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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810054416.X (22)申请日 2018.01.19 (71)申请人 厦门医学院 地址 361000 福建省厦门市集美区灌口中 路1999号 申请人 中华学校财团法人中华科技大学 (72)发明人 吴黉坦 王贵弘 陈煜沛 郭钟达 李定宇 张育奇 孙鹏飞 (74)专利代理机构 厦门市首创君合专利事务所 有限公司 35204 代理人 张松亭 游学明 (51)Int.Cl. A01G 18/20(2018.01) (54)发明名称 一种可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的 牛樟。
2、芝培养基 (57)摘要 本发明公开了一种可增加牛樟芝子实体及 提升三萜类的牛樟芝培养基， 包含有琼脂、 D-葡 萄糖、 麦芽浸膏及0.5至1蛋白胨。 藉此， 将蛋白 胨添加于牛樟芝培养基中， 可有效提高牛樟芝的 质量。 权利要求书1页 说明书4页 附图3页 CN 108353728 A 2018.08.03 CN 108353728 A 1.一种可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 包含琼脂、 D-葡萄糖、 麦芽 浸膏及0.5至1之蛋白胨。 2.如权利要求1所述的可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 其PH值范围为5.60.2。 3.如权利要求1所述的可增加。
3、牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 该蛋白胨为植物性蛋白胨。 4.如权利要求3所述的可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 该植物性蛋白胨为大豆蛋白胨。 5.如权利要求1所述的可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 还包含五谷杂粮。 6.如权利要求5所述的可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 该五谷杂粮包含10-15的紫米。 7.如权利要求1所述的可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 该琼脂、 D-葡萄糖及麦芽浸膏的含量分别为1.5-2、 3-5及2-3。 8.如权利要求7。
4、所述的可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基， 其特征在 于， 该琼脂、 D-葡萄糖及麦芽浸膏的含量分别为2、 4及2。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108353728 A 2 一种可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培养基 技术领域 0001 本发明与药用真菌的培养有关； 特别是指一种适用于可增加牛樟芝子实体及提升 三萜类的牛樟芝培养基成分。 背景技术 0002 牛樟芝又名牛樟菇， 是台湾特有的世界六大药用真菌， 只生长在台湾特有百年以 上的牛樟树树干腐朽的内壁， 或枯死倒伏的牛樟树木材潮湿表面， 因其采集不易， 加上野生 牛樟木近年已被台湾政府列为保育类生物之一， 不。
5、允许出口。 目前只有台湾有， 因此异常珍 贵， 被称为 “台湾至宝” ，“森林中的红宝石” ，“灵芝之王” 等。 0003 牛樟芝的药用功效包含： 0004 一、 解毒、 排毒； 0005 二、 抵抗病毒侵害、 预防流行性感冒、 提高免疫力， 因牛樟芝成份中含有的多醣， 可 增进人体内的免疫调节。 0006 三、 防癌、 抑制癌细胞的生长； 0007 四、 治疗肝炎、 肝硬化、 肝癌， 因牛樟芝含有丰富的三萜类及多醣， 具有保护肝脏、 促进肝细胞再生、 对抗肝癌的疗效。 0008 五、 治疗各种心脑血管疾病， 其中， 牛樟芝除了能降低血液中的胆固醇和脂肪含量 外， 其腺苷能降低血小板的凝结功能。
6、， 因此能治疗各种心脑血管疾病， 如高血压、 低血压、 动 脉硬化等等。 0009 随着人们对于牛樟芝及其药效认知度的提高， 其保健需求日益增长， 然而， 目前存 在的培养法： 椴木栽培法、 个体培养法及液体发酵法皆无法产出高质、 量产且短周期的牛樟 芝。 亦即， 目前仍缺乏能培养出高质量且短周期的牛樟芝培育方式。 发明内容 0010 有鉴于此， 本发明目的在于提供一种可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝 培养基， 建立牛樟芝最适培养基及各成分指标。 0011 为达成上述目的， 本发明提供一种可增加牛樟芝子实体及提升三萜类的牛樟芝培 养基， 包含有琼脂、 D-葡萄糖、 麦芽浸膏及0.5至1蛋。
7、白胨。 在本发明中， 所述的牛樟芝培养基的PH值范围为5.60.2。 在本发明中， 该蛋白胨为植物性蛋白胨。 在本发明中， 该植物性蛋白胨优选为大豆蛋白胨。 在本发明中， 该培养基还包含五谷杂粮。 在本发明中， 该五谷杂粮包含10-15的紫米。 在本发明中， 该琼脂、 D-葡萄糖及麦芽浸膏的含量分别为1.5-2、 3-5及2-3。 在本发明中， 该琼脂、 D-葡萄糖及麦芽浸膏的含量分别为2、 4及2。 0012 本发明的效果在于添加五谷杂粮及植物性蛋白胨等于牛樟芝培养基中， 能有效提 说 明 书 1/4 页 3 CN 108353728 A 3 高牛樟芝的质量。 附图说明 下面结合附图和实施例。
