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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利 (10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 201610134126.7 (22)申请日 2016.03.09 (65)同一申请的已公布的文献号 申请公布号 CN 105766633 A (43)申请公布日 2016.07.20 (73)专利权人 广西壮族自治区林业科学研究院 地址 530002 广西壮族自治区南宁市邕武 路23号 (72)发明人 肖玉菲 陈博雯 刘海龙 覃子海 张烨 张晓宁 刘雄盛 (74)专利代理机构 广西南宁汇博专利代理有限 公司 45114 代理人 邹超贤 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2。
2、006.01) (56)对比文件 CN 101032223 A,2007.09.12, CN 102870677 A,2013.01.16, CN 104429941 A,2015.03.25, CN 102870675 A,2013.01.16, 曲芬霞, 刘玉清. “千层金组培苗瓶外生根 技术研究” . 安徽农业科学 .2010,第38卷(第25 期), 曲芬霞, 刘玉清. “千层金组培苗瓶外生根 技术研究” . 安徽农业科学 .2010,第38卷(第25 期), 审查员 姜岚 (54)发明名称 一种互叶白千层组培继代芽瓶外生根方法 (57)摘要 本发明公开了一种互叶白千层组培继代芽 瓶外。
3、生根方法， 以常规组培方法扩增出互叶白千 层的组培继代丛芽， 再从中切取单芽， 用于瓶外 生根。 切好的单芽在300500 mg/L的市售ABT 2 号溶液中浸泡3050 min， 之后蘸取相应浓度 ABT 2号溶液与滑石粉混合的匀浆， 移植至红心 土基质中， 培育3035天可获得生根杯苗， 生根 率高达93.596.9%。 本发明公布的方法简单易 行， 直接用组培继代芽进行瓶外生根， 省略了瓶 内生根及炼苗等环节， 缩短了育苗时间， 对于降 低互叶白千层组培苗培育成本， 规模化生产该树 种组培苗有重要意义。 权利要求书2页 说明书5页 CN 105766633 B 2018.06.01 CN。
4、 105766633 B 1.一种互叶白千层组培继代芽瓶外生根方法， 其特征在于， 包含以下步骤： （1） 组培继代芽培养： 选取生长健壮无病虫的优树在头一年进行环割或伐桩促萌， 选择 当年生萌芽条作为外植体， 经消毒后接种到诱导培养基上诱导初始芽， 将获得的初始芽接 种于继代培养基上进行增殖培养， 得到组培继代芽； （2） 育苗容器准备： 用地表20 cm以下的红心土作为育苗基质， 先将红心土用碎土机粉 碎后过80100目筛， 装入711 cm 的塑料杯， 置于育苗床上； 继代芽移植前用24 的高锰酸钾溶液消毒2436 h， 消毒后清水淋透备用； （3） 继代芽移植： 选取丛生芽中生长健壮，。
5、 高度3 cm的继代芽洗去培养基， 切成单芽， 将切端用生根剂处理， 用小木棍在育苗容器的育苗基质中央打孔， 将处理后的继代芽垂直 扦插于育苗基质中， 压紧， 然后用清水淋透； （4） 移植后管理： 在育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚， 再盖上遮荫度为7585 %的遮 阴网， 1015天后选阴天拆除小拱棚， 生长期间保持充足的水肥； 步骤 （1） 所述外植体是选择长至3040 cm的萌芽条作为外植体； 所述消毒用75 %酒 精、 0.1 %升汞按常规方法消毒； 步骤 （1） 所述诱导培养基的原料组分和质含量为： 改良MS + 6-BA 2.8 mg/L + IBA 0.1 mg/L + 蔗糖30。
6、000 mg/L + 琼脂3000 mg/L； 步骤 （1） 所述继代培养基的原料组分和质含量为： 改良MS + 6-BA 1.75 mg/L + NAA 0.8 mg/L + 蔗糖30000 mg/L + 琼脂3500 mg/L； 步骤 （3） 所述生根剂处理的方法是： 将切好的单芽在300500 mg/L的市售ABT 2号溶 液中浸泡3050 min， 之后蘸取相应浓度ABT 2号溶液与滑石粉混合的匀浆； 步骤 （3） 所述垂直扦插是继代单芽插入育苗基质的深度为单芽的1/41/3； 所述改良MS培养基的组成为： KNO3 1580 mg/L； NH4NO3 410 mg/L； CaCl22。
