技术领域
本发明涉及一种作为过敏症的预防或治疗剂有效的医药组 合物。本发明特别是涉及一种变应原的稳定性优异、储存及操 作等的便利性优异的医药组合物及医药组合物的制造方法。
背景技术
作为对花粉过敏等过敏性疾病的治疗，目前，大部分为使 用抗组胺剂的对症疗法，但是，近年来，作为可以根治过敏性 疾病的治疗方法，脱敏疗法备受瞩目。
认为脱敏疗法通常需要2～3年左右的长期给药，从该观 点考虑，需要进一步改善护理者及患者的QOL（生活品质）那 样的剂型。
现在，特异性脱敏疗法用制剂大部分是用于皮下注射的注 射剂。
但是，通过皮下注射进行的特异性脱敏疗法存在如下问 题：过敏性休克的危险性、通过医务工作者给药的必要性、长 期频繁到医院去的必要性、由注射引起的疼痛感、需要冷藏保 管等。
针对上述情况，近年来，欧美国家市售有用于舌下给药的 液体制剂及片剂，因其副作用小和简便而备受瞩目。
但是，通过液体制剂的舌下给药进行的特异性脱敏疗法存 在给药量不准确、需要冷藏保管等问题。
另外，通过片剂的舌下给药进行的特异性脱敏疗法存在误 服、难以调节给药量、携带性差、由残渣引起的口腔内的不适 感等问题。
另外，在变应原的制剂化中，需要稳定地保存变应原、即 将生物学活性的损失抑制在最小限度。
作为这样的变应原的制剂化技术，例如，专利文献1提出 了，对包含作为稳定剂的选自由葡萄糖、麦芽酮糖、异麦芽酮 糖、乳酮糖、蔗糖、麦芽糖、乳糖、山梨糖醇、异麦芽糖、麦 芽糖醇、乳糖醇、益寿糖（palatinit）、海藻糖、棉籽糖、水苏 糖、松三糖及葡聚糖构成的组中的玻璃化多元醇（glass forming polyol）的生物学样品进行干燥，以使其可以以具有高粘性的 液体的形式保存。另外，例如，作为与专利文献1同样的技术， 例如，专利文献2提出了一种包含蔗糖或海藻糖作为第一成分、 包含选自由甘露糖醇、棉籽糖、乳糖醇、山梨糖醇及乳糖酸构 成的组中的这些糖作为第二成分的生物学样品的高粘度液体。 另外，例如，专利文献3中，作为用于使蛋白质稳定化或可溶 化的方法，提出了接触糖聚合物衍生物，作为该糖聚合物衍生 物，可列举赤藓糖、苏阿糖、核糖、阿拉伯糖、木糖、来苏糖、 阿洛糖、阿卓糖、葡萄糖、甘露糖、古罗糖、艾杜糖、半乳糖、 塔罗糖、阿洛酮糖、果糖、山梨糖、塔格糖、木酮糖、核酮糖。 另外，例如，专利文献4中，作为用于蛋白质剂的稳定化的组 合物，提出了包含表面活性剂、两种氨基酸、二糖类及乙二胺 四乙酸的组合物，作为二糖类，可列举蔗糖、海藻糖或乳糖。 另外，例如，专利文献5中提出了一种包含至少一种氨基酸、 至少一种糖及至少一种多胺的稳定剂组合物，作为其糖，可列 举葡萄糖、乳糖、麦芽醇、海藻糖、山梨糖醇、甘露糖醇。另 外，例如，专利文献6中，作为使液体疫苗稳定化的方法，提 出了添加海藻糖。
进而，作为变应原的制剂化技术，提出了使用添加了稳定 剂、赋形剂的冷冻干燥剂的方法。
例如，专利文献7中提出了一种医药组合物，其通过对含 有明胶及甘露糖醇或者淀粉及甘露糖醇作为稳定剂的溶液进行 冷冻干燥，使梯牧草花粉变应原稳定化。在对比文件7中提出 了，在对含有基体的溶液进行固化之前，为了防止变应原改性、 沉淀、保证形成稳定的产物，优选对pH进行调节，并且提出 了溶液的pH优选为3.5～10、更优选为4～9、最优选为6～9。 另外，例如，专利文献8中提出了一种医药组合物，其通过对 含有作为稳定剂的甘露糖醇及作为pH调节剂的磷酸钠的溶液 进行冷冻干燥，使源于柳杉花粉变应原的肽稳定化。另外，例 如，专利文献9中也提出了一种医药组合物，其通过对含有作 为稳定剂的甘露糖醇及作为pH调节剂的乙酸的溶液进行冷冻 干燥，使柳杉花粉主要变应原的基因重组蛋白质稳定化。此外， 还提出过一种医药组合物，其通过对含有聚乙二醇4000、聚山 梨酯80及蔗糖的溶液进行冷冻干燥而使螨主要变应原的基因 重组蛋白质稳定化。
但是，变应原的热稳定性差，现有的变应原的制剂化技术 难以稳定地储存及输送变应原。
现有技术文献
专利文献
专利文献1:日本特表2006-504801号公报
专利文献2:日本特表2007-535514号公报
专利文献3:日本特表2008-501639号公报
专利文献4:日本特表2006-528137号公报
专利文献5:日本特表2008-532977号公报
专利文献6:日本特表2002-540079号公报
专利文献7:日本特表2006-513269号公报
专利文献8:日本特许第4179422号
专利文献9:日本特许第3932272号
发明内容
发明要解决的问题
本发明的课题在于，鉴于上述现状，提供可以稳定地储存 及输送热稳定性差的变应原的医药组合物、该医药组合物的制 造方法。
用于解决问题的方案
本发明人等为了解决上述课题进行了深入研究，结果发现， 通过含有选自由有机酸盐、无机酸盐及pH调节剂构成的组中 的至少一种作为稳定剂并调节pH，即使是热稳定性差的变应原 也可以稳定地储存及输送，从而完成了本发明。
即，本发明提供一种医药组合物，其特征在于，其含有变 应原和选自由有机酸盐、无机酸盐及pH调节剂构成的组中的 至少一种。
在本发明的医药组合物中，上述有机酸盐优选含有选自由 乳酸钙、柠檬酸钠、柠檬酸钙、苹果酸钠、甘草酸二钾、甘草 酸二钠、葡糖酸钙、葡糖酸钠、葡糖酸镁、硬脂酰富马酸钠、 酒石酸钠、酒石酸钠钾、琥珀酸二钠、乙酸钠、L-天冬氨酸钠 及L-抗坏血酸钠构成的组中的至少一种有机酸盐。
另外，上述无机酸盐优选含有选自由碳酸钙、（无水）磷 酸氢钙、碳酸镁、硅酸钙、硅酸镁、偏硅酸铝酸镁、合成硅酸 铝、碳酸氢钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钾、磷酸二氢 钾及磷酸二氢钙构成的组中的至少一种有机酸盐。
另外，本发明的医药组合物优选变应原为柳杉花粉变应原 蛋白质。
另外，本发明的医药组合物优选进一步含有明胶。
另外，本发明的医药组合物优选进一步含有水。
另外，上述pH调节剂优选为将pH调节至5.5～8.5的范 围内的pH调节剂。
另外，本发明的医药组合物优选pH调节剂含有选自由乙 酸、磷酸或硼酸或这些酸的混合物、氢氧化钠及碳酸钠构成的 组中的至少一种pH调节剂。
另外，本发明的医药组合物优选不含水。
另外，本发明的医药组合物优选为固体制剂、液体制剂或 胶状制剂。
另外，本发明的医药组合物优选用于经口给药。
另外，本发明的医药组合物优选用于脱敏疗法。
另外，本发明的医药组合物优选用于皮下注射。
另外，本发明还提供一种医药组合物的制造方法，其特征 在于，包含如下工序：使变应原和选自由有机酸盐、无机酸盐 及pH调节剂构成的组中的至少一种溶解于水中，得到含变应 原水溶液的工序；及使所述含变应原水溶液冷冻干燥的工序。
对于本发明的医药组合物的制造方法而言，优选进一步使 明胶溶解在上述含变应原水溶液中。
另外，上述含变应原水溶液的pH优选在5.5～8.5的范围 内。
下面，详细说明本发明。
本发明的医药组合物含有变应原和选自由有机酸盐、无机 酸盐及pH调节剂构成的组中的至少一种。
在本发明的医药组合物中，上述有机酸盐及无机酸盐是发 挥提高变应原的稳定性的作用的材料。
另外，在本发明的医药组合物中，上述pH调节剂是对本 发明的医药组合物的pH进行调节的材料，其通过将本发明的 医药组合物的pH调节至特定的范围内，即使是热稳定性差的 变应原也可以稳定地储存及输送。
在本发明的医药组合物中，作为上述有机酸盐，例如，优 选含有选自由乳酸钙、柠檬酸钠、柠檬酸钙、苹果酸钠、甘草 酸二钾、甘草酸二钠、葡糖酸钙、葡糖酸钠、葡糖酸镁、硬脂 酰富马酸钠、酒石酸钠、酒石酸钠钾、琥珀酸二钠、乙酸钠、 L-天冬氨酸钠及L-抗坏血酸钠构成的组中的至少一种有机酸 盐。
另外，在本发明中，作为上述有机酸盐，例如，也可以以 有机酸和氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化钾等的组合的形式使 用形成与医药组合物中上述的有机酸盐同等的有机酸盐的组 合。
另外，作为上述无机酸盐，例如，优选含有选自由碳酸钙、 （无水）磷酸氢钙、碳酸镁、硅酸钙、硅酸镁、偏硅酸铝酸镁、 合成硅酸铝、碳酸氢钠、磷酸氢钠、磷酸二氢钠、碳酸氢钾、 磷酸二氢钾及磷酸二氢钙构成的组中的至少一种无机酸盐。
另外，在本发明中，作为上述无机酸盐，例如，也可以以 无机酸和氯化钠、氯化钙、氯化镁、氯化钾等的组合的形式使 用形成与医药组合物中上述的无机酸盐同等的无机酸盐的组 合。
另外，由于变应原通常为低pH材料，因此，在本发明中， 优选使用可以维持变应原的低pH的有机酸盐及/或无机酸盐， 具体而言，优选使用pH低于5.5的有机酸盐及/或无机酸盐。
作为在维持上述变应原的低pH的情况下可以使该变应原 稳定化的有机酸盐，可列举例如：乳酸钙（pH4.8）、甘草酸二 钾（pH4.7）、酒石酸钠（pH3.8）、抗坏血酸钠（pH5.0）、苹果 酸钠（pH5.4）、硬脂酰富马酸钠（pH4.1）等。这些有机酸盐可 以单独使用，也可以两种以上并用。
另外，作为在维持上述变应原的低pH的情况下可以使该 变应原稳定化的无机酸盐，可列举例如：合成硅酸铝（pH4.6）、 磷酸二氢钠（pH4.4）、磷酸二氢钙（pH4.1）、磷酸二氢钾（pH4.4） 等。这些无机酸盐可以单独使用，也可以两种以上并用。
作为上述有机酸盐及/或无机酸盐的添加量，例如，在以注 射剂的形式使用本发明的医药组合物的情况下，优选为0.1～5 重量%。当其添加量低于0.1重量%时，对变应原的稳定化效果 弱，另一方面，当其添加量超过5重量%时，因有机酸盐、无 机酸盐的性质而异，但有可能会造成安全性问题。
