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1、(10)授权公告号 CN 101785795 B (45)授权公告日 2011.12.28 CN 101785795 B *CN101785795B* (21)申请号 201010005324.6 (22)申请日 2010.01.15 A61K 36/28(2006.01) A61P 1/16(2006.01) A61P 31/04(2006.01) A61P 31/12(2006.01) (73)专利权人 中国科学院近代物理研究所 地址 730000 甘肃省兰州市南昌路 363 号 (72)发明人 梁剑平 陆锡宏 李雪虎 陶蕾 王曙阳 靳振召 (74)专利代理机构 兰州振华专利代理有限责任 。
2、公司 62102 代理人 张真 CN 1970730 A,2007.05.30, 全文 . 唐丽等 . 藏药藏茵陈的研究进展及开发利 用 . 中央民族大学学报 （自然科学版） .2007, 第 16 卷 ( 第 2 期 ),176 178. (54) 发明名称 藏茵陈饮片的制备方法 (57) 摘要 本发明属医药技术领域， 本发明公开了一种 藏茵陈饮片的制备方法。该方法包括以下步骤 ： 先将藏茵陈经过紫外照射消毒， 同时将黑曲霉依 序经过麦芽浸粉斜面培养、 种子培养基扩大培养 和发酵培养基发酵培养后， 将发酵物烘干、 粉碎， 定量装入胶囊或制成片剂。本发明所采用的方法 主要是通过黑曲霉产生的纤维。
3、素分解酶、 半纤维 素分解酶破坏植物药细胞壁结构， 从而有利于藏 茵陈中有效成分的消化吸收。该方法具有操作简 单， 成本低廉， 资源利用率高的优点， 易于进行工 业化生产， 具有很高的实际应用价值， 市场前景广 阔。 此外， 本方法对于其他中药饮片的制备同样具 有借鉴意义。 (51)Int.Cl. (56)对比文件 审查员 邓丽娟 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 权利要求书 1 页 说明书 3 页 CN 101785795 B1/1 页 2 1. 一种藏茵陈饮片的制备方法， 其特征是包括以下步骤 ： (1) 称取 2-200g 藏茵陈， 放在紫外灯光下照射 0.2-20。
4、 小时， 每隔 3-30min 翻动一次 ； (2) 培养基的制备 ： a. 麦芽浸粉斜面培养基和种子培养基的制作均按照常规方法配制、 保存 ； b. 发酵液体培养基的制备 ： 培养液按重量百分比配比为 ： 硫酸铵 1.4-5.4 ； 磷酸二氢钾 2.0-5.0 ； 氯化钙 0.3-1.0 ； 尿素 0.3-0.9 ； 硫 酸镁 0.3-0.9 ； 硫酸亚铁 5.010-3-5.010-1 ； 硫酸锰 1.610-3-1.610-1 ； 硫酸锌 1.410-3-1.410-1 ； 氯化钴 2.010-3-2.010-1 ； 其余蒸馏水 ； c. 将经过紫外消毒的藏茵陈 6 克， 加入到 150。
5、ml 步骤 b 的培养液中 ； (3) 麦芽浸粉斜面培养基培养 将黑曲霉接种到麦芽浸粉斜面， 在 30恒温培养箱中培养 3 天， 待长出一层均匀较厚 的黑色孢子则可 ； (4) 黑曲霉种子培养基扩大培养 ： 在 500ml 三角瓶中加入 150ml 种子培养基， 灭菌后， 接种斜面孢子 3 环， 在 30下， 130r/min 震荡培养 24h ； (5) 发酵液发酵培养 ： 分别取出已经过扩大培养的黑曲霉种子培养液 50ml 加入到 150ml 发酵液中， 初始 pH 值为 3.5-7.5， 置于 10-50的条件下， 在 90-160r/min 震荡培养 10 100 小时 ； (6) 将。
6、发酵后的藏茵陈置于 35 65的温度下烘干、 粉碎， 过 80 目筛子。 2.如权利要求1所述的藏茵陈饮片的制备方法， 其特征是 ： 将步骤(6)的藏茵陈粉6-8 克装入胶囊或压制成片剂。 权 利 要 求 书 CN 101785795 B1/3 页 3 藏茵陈饮片的制备方法 技术领域 ： 0001 本发明涉及中药饮片的制备方法， 特别是涉及微生物发酵制备藏茵陈饮片的方 法。 背景技术 ： 0002 藏茵陈是是青藏高原罕见的观赏、 美容、 保健、 药用草本花卉， 位列藏药八珍之一， 藏药名蒂达， 始载于藏医药书 四部医典 ， 有清热、 解毒， 清肝利胆的功效。 藏医药将藏茵陈 列为湿生草药类， 。