7、H2O 280 mg/L； MgSO47H2O 370 mg/L； Ca(NO3)24 H2O 260 mg/L； KH2PO3 310 mg/L； MnSO44 H2O 22.3 mg/L； ZnSO47 H2O 8.6 mg/L； CuSO45 H2O 0.025 mg/L； H3BO3 6.2 mg/L； Na2MoO42 H2O 0.025 mg/L； KI 0.83 mg/L； CoCl26 H2O 0.025 mg/L； 维生素B1 0.4 mg/L； 维生素B6 0.5 mg/L； 烟酸 0.5 mg/L； 甘氨酸 2.0 mg/L； 权 利 要 求 书 1/2 页 2 CN 1。
8、05766633 B 2 肌醇 150 mg/L。 2.根据权利要求1所述的互叶白千层组培继代芽瓶外生根的方法， 其特征在于： 步骤 （4） 所述保持充足的水肥， 具体操作为每周用喷雾器补充水分35次， 使湿度保持85 %以 上， 1821天后每月喷洒一次0.1 %的多菌灵杀菌剂， 25天后每3周喷一次叶面肥， 期间光照 强度为15002500 lx， 每天光照时间为1214小时， 直到顶芽变为深绿色， 根系生长良好 后即可进入常规育苗。 权 利 要 求 书 2/2 页 3 CN 105766633 B 3 一种互叶白千层组培继代芽瓶外生根方法 技术领域 0001 本发明属于植物组织培养技术领。
9、域， 涉及一种互叶白千层组培继代芽瓶外生根方 法。 背景技术 0002 互叶白千层(Melaleuca alternifolia)， 又名澳大利亚白千层， 属桃金娘科 (Myrtaceae)白千层属(Melaleuca.)， 原产于澳大利亚南纬23.5 沿海地区及北方领地的北 部等地区。 我国的广东、 广西、 云南等地于1993年起先后成功引种互叶白干层。 互叶白千层 不仅是优美的庭院树、 行道树和防风树， 栽植一年后还可采收新鲜枝叶提取精油， 称为茶树 油。 茶树油是优良的天然芳香剂、 抗菌剂和防腐剂， 广泛应用于制药、 日化、 食品、 香料等行 业， 因此互叶白千层经济价值极高。 0003。
10、 互叶白千层的繁殖方式包括种子繁殖、 扦插繁殖和组培繁殖。 种子败育多， 发芽率 低， 种间差异大， 致使优良种苗匮乏。 互叶白千层扦插繁殖受季节、 母株限制， 占地面积大， 繁育周期长， 繁殖系数较低， 大大地限制了其推广速度。 组织培养是一种快速有效的无性繁 殖途径， 能有效扩增优良品种， 受季节和地域的影响小， 在短期内提供大量优质苗木。 然而 传统的组培繁殖要经过初始芽诱导、 继代增殖、 瓶内生根、 炼苗和移栽等诸多工序， 过程复 杂， 无菌操作要求高， 人力物力电力消耗大， 成本较高。 0004 组培继代芽瓶外生根技术作为常规组培技术的简化版， 近年来在一些树种的组培 苗繁育过程中得。
11、到应用， 但尚未见其在互叶白千层组培繁育过程中的应用报道。 本发明将 瓶内生根和炼苗移栽相结合起来， 简化了程序， 缩短了育苗周期， 降低了育苗成本， 为实现 互叶白千层良种无性化育苗， 推广这一优良树种提供了种苗保证。 发明内容 0005 本发明的目的在于探索适宜的互叶白千层组培继代芽瓶外生根方法， 主要目的在 于降低互叶白千层组培苗培育成本。 0006 本发明的上述技术问题主要是通过下述技术方案得以解决的： 0007 一种互叶白千层组培继代芽瓶外生根方法， 包括组培继代芽培养、 育苗容器准备、 继代芽移植、 移植后管理。 其具体操作步骤如下： 0008 (1)组培继代芽培养： 选取生长健壮。
12、无病虫的优树在头一年进行环割或伐桩促萌。 选择当年生萌芽条作为外植体， 经消毒后接种到诱导培养基上诱导初始芽， 将获得的初始 芽接种于继代培养基上进行增殖培养， 得到组培继代芽； 0009 (2)育苗容器准备： 用地表20cm以下的红心土作为育苗基质， 先将红心土用碎土机 粉碎后过80100目筛， 装入711cm的塑料杯， 置于育苗床上； 继代芽移植前用24的 高锰酸钾溶液消毒2436h， 消毒后清水淋透备用； 0010 (3)继代芽移植： 选取丛生芽中生长健壮， 高度3cm的继代芽洗去培养基， 切成单 芽， 将切端用生根剂处理， 用小木棍在育苗容器的育苗基质中央打孔， 将处理后的继代芽垂 说。