另外，在以经口液体制剂的形式使用本发明的医药组合物 的情况下，上述有机酸盐及/或无机酸盐的添加量优选为0.1～ 20重量%。当其添加量低于0.1重量%时，对变应原的稳定化 效果弱，另一方面，当其添加量超过20重量%时，因有机酸盐、 无机酸盐的性质而异，但有可能会有结晶析出。
另外，在以固体制剂的形式使用本发明的医药组合物的情 况下，上述有机酸盐及/或无机酸盐的添加量优选为0.1～30重 量%。当其添加量低于0.1重量%时，对变应原的稳定化效果弱， 另一方面，当其添加量超过30重量%时，有机酸盐、无机酸盐 的物性有可能会对固体制剂产生影响。
另外，在本发明的医药组合物中，作为上述pH调节剂， 优选为可以使pH为后述的范围的pH调节剂，而且优选为有经 口给药使用经历的pH调节剂。作为这样的pH调节剂，例如， 可列举有作为药品添加剂的经历的己二酸、氨水、盐酸、碳酸 钠、稀盐酸、水合柠檬酸、甘氨酸、葡萄糖酸-δ-内酯、葡糖酸、 结晶磷酸二氢钠、琥珀酸、乙酸、乙酸铵、水合乙酸钠、二异 丙醇胺、酒石酸、D-酒石酸、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化钠、 氢氧化镁、碳酸氢钠、水合碳酸钠、三异丙醇胺、三乙醇胺、 二氧化碳、乳酸、乳酸钠液、冰乙酸、富马酸一钠、富马酸、 丙酸钠、硼酸、硼酸铵、硼砂、马来酸、柠檬酸酐、无水磷酸 一氢钠、无水磷酸二氢钠、葡甲胺、甲磺酸、单乙醇胺、硫酸、 水合硫酸铝钾、DL-苹果酸、磷酸、磷酸三钠、磷酸二钾、磷 酸二氢钾、磷酸二氢钠等。这些pH调节剂可以单独使用，也 可以两种以上并用。
另外，对于上述pH调节剂，从本发明的医药组合物的制 造上的观点考虑，优选为少量使用即可调节pH的pH调节剂。
作为这样的pH调节剂，可列举有作为药品添加剂的经历 的己二酸、氨水、盐酸、碳酸钠、稀盐酸、水合柠檬酸、甘氨 酸、葡糖酸-δ-内酯、葡糖酸、结晶磷酸二氢钠、琥珀酸、乙酸、 乙酸铵、水合乙酸钠、二异丙醇胺、酒石酸、氢氧化钾、氢氧 化钙、氢氧化钠、氢氧化镁、碳酸氢钠、水合碳酸钠、三异丙 醇胺、三乙醇胺、二氧化碳、乳酸、乳酸钠液、冰乙酸、富马 酸、富马酸一钠、丙酸钠、硼酸、硼酸铵、硼砂、马来酸、柠 檬酸酐、无水磷酸一氢钠、无水磷酸二氢钠、葡甲胺、甲磺酸、 单乙醇胺、硫酸、水合硫酸铝钾、DL-苹果酸、磷酸、磷酸三 钠、磷酸二钾、磷酸二氢钾、磷酸二氢钠等。这些pH调节剂 可以单独使用，也可以两种以上并用。
另外，上述pH调节剂还优选为具有抑制蛋白质改性、聚 集的效果的有机酸及有机酸盐。作为这样的pH调节剂，可列 举例如：水合柠檬酸、甘氨酸、葡萄糖酸-δ-内酯、葡糖酸、琥 珀酸、乙酸、水合乙酸钠、酒石酸、乳酸、冰乙酸、富马酸、 富马酸一钠、丙酸钠、马来酸、柠檬酸酐、苹果酸等。
进而，在本发明的医药组合物中，上述pH调节剂优选为 缓冲能在后述的pH的范围内达到最大的缓冲液、包含具有抑 制蛋白质改性、聚集的效果的有机酸或有机酸盐的缓冲溶液。
具体而言，可列举例如：柠檬酸缓冲液（包含柠檬酸及柠 檬酸钠的混合物）、乙酸缓冲液（包含乙酸及乙酸钠的混合物）、 柠檬酸-磷酸缓冲液（包含柠檬酸及磷酸氢二钠的混合物）、磷 酸缓冲液（包含磷酸二氢钠及磷酸氢二钠的混合物）等。
另外，如果是在后述的pH的范围内，则也可以使用作为 广域缓冲液的伯瑞坦-罗宾森（Britton-Robinson）缓冲液作为上 述pH调节剂。
作为上述伯瑞坦-罗宾森缓冲液，只要是使本发明的医药 组合物为后述的pH的范围内的缓冲液即可，没有特别限制， 例如，可优选使用乙酸：磷酸：硼酸=1∶1∶1（重量比）的混 合物。
其中，在本发明的医药组合物中，可优选使用包含选自由 乙酸、磷酸或硼酸或者这些酸的混合物、氢氧化钠及碳酸钠构 成的组中的至少一种的pH调节剂。
另外，对于上述pH调节剂，例如，也可以以有机酸和氯 化钠、氯化钙、氯化镁、氯化钾等的组合的形式使用形成与医 药组合物中作为上述pH调节剂示例的有机酸盐同等的有机酸 盐的组合。
作为上述pH调节剂的含量，没有特别限制，优选以使本 发明的医药组合物的pH为后述的范围内的形式进行适当调节。
本发明中使用的上述变应原，是指与具有过敏疾病的人的 抗体特异性反应的抗原，典型的为蛋白质。
具体而言，可列举源于树木类的花粉的变应原（金合欢 （golden acacia）、红桤木、美国白蜡树、美国山毛榉、桦木、 梣叶枫、山柳杉（mountain cedar）、红柳杉（red cedar）、白杨 （common cottonwood）、丝柏、美洲榆、榔榆、日本道格拉斯冷 杉、香枫、桉树、朴树、山胡桃树、椴树、糖枫、豆科灌木、 桑树、橡树、橄榄树、美国山核桃树、胡椒树、松树、地中海 女贞木、沙枣树、美洲桐木、臭椿、黑胡桃树、黑柳等）、源于 草木类的花粉的变应原（木棉、狗牙草、肯塔基蓝草、无芒雀 麦草、玉米大刍草（cultivated corn）、牛尾草、约翰逊草、燕 麦草（cultivated oats）、野茅、小糠草、黑麦草、大米草、黄花 茅、梯牧草、苋（careless weed）、藜草、普通苍耳、酸模草、 秋麒麟草、扫帚草、羊腿藜、金盏草、荨麻、红根苋（pigwood）、 车前草、三裂叶豚草、短豚草、西方猪草、钾猪毛草、蒿属植 物、金雀花、小酸模（sheep sorrel）等）、源于虫的变应原（蚕、 螨、蜜蜂、马蜂、蚂蚁、蟑螂等）、源于菌的变应原（链格孢菌、 曲霉、肉毒杆菌、念珠菌、头孢霉、弯孢霉、黑附球菌、表皮 癣菌、镰孢菌属、长蠕孢霉属、芽孢状单孢枝霉、毛霉菌、青 霉菌、茎点菌属、出芽茁霉、根霉等）、源于动物的体毛的变应 原（犬、猫、鸟等）、源于室内尘埃的变应原、源于食物的变应 原等，只要是与具有过敏疾病的人的抗体发生特异性反应的抗 原即可，没有特别限制。
这里，目前，大量患者希望进行柳杉花粉过敏症的脱敏疗 法。因此，在本发明的医药组合物中，作为上述变应原，优选 为柳杉花粉变应原蛋白质。
作为上述柳杉花粉变应原蛋白质，可列举如下的柳杉花粉 变应原蛋白质：包含选自以从柳杉花粉提取的具有与有过敏疾 病的人的抗体发生特异性反应的抗原性的蛋白质、与该蛋白质 的氨基酸序列的同源性高的蛋白质为有效成分而成的组中的一 种以上蛋白质。
作为上述由柳杉花粉提取的具有抗原性的蛋白质，可列举 可以诱导柳杉花粉特异性IgE抗体产生那样的柳杉花粉中含有 的蛋白质。该柳杉花粉中含有的蛋白质包含主要柳杉花粉变应 原蛋白质和次要柳杉花粉变应原蛋白质。
需要说明的是，花粉中所含的几种柳杉花粉提取物内，将 大多数患者有强烈过敏反应的成分称为主要柳杉花粉变应原蛋 白质，将仅一部分患者有过敏反应的成分称为次要柳杉花粉变 应原蛋白质。
上述柳杉花粉变应原蛋白质可以是包含它们的液态，也可 以是固体。这里，将液态的称为柳杉花粉提取物，在液态的柳 杉花粉提取物的情况下，可以使用本发明中的上述有机酸盐及/ 或无机酸盐作为稳定剂，将本发明的医药组合物原样以注射剂 或经口液体制剂的形式使用，也可以在本发明的医药组合物中 进一步加入胶凝剂进行固态化而作成经口固体制剂。
另外，将柳杉花粉提取物和上述有机酸盐及/或无机酸盐混 合后，进行冷冻干燥等操作，由此可以将本发明的医药组合物 作成经口固体制剂。
作为上述柳杉花粉提取物，特别优选作为主要柳杉花粉变 应原蛋白质的Cryj1、Cryj2及它们的混合物。另外，在本发明 中，还优选不仅含有上述Cryj1及Cryj2而且还含有次要柳杉 花粉变应原蛋白质的作为柳杉花粉提取液的柳杉花粉提取物原 样或稀释而成的提取物、或者使其冷冻干燥而成的固体物质。 需要说明的是，实际上作为药品由鸟居药品株式会社销售有相 当于上述柳杉花粉提取物的治疗用标准化变应原提取物皮下注 射“TORII”柳杉花粉200JAU/mL及治疗用标准化变应原提取物 皮下注射“TORII”柳杉花粉2000JAU/mL，可以使用该药品。
这里，上述“JAU”是“日本变应原单位（Japanese Allergy Units）”的缩写，是指利用作为主要变应原蛋白质的Cryj1进行 标准化的柳杉花粉变应原的效价。
作为上述变应原的配合量，也因其性质等而异，但相对于 本发明的医药组合物的总重量，通常为1×10-10～60重量%。低 于1×10-10重量%时，有时不适于脱敏疗法，超过60重量%时， 在将本发明的医药组合物作成膜状制剂时，有可能会使膜强度 显著下降，膜的形状保持性产生问题。
特别是在上述变应原为柳杉花粉变应原蛋白质并含有上述 有机酸盐及/或无机酸盐的情况下，作为该柳杉花粉变应原蛋白 质的配合量，也因其性质等而异，但相对于添加的上述有机酸 盐及/或无机酸盐，优选为1×10-10～100重量%。超过100重量 %时，在保管稳定性上，有机酸盐及/或无机酸盐有可能无法显 示作为稳定剂的充分效果，低于1×10-10重量%时，实用上可能 无法得到最佳临床效果。
对于本发明的医药组合物而言，在含有上述pH调节剂的 情况下，优选pH在5.5～8.5的范围。当含有上述pH调节剂的 本发明的医药组合物的pH在低于5.5或大于8.5的范围时，变 应原的物理化学稳定性显著减少，造成安全性问题。需要说明 的是，上述治疗用标准化变应原提取物的规格设定为pH 4～5。 对于本发明的医药组合物的pH，可以利用上述的pH调节剂调 节至上述范围。
另外，在本发明的医药组合物含有上述有机酸盐及/或无机 酸盐的情况下，优选pH在5.0～9.0的范围内。当含有上述有 机酸盐及/或无机酸盐的本发明的医药组合物的pH在低于5.0 或大于9.0的范围时，有时变应原的物理化学稳定性显著减少， 造成安全性问题。更优选pH为6.0～8.0。另外，对于含有上述 有机酸盐及/或无机酸盐的本发明的医药组合物，为了设定为上 述pH范围，优选含有上述的pH调节剂。
在本说明书中，“pH”是指通过以下方法测定的值。
在测定对象为液体制剂的情况下，使用pH测定仪（例如， 株式会社堀场制作所制、pH计），在25±2℃的温度下直接测定 液体制剂的pH。