7、属苦味药， 主治 “赤巴” 的各种热病， 是藏药中最具特色的治疗肝胆系统疾 病的良药， 药效独特， 临床上用于治疗消化不良、 胆囊炎、 各型肝炎、 急性骨髓炎、 急性菌痢、 急性结膜炎、 急性咽喉炎及烫伤， 也用于风火牙痛、 热淋等症的治疗。现代药理研究表明其 具有抗菌消炎、 抗肝损伤、 抗病毒等多种作用， 许多治疗肝炎的藏药都以藏茵陈作为主要原 料。因此， 藏茵陈类药物被称为 “藏药中的奇葩” ， 在国内外市场极为走俏。 0003 因此， 研制新型藏茵陈饮片制备方法具有非常重要的现实意义， 但由于植物药中 的有效成分往往包裹在细胞壁内， 细胞壁主要由纤维素、 半纤维素、 木质素等构成， 其中。
8、纤 维素是 D- 葡萄糖以 -1， 4 糖苷键组成的大分子多糖。中药传统的炮制工艺简单， 往往不 能较彻底地破坏植物药的细胞壁结构， 容易造成饮片不易被机体消化、 生物利用率非常低 等缺陷。通过查阅国内外文献发现， 临床上尚未出现通过微生物发酵法炮制藏茵陈饮片的 报道。黑曲霉 (Aspergillus Niger) 可以通过分泌到胞外的游离纤维素酶、 半纤维素酶等 酶类来水解纤维素及半纤维素， 能将被细胞壁包裹的功能成分释放出来， 从而可以大幅度 提高藏茵陈中有效成分含量和人体对有效成分的利用效率。 发明内容 ： 0004 本发明的目的在于避免现有技术的不足提供一种藏茵陈饮片的制备方法， 本发。
9、明 通过黑曲霉发酵的方法制备藏茵陈饮片， 从而解决了传统炮制饮片的不足之处， 大大增加 了藏茵陈中有效成分的生物利用度， 本饮片具有易消化、 吸收快、 药效显著等特点， 在防治 病毒性疾病、 各型感冒以及痢疾等疾病过程中市场前景广阔。 0005 为实现上述目的， 本发明采取的技术方案为 ： 一种藏茵陈饮片的制备方法， 其主要 特点是包括以下步骤 ： 0006 (1) 称取 2-200g 藏茵陈， 放在紫外灯光下照射 0.2-20 小时， 每隔 3-30min 翻动一 次 ； 0007 (2) 培养基的制备 ： 0008 a. 麦芽浸粉斜面培养基和种子培养基的制作均按照常规方法配制、 保存 ； 。
10、0009 b. 发酵液体培养基的制备 ： 培养液按重量百分比配比为 ： 硫酸铵 1.4-5.4 ； 磷 酸二氢钾 2.0-5.0 ； 氯化钙 0.3-1.0 ； 尿素 0.3-0.9 ； 硫酸镁 0.3-0.9 ； 硫酸亚铁 5.010-3-5.010-1 ； 硫酸锰 1.610-3-1.610-1 ； 硫酸锌 1.410-3-1.410-1 ； 氯 化钴 2.010-3-2.010-1 ； 其余蒸馏水 ； 说 明 书 CN 101785795 B2/3 页 4 0010 c. 将经过紫外消毒的藏茵陈 6 克， 加入到 150ml 步骤 b 的培养液中 ； 0011 (3) 麦芽浸粉斜面培养基。
11、培养 0012 将黑曲霉接种到麦芽浸粉斜面， 在 30恒温培养箱中培养 3 天， 待长出一层均匀 较厚的黑色孢子则可 ； 0013 (4) 黑曲霉种子培养基扩大培养 ： 在 500ml 三角瓶中加入 150ml 种子培养基， 灭菌 后， 接种斜面孢子 3 环， 在 30下， 130r/min 震荡培养 24h ； 0014 (5) 发酵液发酵培养 ： 0015 分别取出已经过扩大培养的黑曲霉种子培养液50ml加入到150ml发酵液中， 初始 pH 值为 3.5-7.5， 置于 10-50的条件下， 在 90-160r/mi n 震荡培养 10 100 小时 ； 0016 (6) 将发酵后的藏茵。
