技术领域：
本发明涉及医药技术领域，确切的说它是一种注射用尼莫地平冻干乳剂及其制 备方法，该乳剂可用于各种原因引起的蛛网膜下隙出血后的脑血管痉挛和急性脑血 管病恢复期的血液循环改善。
技术背景：
尼莫地平(nimodipine，NIM)，化学名为：1-甲基乙基-2-甲氧乙基-1，4-二 氢-2，6-二甲基-4-(3-硝基苯基)-3，5-吡啶二羧酸酯，分子式：C21H26N2O7，分子 量418.5。
尼莫地平是一种临床上广泛应用的1，4-二氢吡啶类钙离子拮抗剂，是目前心 脑血管常用药。正常情况下，平滑肌的收缩依赖于Ca2+进入细胞内，引起跨膜电流的 去极化。尼莫地平通过有效地阻止Ca2+进入细胞内、抑制平滑肌收缩，达到解除血管 痉挛之目的。此外尚具有保护和促进记忆、促进智力恢复的作用。所以可选择性地 作用于脑血管平滑肌，扩张脑血管，增加脑血流量，显著减少血管痉挛引起的缺血 性脑损伤(张石革，孙定人.新药临床药理与应用手册[M]，化学工业出版社： 250～252)。但本品的理化性质决定了它在制剂过程中的难度。本品性质如下：淡 黄色结晶性粉末，无臭，无味，在丙酮、氯仿中易溶，在乙醇中溶解，在乙醚中微 溶，在水中几乎不溶(2.3μg/ml，25℃)，因此在制剂制备、体内吸收等方面均存 在着很大的难点。
目前临床上尼莫地平多以口服片剂、胶囊剂给药，生物利用度极低，且有较强 的肝首过作用，健康受试者及蛛网膜下腔出血患者的生物利用度分别为5％～13％ 和3％～28％。该药的生物半衰期也较短，约1.5～2.0h，患者须频繁给药，这种情 况下，不仅使用不方便，而且血药浓度较低，容易出现“峰谷”现象，因此大大降 低了该药的有效性。而注射液则多用乙醇等有机溶剂增溶，使用时需用特殊的三通 输液器与葡萄糖或生理盐水同时滴注，很不方便，由于尼莫地平必须以1～2mg/h的 速度慢速滴注，滴注10mg药物就需要至少5小时，而众多试验还表明尼莫地平输液 在与葡萄糖或生理盐水混合滴注过程中易出现析晶现象，而且长期使用含较高浓度 乙醇的制剂会对病人血管产生刺激作用，大大降低了病人的顺应性(张桂芳，朱家 壁，庄妍，等.尼莫地平纳米脂质体制备工艺及处方优化研究I[J]，中国药科大学学 报，2003，34(1)：25～28)。另外有人用环糊精将其制成包合物，但环糊精用量大 (至少大于30％)，也已经超过了安全范围。尼莫地平另外一个缺陷是遇光不稳定， 因此，无论是在制剂制备过程中、贮存过程中，还是在临床应用过程中都要求避光。
脂肪乳是一种具有膜亲和性和通透性制剂，同时它还是一种给药载体。通常情 况下是将药物溶解于某种油性溶剂中作为油相，水相和油相再在适当辅料的作用 下，通过特殊的工艺条件形成能够静脉注射的脂肪乳剂，当药物包入脂肪乳的乳滴 中时，不仅降低了药物的毒副作用，提高了药物的生物利用度，还具有了一定程度 的长效缓释和靶向作用。
脂肪乳本身是一种能量补充药，是静脉营养的组成部分之一，为机体提供能量 和必需脂肪酸，用于胃肠外营养补充能量及必需脂肪酸，预防和治疗人体必需脂肪 酸缺乏症，也为经口服途径不能维持和恢复正常必需脂肪酸水平的病人提供必需脂 肪酸。脂肪乳在临床上应用广泛，其安全性高，并已被多年临床应用所证实。
现将尼莫地平通过一定的手段制备成冻干乳剂，解决了其水不溶性和光不稳定 性两大难题。现有技术中未见有关于尼莫地平冻干乳剂及其制备方法的相关文献报 道。
发明内容：
本发明的目的之一是提供一种注射用尼莫地平冻干乳剂，它既能避免使用较高 浓度的乙醇增溶，降低了其对病人血管产生的刺激作用，又能避免与生理盐水混注 过程中产生的析晶和沉淀现象，因此大大提高了患者的顺应性。
本发明的第二目的是提供一种制备注射用尼莫地平冻干乳剂的方法，其制备工 艺简便、可靠，便于工业化，同时使药物含量更加可控，提高了药物及辅料的稳定 性。为广大患者提供了更安全、稳定、有效的冻干乳剂。
本发明所述注射用尼莫地平冻干乳剂，其组成包含活性成分尼莫地平，还包括 油性溶剂、乳化剂、冻干保护剂、等渗调节剂、pH调节剂，按冷冻干燥前或复溶后， 每1000ml脂肪乳剂中以质量体积百分比计算，它们分别为：
尼莫地平 0.001～0.2％
油性溶剂 0.5～30％
乳化剂 0.1～5％
冻干保护剂 5％～40％
等渗调节剂 0.1～10％
pH调节剂 适量。
在上述组分的基础上，还可以包括：
金属络合剂 0.1～1％
稳定剂 0.01～1％。
上述油性溶剂选自植物油、动物油、中性类脂物(甘油一、二、三脂)、合成 油脂、甾醇衍生物等。植物油可以是大豆油、茶油、橄榄油、蓖麻油、橄榄油、红 花油、棉籽油、玉米油等。动物油可以是鱼油、海狗油、海狸油等。实际应用时， 可以是任何种类油中的一种或一种以上按任意比例的混合物，其中优选大豆油、橄 榄油或中链甘油三酸酯中的一种或一种以上按任意比例的混合物，冷冻干燥前及再 溶解后的脂肪乳剂中的油性溶剂含量一般在0.5％-30％范围内，其中优选2％-20％ (W/V％)。