另外，在测定对象为固体制剂（包括胶状制剂）的情况下， 首先，取1g固体制剂置于10mL量瓶，用蒸馏水稀释至刻度。 在30～35℃的恒温下进行搅拌直至固体制剂完全溶解而得到 样品溶液。使用pH测定仪（例如，株式会社堀场制作所制、 pH计），在25±2℃的温度下测定得到的样品溶液的pH。
本发明的医药组合物优选进一步含有水。
通过进一步含有上述水，可以优选以后述的胶状制剂的形 式使用本发明的医药组合物。需要说明的是，其理由将在后面 叙述。
另外，本发明的医药组合物优选含有明胶。
上述明胶作为胶凝剂或稳定剂起作用，可列举将动物的 皮、骨中含有的蛋白质利用酶进行分解提取而得到的明胶，例 如，可以使用对源于猪、牛及鱼的明胶进行酸处理或碱处理而 得到的任一种明胶。
从上述的变应原的保管时稳定性的观点考虑，作为上述明 胶，优选碱处理明胶，从其溶解性的观点考虑，优选水溶性明 胶。
另外，从近年来的BSE问题的观点考虑，作为上述明胶， 优选源于鱼及源于猪的明胶。
另外，上述明胶作为稳定剂添加的情况下，认为其添加量 越多越优选，但依存于所要求的最终剂型。
例如，在将本发明的医药组合物以注射剂的形式使用的情 况下，作为上述明胶的添加量，优选为1～3重量%。低于1重 量%时，对变应原的稳定化效果弱，超过3重量%时，有可能 会因其粘性而造成实用上问题。
另外，在将本发明的医药组合物以经口液体制剂的形式使 用的情况下，作为上述明胶的添加量，优选为1～10重量%。 低于1重量%时，对变应原的稳定化效果弱，超过10重量%时， 有可能会因其粘性而造成实用上问题。
另外，在将本发明的医药组合物以经口固体制剂的形式使 用的情况下，作为上述明胶的添加量，优选为1～80重量%。 低于1重量%时，对变应原的稳定化效果弱，超过80重量%时， 存在经口给药时变应原的释放性变低，无法充分发挥效果的可 能性。
如上所述，本发明的医药组合物可以制备注射剂、经口液 体制剂、经口固体制剂，在以这些剂型的形式使用的情况下， 除了上述的材料以外，也可以根据要求适当使用赋形剂、粘合 剂、香料、掩味剂、甜味剂、着色剂、防腐剂、抗氧化剂、上 述的有机酸盐及/或无机酸盐以外的稳定剂、表面活性剂等。作 为这些材料，没有特别限制，可以使用目前公知的材料。
另外，作为本发明的医药组合物的优选剂型，可列举例如： 固体制剂、液体制剂或胶状制剂。
另外，本发明的医药组合物优选为皮下注射用、经口给药 用或经口给药用的液体制剂。
上述经口固体制剂包括片剂、糖衣片、散剂、颗粒剂、细 粒剂、口腔内崩解片、口腔内粘贴剂、胶状制剂、膜剂，只要 是经口、舌下、口腔给药的固体状的制剂即可，没有特别限制。
另外，本发明的医药组合物优选用于脱敏疗法。
上述用于脱敏疗法的本发明的医药组合物优选为胶状制 剂。
作为上述胶状制剂，可列举在上述的本发明的医药组合物 中含有水和作为胶凝剂的明胶的胶状制剂。
上述胶状制剂可以优选用于需要控制过敏时间的口腔内 脱敏疗法用，特别适于舌下脱敏疗法。另外，由于上述胶状制 剂含有明胶和特定的稳定剂，因此可以稳定地维持变应原、特 别是蛋白质、肽。
作为上述胶状制剂的厚度，没有特别限制，优选为30～ 5000μm。低于30μm时，从薄片强度及产品的操作性的观点来 看可能成为问题，超过5000μm时，在向口腔内、特别是舌下 给药的情况下，可能会有不适感。
另外，作为上述胶状制剂的尺寸，没有特别限制，优选平 面面积在0.5～6.0cm2的范围内。低于0.5cm2时，将胶状制剂 用手拿起来给药时有可能不容易操作，超过6.0cm2时，有可能 无法完全放入口腔内、特别是舌下。
另外，上述胶状制剂的平面形状没有特别限制，可列举例 如：长方形、正方形等矩形、五边形等多边形、圆形、椭圆形 等任意的形状。对于这里所说的多边形，除了典型的多边形以 外，还包括角部具有略圆角的形状。
上述胶状制剂含有作为胶凝剂的明胶。
上述明胶是构成上述胶状制剂的基材的材料，具有膜形状 形成能力及可食性。
通过含有这样的明胶，上述胶状制剂可以在常温下发生凝 胶化，在口腔内的体温程度的温度下容易溶解。另外，明胶可 以在热可逆性胶凝剂中在最低温下发生凝胶化，可以在常温～ 40℃附近的温度下制造制剂，因此，可以确保制造热稳定性低 的药物时的稳定性。
需要说明的是，在本说明书中，“可食性”是指可以经口给 药且制剂学上容许使用。
作为上述明胶，优选可溶解于常温下的水的被称为水溶性 明胶的等级的明胶。通过使用上述水溶性明胶，可以在常温附 近制造胶状制剂，可以确保后述的药物制造时的稳定性。
需要说明的是，本说明书中所说的“水溶性明胶”是指1g 明胶溶于20mL常温（30℃）水的明胶。
另外，上述明胶优选具有在制成浓度10重量%的水溶液时 在32℃不发生凝胶化、在5℃附近发生凝胶化的特性。其原因 在于，在为具有这样的特性的明胶的情况下，即使不是上述水 溶性明胶，也存在根据分子量及明胶中的羟基脯氨酸含量充分 发挥本发明的效果的等级。
作为上述胶状制剂中可使用的明胶，可列举将动物的皮、 骨中含有的蛋白质利用酶进行分解提取而得到的明胶，例如， 可以使用对源于猪、牛及鱼的明胶进行酸处理或碱处理而得到 的任一种明胶。
其中，作为上述明胶，从制造时可以在常温下制备、制造 不耐热的药物时的稳定性的观点考虑，优选源于鱼或猪的明胶。
从这样的观点来看，上述明胶只要是平均分子量超过9万、 氨基酸组成中的羟基脯氨酸量为5.2～9.2摩尔%的明胶即可。 作为这样的明胶，可列举例如：源于鲑鱼的明胶（氨基酸组成 中的羟基脯氨酸量：5.4摩尔%）、源于鲤鱼的明胶（氨基酸组 成中的羟基脯氨酸量：7.6摩尔%）、源于罗非鱼的明胶（氨基 酸组成中的羟基脯氨酸量：8.0摩尔%）等源于鱼的明胶，其中， 特别优选源于罗非鱼的明胶。
这里，上述氨基酸组成是通过使明胶水解后利用离子交换 色谱法进行分离并利用茚三酮进行检测的分析而得到的。
需要说明的是，作为利用上述方法得到的氨基酸组成中的 羟基脯氨酸量（摩尔%）的具体例，例如，如下所述。
鸡：10.8%
驼鸟：10.4%
鼠：8.7%
猪：9.4%
牛：9.5%
另外，作为上述明胶，只要是平均分子量为5万～9万的 明胶，就与氨基酸组成中的羟基脯氨酸量无关而是优选的明胶。
这里，本说明书中“平均分子量”是指重均分子量，利用凝 胶过滤色谱分析进行测定。
进而，这里所说的平均分子量不是明胶的多肽链3聚物的 分子量，是指各个多肽链单体的分子量。
在上述胶状制剂中，对于上述明胶的含量，基于该胶状制 剂的总重量，优选为2～40重量%、更优选为3～30重量%。 低于2重量%时，有可能在常温下不发生凝胶化，另一方面， 超过40重量%时，上述胶状制剂在口腔内的溶解非常慢，有可 能会造成使用问题。
对于上述胶状制剂而言，在作为上述可食性高分子的明胶 的基础上，只要是不损害本发明的效果的范围，就还可以适当 组合使用仅溶于水的可食性高分子或不溶于水也不溶于有机溶 剂的可食性高分子（以下将这些可食性高分子统称为其他可食 性高分子）。
对于上述其他可食性高分子的配合量，以上述胶状制剂的 总重量标准计，优选为0.1～10重量%。
另外，上述胶状制剂含有水。
上述水是具有辅助上述胶状制剂溶解的作用的材料。
另外，通过控制上述胶状制剂内的水分含量，可以容易地 控制胶状制剂的溶解时间。因而，上述胶状制剂不管是在口腔 内溶解服用的情况，还是在口腔内、特别是舌下慢慢溶解而使 药物释放的情况下都适用。
在本发明中，基于胶状制剂的总重量，水含量优选为1～ 60重量%、更优选为5～50重量%。低于1重量%时，有可能 在口腔内的溶解性变得非常差而造成使用上问题，另一方面， 超过60重量%时，可能会使常温下的物性方面的保管稳定性变 差。
另外，上述胶状制剂优选进一步含有改善物性及溶解性的 添加剂，例如选自由糖、糖醇及糖脂肪酸构成的组中的至少一 种。
作为上述糖，可列举例如以下所示的单糖、二糖、三～六 糖。
作为单糖类，可列举例如：赤藓糖、苏阿糖等丁醛糖；核 糖、来苏糖、木糖、阿拉伯糖等戊醛糖；阿洛糖、塔罗糖、古 罗糖、葡萄糖、阿卓糖、甘露糖、半乳糖、艾杜糖等己醛糖； 赤藓酮糖等酮丁糖；木酮糖、核酮糖等戊酮糖；阿洛酮糖、果 糖、山梨糖、塔格糖等己酮糖等。作为二糖类，可列举例如： 海藻糖、曲二糖、黑霉糖、麦芽糖、异麦芽糖等α-双糖苷、异 海藻糖、槐糖、昆布二糖、纤维二糖、龙胆二糖的β-双糖苷、 新海藻糖等α,β-双糖苷、以及乳糖、蔗糖、异麦芽酮糖（帕拉 金糖）等。作为三糖类，可列举例如棉籽糖等。作为三糖～六 糖的低聚糖，可列举例如：低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖、 低聚异麦芽糖、甲壳素低聚糖、低聚壳聚糖、低聚氨基葡萄糖、 糊精、环糊精等环状低聚糖等。
另外，作为单糖的醇，可列举例如：赤藓糖醇、D-苏丁醇、 L-苏丁醇等丁糖醇、D-阿拉伯糖醇、木糖醇等戊糖醇、D-艾杜 糖醇、半乳糖醇（卫矛醇）、D-葡萄糖醇（山梨糖醇）、甘露糖 醇等己糖醇、肌醇等环多醇等。另外，作为二糖的醇，可列举 例如：麦芽糖醇、乳糖醇、还原帕拉金糖（异麦芽酮糖醇）等， 作为低聚糖的醇，可列举季戊四醇、还原麦芽糖糖浆等。
在上述胶状制剂中，上述糖或糖醇可以被取代，另外，也 可以单独使用1种或混合使用2种以上。
对于上述糖或糖醇，从上述胶状制剂在口腔内容易溶解的 观点、而且制造工序中溶液粘性不会发生大的变化的观点考虑， 优选为单糖类～三糖类或这些糖的糖醇。
另外，作为上述糖脂肪酸，可列举例如山梨糖醇酐脂肪酸 酯、蔗糖脂肪酸酯等。
作为上述山梨糖醇酐脂肪酸酯，可列举例如：山梨糖醇酐 单油酸酯、山梨糖醇酐三油酸酯、山梨糖醇酐倍半油酸酯、山 梨糖醇酐椰子油脂肪酸酯、聚氧乙烯山梨糖醇酐脂肪酸酯等。