12、陈置于 35 65的温度下烘干、 粉碎， 过 80 目筛子。 0017 所述的藏茵陈饮片的制备方法， 将步骤 (6) 的藏茵陈粉 6-8 克装入胶囊或压制成 片剂。 0018 本发明应用黑曲霉菌对中药藏茵陈进行发酵， 发酵后降低了藏茵陈中纤维素和半 纤维素的含量， 从而有利于机体对藏茵陈中有效成分的消化吸收。 0019 本发明的有益效果 ： 本发明所采用的方法主要是通过黑曲霉产生的纤维素分解 酶、 半纤维素分解酶破坏植物药细胞壁结构， 从而可以大幅度提高藏茵陈中有效成分含量 和人体对有效成分的利用效率。 高效液相色谱检测表明， 发酵后其主要有效成分齐墩果酸、 芒果苷含量分别提高 18、 23，。
13、 有效成分溶出率较传统饮片提高 50-65。对小鼠免疫 性肝炎的疗效比较发现， 降低 sGDP 方面较传统藏茵陈饮片提高 25。本发明具有操作简 单， 成本低廉， 资源利用率高的优点， 可实现工业化生产， 可实现中药饮片的标准化， 具有很 高的实际应用价值， 市场前景广阔。 此外， 本方法对于其他中药饮片的制备同样具有借鉴意 义。 具体实施方式 ： 0020 以下对本发明的原理和特征进行描述， 所举实例只用于解释本发明， 并非用于限 定本发明的范围。 0021 实施例 1 ： 一种藏茵陈饮片的制备方法 0022 (1) 精密称取 20g 藏茵陈， 放在紫外灯光下照射 2 小时， 每隔 30mi。
14、n 翻动一次。 0023 (2) 培养基制作 0024 a. 麦芽浸粉斜面培养基和种子培养基的制作均按照常规方法配制、 保存 ； 0025 b. 发酵液体培养基的制备 ： 培养液按重量百分比配比为 ： 0026 硫酸铵 1.4 克 ； 磷酸二氢钾 2.0 克 ； 氯化钙 0.3 克 ； 尿素 0.3 克 ； 硫酸镁 0.3 克 ； 硫 酸亚铁 5.0 毫克 ； 硫酸锰 1.6 毫克 ； 硫酸锌 1.4 毫克 ； 氯化钴 2.0 毫克 ； 加入蒸馏水到 1000 毫升。 0027 c. 将经过紫外消毒的藏茵陈 6 克， 加入到 150ml 步骤 b 的培养液中 ； 0028 (3) 麦芽浸粉斜面。
15、培养基培养 0029 将黑曲霉接种到麦芽浸粉斜面， 在 30恒温培养箱中培养 3 天， 待长出一层均匀 较厚的黑色孢子则可 ； 0030 (4) 黑曲霉种子培养基扩大培养 ： 在 500ml 三角瓶中加入 150ml 种子培养基， 灭菌 说 明 书 CN 101785795 B3/3 页 5 后， 接种斜面孢子 3 环， 在 30下， 130r/min 震荡培养 24h ； 0031 (5) 发酵液发酵培养 ： 0032 分别取出已经过扩大培养的黑曲霉种子培养液50ml加入到150ml发酵液中， 初始 pH 值为 3.5-7.5， 置于 10-20的条件下， 在 90-120r/min 震荡培。
16、养 10 40 小时 ； 0033 (6) 将发酵后的藏茵陈置于 35 45的温度下烘干、 粉碎， 过 80 目筛子。 0034 所述的藏茵陈饮片的制备方法， 将步骤 (6) 的藏茵陈粉 6-8 克装入胶囊或压制成 片剂。 0035 实施例 2 ： 一种藏茵陈饮片的制备方法 0036 步骤 1-4 与实施例 1 相同。 0037 4. 黑曲霉种子培养基扩大培养 0038 5. 发酵液发酵培养 0039 分别取出已经过扩大培养的黑曲霉种子培养液50ml加入到150ml发酵液中， 初始 pH 值为 6.5 左右， 置于 30的条件下， 在 130r/min 震荡培养 36 小时。 0040 6. 。
17、将发酵后的藏茵陈置于 45的温度下烘干、 粉碎， 80 目过筛， 定量装入胶囊或 压制成片剂， 制成成品。 0041 实施例 3 一种藏茵陈饮片的制备方法 0042 步骤 1-4 与实施例 1 相同。 0043 5. 发酵液发酵培养 0044 分别取出已经过扩大培养的黑曲霉种子培养液50ml加入到150ml发酵液中， 初始 pH 值为 6.5 左右， 置于 30的条件下， 在 130r/min 震荡培养 48 小时。 0045 6. 将发酵后的藏茵陈置于 55的温度下烘干、 粉碎， 80 目过筛， 定量装入胶囊或 压制成片剂， 制成成品。 0046 上所述仅为本发明的较佳实施例， 并不用以限制本发明， 凡在本发明的精神和原 则之内， 所作的任何修改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 。