《一种互叶白千层组培苗生根培养方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种互叶白千层组培苗生根培养方法.pdf（6页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201810474431.X (22)申请日 2018.05.17 (71)申请人 邵武市闽澳农业发展有限公司 地址 354000 福建省南平市邵武市经济开 发区 (72)发明人 吴燕斌 (74)专利代理机构 福州市博深专利事务所(普 通合伙) 35214 代理人 林志峥 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 一种互叶白千层组培苗生根培养方法 (57)摘要 本发明公开了一种互叶白千层组培苗生根 培养方法， 包括以下步骤： (1)将互叶白千。
2、层外植 体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养， 得 到初芽； (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养 基， 进行继代培养， 得到继代母苗； (3)从继代培 养的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm， 转接至生根培 养基中， 进行生根培养； 其中生根培养基的最优 组成为： 1/2MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L ABT-1。 本 发明的互叶白千层组培苗生根培养方法对于防 止互叶白千层组培苗生根培养褐化的效果显著， 且生根率高， 大幅提高互叶白千层组培繁殖的成 活率， 利于良种无性苗的繁殖， 对于规模化生产 互叶白千层组培苗具有重要意义。 权利要求书1页 说明书4页 CN 1086512。
3、83 A 2018.10.16 CN 108651283 A 1.一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在于， 包括如下步骤： (1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养20-30d， 所述诱导培 养基组成为： MS+1.0-1.5mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L NAA， 所述诱导培养基的pH为5.6-5.8； (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基， 进行继代培养35-40d， 所述继代培养基的组 成为： MS+1.5-2mg/L 6-BA+1.0-1.5mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.6-5.8； (3)从继代培养的母苗中切取单芽， 单芽1。
4、-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培养， 黑 暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h； 所述生根培养基的组成为： 1/ 2MS+0.2-0.3mg/L NAA+1.0-1.5mg/L ABT-1， 所述生根培养基的pH为5.7-5.9。 2.根据权利要求1所述的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在于， 所述步骤 (3)中的生根培养基的组成为： 1/2MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L ABT-1。 3.根据权利要求1或2任意一项所述的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在 于， 所述步骤(1)的外植体取自生长健壮无虫病的一年生植株， 剪取。
5、生长旺盛的萌生枝条， 将枝条除去叶片， 切成0.5-1.0cm的茎段即为外植体材料。 4.根据权利要求1或2任意一项所述的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在 于， 所述步骤(1)的外植体经消毒， 具体为： 将所述枝条表面清洗干净， 用体积浓度为75的 乙醇浸泡枝条15-20s， 移入超净工作台， 置于0.1氯化汞溶液中进一步消毒10min， 取出枝 条后用无菌水冲洗6-8次， 随即将枝条放入在无菌水中切割。 5.根据权利要求1或2任意一项所述的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在 于， 所述步骤(1)中的诱导培养的培养条件为， 光照强度为1000-1500lx， 光照时间为每。
6、天 11h， 温度为241。 6.根据权利要求1或2任意一项所述的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在 于， 所述步骤(2)中的继代培养的培养条件为， 光照强度为1500-2000lx， 光照时间为每天 13h， 温度为252。 7.根据权利要求1或2任意一项所述的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 其特征在 于， 所述步骤(3)中的生根培养的培养条件为， 光照强度为2500-3000lx， 温度为252。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 108651283 A 2 一种互叶白千层组培苗生根培养方法 技术领域 0001 本发明属于植物组织培养技术领域， 涉及一种互叶白千层组培。
7、苗生根培养方法。 背景技术 0002 互叶白千层(Melaleuca ahemifolia)桃金娘科白千层属， 原产于澳洲， 其树叶提 取物俗称 “茶树精油” ， 因其具有强力的消炎杀菌功效， 现已被产业化， 广泛的应用于医药、 化妆品、 日化品等领域， 我国目前已在广西、 广东、 福建等多个省市推广种植。 0003 互叶白千层主要通过种播、 扦插和组织培养进行繁育， 但由于目前国内种植品种 混杂， 种子败育， 种植技术条件限制等问题， 致使互叶白千层的发芽率和成活率都较低。 若 需要规模化生产还需利用组织培养技术， 使其后代能保持原品种的优良性状， 同时便于人 工控制， 适合集约化生产。 0。