另外，作为上述蔗糖脂肪酸酯，可列举例如：蔗糖硬脂酸 酯、蔗糖油酸酯、蔗糖软脂酸酯、蔗糖肉豆蔻酸酯、蔗糖山嵛 酸酯、蔗糖芥酸酯、蔗糖混合脂肪酸酯等。
对于这些糖脂肪酸而言，除了作为蛋白质、肽的稳定剂的 效果以外，还作为消泡剂起作用，因此非常合适。
另外，作为改善上述胶状制剂的物性的添加剂，优选进一 步含有聚乙二醇或其衍生物、纤维素。
作为上述聚乙二醇，优选平均分子量为200～2万的聚乙 二醇，更优选平均分子量为400～8000的聚乙二醇。平均分子 量低于200时，增塑性高，可能无法得到使用上所需要的充分 的物性，平均分子量超过2万时，溶解时的粘性升高，口腔内 可能会有不适感。需要说明的是，这里所说的平均分子量可利 用第十五改正日本药局方各条聚乙二醇400中记载的平均 分子量试验求得。
作为上述纤维素，优选为结晶纤维素、粉末纤维素，更优 选为结晶纤维素。
对于这样的纤维素，优选平均粒径为0.01～100μm的纤维 素，更优选平均粒径为0.01～50μm的纤维素。平均粒径低于 0.01μm时，有在制备中的溶液中容易发生聚集、反而损害物性 的担心。平均粒径超过100μm时，可能在制备中的溶液中容易 发生沉降，而且，在口腔内给药时有可能残留残渣感而感觉不 适。这里所说的平均粒径是指用激光散射式粒度分布测定装置 求得的50%平均粒径。
对于上述胶状制剂中上述的添加剂的量，基于上述胶状制 剂的总重量，优选为1～80重量%，更优选为5～70重量%。 低于1重量%时，有可能无法担保使用上充分的物性，另一方 面，超过80重量%时，有难以利用添加的添加剂控制胶状制剂 的物性的担心。
进而，对于上述胶状制剂而言，作为构成基材的成分，除 了上述的材料以外，也可以根据要求适当使用香料、掩味剂、 甜味剂、着色剂、防腐剂、抗氧化剂、其它稳定剂、表面活性 剂等。作为这些材料，没有特别限制，可以使用目前公知的材 料。
由于如上所述上述胶状制剂含有明胶，因此，可以在常温 下发生凝胶化，在口腔内的体温程度的温度下容易溶解，另外， 通过含有明胶和特定的添加剂，可以显著改善使用上的物性。 另外，可以稳定地维持变应原蛋白质、特别是柳杉花粉变应原 蛋白质。
另外，对于上述胶状制剂，通过控制其水分含量，可以容 易地控制其溶解时间，因此，适于需要控制过敏时间的口腔内、 特别是舌下脱敏疗法。
对于上述胶状制剂，当然可以以原样的状态咽下，也可以 使其在口腔内立即溶解并咽下。进而，也可以控制在口腔内的 溶解时间以被口腔粘膜、舌下粘膜吸收。从由于在体温程度的 温度下可以完全溶解而没有残渣感的观点、以及其形状为薄片 状且其表面积比片剂等大从而患者及护理者均容易用手指把持 的观点来看，可大幅度提高患者及护理者的QOL。
对于上述的胶状制剂，例如，可以通过如下方法来制造： 具有混合水、明胶、有机酸盐及/或无机酸盐以及变应原来制备 混合溶液的工序和使用上述混合溶液形成薄膜的工序，在制备 上述混合溶液的工序中调节添加水分量、或者在形成上述薄膜 的工序之后使上述薄膜干燥以调节得到的医药组合物中含有的 水量的方法。
在上述制备混合溶液的工序中，例如，首先，在常温下或 通过加热使明胶、有机酸盐及/或无机酸盐以及根据需要的其他 添加剂溶解在规定量的水中，另外，对于不溶解的添加剂，使 其均匀分散。在上述变应原为对热稳定的变应原的情况下，该 变应原与上述明胶等一起添加来制备混合溶液。另一方面，在 对热不稳定的变应原的情况下，使上述明胶等溶解而制备明胶 溶液后，在将该明胶溶液冷却至常温～35℃附近之后添加变应 原并进行搅拌混合来制备混合溶液。需要说明的是，上述变应 原也可以在后述的分注或延展混合溶液时添加。
需要说明的是，在制备上述混合溶液时起泡的情况下，放 置一夜、进行真空脱泡或减压脱泡即可。
另外，在上述形成薄膜的工序中，例如，将规定量的上述 混合溶液在28～32℃的温度下分注入所希望的尺寸的塑料制 泡罩盒内，分注后立即使其冷却固化而形成薄膜。也可以替代 该分注方式，将上述混合溶液适当量延展在剥离膜上并冷却固 化，从而形成薄膜并裁剪成所希望的尺寸。
本工序形成的薄膜优选与上述的胶状制剂具有同等的尺 寸。
在上述胶状制剂的制造方法中，在上述制备混合溶液的工 序中调节添加水分量，或者在上述形成薄膜的工序之后使上述 薄膜干燥从而调节得到的胶状制剂中含有的水量。
即，通过在制备混合溶液的工序中调节添加水分量来进行 上述水量的调节的情况下，可以通过上述形成薄膜来制造本发 明的胶状制剂。
另一方面，通过在形成上述薄膜的工序之后使上述薄膜干 燥来进行上述水量的调节的情况下，可以通过使上述薄膜干燥 来制造上述胶状制剂。
作为使上述薄膜干燥的方法，可列举例如进行冷风干燥工 序或冷却减压干燥工序的方法。
对于上述胶状制剂的制造方法而言，由于使用可以谋求变 应原的热稳定性的提高的有机酸盐及/或无机酸盐或者pH调节 剂，因此，可以防止制造过程中的变应原的失活损失，特别是 在即使是热稳定性低的变应原蛋白质也可以在高温（常温～ 40℃）下制备方面非常有用。
另外，对于得到的医药组合物，优选根据需要进行密封包 装作成产品。
另外，本发明的医药组合物也优选不含水。
通过使本发明的医药组合物不含水，不需要例如使用医药 组合物而成的普通胶状制剂所需要的灭菌工序、防腐剂的添加， 在制造成本面有优势，另外，也适合于应用在用于需要限制水 分的患者的营养辅助食品的情况。
需要说明的是，本说明书中“不含水”包括基本上不含水的 情况，是指例如以本发明的医药组合物的总重量为基准水含量 为5重量%以下、优选为2.5重量%以下、更优选为1重量%以 下。
在本发明的医药组合物不含水的情况下，优选的是，本发 明的医药组合物为含有上述明胶并被称为块状物（cake）的多 孔性固体，为通过利用冷冻干燥法使作为含有变应原的水溶液 的溶剂的水分升华而形成的冷冻干燥制剂。
作为本发明的医药组合物的冷冻干燥制剂在常温～60℃ 左右物理性质稳定。
另外，由于主基材为明胶，因此，本发明的医药组合物在 口腔内的体温程度的温度和水分量下容易溶解，通过含有特定 的添加剂，可以显著改善使用上的物性。
另外，可以稳定地维持变应原蛋白质、特别是柳杉花粉变 应原蛋白质。
对于本发明的医药组合物，当然可以以原样的状态咽下， 也可以在口腔内立即溶解并咽下。进而，也可以控制在口腔内 的溶解时间以期待口腔粘膜、舌下粘膜的吸收。
进而，对于本发明的医药组合物，从由于在体温程度的温 度下可以完全溶解而没有残渣感的观点、还有物理性质稳定、 患者及护理者均容易用手指把持的观点来看，可大幅度提高患 者及护理者的QOL。
对于本发明的医药组合物的物理强度没有特别限制，优选 为例如在包装、储存、运输及由患者处理制剂时看不到破裂· 缺损等物理性崩解的程度。另外，在用手把持的情况下，体温 程度的接触时看不到制剂溶解、性状恶化。
进而，对于使用本发明的医药组合物得到的制剂，要求其 在具有物理稳定性，另一方面，要求其在水分的共存下迅速发 生崩解，例如在口中与唾液接触时迅速发生崩解。优选在90 秒以内、更优选60秒以内在口腔内发生崩解。
另外，作为本发明的医药组合物的尺寸，没有特别限制， 优选平面面积在0.5～6.0cm2的范围内。低于0.5cm2时，有将 使用本发明的医药组合物得到的制剂用手拿起来给药时不易操 作的担心，超过6.0cm2时，有无法完全放入口腔内、特别是舌 下的担心。
上述的本发明的医药组合物例如可以利用包含如下工序的 方法来制造：使变应原和选自由有机酸盐、无机酸盐及pH调 节剂构成的组中的至少一种溶解于水而得到含变应原水溶液的 工序；及使上述含变应原水溶液冷冻干燥的工序。
这样的本发明的医药组合物的制造方法也是本发明之一。
本发明的医药组合物的制造方法具有制备含变应原水溶液 的工序。
在本工序中，例如，首先，在常温下或通过加热使选自由 有机酸盐、无机酸盐及pH调节剂构成的组中的至少一种以及 根据需要使用的其他添加剂溶解在规定量的水中，另外，对于 不溶解的添加剂，使其均匀分散。在上述变应原为对热稳定的 变应原的情况下，该变应原与上述有机酸盐等同时添加来制备 含变应原水溶液。另一方面，在对热不稳定的变应原的情况下， 制备溶解有上述有机酸盐等的溶液后，将该溶液冷却至常温～ 35℃附近，之后添加变应原并进行搅拌混合来制备含变应原水 溶液。需要说明的是，上述变应原也可以在后述的分注或延展 含变应原水溶液时添加。
需要说明的是，在制备上述含变应原水溶液时起泡的情况 下，放置一夜、进行真空脱泡或减压脱泡即可。
在上述制备含变应原水溶液的工序中，优选进一步使明胶 溶解在该含变应原水溶液中。通过使明胶溶解于上述含变应原 水溶液，可以制造上述的明胶制剂。
另外，优选使得上述得到含变应原水溶液的工序中得到的 含变应原水溶液的pH在5.5～8.5的范围内。需要说明的是， 上述含变应原水溶液含有上述有机酸盐及/或无机酸盐的情况 下，pH优选为5.0～9.0。
通过使上述含变应原水溶液的pH在上述范围内，可以防 止变应原的物理化学稳定性显著减少、确保安全性。
作为将上述含变应原水溶液的pH调节至上述范围的方 法，可列举调节上述的pH调节剂的添加量的方法。
另外，在上述使含变应原水溶液冷冻干燥的工序中，例如， 优选将规定量的上述含变应原水溶液在28℃～35℃的温度下分 注入所希望的尺寸的冷冻干燥用泡罩（blister）内，分注后立 即使其冷冻干燥。
另外，对于得到的医药组合物，优选根据需要进行密封包 装作成产品。
通过上述方法得到的本发明的医药组合物如上所述为冷冻 干燥制剂，优选作为经口固体制剂，但由于其冷冻干燥后的使 用适应性、对注射用水的溶解性良好，且可以长期保持变应原 的稳定性，因此，也可以以注射剂的形式或以经粘膜给药（经 鼻、经口、舌下）的制剂的形式使用。
发明的效果
