一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法.pdf

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摘要
申请专利号:

CN201710658434.4

申请日:

20170803

公开号:

CN107372112A

公开日:

20171124

当前法律状态:

有效性:

审查中

法律详情:

IPC分类号:

A01H4/00

主分类号:

A01H4/00

申请人:

东方上彩现代农业有限公司

发明人:

王健,刘坤,申亮,卢迪浩,郑德助,施金玉,包宇飞

地址:

572634 海南省东方市板桥镇三间村老园(距省道中板线中沙路口一公里)

优先权:

CN201710658434A

专利代理机构:

北京超凡志成知识产权代理事务所(普通合伙)

代理人:

王玉桂

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内容摘要

本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,包括以下步骤:选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体;将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织;将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得。本发明利用特定的诱导绿萝愈伤组织的培养基及促进愈伤组织快速生长的方法,以绿萝茎段作为外植体材料,通过二次转接,利用特定培养基打破愈伤组织外部的黑色包围层,使愈伤组织得以迅速生长,有效地大量繁殖绿萝后代,具有高产、优质、抗逆性强等优良性状,为绿萝规模化生产提供一条有效途径。

权利要求书

1.一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,包括以下步骤:选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体;将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织;将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得;所述继代培养基1号包括如下组分:改良MS培养基1号、6-苄氨基腺嘌呤、ZT、吲哚-3-乙酸、VC、蔗糖和琼脂粉;所述继代培养基2号包括如下组分:改良MS培养基3号、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、AC、蔗糖和琼脂粉。 2.如权利要求1所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体,包括:选取母株运用多菌灵灌根;取所述母株生长点处茎段;将所述茎段消毒,得绿萝茎段外植体。 3.如权利要求2所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述选取母株运用多菌灵灌根,包括:选取母株使用80%多菌灵1000倍溶液进行灌根30天,每10天1次。 4.如权利要求3所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号;所述将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织,包括:将所述绿萝茎段外植体修剪后,得茎段段样;将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟;将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行暗培养10天后,给予1500-20001X的光照继续培养,得初期绿萝愈伤组织;将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行培养7天后,给予光照2001X继续加速培养,得第二愈伤组织。 5.如权利要求4所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下组分:改良MS培养基1号、TDZ、萘乙酸、D丁酯、蔗糖、椰子水和琼脂粉;所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下组分:改良MS培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、KT、萘乙酸、IBA、水解酪蛋白、琼脂粉和蔗糖。 6.如权利要求5所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置:在改良MS培养基1号中,按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、0.2mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的D丁酯、30mg/L的蔗糖、100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉,调节PH值至5.6-5.8,即得;所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置:在改良MS培养基2号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的KT、0.2mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的IBA、200-500g/L的水解酪蛋白、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖,调节PH值至5.6-5.8,即得。 7.如权利要求1所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得,包括:将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、光照时间12小时/日、温度25℃-28℃条件下进行培养40天,获得第二代愈伤组织;将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养,即得。 8.如权利要求7所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述继代培养基1号,按如下方法进行配制:在改良MS培养基1号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的ZT、0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、50mg/L的VC、25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。 9.如权利要求7所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述继代培养基2号,按如下方法进行配制:在改良MS培养基3号中,按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的吲哚丁酸、1000mg/L的AC、30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。 10.如权利要求1-9任一项所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,其特征在于,所述改良MS培养基1号按如下方法配置:以MS培养基为基础,还包括以下成分,并调整含量为:肌醇:1-5mg/L;盐酸硫胺素:3-6mg/L;盐酸吡哆醇:0.5-2mg/L;烟酸:0.5-3mg/L;精氨酸:50mg/L;天冬氨酸:100mg/L;谷氨酸:150mg/L;所述改良MS培养基2号按如下方法配置:以MS培养基为基础,还包括以下成分,并调整含量为:肌醇:1-5mg/L;盐酸硫胺素:3-6mg/L;盐酸吡哆醇:0.5-2mg/L;烟酸:0.5-3mg/L;精氨酸:100mg/L;天冬氨酸:50mg/L;谷氨酸:200mg/L;所述改良MS培养基3号按如下方法配置:以MS培养基为基础,将其中成分调整为:肌醇:1-5mg/L;盐酸硫胺素:3-6mg/L;盐酸吡哆醇:0.5-4mg/L;烟酸:0.5-5mg/L。

说明书

技术领域

本发明涉及植物培养技术领域,具体地说,涉及一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法。

背景技术

绿萝(学名:Epipremnum aureum),属于麒麟叶属植物,大型常绿藤本,生长于热带地区,常攀援生长在雨林的岩石和树干上,其缠绕性强,气根发达,可以水培种植。成熟枝上叶柄粗壮,长30-40厘米,基部稍扩大,上部关节长2.5-3厘米、稍肥厚,腹面具宽槽,叶鞘长,叶片薄革质,翠绿色,通常(特别是叶面)有多数不规则的纯黄色斑块,全缘,不等侧的卵形或卵状长圆形,先端短渐尖,基部深心形,稍粗,两面略隆起。