8、004 组织培养过程中不可避免的一个问题是植物材料发生褐化， 主要是由于在组织培 养过程中， 需要分离切取外植体， 形成切口， 植物自身在受到外界伤害时， 其体内的多酚化 合物就会在多酚氧化酶的作用下氧化成醌类物质， 呈现褐色。 在互叶白千层培苗生根培养 过程中， 也会出现不同程度的褐化现象， 严重时常常会导致植物体死亡造成组织培养失败。 如吴丽君(吴丽君.高精油互叶白千层组培产业化技术研究.福建农业学报， 2014， 29(12)： 1246-1250)就指出互叶白千层组培继代苗基部易黑褐死亡， 其利用3.0g/L花宝1号与VH、 Vc、 VB2的组合物能有效地抑制继代苗褐化死亡。 而如何选。
9、择合适的生根培养基和适宜的培 养方法， 在生根培养阶段有效地抑制互叶白千层的褐化， 目前还未见报道。 发明内容 0005 为了克服背景技术中的技术缺陷， 本发明所要解决的技术问题是： 提供一种互叶 白千层生根培养方法， 已提高互叶白千层的生根率同时防止生根过程中褐化现象的产生。 0006 为了解决上述技术问题， 本发明采用的技术方案为： 提供了一种互叶白千层组培 苗生根培养方法， 包括如下步骤： 0007 (1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养20-30d， 所述诱 导培养基组成为： MS+1.0-1.5mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L NAA， 所述诱导培养。
10、基的pH为5.6- 5.8。 0008 (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基， 进行继代培养35-40d， 所述继代培养基 的组成为： MS+1.5-2mg/L 6-BA+1.0-1.5mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.6-5.8。 0009 (3)从继代培养的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培 养， 黑暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h； 所述生根培养基的组成 为： 1/2MS+0.2-0.3mg/L NAA+1.0-1.5mg/L ABT-1、 所述培养基pH为5.7-5.9。 0010 本发明的有益效果在于： 本。
11、发明提供了一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 包 括诱导培养、 继代培养和生根培养， 其中生根培养基最优组成为： 1/2MS+0.3mg/L NAA+ 1.0mg/L ABT-1， 利用该培养方法对互叶白千层组培苗进行生根培养， 生根率高， 同时有效 说 明 书 1/4 页 3 CN 108651283 A 3 的防止了生根过程中的褐化现象， 大幅提高互叶白千层组培繁殖的成活率， 利于良种无性 苗的繁殖， 对于规模化生产互叶白千层组培苗具有重要意义。 具体实施方式 0011 为详细说明本发明的技术内容、 所实现目的及效果， 以下结合实施方式予以说明。 0012 本发明最关键的构思在于： 提供一。
12、种互叶白千层组培苗生根培养方法， 保证生根 率的同时有效的避免生根过程中出现褐化现象。 0013 本发明提供了一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 包括如下步骤： 0014 (1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养20-30d， 所述诱 导培养基组成为： MS+1.0-1.5mg/L 6-BA+0.3-0.5mg/L NAA， 所述诱导培养基的pH为5.6- 5.8。 0015 (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基， 进行继代培养35-40d， 所述继代培养基 的组成为： MS+1.5-2mg/L 6-BA+1.0-1.5mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.6-。
13、5.8。 0016 (3)从继代培养的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培 养， 黑暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h； 所述生根培养基的组成 为： 1/2MS+0.2-0.3mg/L NAA+1.0-1.5mg/L ABT-1、 所述培养基pH为5.7-5.9。 0017 进一步的， 所述步骤(3)的生根培养基最优组成为： 1/2MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L ABT-1。 0018 进一步的， 所述步骤(1)的外植体取自生长健壮无虫病的一年生植株， 剪取生长旺 盛的萌生枝条， 将枝条除去叶片， 切成0.5-1.0cm。
14、的茎段即为外植体材料。 0019 进一步的， 所述步骤(1)中外植体经过消毒处理， 所述消毒处理为： 将所述枝条表 面洗净干净， 用体积浓度为75的乙醇浸泡枝条15-20s， 移入超净工作台， 置于0.1氯化 汞溶液中进一步消毒10min， 取出枝条后用无菌水冲洗6-8次， 随即将枝条放入在无菌水中 切割。 0020 进一步的， 所述步骤(1)的培养条件为， 光照强度为1000-1500lx， 光照时间为每天 11h， 温度为241 0021 进一步的， 所述步骤(2)的培养条件为， 光照强度为1500-2000lx， 光照时间为每天 13h， 温度为252。 0022 进一步的， 所述步骤(。
15、3)的培养条件为， 光照强度为2500-3000lx， 温度为252。 0023 从上述描述可知， 本发明的有益效果在于： 通过对诱导培养、 继代培养和生根培养 阶段培养基的设计， 添加适宜的激素， 调节优化配比与培养条件， 针对性的提供了一种互叶 白千层组培苗生根培养方法， 能够有效地防止互叶白千层组培苗生根培养褐化的问题， 且 生根率高， 在生根培养基最优方案下生根率达到98， 大幅提高互叶白千层组培繁殖的成 活率， 利于良种无性苗的繁殖， 对于规模化生产互叶白千层组培苗具有重要意义。 0024 实施例1： 0025 一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 包括如下步骤： 0026 (1)将互。