8、对本发明作进一步说明。 图1为培养基A0.5及培养基P0.5高效液相色谱法(HPLC)分析。 图2为本发明所得牛樟芝对急性酒精肝损伤小鼠ALT和AST的影响。 图3为本发明所得牛樟芝对急性酒精肝损伤小鼠MDA、 GSH-Px和SOD水平的影响。 具体实施方式 0015 实施例一牛樟芝最佳培养条件探索及其成分分析 0016 菌种来源 0017 台湾中华科技大学真菌与植物生技团队山上采集新鲜牛樟菇后分离而得。 0018 最佳培养条件探索 0019 MEA培养基主要是用来进行真菌(霉菌、 酵母菌等)的分离、 计数和培养， 而本发明 培养基包含基本成分： 五谷杂粮(玉米、 稻米或小麦等)， 其中包含1。
9、0-15的紫米， 故色泽偏 红， 另外更添加了0.1-1的蛋白胨， 其中， 蛋白胨减缓成长速度， 故能长出类似子实体结 构。 0020 牛樟芝子实体的培养装置主要包含有： 一袋体， 由一环壁与一顶壁构成， 使其顶侧 形成一开口， 内部形成一容置空间。 上述培养基容置于该袋体的容置空间中， 藉以培养牛樟 芝。 利用此种培养方式可大幅增加产量与降低成本。 0021 本发明的实验以固态培养基为主， 并以五种培养基条件进行培养， 该五种培养基 分别以MEA、 P0.1、 P0.5、 A0.1、 A0.5表示， 其中对照组为MEA培养基， 实验组为加入0.1及 0.5动、 植物性蛋白胨， 如表一所示。 。
10、表一、 各组培养基成份 0022 表中培养基的配置方法为： 将琼脂、 D-葡萄糖、 麦芽浸膏及蛋白胨加入蒸馏水配制 成1升溶液后， 于121高温下灭菌15分钟， 再将PH值调至5.60.2。 其中， 琼脂、 D-葡萄糖及 说 明 书 2/4 页 4 CN 108353728 A 4 麦芽浸膏较佳含量分别为2、 4及2。 0023 直径生长与干重比较 0024 牛樟菌接种时以钻孔器进行打洞， 以控制每次接种的菌种直径都相同， 再以挑菌 棒取一块放入培养基中央， 之后放入26培养箱进行培养1-2个月， 测量并纪录菌丝生长直 径， 之后在烘箱中烘干46小时， 烘干后用剪刀剪去不含樟芝菌丝的培养基部分。
11、， 并秤重记 录， 结果如下表二。 表二、 牛樟菌于五种培养基下直径增加与干重比较 0025 将直径与干重增加最显著的组别P0.5及A0.5(培养2个月后)进行高效液相色谱法 (HPLC)分析， 结果如图1显示， 图中所标记的A、 B峰于P0.5中单独存在， 且C峰较高。 故确定牛 樟芝最适固体培养条件为P0.5组所含成份。 0026 指标成分分析 0027 本发明培养基(P0.5)的特征在于添加0.5-1植物性蛋白胨， 其指标成分含量如 下表三。 表三、 本发明培养基所得牛樟芝指标成分含量 0028 实施例二牛樟芝对于肝脏损伤的修护 0029 乙醇诱导的急性酒精肝损伤小鼠模型 0030 C5。
12、7BL/6小鼠经过一周的适应以后， 随机分为三组， 每组六只。 分组方式如下表四： 说 明 书 3/4 页 5 CN 108353728 A 5 表四、 牛樟芝对于肝脏损伤的修护实验动物分组 分组样品处理方式(灌胃) 空白对照组生理食盐水 急性酒精肝损模型组60酒精(12mL/kg) 牛樟芝菌粉组牛樟芝菌粉(1.5g/kg) 0031 生理盐水和牛樟芝菌粉每天上午9点给予， 连续灌胃30天之后， 小鼠禁食6小时， 然 后灌胃酒精(12mL/kg， 60)。 16小时后处死小鼠并取血， 其血清用来测定各项生化参数； 另 取部分小鼠肝脏， 加入定量生理盐水制备成肝组织匀浆液， 并评估其肝损伤程度。。
13、 0032 牛樟芝对肝损伤标志性酶活性的影响 0033 谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)是肝脏内的标志性酶类， 当肝脏损伤后， 二 者会产生异常升高。 该实验考察牛樟芝菌粉对急性酒精肝损伤小鼠ALT和AST含量的影响， 结果如图2所示。 0034 与对照组相比， 模型组小鼠ALT和AST活性明显升高。 牛樟芝菌粉能显著抑制急性 酒精肝损伤小鼠ALT和AST活性的升高， 其中， 与空白组比较， *p0.001； 与模型组比较，#p 0.001， #p0.01。 0035 牛樟芝对氧化性损伤相关指标的影响 0036 MDA为脂质过氧化所产生的二级产物， SOD和GSH-Px是肝脏清除过氧。
14、化物， 防止氧 化性损伤的关键酶， 肝脏MDA含量以及SOD和GSH-Px酶活性可反映肝脏内脂质过氧化及氧化 性损伤的程度。 该实验考察牛樟芝菌粉对急性酒精肝损伤小鼠MDA含量以及SOD和GSH-Px酶 活性的影响， 结果如图3所示。 0037 与对照组相比， 模型组小鼠的MDA含量明显升高， 而SOD和GSH-Px活性显著降低。 牛 樟芝菌粉能显著的抑制急性酒精肝损伤小鼠MDA含量的升高,以及SOD和GSH-Px活性的降 低， 其中， 与空白组比较， *p0.001； 与模型组比较， #p0.01。 0038 以上实验显示， 牛樟芝菌粉对小鼠急性酒精肝损伤具有一定的保护作用。 0039 综上所述， 利用本发明牛樟芝培养基确实能够产出高质量且短周期的牛樟芝。 0040 以上所述， 仅为本发明较佳实施例而已， 故不能依此限定本发明实施的范围， 即依 本发明专利范围及说明书内容所作的等效变化与修饰， 皆应仍属本发明涵盖的范围内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 108353728 A 6 图1 说 明 书 附 图 1/3 页 7 CN 108353728 A 7 图2 说 明 书 附 图 2/3 页 8 CN 108353728 A 8 图3 说 明 书 附 图 3/3 页 9 CN 108353728 A 9 。