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功能失调性子宫出血(简称功血)是指由下丘脑-垂体-卵巢轴神经内分泌功能失调而导致的异常子宫出血，属祖国医学崩漏范畴，为妇科临床常见病、疑难病之一。现代医学治疗该病多用激素、止血类药物及清宫术，中医治疗该病具有独特的优势，但多使用大复方汤剂，临床使用不方便，如《医学衷中参西录》固冲汤:龙骨24g、牡蛎24g、山萸肉24g、海螵蛸12g、炒黄芪18g、茜草9g、五倍子1.5g、炒白术12g、棕边炭6g，全方9味130g药材煎汤服用。现有成药也较少，质量控制指标不明确，药效不稳定。如《中国药典》中成药固经丸:龟板、白芍、黄芩、黄柏、椿根皮、香附全方6味药材打粉制丸，工艺粗糙，且只检测抗菌成分小檗碱含量，而不是促进子宫内膜恢复、抗炎、止血等与治疗功血的相关成分。
因此，本领域仍然需要一种成分简单，药效明确，且提取工艺稳定的治疗功血的药物，及其稳定有效的制备方法。
发明内容
因此，本发明的一个目的是提供一种成分简单，药效明确的治疗功能失调性子宫出血的组合物。在本发明的一个方面，提供了一种治疗功能失调性子宫出血的药物组合物，其含有活性成分和药物学上可接受的载体，所述活性成分由龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮以重量比为5-20：15-60：5-20：6-18：3-18组成。更优选地，重量比为12-18：20-40：12-18：8-12：6-12。最优选地，配比为龟板：生地黄：白芍：蒲黄：椿根皮为15：30：15：10：9。
在一个方面，该组合物由以下方法制备：
a)加入原生药药材重量比为15-60:5-20的生地黄和龟板，生地黄和龟板加水煎提取(10-20倍水，以重量计，0.5-1.5小时，重复两次)；
b)药液过滤，滤液调节PH至近中性；
c)将步骤b)获得的滤液浓缩成1.5-2.5g生药/ml的稠膏，水沉1-3天，取上清得浸膏；
d)将白芍、生蒲黄、椿根皮以5-20：6-18：3-18的重量比用60-80％乙醇以5-15倍药材量渗滤12-20小时提取，回收乙醇，浓缩至1.5-4.5g生药/ml，水沉1-3天，取上清得清膏；
e)混合步骤c)获得的浸膏和步骤(d)获得的浸膏。
在该方面的另一个优选例中，药物学上可接受的载体选自赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、稀释剂、缓冲剂、渗透压调节剂、防腐剂、保湿剂、乳化剂、分散剂、稳定剂、助溶剂。
在该方面的一个优选例中，所述组合物是口服剂型。口服剂型选自冲剂、凝胶剂、口服液、片剂等。
在该方面的还有一个优选例中，组合物中的活性成分浓度为1.5-3.5g生药/ml，其中所述重量是龟板、生地黄、白芍、生蒲黄、和椿根皮在组合物中的总重量。组合物中活性成分的最佳浓度为2.5g生药/ml
在该方面的另一个优选例中，组合物活性成分的含量标准为：芍药苷≥12mg/ml、梓醇≥2mg/ml、香蒲新苷和新橙皮苷≥0.3mg/ml、总黄酮≥5mg/ml。
在本发明的另一个方面，提供了制备本发明的组合物的方法，该方法包括步骤：
a)加入原生药药材重量比为15-60:5-20的生地黄和龟板，生地黄和龟板加水煎提取(10-20倍水，以重量计，0.5-1.5小时，重复两次；
b)药液过滤，滤液调节PH至近中性；
c)将步骤b)获得的滤液浓缩成1.5-2.5g生药/ml的稠膏，水沉1-3天，取上清得浸膏；
d)将白芍、生蒲黄、椿根皮以5-20：6-18：3-18的重量比用60-80％乙醇以5-15倍药材量渗滤12-20小时提取，回收乙醇，浓缩至1.5-4.5g生药/ml，水沉1-3天，取上清得清膏；
e)混合步骤c)获得的浸膏和步骤(d)获得的浸膏。
在一个优选例中，该方法可包括任选的步骤f)：在组合物中加入辅料，制成口服剂型。口服剂型选自冲剂、凝胶剂、口服液、片剂等。