上述乳化剂可以是大豆磷脂、蛋黄磷脂、氢化大豆磷脂、氢化蛋黄磷脂、聚乙 二醇-磷脂酰胆碱(PEG-PC)、聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)、聚乙二醇-二硬脂 酰磷脂酰胆碱(PEG-DSPC)、泊洛沙姆、HS15(聚乙二醇12-羟基硬脂酸酯， Polyethylene glycol 660 hydroxy stearate)、维生素E聚乙二醇琥珀酸酯(TPGS)、 吐温类、聚氧乙烯脂肪醇醚类、胆固醇等药学上可接受的乳化剂中的一种或一种以 上按任意比例的混合物，其中优选大豆卵磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆卵磷脂、氢 化蛋黄卵磷脂、吐温和泊洛沙姆中的一种或一种以上按任意比例的混合物，乳化剂 在体系中的用量为0.1-5％(W/V％)，其中优选0.5％-2.5％。
上述冻干保护剂可以是葡萄糖、乳糖、半乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖、木糖 醇、麦芽糖、甘氨酸、蔗糖、海藻糖、右旋糖苷、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等中的 一种或一种以上按任意比例的混合物，优选葡萄糖、蔗糖、海藻糖、麦芽糖中的一 种或一种以上按任意比例的混合物，冻干保护剂在体系中的用量为5％-40％(W/V％)， 更优选为5％-30％(W/V％)。
等渗调节剂可以是甘油、葡萄糖、氯化钠等中的一种或一种以上按任意比例的 混合物，用量为0.1-10％(W/V％)。
稳定剂可以是胆固醇、无水亚硫酸(氢)钠、油酸、油酸钠、胆酸或脱氧胆酸 及其钠盐、Vc、氮气、二丁基羟基甲苯、α-生育酚、α-生育酚醋酸酯、氢醌等中 的一种或一种以上按任意比例的混合物，优选油酸、油酸钠、胆酸或脱氧胆酸及其 钠盐中的一种或一种以上按任意比例的混合物，用量为0.01～1％(W/V％)。
pH调节剂可以是氢氧化钠、磷酸钠、柠檬酸钠、盐酸、醋酸、磷酸、柠檬酸中 的一种或一种以上按任意比例的混合物，pH范围是6～10，其中优选7～9。
金属络合剂可以是乙二胺四乙酸类、依地酸钠钙、去铁敏等中的一种或一种以 上按任意比例的混合物，用量为0.1-1％(W/V％)。
本发明还提供了尼莫地平冻干乳剂的制备工艺，工艺步骤如下：1、将主药尼 莫地平溶解于油性溶剂中作为油相；2、将等渗调节剂溶于水中作为水相；3、乳化 剂既可分散于水相也可分散于油相，还可将乳化剂分成两部分同时溶于水相和油 相；4、将油相在搅拌的条件下加入水相中或水相在搅拌的条件下加入油相中，在 20-90℃的恒温水浴条件下初乳化，并调节pH在6～10之间；5、初乳通过均质机均 质，得到均匀的乳状液I；6、将冻干保护剂溶解得到溶液II；7、将溶液I与溶液 II混合并定容，经冷冻干燥去除水分，得干燥的尼莫地平冻干乳剂，所得冻干乳剂 复溶之后的平均粒径在50nm-500nm之间；8、根据需要可以在步骤1中加入油溶性稳 定剂，或在步骤2中加入水溶性稳定剂或/和金属络合剂。
将制得的冻干乳剂按需要量加注射用水、水、NaCl溶液、葡萄糖溶液、空白脂 肪乳或其它水溶液，水合振荡后复原成乳剂，供肌内注射或静脉输注。
总结起来本发明具有以下几个优点：1、使用油性溶剂作为溶解尼莫地平的溶 剂，一是避免了使用有机溶剂(如乙醇)对血管的刺激和伤害，使其毒副作用得到 一定程度的降低，二是避免使用大量环糊精，这就使安全性得到了保障，三是同时 解决了其水不溶性和光不稳定性这两大难题；2、通过脂肪乳作为载体，克服了口 服制剂生物利用度低的缺点；3、可以与任意比例的注射用水、水、NaCl溶液、葡 萄糖溶液、空白脂肪乳或其它水溶液混合，而不出现析晶现象；4、大大提高了药 物的稳定性。
将尼莫地平分散于乳滴中，不但有利于增加尼莫地平的透膜能力、延长其在体 内的滞留时间，同时还提高了用药的安全性还可以将药物靶向到脑部血管从而提高 其疗效，降低其毒副反应。为了解决传统乳剂的稳定性问题，在尼莫地平乳剂中加 入适量的冻干保护剂制成冻干乳剂，更有助于提高尼莫地平及其辅料的稳定性，降 低对生产、运输、贮存条件的要求，延长其贮存有效期，为广大患者提供更安全、 稳定、有效的尼莫地平制剂。
具体实施方案：
实施例1：
1、将10mg主药尼莫地平溶解于5g橄榄油中作为油相；