13、 明 书 1/5 页 4 CN 105766633 B 4 直扦插于育苗基质中， 压紧， 然后用清水淋透； 0011 (4)移植后管理： 在育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚， 再盖上遮荫度为7585 的遮阴网， 1015天后选阴天拆除小拱棚， 生长期间保持充足的水肥。 0012 以上步骤(1)所述外植体是选择长至3040cm的萌芽条作为外植体； 所述消毒用 75酒精、 0.1升汞按常规方法消毒。 0013 以上步骤(1)所述诱导培养基的原料组分和质含量为 改良MS+6-BA 2.8mg/L+ IBA0.1mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂3000mg/L。 0014 以上步骤(1)所述继代培。
14、养基的原料组分和质含量为 改良MS+6-BA1.75mg/L+ NAA0.8mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂3500mg/L。 0015 以上步骤(1)所述改良MS培养基的组成为： 0016 0017 0018 以上步骤(3)所述生根剂的处理方法是： 将切好的单芽在300500mg/L的市售ABT 2号溶液中浸泡3050min， 之后蘸取相应浓度ABT 2号溶液与滑石粉混合的匀浆。 0019 以上步骤(3)所述垂直扦插是继代单芽插入育苗基质的深度为单芽的1/41/3。 0020 以上步骤(4)所述保持充足的水肥， 具体操作为每周用喷雾器补充水分35次， 使 说 明 书 2/5 页 5 C。
15、N 105766633 B 5 湿度保持85以上， 1821天后每月喷洒一次0.1的多菌灵杀菌剂， 25天后每3周喷一次 叶面肥， 期间光照强度为15002500lx， 每天光照时间为1214小时， 直到顶芽变为深绿 色， 根系生长良好后即可进入常规育苗。 0021 本发明与现有技术相比的有益效果是： 0022 (1)本发明以地表20cm以下的红心土作为育苗基质， 更适合继代芽瓶外生根， 将1/ 41/3继代芽带浆垂直插入基质小孔中， 压紧后用清水淋透， 在育苗容器上方用塑料薄膜 搭建小拱棚， 再盖上遮荫度为7585的遮阴网， 1015天后拆除小拱棚， 每周用喷水35 次， 以红心土变为深红色。
16、， 柔软， 轻压可变形为宜， 1821天后每月喷洒一次0.1的多菌灵 杀菌剂， 25天后每3周喷1次叶面肥， 期间光照强度为15002500lx， 每天光照时间为1214 小时的配套瓶外生根方法， 生根率高， 生根处理3035d， 瓶外生根率达93.596.9， 根系 数量可达48条， 且生长良好。 0023 (2)本发明选取生长健壮无病虫的优树在头一年进行环割或伐桩促萌， 选择当年 生萌芽条作为外植体， 萌芽条健壮质优， 继代芽质量好。 0024 (3)本发明各阶段组培培养基组方合理， 更适应继代芽的组培生长， 组培继代芽的 质量好， 繁殖率高。 0025 (4)本发明可以将一些污染的继代瓶。
17、苗加以利用， 培育成杯苗， 避免无谓的浪费。 0026 (5)本发明将瓶内生根和炼苗移栽相结合起来， 方法简单可行， 省去传统瓶内生根 程序， 减少了一次无菌操作的步骤， 简化了流程， 缩短了育苗周期， 加快了苗木培育的速度， 节省了培养室的空间， 节约了成本， 一年四季均均可培育， 提高了生产效率， 实现互叶白千 层良种无性化育苗， 为工厂化生产互叶白千层无性苗木提供了可靠的技术保障， 具有较好 的经济效益、 社会效益和生态效益。 具体实施方式 0027 下面的实施例可以使本领域技术人员更全面地理解本发明， 但不以任何方式限制 本发明。 但本领域技术人员应当理解， 可以在形式上和细节上对其做。
18、出各种各样的改变， 而 不偏离本发明权利要求书所限定的范围。 0028 以下实施例继代芽的组培方法是选取生长健壮无病虫的优树在头一年11月进行 环割或伐桩促萌。 选择当年生、 长至3040cm的萌芽条作为外植体， 经75酒精、 0.1升汞 消毒后接种到改良MS+6-BA2.8mg/L+IBA0.1mg/L+蔗糖30000mg/L+琼脂3000mg/L的诱导培 养基上诱导初始芽， 将获得的初始芽接种于改良MS+6-BA1.75mg/L+NAA 0.8mg/L+蔗糖 30000mg/L+琼脂3500mg/L的继代培养基上进行增殖培养。 0029 所述改良MS培养基的组成为： 0030 KNO315。