在本发明的另一个方面，提供了本发明的组合物在制备治疗功能失调性子宫出血的药物中的用途。该药物的临床用量为每天最佳用量为相当于81g生药量的制剂，分3次服用。最佳制剂是含27g生药/袋的冲剂，每日3次，每次1袋。
具体实施方式
生地黄来源为中药地黄为玄参科植物地黄(Rehmannia glutinosa)的块根，具有滋阴清热，补血止血等功效。从鲜地黄及干地黄中，已分离鉴定出20多种苷类，主要是环烯醚萜苷类：梓醇，二氢梓醇，乙酰梓醇，益母草苷，桃叶珊瑚苷，单蜜力特苷，蜜力特苷，地黄素A、B、C、D，阿克替甙，地黄苷A、B、C、D，脑苷脂及含氯的地黄氯化臭蚁醛苷，地黄苷A、B、C，地黄苦苷，洋地黄叶甙C，海胆苷，肉苁蓉苷A、F，吉奥诺苷A、B，焦地黄苷A，B，去羟栀子苷，筋骨草苷，8-表番木鳖酸，乙酰梓醇苷等，熟地中含量较少。梓醇作为环烯醚萜苷类的主要成分，也是《中国药典》地黄质量控制成分，具有抗炎、止痛、抗肿瘤、缓泻、降血糖、保肝及抗衰老等多种药理作用。生地黄性寒，味甘，清热凉血，养阴生津。用于阴虚内热、骨蒸劳热、内热消渴、发斑发疹。
龟板是动物乌龟〔Chinemys reevesi(Gray))的干燥腹甲,龟板性微寒,味微咸,气微腥。含胶质、钙盐、脂肪和角蛋白等。具有补心肾,滋阴降火,潜阻退虚热等功效。
白芍是毛茛植物芍药(Paeonia Iactiflora Pall)去皮的干燥根。根含单萜及其苷类、黄酮、鞣质、多糖等，其主要有效成分为芍药苷。芍药苷是《中国药典》白芍质量控制的指标性成分。研究发现，芍药苷具有显著的抗炎、免疫调节和保护内皮细胞等药理作用，还可用于治疗类风湿性关节炎。白芍性微寒，味苦、酸，具有平肝止痛、养血调经、敛阴止汗的功效。
生蒲黄香蒲科多年生沼生草本狭叶香蒲(Typha angudtifolia L)、东方香蒲(Typha Orien talisP resl)或同属植物的干燥花粉。主要成分包括黄酮类、甾类、烷烃类及糖类等，其中黄酮类中的香蒲新苷和新橙皮苷是主要有效成分，具有促进血管生成和止血作用，作为药材质控成分收入药典标准。性味甘、微辛、平。归肝、心经。具有化瘀,止血,利尿作用。
椿根皮为臭椿Ailanthus altissima(Mill.)Swingle的干燥根皮。椿根皮的化学成分多为生物碱、三萜类化合物，其中三萜类化合物多为苦木素类化合物，同时，从该植物中也分离出一些黄酮类化合物。具有抗菌、抗病毒、抗肿瘤等多重作用。椿根皮味苦涩性微寒，具有清热燥湿、止泻止血之功效。
发明人首次提供了一种组方少，药材配比明确，质量可明确控制的治疗功血的组合物，从众多滋阴清热止血的中草药中，根据中医药理论和临床应用经验，筛选出生地黄、龟板、白芍、生蒲黄、椿根皮作为该冲剂的药物组成，其中生地黄为君药，清热凉血、养阴生津，白芍滋阴收敛、龟板滋阴潜阳为臣药，蒲黄、椿根皮活血止血、清热收敛为佐使药。该组合物对功能失调性子宫出血有很好的治疗作用，未见毒副作用。又根据现代中药提取方法和药理实验对这5味中药分别提取后进行了配比验证，结果中药在以下配比范围均有缩宫止血效果，龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮以重量比为5-20：15-60：5-20：6-18：3-18，该冲剂最佳组方是龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮为15：30：15：10：9。
发明人优化了制备工艺，建立了可控的质量标准，检测4个有效成分的含量，并通过实验证实了其可行性。
通过药理作用研究，结果表明本发明的药物组合物具有较好的缩宫止血效果，同时还具有促凝血、促进子宫内膜和激素水平恢复正常作用，是一种良好的功血治疗药物。
发明人还提供了一种检测治疗功血的药物组合物的质量标准，芍药苷≥12mg/ml、梓醇≥2mg/ml、香蒲新苷和新橙皮苷≥0.3mg/ml、总黄酮≥5mg/ml，可良好地控制药物组合物的生产质量。