16、叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养20d， 所述诱导 培养基组成为： MS+1.0mg/L 6-BA+0.3mg/L NAA， 所述诱导培养基的pH为5.7。 0027 (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基， 进行继代培养35d， 所述继代培养基的 说 明 书 2/4 页 4 CN 108651283 A 4 组成为： MS+1.5mg/L 6-BA+1.0mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.7。 0028 (3)从继代培养的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培 养， 黑暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h。
17、； 所述生根培养基的组成 为： 1/2MS+0.25mg/L NAA+125mg/L ABT-1、 所述培养基pH为5.8。 0029 实施例2： 0030 一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 包括如下步骤： 0031 (1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养30d， 所述诱导 培养基组成为： MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA， 所述诱导培养基的pH为5.8。 0032 (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基， 进行继代培养38d， 所述继代培养基的 组成为： MS+2mg/L 6-BA+1.5mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.8。 00。
18、33 (3)从继代培养的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培 养， 黑暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h； 所述生根培养基的组成 为： 1/2MS+0.2mg/L NAA+1.5mg/L ABT-1、 所述培养基pH为5.9。 0034 实施例3： 0035 一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 包括如下步骤： 0036 (1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养25d， 所述诱导 培养基组成为： MS+1.5mg/L 6-BA+0.4mg/L NAA， 所述诱导培养基的pH为5.6。 0037 (2)将诱导培养的初。
19、芽转接至继代培养基， 进行继代培养40d， 所述继代培养基的 组成为： MS+2mg/L 6-BA+1.0mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.6。 0038 (3)从继代培养的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培 养， 黑暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h； 所述生根培养基的组成 为： 1/2MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L ABT-1、 所述培养基pH为5.7。 0039 实施例4： 0040 采用正交设计(如表1所示)， 共9组试验组， 每组设置5个平行， 研究MS培养基(1/2、 1/3、 1/4)、 NA。
20、A(0.1、 0.2、 0.3mg/L)、 ABT-1(0.5、 1.0、 1.5mg/L)对互叶白千层组培苗生根的 影响。 0041 一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 包括如下步骤： 0042 (1)将互叶白千层外植体经消毒后接入诱导培养基， 进行诱导培养30d， 所述诱导 培养基组成为： MS+1.5mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA， 所述诱导培养基的pH为5.8。 0043 (2)将诱导培养的初芽转接至继代培养基， 进行继代培养38d， 所述继代培养基的 组成为： MS+2mg/L 6-BA+1.5mg/L IAA， 所述继代培养基的pH为5.8。 0044 (3)从继代培养。
21、的母苗中切取单芽， 单芽1-2cm转接至生根培养基中， 进行生根培 养， 黑暗培养7d， 之后光照培养25d， 光照培养的光暗周期为16/8h； 光照强度为2500- 3000lx， 温度为252， 光照培养25d后统计生根数量、 生根率及其褐化情况。 0045 表1不同浓度培养基对互叶白千层生根的影响 说 明 书 3/4 页 5 CN 108651283 A 5 0046 0047 0048 9组试验组中， 生根条数平均在10条以上， 在试验组3的培养基中， 即培养基组成为 1/2MS+0.3mg/L NAA+1.0mg/L ABT-1的条件下， 互叶白千层组培苗生根率最高为98， 该条 件下未出现褐化现象。 0049 综上所述， 本发明提供的一种互叶白千层组培苗生根培养方法， 该培养基条件和 方法下， 互叶白千层组培苗生根培养无褐化现象产生， 且生根率高达98， 有效的解决了互 叶白千层组培苗生根培养阶段的褐化问题， 大幅提高互叶白千层组培繁殖的成活率， 利于 良种无性苗的繁殖。 0050 以上所述仅为本发明的实施例， 并非因此限制本发明的专利范围， 凡是利用本发 明说明书内容所作的等同变换， 或直接或间接运用在相关的技术领域， 均同理包括在本发 明的专利保护范围内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 108651283 A 6 。