19、80mg/L； NH4NO3410mg/L； CaCl22H2O280mg/L； MgSO47H2O370mg/L； Ca(NO3)24H2O260mg/L； KH2PO3310mg/L； 说 明 书 3/5 页 6 CN 105766633 B 6 MnSO44H2O22.3mg/L； ZnSO47H2O8.6mg/L； CuSO45H2O0.025mg/L； H3BO36.2mg/L； Na2MoO42H2O0.025mg/L； KI0.83mg/L； CoCl26H2O0.025mg/L； 维生素B10.4mg/L； 维生素B60.5mg/L； 烟酸0.5mg/L； 甘氨酸2.0mg/L。
20、； 肌醇150mg/L。 0031 实施例1： 0032 在南宁， 6月份用地表20cm以下的红心土作为育苗基质， 先将红心土用碎土机粉碎 后过80目筛， 装入711cm的塑料杯中， 置于育苗床上， 基质占塑料杯体积的4/5， 继代芽 移植前用2的高锰酸钾溶液消毒36h， 消毒后清水淋透基质备用； 选取污染的丛生芽中生 长健壮、 高度3cm的继代芽洗去培养基， 切成单芽； 将单芽的切端在500mg/L的市售ABT2号 溶液中浸泡40min， 之后蘸取500mg/L ABT 2号溶液与滑石粉体积比为3:1混合的匀浆， 在育 苗容器的育苗基质中央用小木棍打孔， 垂直将带浆的继代芽插入基质中， 压紧。
21、后用清水淋 透， 插入深度为芽长的1/3； 在育苗容器上方用塑料薄膜搭建小拱棚， 再盖上遮荫度为75 的遮阴网， 12天后拆除小拱棚， 每周用喷雾器补充水分5次， 以红心土变为深红色， 柔软， 轻 压可变形为宜， 18天后每月喷洒一次0.1的多菌灵杀菌剂， 以苗表面全湿为宜， 25天后每3 周喷1次叶面肥。 期间光照强度为20002500lx， 每天光照时间为1314小时。 生根处理30 天后开始生根， 根系多为4条， 少量为5条， 组培继代芽瓶外生根率达94.6。 0033 实施例2： 0034 在南宁， 11月份用地表20cm以下的红心土作为育苗基质， 先将红心土用碎土机粉 碎后过90目筛。
22、， 装入711cm的塑料杯中， 置于育苗床上， 基质占塑料杯体积的4/5， 继代 芽移植前用3的高锰酸钾溶液消毒30h， 消毒后清水淋透备用； 选取无污染的丛生芽中生 长健壮、 高度4cm的继代芽洗去培养基， 切成单芽； 将单芽的切端在300mg/L的市售ABT 2 号溶液中浸泡50min， 之后蘸取300mg/L ABT 2号溶液与滑石粉体积比为3:1混合的匀浆， 在 育苗容器的育苗基质中央用小木棍打孔， 垂直将带浆的继代芽插入基质中， 压紧后用清水 淋透， 插入深度为芽长的1/3； 在育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚， 再盖上遮荫度为85 的遮阴网， 10天后拆除小拱棚， 每周用喷雾器补充水。
23、分4次， 以红心土变为深红色， 柔软， 轻 压可变形为宜， 21天后每月喷洒一次0.1的多菌灵杀菌剂， 以苗表面全湿为宜， 25天后每3 周喷一次叶面肥。 期间光照强度为20002500lx， 每天光照时间为1213小时。 生根处理32 天后开始生根， 根系多为48条， 组培继代芽瓶外生根率达96.9。 0035 实施例3： 0036 在南宁， 1月份用地表20cm以下的红心土作为育苗基质， 先将红心土用碎土机粉碎 后过100目筛， 装入711cm的塑料杯中， 置于育苗床上， 基质占塑料杯体积的4/5， 继代芽 说 明 书 4/5 页 7 CN 105766633 B 7 移植前用4的高锰酸钾。
24、溶液消毒24h， 消毒后清水淋透备用； 选取无污染的丛生芽中生长 健壮、 高度5cm的继代芽洗去培养基， 切成单芽； 将单芽的切端在400mg/L的市售ABT 2号 溶液中浸泡45min， 之后蘸取400mg/L ABT 2号溶液与滑石粉体积比为3:1混合的匀浆， 在育 苗容器的育苗基质中央用小木棍打孔， 垂直将带浆的继代芽插入基质中， 压紧后用清水淋 透， 插入深度为芽长的1/4； 在育苗床上方用塑料薄膜搭建小拱棚， 再盖上遮荫度为85的 遮阴网， 15天后拆除小拱棚， 每周用喷雾器补充水分3次， 以红心土变为深红色， 柔软， 轻压 可变形为宜， 21天后每月喷洒一次0.1的多菌灵杀菌剂， 以苗表面全湿为宜， 25天后每3周 喷一次叶面肥， 期间光照强度为15002000lx， 每天光照时间为1213小时。 生根处理35天 后开始生根， 根系多为46条， 组培继代芽瓶外生根率达93.5。 说 明 书 5/5 页 8 CN 105766633 B 8 。