2、将1.0g大豆磷脂分散于水中，并加入5g甘油和1gVc作为水相；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相，在20℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至8.0，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将400g蔗糖溶解得 到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件下完成。
实施例2：
1、将500mg主药尼莫地平溶解于100g大豆油中作为油相；
2、将20g蛋黄磷脂分散于水中，并加入2g甘油作为水相；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相，在40℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.1mol/L的柠檬酸钠缓冲液调节pH至7.5，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将100g葡萄糖溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件下完成。
实施例3：
1、将2.0g主药尼莫地平和25g蛋黄磷脂溶解于300g注射用大豆油中作为油相；
2、将25g大豆磷脂分散于水中，再加入2.0g氯化钠和1g油酸钠作为水相；
3、将水相在搅拌的条件下加入油相，在90℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.5mol/L的柠檬酸缓冲液调节pH至8.0，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将200g麦芽糖溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件下完成。
实施例4：
1、将50mg主药尼莫地平和12g大豆磷脂溶解于50g鱼油中作为油相；
2、将2g甘油、0.1和10g依地酸钠钙溶于水中作为水相；
3、将水相在搅拌的条件下加入油相中，在70℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.5mol/L的NaOH溶液调节pH至10.0，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将400g甘露醇溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件下完成。
实施例5：
1、将2000mg主药尼莫地平与18g氢化蛋黄磷脂溶于25g大豆油与25g中链甘油三 酸酯的混合物中作为油相；
2、将5g大豆磷脂和0.5g吐温分散于水中，并加入3g甘油和0.1g油酸钠作为水 相；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相中，在50℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.1mol/L的NaOH溶液调节pH至8.5，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将150g乳糖溶解得 到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件的完成。
实施例6：
1、将100mg主药尼莫地平和12g氢化大豆磷脂以及油酸溶解于100g大豆油、100g 橄榄油和100g中链甘油三酸酯三者的混合物中；
2、将2.5g甘油和1gEDTA-2Na溶于水中作为水相；
3、将水相在搅拌的条件下加入油相中，在70℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.1mol/L HCl调节pH至6.0，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将200g麦芽糖溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件下完成。
实施例7：
1、将200mg主药尼莫地平、10g蛋黄磷脂和1g胆固醇溶解于200g中链甘油三酸 酯中；
2、将10g大豆磷脂分散于水中，并加入3g甘油和2gVc；