本发明的医药组合物含有变应原和作为稳定剂的选自由有 机酸盐、无机酸盐及pH调节剂构成的组中的至少一种，因此， 可以稳定地储存及输送已知热稳定性差的变应原。本发明的医 药组合物可以应用于注射剂及经口液体制剂这两种剂型，不仅 可以制备这些溶液状的制剂，而且通过添加作为胶凝剂的明胶， 还可以制备稳定的经口固体制剂。
另外，通过含有明胶，本发明的医药组合物可以作成胶状 制剂，患者可以自己给药，没有了由注射引起的疼痛感，还可 以分割来调节给药量，携带性也优异、也没有残渣感，在通过 使其与片剂的剂型不一样来防止误服方面也优异，护理者容易 给药等，可以大幅度提高患者及护理者的QOL。
进而，上述胶状制剂使用作为稳定剂的有机酸盐及/或无 机酸盐或含有pH调节剂来调节pH，因此，在其制造工序中可 以稳定地维持已知热稳定性差的变应原。
具体实施方式
利用以下的实施例具体说明本发明，但本发明并不限定于 这些实施例。
（实验例1～4）
在860重量份的纯水中，加入水溶性明胶（鱼）（CSF、 Nippi Inc.制）10重量份，在30～40℃的温度下使其溶解。溶 解后恢复到室温，确认没有发生凝胶化。另外在20重量份的纯 水中加入柳杉花粉提取物干燥粉末（LSL公司制）0.1重量份， 在室温下使其溶解。然后全部加入之前的明胶溶液中，迅速混 合，再次确认没有发生凝胶化。
使用pH调节剂（氢氧化钠），调节至表1所示的pH，进 一步加入纯水使总量为1000重量份，得到含变应原明胶水溶 液。将得到的含变应原明胶水溶液装入35℃的搅拌器（shaker） 中并进行搅拌，通过以下方法测定经过30分钟后、经过60分 钟后的变应原活性。
接着，使含变应原明胶水溶液恢复到室温，确认没有发生 凝胶化后，迅速分注入冷冻干燥用小瓶（vial）中各1.0g，使 其冷冻干燥，得到含医药组合物。作为得到的含医药组合物的 保管稳定性试验，在40±2℃保管14日，并通过以下方法测定 经过7日后和经过14日后的变应原活性。结果示于表2。
（实验例5～12）
通过与实验例1～4同样的步骤得到冷冻干燥而成的含医 药组合物。需要说明的是，实验例5～8使用猪骨明胶（AEP、 Nippi Inc.制）、实验例9～12使用碱处理牛明胶（AD4、Nippi Inc. 制）。对于pH，分别使用适当的pH调节剂调节至表1所示的 值。另外，与实验例1～4同样地测定含变应原明胶水溶液及保 管稳定性试验后的变应原活性。
（比较实验例1～6）
通过与实验例1～4同样的步骤得到冷冻干燥而成的含医 药组合物。需要说明的是，比较实验例1～2使用水溶性明胶 （鱼）（CSF、Nippi Inc.制）、比较实验例3～4使用猪骨明胶（AEP、 Nippi Inc.制）、比较实验例5～6使用碱处理牛明胶（AD4、Nippi Inc.制）。对于pH，分别使用适当的pH调节剂调节至表1所示 的值。另外，与实验例1～4同样地测定含变应原明胶水溶液及 保管稳定性试验后的变应原活性。
[表1]
（变应原活性评价方法）
使用柳杉花粉抗原ELISA“Cryj1”（Seikagaku Biobusiness Corp.制），测定作为柳杉花粉的主要变应原之一的Cryj1的变 应原活性。该测定试剂盒可以以利用对日本柳杉（Cryptomeria japonica）花粉抗原之一的Cryj1特异的单克隆抗体（013、053） 的夹心ELISA法为原理，对Cryj1进行特异性测定。
在试剂盒附带的反应缓冲液100μL中添加标准溶液或样 品20μL，在常温下进行初级反应60分钟后，加入HRP标记抗 体溶液100μL进行二次反应60分钟。在其中加入酶底物溶液 100μL，在常温避光下反应30分钟，最后加入反应停止溶液 100μL。其后，测定450nm的紫外线吸收强度。以各Cryj1浓 度的标准溶液中的吸收强度为基础求出标准曲线，依照其测定 各样品的Cryj1变应原活性（ng/mL）。
求出保管稳定性试验采样后（经过7日后、经过14日后） 及刚制造后（经过30分钟后、经过60分钟后）的Cryj1变应 原活性%。通过对该Cryj1变应原活性%如下所述进行评分来进 行评价。
5：90%以上且低于105%
4：75%以上且低于90%
3：60%以上且低于75%
2：45%以上且低于60%
1：30%以上且低于45%
0：低于30%
[表2]
如表2所示，作为柳杉花粉变应原的最佳pH区域，显示 为5.0～9.0、更优选为6.0～8.0。
另外，表明了，在pH为4.0以下或10.0以上的情况下， 柳杉花粉变应原会迅速失活。另外，不管哪个样品溶液，在进 行了冷冻干燥制剂化的情况下，在40℃、保管14日时均没有 看出变应原含量显著减少。
（实验例13）
在860重量份的纯水中，加入水溶性明胶（鱼）（CSF、 Nippi Inc.制）10重量份，在30～40℃的温度下使其溶解。溶 解后恢复到室温，确认没有发生凝胶化。另外在20重量份的纯 水中加入柳杉花粉提取物干燥粉末（LSL公司制）0.1重量份， 在室温下使其溶解。然后全部加入之前的明胶溶液中，迅速混 合，再次确认没有发生凝胶化。使用pH调节剂（氢氧化钠） 调节至pH=7.0，进一步加入纯水使总量为1000重量份。其后， 迅速分注入冷冻干燥用小瓶中各1.0g，进行冷冻干燥，得到含 医药组合物。将得到的含医药组合物在40±2℃下保管，通过上 述的方法测定经过7日后、经过14日后、经过30日后及经过 120日后的变应原活性。结果示于表4。
（实验例14～20）
通过与实验例13同样的步骤得到含医药组合物。需要说 明的是，实验例14使用鱼明胶（FGS-230、Nippi Inc.制）、实 验例15使用水溶性明胶（猪）（CS、Nippi Inc.制）、实验例16 使用酸处理猪明胶（AP-200F、Nippi Inc.制）、实验例17使用 碱处理猪明胶（BP-200F、Nippi Inc.制）、实验例18使用猪骨 明胶（AEP、Nippi Inc.制）、实验例19使用牛明胶（CP-1045、 日本JELLICE株式会社制）、实验例20使用碱处理牛明胶 （AD4、Nippi Inc.制）。
[表3]
[表4]
如表4所示，对于使用明胶作为含医药组合物的基材的实 验例的含医药组合物而言，不太能看出变应原的活性下降。另 外，不管使用哪种明胶，都显示可以使柳杉花粉变应原稳定化。 需要说明的是，由于不含有机酸盐，因此，经过长时间（120 日）时变应原的活性稍稍下降。
（实验例21）
在960重量份的纯水中，加入乳酸钙（水合乳酸钙（颗粒）、 日本太平化学产业株式会社制）10重量份，在室温下使其溶解。 另外在20重量份的纯水中加入柳杉花粉提取物干燥粉末（LSL 公司制）0.1重量份，在室温下使其溶解。然后全部加入之前 的溶液中，迅速混合，得到含医药水溶液。测定得到的含医药 水溶液的pH。然后，将该含医药水溶液分注入冷冻干燥用小瓶 中各1.0g，进行冷冻干燥，得到含医药组合物。将得到的含医 药组合物在40±2℃下保管，测定经过7日后及经过14日后的 变应原活性。结果示于表6。
（实验例22～31、比较实验例7、8）
如表5所示，通过与实验例21同样的步骤得到含医药组 合物。添加剂分别使用甘草酸二钾（和光纯药工业株式会社制）、 柠檬酸钠（和光纯药工业株式会社制）、苹果酸钠（n水合DL- 苹果酸二钠、和光纯药工业株式会社制）、葡糖酸钙（和光纯药 工业株式会社制）、琥珀酸二钠（和光纯药工业株式会社制）、 酒石酸钠钾（四水合酒石酸钠钾、和光纯药工业株式会社制）、 酒石酸钠（L-酒石酸钠、和光纯药工业株式会社制）、L-抗坏血 酸钠（和光纯药工业株式会社制）、葡糖酸钠（扶桑化学工业株 式会社制）、L-天冬氨酸钠（Kyowa Hakko Bio Co.,Ltd.制）、酒 石酸氢钾（L-酒石酸氢钾、小松屋株式会社制）、富马酸一钠 （MONOFUMAR、日本触媒株式会社制）。
[表5]
[表6]
由表6所示可知，显示pH=5.0～9.0（浓度1重量%的含医 药水溶液）的有机酸盐显示出较高的变应原稳定性。其中，发 现乳酸钙、甘草酸二钾、柠檬酸钠、葡糖酸钙、葡糖酸钠及L- 天冬氨酸钠显示出较高的变应原稳定性。
需要说明的是，可知柳杉花粉变应原的最优选的pH区域 为6～8，但显示出较高的稳定性的有机酸盐未必是最佳pH区 域，虽然为大致相同的pH，但稳定性也不尽相同。
由以上结果表明，有机酸盐的变应原稳定化效果未必依存 于水溶液的pH。
（实施例1）
在850重量份的纯水中，加入水溶性明胶（鱼）（CSF、 Nippi Inc.制）10重量份及乳酸钙（水合乳酸钙（颗粒）、日本 太平化学产业株式会社制）5重量份，在30～40℃的温度下使 其溶解而得到明胶溶液。溶解后恢复到室温，确认没有发生凝 胶化。另外在20重量份的纯水中加入柳杉花粉提取物干燥粉末 （LSL公司制）0.1重量份，在室温下使其溶解。然后全部加入 之前的明胶溶液中，迅速混合，再次确认没有发生凝胶化。使 用pH调节剂（氢氧化钠）调节至pH=7.0，进一步加入纯水使 总量为1000重量份，得到含变应原明胶水溶液。其后，迅速分 注入冷冻干燥用小瓶中各1.0g，进行冷冻干燥，得到医药组合 物。将得到的医药组合物用手拿起来评价使用上的适应性。
接着，加入5℃、25℃或30℃的纯水5.0g，在室温下观察 医药组合物溶解的情况，用以下标准进行评价。另外，将医药 组合物在40±2℃保管，测定经过30日后、经过60日后、经过 90日后及经过120日后的变应原活性。结果示于表8、9。
◎：在30秒以内完全溶解了
○：在30秒～1分钟左右完全溶解了
△：直至完全溶解需要1分钟以上
（实施例2～11）
