点与效益 ： 0024 本发明提出了 DHSA 的一种新的用途。其可以有效的降低血糖含量、 提升胰岛素敏 感度， 在 2 型糖尿病和肥胖治疗中有极高的应用前景。由于 DHSA 具有降低血糖和体重的 双重作用， 且为制备药物时为口服制剂， 既有希望用于肥胖的治疗， 也有望用于糖尿病的治 疗。由于肥胖和糖尿病的发病率在增加， 这样的患者不断增加， 因此， DHSA 如果应用于 2 型 糖尿病和肥胖的治疗， 将具有双重的社会效益和经济效益。 附图说明 0025 下面结合附图详细描述本发明的实施方式 ： 说 明 书 CN 10182。

14、2662 B3/5 页 5 0026 图 1 为 DHSA 对 CV-1 细胞 PPAR- 活性的影响 ； 0027 图 2 为 DHSA 对 CV-1 细胞 PPAR- 活性的影响 ； 0028 图 3 为 DHSA 口服片剂制备工艺流程图。 具体实施方式 0029 实施例 1DHSA 的制备 0030 DHSA 可以采用多种方法制备， 本实施例具体采用制备方法如下 ： 0031 在烧瓶中加入油酸后， 再加入甲酸、 过氧化氢， 加料时间为 15min。在整个反应过 程中维持温度在 40， 反应四五小时后， 反复水洗油层， 收集油层。在油层中加入 3mol/L NaOH 溶液 25mL， 于 。

15、100水浴加热 1h， 趁热加入 3mol/L HCl 50mL， 剧烈搅拌， 析出白色沉 淀。用水反复清洗使清洗液 pH 值为中性， 收集沉淀物。在沉淀物中加入体积分数为 0.95 的乙醇10mL， 加热溶解， 抽滤， 将滤液于0析出结晶， 抽滤， 将抽滤物用体积分数为0.95的 乙醇 10mL 加热溶解， 于 0结晶， 抽滤。同样方法再结晶 2 次， 最后得到白色结晶物， 晾干， 收率 68.8。将结晶物分别上液相 - 质谱联用仪 (LC-MS)、 元素分析仪、 红外光谱仪和核磁 共振仪进行分析和结构鉴定。最终鉴定结果为 9， 10- 二羟基硬脂酸。 0032 实施例 2DHSA 改善 K。

16、KAy 糖尿病小鼠胰岛素敏感性， 降低体重和血糖 0033 1. 实验动物分组及饲养 0034 8 周龄雄性 KKAy 糖尿病小鼠 60 只 ( 由中国医学科学院动物中心提供 )， 适应喂 养 5 天后按血糖随机分为 4 组， 分别喂养含 4 9， 10- 二羟基硬脂酸高脂饲料 (4 DHSA)、 含 2 DHSA 高脂饲料 (2 DHSA)、 含 4橄榄油高脂饲料 (4 OO)、 含 4玉米油高脂饲料 (4 CO)， 饲料由军事医学科学院动物中心合成， 饲料配方见表 1。饲养期间自由进食进水， 每周称重 1 次。 0035 表 1 饲料配方 0036 0037 2. 葡萄糖耐量和胰岛素敏感性。

17、实验 0038 分别用含 4 DHSA、 含 2 DHSA、 含 4橄榄油 (4 OO)、 含 4玉米油高脂饲料 (4 CO) 饲养 KKay 糖尿病小鼠。第五周时， 空腹 12h 后测定血糖， 并进行葡萄糖耐量试验， 按 1.5g/kg 灌胃给予葡萄糖， 分别测定灌胃后 0.5h、 1h 和 2h 血糖水平。第六周测定随机血 糖之后， 按 1IU/kg 体重皮下注射胰岛素， 分别测定注射胰岛素 0.5h 和 1h 后血糖， 胰岛素购 自上海第一生化药业有限公司。 说 明 书 CN 101822662 B4/5 页 6 0039 3.DHSA 对 KKAy 糖尿病小鼠体重的影响 0040 实验。

18、开始时各组小鼠空腹体重无显著差异， 实验一周后 4 DHSA 组小鼠体重明显 低于其他各组(P0.05)， 实验第二周至实验结束4DHSA组小鼠体重明显低于4CO组 (P 0.05)， 结果见表 2。 0041 表 2DHSA 对 KKAy 糖尿病小鼠体重的影响 0042 0043 a 与 4玉米油组相比 P 0.05 ； b 与 4橄榄油组比较 P 0.05 ； c 与 2 9， 10- 二羟基硬脂酸组比较 P 0.05。 0044 4.DHSA 对 KKAy 糖尿病小鼠葡萄糖耐量的影响 0045 在葡萄糖耐量试验中， 空腹 12h 后各组空腹血糖值没有显著差异 ； 给予葡萄糖灌 胃 0.5。