3、将水相在搅拌的条件下加入油相中，在80℃条件下高速搅拌使其初乳化， 并0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液调节pH至7.5，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将50g乳糖溶解得 到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂
实施例8：
1、将1000mg主药尼莫地平和0.3g油酸溶解于30g大豆油和30g中链甘油三酸酯 的混合物中；
2、将12g大豆磷脂分散于水中，并加入3g甘油；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相中，在50℃高速搅拌使其初乳化，并 0.1mol/L HCl调节pH至6.5，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将100g乳糖溶解得 到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件下完成。
实施例9：
1、将800mg主药尼莫地平与50g氢化大豆磷脂溶于150g大豆油和150g中链甘油 三酸酯的混合物中。
2、将2.5g甘油和1.5g氯化钠溶于水中作为水相；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相中，在75℃高速搅拌使其初乳化，并用 0.5mol/LNaOH调节pH至9.0，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将300g半乳糖溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合并定容，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水 分，得干燥的尼莫地平冻干乳剂
实施例10：
1、将200mg主药尼莫地平和50g大豆磷脂溶解于50g橄榄油和100g中链甘油三酸 酯三者的混合物中；
2、将3g氯化钠、1.0g油酸钠和2g依地酸钠钙溶于水中作为水相；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相中，在70℃高速搅拌使其初乳化，并调节 0.1mol/L柠檬酸钠缓冲液调节pH至7.5，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将100g右旋糖苷溶 解得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件的完成。
实施例11：
1、将500mg主药尼莫地平溶解于20g大豆油与20g中链甘油三酸酯的混合油中；
2、将10g大豆磷脂和2g泊洛沙姆分散于水中，并加入2.5g甘油和0.5g油酸钠；
3、将2在搅拌的条件下加入1中，在60℃高速搅拌使其初乳化，并调节pH至10， 得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将120g葡萄糖和80g 海藻糖溶解得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件的完成。
实施例12：
1、将250mg主药尼莫地平和12g大豆磷脂溶解于25g中链甘油三酸酯中；
2、将12g蛋黄磷脂、2.5g甘油溶于水中作为水相；
3、将油相在搅拌的条件下加入水相中，在55℃高速搅拌使其初乳化，并调节 pH至8.8，得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将100g麦芽糖溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件的完成。
实施例13：
1、将800mg主药尼莫地平和15g蛋黄磷脂、1g胆固醇以及0.3g油酸溶解于50g大 豆油与50g中链甘油三酸酯的混合物中；
2、将5g氯化钠溶于水中作为水相；
3、将2在搅拌的条件下加入1中，在70℃高速搅拌使其初乳化，并调节pH至9.0， 得到初乳；
4、初乳通过APV2000型均质机均质，得到均匀的乳状液I，将400g麦芽糖溶解 得到溶液II；
5、将溶液I与溶液II混合，将溶液定容至1000ml，经冷冻干燥去除水分，得 干燥的尼莫地平冻干乳剂，以上过程均在充氮的条件的完成。
尼莫地平含量和有关物质测定方法：
【含量测定】照高效液相色谱法(中国药典2005版二部附录VD)