下面的实施例是为了说明本发明，不是为了限制。
实施例1组合物的制备
龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮以重量比为5-20：15-60：5-20：6-18：3-18，该冲剂最佳组方是龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮为15：30：15：10：9。结果见下表。
中试1龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮为15：30：15：10：9kg，制备工艺按原生药比投料，生地黄和龟板加水煎提取(共20倍水，0.5小时，煎两次)，药液过滤，滤液调节PH至近中性，浓缩成2.0g生药/ml的稠膏，水沉2天，取上清得浸膏；蒲黄、椿根皮、白芍70％乙醇10倍药材量渗滤18小时提取，回收乙醇，浓缩至3.0g生药/ml，水沉2天，取上清得清膏。浸膏和清膏两份提取物合并，加辅料制成口服制剂。
中试2龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮为15：20：10：15：5kg，制备工艺按原生药比投料，生地黄和龟板加水煎提取(共15倍水，1小时，煎两次)，药液过滤，滤液调节PH至近中性，浓缩成1.5g生药/ml的稠膏，水沉3天，取上清得浸膏；蒲黄、椿根皮、白芍80％乙醇15倍药材量渗滤20小时提取，回收乙醇，浓缩至2.5g生药/ml，水沉3天，取上清得清膏。浸膏和清膏两份提取物合并，加辅料制成口服制剂。
中试3龟板：生地黄：白芍：生蒲黄：椿根皮为15：60：5：7：18kg，制备工艺按原生药比投料，生地黄和龟板加水煎提取(共12倍水，1.5小时，煎两次)，药液过滤，滤液调节PH至近中性，浓缩成2.5g生药/ml的稠膏，水沉1天，取上清得浸膏；生蒲黄、椿根皮、白芍60％乙醇7倍药材量渗滤12小时提取，回收乙醇，浓缩至3.5g生药/ml，水沉1天，取上清得清膏。浸膏和清膏两份提取物合并，加辅料制成口服制剂。
表1三批提取中试结果
以上提取物按原生药重量比投料，加入冲剂常规辅料，混合，分装，即得。
实施例2组合物的有效成分检测
对上述实施例1中的三批中试提取物进行了有效成分检测，并制定了产品的质量标准，如下：
1技术要求
1.1外观本品为深黄色液体。
1.2理化要求
表2理化要求标准
2实验方法
2.1 pH：将样品10％水溶液用酸度计测定。
2.2总黄酮：取本品溶液10ml至100ml容量瓶，以50％甲醇定容，分别取该液、芦丁对照品、50％甲醇2.0ml，置25ml容量瓶中，加水至10ml，加1ml5％亚硝酸钠溶液，再加1ml10％硝酸铝溶液，摇匀放置5分钟，分别加入5ml 1mol/L氢氧化钠溶液，以水定容，混匀，放置10分钟，用分光光度计在波长510±5nm处，以甲醇为参比液，测定其吸光度，并计算总黄酮的含量
2.3梓醇含量测定：
用HPLC法进行测定。本文选择流动相为0.1％磷酸水，流速为1.0ml/min，检测波长为210nm，柱温为25℃。
2.4芍药苷含量测定：
用HPLC法进行测定。本文选择流动相为甲醇-水-磷酸(28:72:0.1)，流速为1.0ml/min，检测波长为230nm，柱温为25℃。
2.5新橙皮苷和香蒲新苷
用HPLC法进行测定。本文选择流动相为乙腈-0.05％磷酸水(14:86)，流速为1.0ml/min，检测波长为370nm，柱温为30℃。
3三批中试产品的质量报告
对实施例1中的三批中试提取物(浸膏)进行了检测,结果见下表。
表3中试产品的质量报告
实施例3组合物治疗功血的效果检测
根据下面的实验步骤，对实施例1中的中试1样品，利用米索前列醇合并米非司酮法复制功血大鼠模型测试了功血治疗的效果。
1实验材料
1.1实验药物和试剂
实施例1所述的中试1
功血宁胶囊，云南白药集团股份有限公司，批号：Z112021.