如表7所示，通过与实施例1同样的步骤得到医药组合物。 有机酸盐分别使用甘草酸二钾（和光纯药工业株式会社制）、柠 檬酸钠（和光纯药工业株式会社制）、葡糖酸钠（扶桑化学工业 株式会社制）、L-天冬氨酸钠（Kyowa Hakko Bio Co.,Ltd.制）、 苹果酸钠（n水合DL-苹果酸二钠、和光纯药工业株式会社制）、 葡糖酸钙（和光纯药工业株式会社制）、琥珀酸二钠（和光纯药 工业株式会社制）、酒石酸钠钾（四水合酒石酸钠钾、和光纯药 工业株式会社制）、酒石酸钠（L-酒石酸钠、和光纯药工业株式 会社制）、L-抗坏血酸钠（和光纯药工业株式会社制）。与实施 例1进行同样的评价。
（实施例12～22）
如表7所示，通过与实施例1同样的步骤得到医药组合物。 明胶使用猪骨明胶（AEP、Nippi Inc.制），有机酸盐分别使用乳 酸钙（水合乳酸钙（颗粒）、日本太平化学产业株式会社制）、 甘草酸二钾（和光纯药工业株式会社制）、柠檬酸钠（和光纯药 工业株式会社制）、葡糖酸钠（扶桑化学工业株式会社制）、L- 天冬氨酸钠（Kyowa Hakko Bio Co.,Ltd.制）、苹果酸钠（n水 合DL-苹果酸二钠、和光纯药工业株式会社制）、葡糖酸钙（和 光纯药工业株式会社制）、琥珀酸二钠（和光纯药工业株式会社 制）、酒石酸钠钾（四水合酒石酸钠钾、和光纯药工业株式会社 制）、酒石酸钠（L-酒石酸钠、和光纯药工业株式会社制）、L- 抗坏血酸钠（和光纯药工业株式会社制）。对于得到的医药组合 物，与实施例1进行同样的评价。需要说明的是，在实施例14 中，使用盐酸作为pH调节剂进行pH调节。
[表7]
[表8]
[表9]
如表8、9所示，实施例得到的医药组合物均可以没有问题 地用手拿起来，使用上没有问题。
另外，关于实施例得到的医药组合物在水中的溶解性，在 添加了水时医药组合物立即发生崩解，失去原样。在5℃的水 中医药组合物直至完全溶解需要1分钟以上。在25℃的水中在 30秒～1分钟左右完全溶解。在30℃的水中在30秒以内完全 溶解。
另外，保管稳定性的结果是，在40℃保管120日的情况下， 变应原含量一点儿也没有下降。
（实施例23）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中， 加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份、碳酸钙（和 光纯药工业制）10重量份并进行搅拌混合得到医药组合物。将 该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测定保管后 的残留Cryj1变应原活性。
（实施例24～31）
以表10的组成、通过与实施例23同样的步骤制备实施例 24～31的医药组合物。将这些医药组合物在30±2℃下保管2 周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
添加剂分别使用无水磷酸氢钙（Fujicalin F、富士化学工 业株式会社制）、碳酸镁（碳酸镁（碱性）、Nacalai Tesque制）、 硅酸钙（和光纯药工业株式会社制）、硅酸镁（协和化学工业株 式会社制）、偏硅酸铝酸镁（Neusilin FL2、富士化学工业株式 会社制）、合成硅酸铝（协和化学工业株式会社制）、磷酸氢钠 （十二水合磷酸氢二钠、和光纯药工业株式会社制）、磷酸二氢 钾（和光纯药工业株式会社制）。
（比较例1）
以治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份为医药组合物， 在30±2℃下保管2周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1 变应原活性。
（比较例2）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份并进行搅拌混 合得到医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用 后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（比较例3）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份、氯化钙（二 水合氯化钙、和光纯药工业株式会社制）10重量份并进行搅拌 混合得到医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周， 用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（比较例4、5）
以表1的组成、通过与比较例3同样的步骤制备医药组合 物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测定 保管后的残留Cryj1变应原活性。添加剂分别使用氯化镁 （Sigma公司制）、氯化钾（和光纯药工业株式会社制）。
[表10]
（实施例32）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份、乳酸钙（水 合乳酸钙（颗粒）、日本太平化学产业社制）10重量份并进行 搅拌混合得到医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2 周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（实施例33～50）
以表11的组成、通过与实施例32同样的步骤制备医药组 合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。添加剂分别使用柠檬酸钠 （和光纯药工业株式会社制）、柠檬酸钙（和光纯药工业株式会 社制）、苹果酸钠（n水合DL-苹果酸二钠、和光纯药工业株式 会社制）、甘草酸二钾（和光纯药工业株式会社制）、甘草酸二 钠（和光纯药工业株式会社制）、葡糖酸钙（一水合葡糖酸钙、 和光纯药工业株式会社制）、葡糖酸钠（和光纯药工业株式会社 制）、葡糖酸镁（D-葡糖酸镁、和光纯药工业株式会社制）、硬 脂酰富马酸钠（PRUV、JRS Pharma制）、酒石酸钠（和光纯药 工业株式会社制）、酒石酸钠钾（四水合酒石酸钠钾、和光纯药 工业株式会社制）、琥珀酸二钠（和光纯药工业株式会社制）、 乙酸钠（和光纯药工业株式会社制）、L-抗坏血酸钠（和光纯药 工业株式会社制）、L-天冬氨酸钠（和光纯药工业株式会社制）、 依地酸二钠（和光纯药工业株式会社制）、海藻酸钠（KIMICA ALGIN、KIMICA Corp.制）、羧甲基纤维素钠（MP Biomedicals 制）。
[表11]
（比较例6）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份、乳酸（日本 药局方乳酸、小松屋株式会社制）10重量份并进行搅拌混合得 到医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述 的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（比较例7～16）
以表12的组成、通过与比较例6同样的步骤制备医药组 合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。添加剂分别使用柠檬酸（日 本药局方水合柠檬酸、小松屋株式会社制）、苹果酸（DL-苹果 酸、和光纯药工业株式会社制）、甘草酸（和光纯药工业株式会 社制）、葡糖酸（50%葡糖酸溶液、和光纯药工业株式会社制）、 富马酸（和光纯药工业株式会社制）、酒石酸（日本药局方酒石 酸、小松屋株式会社制）、琥珀酸（扶桑化学工业株式会社制）、 乙酸（和光纯药工业株式会社制）、L-抗坏血酸（和光纯药工业 株式会社制）、L-天冬氨酸（和光纯药工业株式会社制）。
[表12]
（实施例51）
加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花 粉2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份、乳酸钙 （水合乳酸钙（颗粒）、日本太平化学产业社制）10重量份并进 行搅拌混合得到医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管 2周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（实施例52～57）
以表13的组成、通过与实施例51同样的步骤制备医药组 合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。添加剂分别使用碳酸钙（和 光纯药工业株式会社制）、碳酸镁（碳酸镁（碱性）、Nacalai Tesque制）、硅酸镁（协和化学工业株式会社制）、磷酸氢钠（十 二水合磷酸氢二钠、和光纯药工业株式会社制）、柠檬酸钠（和 光纯药工业株式会社制）、苹果酸钠（n水合DL-苹果酸二钠、 和光纯药工业制）。
[表13]
（实施例58）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入纯水25.0重量份，进一步加入纯化柳杉花粉抗原Cryj1 （Seikagaku Biobusiness Corp.制）0.05重量份、乳酸钙（水合乳 酸钙（颗粒）、日本太平化学产业制）10重量份并进行搅拌混 合。将该混合物在30±2℃下保管2周，测定保管后的残留Cryj1 变应原活性。
（实施例59～64）