色谱条件与系统适用性试验 用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-乙腈 -水(35∶38∶27)为流动相，检测波长为237nm。理论板数按尼莫地平峰面积计 算一般不低于8000，尼莫地平峰与相邻杂质峰的分离度应符合要求。
测定法精密称取本品适量，加入异丙醇溶解、破乳，使溶液含主药40μg/ml， 取该溶液10ml置20ml容量瓶中，加入流动相稀释至刻度，摇匀，精密量取10μl注 入色谱仪记录色谱图；另取尼莫地平对照品适量，精密称定，用流动相溶解并定容 稀释制成每1ml中约含20μg的溶液，同法测定，按外标法以峰面积计算，即得。
有关物质取含量测定项下的供试品溶液，精密量取适量，用流动相稀释制成2 μg/ml的溶液作为对照品溶液。照含量测定项下的色谱条件，取对照品溶液10μl 注入色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的50％；再精密 量取供试品溶液与对照溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分 色谱峰保留时间的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，除与主成分峰的保留时 间小于0.45的色谱峰不计外，单个杂质的峰面积不得大于对照溶液主峰面积，各杂 质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍。
小结：
试验结果：
A、以上13个实施例制备出的样品测定粒径分布情况
表1 尼莫地平冻干乳剂冻干前后粒径变化情况
以上试验结果采用Malvern Zetasizer nano-ZS型粒度测定仪测得。
从以上试验结果可以发现，以上13个处方和制备工艺得到的粒径均符合要求， 且样品冻干前后平均粒径大小和粒径分布范围均没有明显改变，另外冻干品外观性 状、复容情况均较理想。
B、尼莫地平冻干乳剂和普通注射液与稀释液混合后的溶液物理性质的变化情 况
以上样品与注射用水、水、NaCl溶液、葡萄糖溶液、空白脂肪乳分别按1∶1和 1∶5混合，水合振荡后复原成乳剂，放置6小时均无析晶、分层或破乳现象。
而普通的尼莫地平注射液与注射用水、水、NaCl溶液、葡萄糖溶液分别按1∶1 和1∶5混合均出现不同程度的析晶现象。
C、尼莫地平冻干乳剂(实施例12)与普通注射液光稳定性考察结果
表2 尼莫地平注射液30001x强光照射试验结果
时间(h) 外观性状 含量％ 有关物质％ 0 几乎无色的澄明液体 101.83 0.98 5 微黄绿色的澄明液体 99.26 2.93 10 黄绿色的半透明液体 70.26 15.67 24 较浑浊的黄绿色液体 41.05 27.81
表3 尼莫地平冻干乳剂30001x强光照射试验结果
时间(h) 外观性状 平均粒径 PdI 含量％ 有关物质％ 0 白色疏松块状物 189 0.107 100.66 0.88 5 白色疏松块状物 185 0.105 100.69 0.91 10 白色疏松块状物 190 0.108 100.21 0.89 24 白色疏松块状物 188 0.106 100.23 0.99
从尼莫地平冻干乳剂(实施例12)与普通注射液光稳定性考察结果可以看出， 冻干乳剂较普通注射液具有更好的光稳定性。
D、冻干乳剂(实施例12)与普通注射液长期稳定性的理化性质比较
表4 尼莫地平普通注射液长期稳定(温度：25℃，湿度：60％)性试验结果
外观性状 尼莫地平含量％ 有关物质％ 0月 几乎无色的澄明液体 100.96 0.98 3月 几乎无色的澄明液体 99.4 1.35 6月 微黄绿色的澄明液体 95.0 1.68 9月 微黄绿色的澄明液体 92.1 1.94 12月 黄绿色的半透明液体，略浑浊 89.5 2.36
表5 尼莫地平冻干乳剂长期稳定性(温度：25℃，湿度：60％)试验结果
外观性状 平均粒径(nm) PdI 尼莫地平含量％ 有关物质％ 0月 白色疏松块状物，复溶良好 189 0.107 100.66 0.88 3月 白色疏松块状物，复溶良好 188 0.109 100.42 0.89 6月 白色疏松块状物，复溶良好 189 0.106 100.21 0.95 9月 白色疏松块状物，复溶良好 184 0.105 99.48 0.96 12月 白色疏松块状物，复溶良好 192 0.110 100.01 1.03
*pdI：polydispersion index多分散指数(是用于衡量粒度分布范围的指标)
从尼莫地平冻干乳剂(实施例12)与普通注射液长期稳定性的理化性质比较结 果可以看出，将尼莫地平制成冻干乳剂较普通注射液大大增加了样品的物理与化学 稳定性。