米索前列醇片(200ug/片)，英国Pharmal healthcare公司，批号：A06332.
米非司酮片(10mg/片)，浙江仙琚制药股份有限公司，批号：121201.
雌二醇ELISA试剂盒，南京森贝伽生物科技有限公司，批号：SBJ-R0048.
孕酮ELISA试剂盒，南京森贝伽生物科技有限公司，批号：SBJ-R1043.
TT试剂盒，北京世帝科学仪器有限公司，批号：STY20301-37.
PT试剂盒，北京世帝科学仪器有限公司，批号：STY20101-56B.
APTT试剂盒，北京世帝科学仪器有限公司，批号：STY20201-42.
1.2实验仪器
LG-PABER-1血小板聚集凝血因子分析仪，北京世帝科学仪器有限公司。
Synergy HT型紫外荧光酶标仪，美国Biotek公司。
1.3实验动物
雌性大鼠90只，雄性大鼠40只，180-220g，购于南京青龙山动物养殖场，动物合格证号：SCXK(苏)2008-0010。
2实验方法
2.1药物配制方法：
米非司酮的配制：200mg(20片)用NS配至240ml，1ml/100g，ig。
米索前列醇的配制：3mg(15片)用NS配制300ml，1ml/100g，ig。
受试药的配制：根据临床人81g生药/60kg/日，大鼠8倍量计算，大鼠剂量为81÷60×8＝10.8g生药/kg，相当本发明组合物2.5g生药/ml的浓度大鼠给药4.0ml/kg，以此为中剂量，加1倍量为高剂量，减1倍量为低剂量，加水配制大鼠灌胃为1ml/100g。
阳性药宫血宁的配制：
宫血宁胶囊规格：0.13g/粒。人用量：一日0.78g/人/日。大鼠拟用量：0.13g/kg。2.6g(20粒)用NS配至200ml，1ml/100g，ig。
2.2功血模型大鼠的复制：将大鼠按雌∶雄2∶1合笼，次晨检查雌鼠阴栓与阴道涂片，以发现阴栓或阴道涂片有精子为妊娠第1天，于怀孕第7天上午8时灌胃米非司酮8.3mg/kg，下午6时灌胃米索前列醇100μg/kg，造成早孕大鼠功血模型。
2.3给药方法：取雌性大鼠60只，随机均分为6组，即受试药高中低组、正常组、模型组和阳性组(宫血宁组)，每组10只，除正常组外，其他10组均造模，造模成功后，连续给药7天。
2.4指标检测方法：大鼠连续灌胃7天后，麻醉，颈总动脉取血5ml，其中3ml无需抗凝，离心3000rpm，10min，获取血清，根据ELISA试剂盒要求测定雌激素和孕激素含量，另外2ml血液用3.8％枸缘酸钠1︰9抗凝，获取血浆后，用血小板聚集凝血因子分析仪测大鼠凝血功能：凝血酶原时间(TT)、凝血酶时间(PT)及活化部分凝血时间(APTT)。处死大鼠，取子宫，固定于福尔马林中，进行组织学检查。病理观察指标为:子宫腔有无粘连、闭塞或扩张；子宫腔壁结构有无改变；子宫内膜上皮细胞有无变性坏死；子宫壁有无慢性炎细胞浸润；子宫内膜有无充血水肿。根据病变由轻到重的程度分别记为0-4分,积分标准为：无病变记为0分，极轻度记为1分，轻度但病变范围<1/3记2分，中度病变，范围在1/3-2/3记3分；重度病变，范围在2/3以上者记4分。炎细胞浸润程度积分标准为无炎细胞浸润记为0分；极少量记为1分；黏膜固有层有少量记为2分，肌层查见记为3分，全层皆有记为4分，累积所有分数。
3实验结果
3.1凝血功能检测结果