以表14的组成、通过与实施例58同样的步骤进行制备。 将该混合物在30±2℃下保管2周，测定保管后的残留Cryj1变 应原活性。添加剂分别使用碳酸钙（和光纯药工业制）、碳酸镁 （碳酸镁（碱性、Nacalai Tesque制）、硅酸镁（日本协和化学工 业制）、磷酸氢钠（十二水合磷酸氢二钠、和光纯药工业制）、 柠檬酸钠（和光纯药工业制）、苹果酸钠（n水合DL-苹果酸钠、 和光纯药工业株式会社制）。
（比较例17）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入纯水25.0重量份，进一步加入纯化柳杉花粉抗原Cryj1 （Seikagaku Biobusiness Corp.制）0.05重量份并进行搅拌混合得 到医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述 的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（比较例18）
在纯化柳杉花粉抗原Cryj1（Seikagaku Biobusiness Corp. 制）0.05重量份加入纯水25.0重量份并进行搅拌混合得到医药 组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法 测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表14]
（实施例65）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入纯水25.0重量份，进一步加入柳杉花粉提取物冷冻干燥粉 末（LSL公司制）0.1重量份、乳酸钙（水合乳酸钙（颗粒）、 日本太平化学产业株式会社制）10重量份并进行搅拌混合得到 医药组合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的 方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（实施例66～71）
以表15的组成、通过与实施例65同样的步骤制备医药组 合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。添加剂分别使用碳酸钙（和 光纯药工业株式会社制）、碳酸镁（碳酸镁（碱性）、Nacalai Tesque制）、硅酸镁（协和化学工业株式会社制）、磷酸氢钠（十 二水合磷酸氢二钠、和光纯药工业株式会社制）、柠檬酸钠（和 光纯药工业株式会社制）、苹果酸钠（n水合DL-苹果酸二钠、 和光纯药工业株式会社制）。
（比较例19）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入纯水25.0重量份，进一步加入柳杉花粉提取物冷冻干燥粉 末（LSL公司制）0.1重量份并进行搅拌混合得到医药组合物。 将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测定保管 后的残留Cryj1变应原活性。
（比较例20）
在柳杉花粉提取物冷冻干燥粉末（LSL公司制）0.1重量 份中加入纯水25.0重量份并进行搅拌混合得到医药组合物。将 该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测定保管后 的残留Cryj1变应原活性。
[表15]
（实施例72）
在水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）50.0重量份中 加入治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份、柠檬酸（日 本药局方水合柠檬酸、小松屋株式会社制）0.1重量份并进行 搅拌混合。将该混合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。需要说明的是，由于治疗 用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）含有NaCl，因此得到的 混合物中生成了柠檬酸钠。
（实施例73～75）
以表16的组成、通过与实施例72同样的步骤制备医药组 合物。将该医药组合物在30±2℃下保管2周，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表16]
（实施例76）
在纯水20.0重量份中加入聚山梨酯80（NIKKOL TO-10MV、Nikko Chemicals Co.,Ltd.制）0.1重量份、中链脂 肪酸甘油三酯（COCONAR MT、日本花王株式会社制）0.1重 量份、对羟基苯甲酸甲酯（对羟基苯甲酸甲酯、日本上野制药 株式会社制）0.1重量份并用超声波搅拌溶解10分钟。在该溶 液中加入水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）12.0重量份， 在35℃下搅拌30分钟，得到明胶溶液。另外，取治疗用标准 化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉2000JAU/mL（鸟居 药品株式会社制）55.0重量份，加入D-山梨糖醇（NEOSORB P60Ｗ、ROQUETTE公司制）8.0重量份、碳酸钙（和光纯药工 业株式会社制）3.0重量份、柠檬酸钠（和光纯药工业株式会 社制）1.0重量份、阿斯巴甜（Ajinomoto KK aspartame、 Ajinomoto Co.,Inc.制）0.1重量份并进行搅拌混合，得到医药 组合物。将该医药组合物全部添加在之前制备的明胶溶液中， 进一步加入樱桃香料（cherry flavor）（高砂香料株式会社制） 0.1重量份，在35℃下混合20分钟后，分注5cm2塑料制泡 罩盒（blister case）（3号包埋模具（Cryomold）（方形）、Sakura Finetek Japan Co.,Ltd.制）中各2.0g，在2～8℃下冷却固化1 昼夜，得到胶状制剂。将该胶状制剂在30±2℃下保管6个月， 用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（实施例77、78）
以表17的组成、通过与实施例76同样的步骤制备胶状制 剂。
将得到的胶状制剂在30±2℃下保管3个月，用后述的方法 测定保管后的残留Cryj1变应原活性。添加剂使用乳酸钙（水 合乳酸钙（颗粒）、日本太平化学产业制）。
（实施例79）
在纯水20.0重量份中加入聚山梨酯80（NIKKOL TO-10MV、Nikko Chemicals Co.,Ltd.制）0.1重量份、中链脂 肪酸甘油三酯（COCONAR MT、日本花王株式会社制）0.1重 量份、对羟基苯甲酸甲酯（对羟基苯甲酸甲酯、日本上野制药 株式会社制）0.1重量份并用超声波搅拌溶解10分钟。在该溶 液中加入水溶性明胶（鱼）（CSF、Nippi Inc.制）12.0重量份， 在35℃下搅拌30分钟，得到明胶溶液。另外，取治疗用标准 化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉2000JAU/mL（鸟居 药品株式会社制）55.0重量份，加入D-山梨糖醇（NEOSORB P60Ｗ、ROQUETTE公司制）8.0重量份、碳酸钙（和光纯药工 业株式会社制）3.0重量份、柠檬酸钠（和光纯药工业株式会 社制）1.0重量份、阿斯巴甜（味之素KK阿斯巴甜、Ajinomoto Co.,Inc.制）0.1重量份并进行搅拌混合，得到医药组合物。将 该医药组合物全部添加在之前制备的明胶溶液中，进一步加入 樱桃香料（高砂香料株式会社制）0.1重量份，在35℃下混合 20分钟后，加入磷酸（和光纯药株式会社制）调节pH至7.0， 进一步混合5分钟。其后，分注入5cm2塑料制泡罩盒（3号包 埋模具（方形）、Sakura Finetek Japan Co.,Ltd.制）中各2.0g， 在2～8℃下冷却固化1昼夜，得到胶状制剂。将该胶状制剂在 30±2℃下保管6个月，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1 变应原活性。
（实施例80、81）
以表17的组成、通过与实施例79同样的步骤制备胶状制 剂。
将得到的胶状制剂在30±2℃下保管3个月，用后述的方法 测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表17]
（试验方法）
通过测定保管2周后的医药组合物中作为柳杉花粉的变应 原蛋白的Cryj1的残留变应原活性，用以下方法评价各种医药 组合物是否有助于Cryj1蛋白质的稳定性（特别是热稳定性）。 结果示于表18～25。
（残留Cryj1变应原活性评价方法）
使用柳杉花粉抗原ELISA“Cryj1”（Seikagaku Biobusiness Corp.制），测定作为柳杉花粉的主要变应原之一的Cryj1的变 应原活性。该测定试剂盒可以以利用对日本柳杉（Cryptomeria japonica）花粉抗原之一的Cryj1特异的单克隆抗体（013、053） 的夹心ELISA法为原理，对Cryj1进行特异性测定。在试剂盒 附带的反应缓冲液100μL中添加标准溶液或样品20μL，在常温 下进行初级反应60分钟后，加入HRP标记抗体溶液100μL进 行二次反应60分钟。在其中加入酶底物溶液100μL，在常温避 光下反应30分钟，最后加入反应停止溶液100μL。其后，测定 450nm的紫外线吸收强度。以各Cryj1浓度的标准溶液中的吸 收强度为基础求出标准曲线，依照其测定各样品的Cryj1变应 原活性（ng/mL）。