19、h 和 1h 时， 4 DHSA 组血糖明显低于其他各组， 差异显著， P 0.05 ； 2 小时后各组血 糖值没有显著差异， P 0.05。4 DHSA 组血糖曲线下面积明显低于其他各组， 差异显著， P 0.05， 见表 3。 0046 表 3DHSA 对 KKAy 糖尿病小鼠葡萄糖耐量的影响 0047 0048 a 与 4玉米油组相比 P 0.05 ； b 与 4橄榄油组比较 P 0.05 ； c 与 2 9， 10- 二羟基硬脂酸组比较 P 0.05。 0049 5.DHSA 对 KKAy 糖尿病小鼠胰岛素敏感性的影响 0050 4DHSA组小鼠自由进食后随机血糖明显低于其他各组， P。

20、0.05。 2DHSA组小 鼠自由进食后随机血糖明显高于 4 DHSA 组， 低于 4 OO、 4 CO 组， P 0.05， 按 1IU/kg 体重皮下注射胰岛素 0.5h、 1h 后， 4 DHSA 组血糖明显低于其他各组， 差异显著， P 0.05， 2 DHSA 组小鼠血糖在注射胰岛素 0.5h 后明显高于 4 DHSA 组， 低于 4 OO 和 4 CO 组， P 0.05， 见表 4。 说 明 书 CN 101822662 B5/5 页 7 0051 表 4DHSA 对 KKAy 糖尿病小鼠胰岛素敏感性的影响 0052 0053 a 与 4玉米油组相比 P 0.05 ； b 与 4。

21、橄榄油组比较 P 0.05 ； c 与 2 9， 10- 二羟基硬脂酸组比较 P 0.05 ； d 与 4 9， 10- 二羟基硬脂酸组比较 P 0.05。 0054 结论 ： 一定剂量的9， 10-二羟基硬脂酸(DHSA)可降低体重， 改善KKAy糖尿病小鼠 糖耐量， 增加胰岛素敏感性。 0055 实施例 3DHSA 对 CV-1 细胞 PPAR- 和 活性的影响 0056 1.DHSA 对 CV-1 细胞 PPAR- 活性的影响 0057 CV-1细胞按1105个/ml接种于24孔板， 培养24h。 用PPAR-alpha质粒、 PPRE-Luc 荧光素酶质粒和内对照质粒 TK-Renil。

22、la 转染 CV-1 细胞， 培养 24h 后， 加入不同浓度的 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA)， 继续培养 24h， 测定荧光强度。以 DMSO 为阴性对照， 结果如图 1， 可见 DHSA 没有激活 PPAR-alpha 的作用。 0058 2. 油酸代谢产物 DHSA 对 CV-1 细胞 PPAR- 活性的研究 0059 CV-1细胞按1105个/ml接种于24孔板， 培养24h。 用PPAR-gamma质粒、 PPRE-Luc 荧光素酶质粒和内对照质粒 TK-Renilla 转染 CV-1 细胞， 培养 24h 后， 加入不同浓度 9， 10- 二羟基硬脂酸 (DHSA)， 。

23、继续培养 24h。测定荧光强度。以罗格列酮 (Rosiglitazone， Rosi) 作为阳性对照， 以 DMSO 为阴性对照， 结果如图 2 所示， 可见 9， 10- 二羟基硬脂酸在低 浓度时没有激活 PPAR-gamma 的作用， 在 50 100M 时具有轻度的激活 PPAR-gamma 的活 性， 并具有一定的剂量 - 效应关系。 0060 以上结果显示油酸代谢产物 DHSA 对 PPAR- 活性没有激活作用， 但 DHSA 提高 CV-1 细胞 PPAR- 活性， 说明 DHSA 可能是通过提高 PPAR- 活性， 改善糖尿病小鼠糖耐量 和胰岛素敏感性的。 0061 实施例 4DHSA 制备降糖药物 0062 制备方法采用湿法制粒， 工艺过程如图 3 所示。 0063 动物实验所用剂量为 200mg/kg， 由此推荐成年 2 型糖尿病患者或肥胖患者的推荐 使用剂量为 DHSA 为 400mg 800mg/ 日， 分每日 2 3 次口服服用。 说 明 书 CN 101822662 B1/2 页 8 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 101822662 B2/2 页 9 图 3 说 明 书 附 图 。