与正常组比较，功血模型大鼠可见TT和APTT的显著延长(P<0.05，0.01)。各给药组与模型组比较未见显著差异(P>0.05)，但相比其他药物，高剂量药组在TT和PT中的缩短趋势最为明显，而中剂量药在APTT的缩短趋势最明显。各组凝血功能结果见表1。
表4凝血功能检测结果
与模型组比较，*P<0.05。
3.2血清雌二醇和孕酮含量检测结果
与正常组比较，功血模型大鼠可见血清雌二醇和孕酮的显著降低(P<0.05)。与模型组比较，除高剂量组，其他各给药组有升高，但未见显著差异(P>0.05)。各组血清雌二醇和孕酮含量检测结果见表5。
表5血清雌二醇和孕酮含量检测结果
3.3子宫组织学检测结果
空白对照组：本组所有子宫各层完整，界限清晰，内膜上皮细胞及腺体无变性、坏死，无充血水肿，内膜可见散在的嗜酸性粒细胞浸润(+)，肌层、浆膜层结构正常。
模型组：本组4/10例子宫腔壁结构紊乱，内膜上皮细胞变性、坏死、脱落(+++)，腺体减少(++)，并可见大量炎细胞浸润和成纤维细胞增生(+++)；1/10例子宫腔壁结构紊乱，上皮细胞变性、坏死、脱落(+++)，腺体减少(++)，内膜充血水肿(+++)，可见大量炎细胞浸润；2/10例子宫内膜上皮细胞变性(+)，可见中度炎细胞浸润(++)；余3/10例内膜可见少量的嗜酸性粒细胞浸润(+)。
阳性药组：本组1/10例子宫腔壁结构紊乱，上皮细胞变性、坏死、脱落(+)，内膜充血水肿(++)，并可见大量炎细胞浸润(++)，5/10例子宫内膜上皮细胞变性(+)，可见轻度炎细胞浸润(+)；余4/10例子宫内膜可见少量斯嗜酸性粒细胞浸润(+)。
高剂量组：本组1/10例子宫内膜上皮细胞变性、脱落(+)，内膜水肿(+)，并可见大量炎细胞浸润(++)，6/10例子宫内膜上皮细胞变性(+)，可见散在的炎细胞浸润(+)；余2/10例子宫内膜轻度水肿(+)，可见少量斯嗜酸性粒细胞浸润(+)。
低剂量组：本组2/10例子宫内膜上皮细胞变性、脱落(+)，内膜水肿(+)，并可见大量炎细胞浸润(++)，1/10例子宫内膜上皮细胞变性、坏死、脱落(+)，内膜充血水肿(++)，少量炎细胞浸润；4/10例子宫内膜上皮细胞变性(+)，可见少量的炎细胞浸润(+)；余3/10例子宫内膜轻度水肿(+)，可见少量斯嗜酸性粒细胞浸润(+)。
中剂量组：本组4/10例子宫腔壁结构紊乱，上皮细胞变性、坏死、脱落(++)，腺体减少(++)，内膜中度水肿(++)，并可见中度炎细胞浸润(++)；1/10例子宫内膜上皮细胞变性、坏死、脱落(+)，内膜水肿(+)，并可见轻度炎细胞浸润(+)，余5/10例子宫内膜轻度水肿(+)，并可见少量嗜酸性粒细胞浸润(+)。
表6子宫组织学检测结果
与模型组比较，*P<0.05，**P<0.01。
实施例4组合物的安全性检验
1急性毒性
为了提供试验安全用药的剂量范围，对实施例1的中试1组合物进行了急性毒性试验。在预备试验中，小鼠灌服大剂量亦不致死，不能测出半数致死量，故采用最大给药量试验。
受试药物中试1组合物再浓缩至6.0g生药/ml，供灌胃用。
实验动物ICR小鼠40只，18-21g，雌雄各半，由中国药科大学实验动物中心提供。
试验方法与结果取健康小鼠20只，雌雄各半，0.5ml/10g每次最大灌胃给药，一日内灌胃3次，连续观察7日。
小鼠给药当日，行动缓慢，进食减少。次日恢复食量，活动、大便均正常。观察7日未见死亡，第8日空腹12h称重，尸解未见主要脏器有异常。体重变化见表7。
表7 A-2小鼠急性毒性试验体重变化
与给药前比，***P<0.01