将在各样品中的Cryj1添加量的初始值设为100%，求出 相对于该初始值的保管后的残留Cryj1变应原活性（%）。通过 对该残留Cryj1变应原活性（%）如下所述进行评分来进行评 价。
5：90%以上且低于105%
4：75%以上且低于90%
3：60%以上且低于75%
2：45%以上且低于60%
1：低于45%
[表18]
[表19]
[表20]
[表21]
[表22]
[表23]
[表24]
[表25]
如表18～25所示，对于含有变应原、有机酸盐及/或无机 酸盐的实施例的医药组合物及胶状制剂而言，结果残留Cryj1 变应原活性的得分均优异。需要说明的是，可以认为，实施例 59的医药组合物中添加的柠檬酸量多，超过治疗用标准化变应 原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉2000JAU/mL中含有的氯 化钠量，与医药组合物中生成的柠檬酸钠带来的稳定化效果相 比，由柠檬酸带来的不稳定化效果更强，残留Cryj1变应原活 性稍低。
另一方面，对于比较例的医药组合物而言，残留Cryj1变 应原活性的得分均为1～2。
（实验例32～34）
在治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 200JAU/mL（鸟居药品株式会社制）1.0mL中，以表26所示的 量（mg）加入碳酸钠（和光纯药工业株式会社制）并进行搅拌 混合得到医药组合物。将该医药组合物在40±2℃下保管2周， 用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（比较实验例9）
以治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 200JAU/mL（鸟居药品株式会社制）1.0mL为医药组合物，在 40±2℃下保管2周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变 应原活性。
（比较实验例10、11）
在治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 200JAU/mL（鸟居药品株式会社制）1.0mL中，以表26所示的 量（mg）加入碳酸钠（和光纯药工业株式会社制）并进行搅拌 混合得到医药组合物。将该医药组合物在40±2℃下保管2周， 用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表26]
（实验例35～37）
在治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）1.0mL中，以表27所示 的量（mg）加入碳酸钠（和光纯药工业株式会社制）并进行搅 拌混合，得到医药组合物。将该医药组合物在40±2℃下保管2 周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
（比较实验例12）
以治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）1.0mL为医药组合物，在 40±2℃下保管2周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变 应原活性。
（比较实验例13～15）
在治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）1.0mL中，以表27所示 的量（mg）加入碳酸钠（和光纯药工业株式会社制）并进行搅 拌混合，得到医药组合物。将该医药组合物在40±2℃下保管2 周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表27]
（实验例76～80、比较实验例16、17）
用乙酸、磷酸及硼酸（均为和光纯药工业株式会社制）制 备80mM Britton-Robinson缓冲溶液（BR Buffer）。用氢氧 化钠溶液（和光纯药工业株式会社制）将制备好的BR Buffer 的pH调节至表28所示的值。
接着，在柳杉花粉提取物的冷冻干燥粉末（柳杉花粉提取 物-Cj、LSL公司制）2mg中加入纯水2.9mL，使其充分溶解得 到变应原溶液。需要说明的是，得到的变应原溶液成为5mM 硼酸缓冲溶液（pH=8.0）记载于附带资料。在该变应原溶液125.0 重量份中，加入甘油250.0重量份并进行搅拌混合。在其中分 别加入调节至表28所示的pH的BR Buffer 125.0重量份，充 分进行搅拌混合得到医药组合物。将该医药组合物在40±2℃下 保管2周，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表28]
（实验例43～46、比较实验例18～21）
在表29所示的配合量的纯水中，加入作为消泡剂的聚山 梨酯80及中链脂肪酸甘油三酯（CCTG）0.1重量份、作为防 腐剂的对羟基苯甲酸甲酯（羟苯甲酯）0.1重量份并进行超声 波溶解及分散。在其中以表29所示的配合量加入碳酸钠并使其 溶解。
接着，加入水溶性鱼明胶（CSF、Nippi Inc.制）10重量份， 在30～40℃的温度下使其溶解，在28～32℃的恒温下通过搅拌 器制成明胶溶液。另外，取柳杉花粉变应原提取物原液 2000JAU/mL 50重量份，使D-山梨糖醇10重量份在2～8℃下 溶解，进行加温以使其达到25～30℃的温度后，全部加入预先 准备好的明胶溶液中，在28～32℃下迅速混合，分注入5cm2塑料制泡罩盒（3号包埋模具（方形）、Sakura Finetek Japan Co., Ltd.制）中各1g，使其在2～8℃下冷却固化1昼夜，得到胶状 制剂。将该胶状制剂在25±2℃下保管2个月，用后述的方法测 定保管后的残留Cryj1变应原活性。
[表29]
（比较实验例22）
以治疗用标准化变应原提取物皮下注射“TORII”柳杉花粉 2000JAU/mL（鸟居药品株式会社制）50.0重量份为医药组合物， 在25±2℃下保管2个月，用后述的方法测定保管后的残留Cryj1 变应原活性。
（实验例47～50、比较实验例23、24）
除了设为表30所示的组成以外，通过与实验例43同样的 步骤得到胶状制剂。将得到的胶状制剂在25±2℃下保管2个月， 用后述的方法测定保管后的残留Cryj1变应原活性。
需要说明的是，实验例47～50、比较实验例23、24使用 猪明胶（AEP、Nippi Inc.制）。
[表30]
（试验方法）
测定实验例及比较实验例制备的医药组合物或胶状制剂 的pH。
另外，测定作为柳杉花粉的变应原蛋白的Cryj1的变应原 活性，由此评价各种医药组合物是否有助于Cryj1蛋白的稳定 性（特别是热稳定性）。各个试验方法如下所示，结果示于表 31～33。
（pH测定方法）
使用pH测定仪（株式会社堀场制作所制、pH计），在 25±2℃的温度下测定制备的医药组合物（实验例32～42及比较 实验例9～17）的pH。
另外，取胶状制剂（实验例43～50及比较实验例18～21、 23、24）1g或医药组合物（比较实验例22）0.5mL置于10mL 量瓶，用蒸馏水进行稀释。胶状制剂的情况下，在30～35℃的 恒温下进行搅拌直至该制剂完全溶解，分别制备样品溶液。然 后，使用pH测定仪（株式会社堀场制作所制、pH计），在25±2℃ 的温度下测定得到的样品溶液的pH。
（变应原活性评价方法）
使用柳杉花粉抗原ELISA“Cryj1”（Seikagaku Biobusiness Corp.制），测定作为柳杉花粉的主要变应原之一的Cryj1的变 应原活性。该测定试剂盒可以以利用对日本柳杉（Cryptomeria japonica）花粉抗原之一的Cryj1特异的单克隆抗体（013、053） 的夹心ELISA法为原理，对Cryj1进行特异性测定。在试剂盒 附带的反应缓冲液100μL中添加标准溶液或样品20μL，在常温 下进行初级反应60分钟后，加入HRP标记抗体溶液100μL进 行二次反应60分钟。在其中加入酶底物溶液100μL，在常温避 光下反应30分钟，最后加入反应停止溶液100μL。其后，测定 450nm的紫外线吸收强度。以各Cryj1浓度的标准溶液中的吸 收强度为基础求出标准曲线，依照其测定各样品的Cryj1变应 原活性（ng/mL）。
将在各样品中的Cryj1添加量的初始值设为100%，求出 相对该初始值的1日后、7日后及14日后的Cryj1变应原活性 （%）。通过对该Cryj1变应原活性（%）如下所述进行评分来进 行评价。
5：90%以上且低于105%
4：75%以上且低于90%
3：60%以上且低于75%
2：45%以上且低于60%
1：30%以上且低于45%
0：低于30%
[表31]
[表32]
[表33]
如表31～33所示，对于实验例的医药组合物而言，通过将 pH调节至5.5～8.5的范围，即使制备后经过14日，在变应原 活性的评价中也可以确保为3以上。
另一方面，对于pH偏离5.5～8.5的范围的比较实验例的 医药组合物而言，与实验例的医药组合物相比，变应原活性的 评价差。
[表34]
[表35]
如表34、35所示，对于实验例的胶状制剂而言，通过将 pH调节至5.5～8.5的范围，变应原活性的评价均为5，非常优 异，与医药组合物的实验例相比，可以进一步稳定化。
另一方面，pH偏离5.5～8.5的范围的比较实验例的胶状 制剂与实验例的胶状制剂相比，变应原活性的评价均差。
产业上的可利用性
本发明的医药组合物可有效用作过敏症的预防或治疗剂， 特别是对稳定性优异地储存及输送热稳定性差的变应原有用。