由表7可见，小鼠灌服本发明的组合物，体重正常增长。
在小鼠急性毒性试验中，采用最大给药量法，组合物给予小鼠量每日最大为150ml/kg，即为900g生药/kg，人最大安全用量为90g/kg，成人以60kg计，每人每天最大安全用量为5400g，组合物推荐临床剂量为人每天81g生药量，急毒安全剂量相当于临床剂量的67倍。给药后观察7日，均未出现死亡及明显中毒反应，体重正常增长。
以上结果说明本发明的组合物安全、无毒。
最后，应该理解的是，虽然本说明书的各方面通过参照特定实施例突出显示，但是本领域技术人员将容易地理解，这些公开的实施例仅仅阐述说明这里公开的主题的原理。因此，应当理解，所公开的主题并不局限于特定的方法，协议和/或本文描述的试剂等。这样，所公开的主题的各种修改或改变或替代结构可根据本文中的教示而不脱离本说明书的精神。最后，在此使用的术语仅仅是为了描述具体实施例的目的，而不是用来限制本发明的范围，其仅由权利要求书限定。因此，本发明并不限于具体所示和所述的内容。
本文描述了本发明的某些实施方式，包括本发明人已知的实施本发明所需的最佳模式。当然，阅读以上说明书后，所述实施方式的变型将是本领域普通技术人员所明白的。本发明人预期，普通技术人员将适当地利用这些变型，本发明人旨在使本发明在本文具体描述之外以其他方式进行实施。因此，根据申请原则，本发明包括所附权利要求书所涉及主题的所有改进和等同形式。而且，所有可能的变型中上述要素的任意组合包括在本发明范围内，除非另有说明或者清楚指出相反。
本文所述本发明可选的实施方式、要素或步骤的分组不应解释为限制性的。每个组成员都可被单独提到或要求保护，或与本文公开的其他组成员的任何组合。预计出于便利和/或专利性的原因，组中可以包括或者删除一个或多个成员。在发生任何这种包括或者删除时，认为说明书包括经修饰的组，因而满足所附权利要求书中使用的所有马库什组(Markush group)的书写描述。
除非另有说明，本说明书和权利要求书所用的表示特征、项目、数量、参数、性质、属性术语等等的所有数值应理解为在所有情况下均被术语“约”修饰。如本文所用，术语“约”表示限定的特征、项目、数量、参数、属性涵盖了所述特征、项目、数量、参数、特性或属性的值在之上或之下加上或减去10％。因此，除非有相反说明，以下说明书和所附权利要求中所述的数值参数是近似值。例如，质谱分析仪可以在测定给定分析物的质量时轻微变化，术语离子质量或离子的质/荷比的“约”是指+/-0.50原子质量单位。
并非试图限制等同原则应用于权利要求的范围，最起码的，每个数值至少应根据所记录的有效数字的位数并考虑到运用了常用的取整规则进行解释。
使用术语"可"或"可能"参考一个实施方式或实施方式的一方面还携带有“不”或“不能”的替代含义。这样，如果本说明书公开的实施方式或实施方式的一方面可以是或者可被包含作为本发明的主题的一部分，则负面限制或排除条件也被明确地表示，也就是说一个实施方式或者实施方式的一个方面可以不是或不能被包含作为本发明的主题。以类似的方式，使用术语"任选地"参考一个实施方式或实施方式的一方面意味着这样的实施方案或实施方式的方面可以被包括作为本发明主题的部分或可不被包括作为本发明的主题。无论这种负面限制或是禁入条件应用将基于负面限制或排除条件叙述在所要求保护的主题。
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