绿萝原产地在印度尼西亚所罗门群岛的热带雨林中,性喜温暖、潮湿环境,要求土壤疏松肥沃、排水良好。在热带地区常攀援生长于岩石和树干上,成为巨大的观赏藤本植物,我国南方各地均有栽植。绿萝耐阴性强,终年常绿,叶面有较厚的角质层,能适应室内干燥的环境条件,是优良的室内观叶植物。此外,还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物,是天然的“空气净化器”,具有较大的市场前景。

绿萝的繁殖目前是通过扦插进行繁殖,由于绿萝生长环境高温高湿,扦插繁殖的后代极易感病菌,生产中经常出现大规模茎腐、根腐现象,给绿萝的培育造成一定的经济损失。

发明内容

有鉴于此,本发明要解决的技术问题在于克服绿萝的繁殖目前是通过扦插进行繁殖,由于绿萝生长环境高温高湿,扦插繁殖的后代极易感病菌,生产中经常出现大规模茎腐、根腐现象,给绿萝的培育造成一定的经济损失的缺陷。

为解决上述问题,本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,包括以下步骤:

选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体;

将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织;

将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得;

所述继代培养基1号包括如下组分:

改良MS培养基1号、6-苄氨基腺嘌呤、ZT、吲哚-3-乙酸、VC、蔗糖和琼脂粉;

所述继代培养基2号包括如下组分:

改良MS培养基3号、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、AC、蔗糖和琼脂粉。

优选地,所述选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体,包括:

选取母株运用多菌灵灌根;

取所述母株生长点处茎段;

将所述茎段消毒,得绿萝茎段外植体。

优选地,所述选取母株运用多菌灵灌根,包括:

选取母株使用80%多菌灵1000倍溶液进行灌根30天,每10天1次。

优选地,

所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号;

所述将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织,包括:

将所述绿萝茎段外植体修剪后,得茎段段样;

将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟;

将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行暗培养10天后,给予1500-20001X的光照继续培养,得初期绿萝愈伤组织;

将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行培养7天后,给予光照2001X继续加速培养,得第二愈伤组织。

优选地,所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下组分:

改良MS培养基1号、TDZ、萘乙酸、D丁酯、蔗糖、椰子水和琼脂粉;

所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下组分:

改良MS培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、KT、萘乙酸、IBA、水解酪蛋白、琼脂粉和蔗糖。

优选地,所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、0.2mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的D丁酯、30mg/L的蔗糖、100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉,调节PH值至5.6-5.8,即得;

所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置:

在改良MS培养基2号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的KT、0.2mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的IBA、200-500g/L的水解酪蛋白、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖,调节PH值至5.6-5.8,即得。

优选地,所述将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得,包括:

将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、光照时间12小时/日、温度25℃-28℃条件下进行培养40天,获得第二代愈伤组织;

将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养,即得。

优选地,所述继代培养基1号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的ZT、0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、50mg/L的VC、25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

优选地,所述继代培养基2号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基3号中,按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的吲哚丁酸、1000mg/L的AC、30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

优选地,所述改良MS培养基1号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:1-5mg/L;

盐酸硫胺素:3-6mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5-2mg/L;

烟酸:0.5-3mg/L;

精氨酸:50mg/L;

天冬氨酸:100mg/L;

谷氨酸:150mg/L;

所述改良MS培养基2号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:1-5mg/L;

盐酸硫胺素:3-6mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5-2mg/L;

烟酸:0.5-3mg/L;

精氨酸:100mg/L;

天冬氨酸:50mg/L;

谷氨酸:200mg/L;

所述改良MS培养基3号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,将其中成分调整为:

肌醇:1-5mg/L;

盐酸硫胺素:3-6mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5-4mg/L;

烟酸:0.5-5mg/L。

本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,包括选:取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体;将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织;将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得。本发明利用特定的诱导绿萝愈伤组织的培养基及促进愈伤组织快速生长的方法,其特点在于通过特定培养基加速诱导出愈伤组织,然后通过二次转接,利用特定培养基打破愈伤组织外部的黑色包围层,使愈伤组织得以迅速生长的方法。以绿萝茎段作为外植体材料,利用组织培养技术对绿萝进行快速繁殖,可有效地大量繁殖绿萝后代,具有高产、优质、抗逆性强等优良性状,为绿萝规模化生产提供一条有效途径。

具体实施方式

为了更清楚地说明本发明的技术方案,下面结合具体实施例对本发明的权利要求做进一步的详细说明,可以理解的是,以下仅示出了本发明的某些实施例,因此不应被看作是对范围的限定,任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改,仍在本发明的权利要求范围之内。

为解决上述问题,本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,包括以下步骤:

选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体;

将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织;

将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得;

所述继代培养基1号包括如下组分:

改良MS培养基1号、6-苄氨基腺嘌呤、ZT、吲哚-3-乙酸、VC、蔗糖和琼脂粉;

所述继代培养基2号包括如下组分:

改良MS培养基3号、6-苄氨基腺嘌呤、吲哚丁酸、AC、蔗糖和琼脂粉。

绿萝(学名:Epipremnum aureum),属于麒麟叶属植物,大型常绿藤本,生长于热带地区,常攀援生长在雨林的岩石和树干上,其缠绕性强,气根发达,可以水培种植。成熟枝上叶柄粗壮,长30-40厘米,基部稍扩大,上部关节长2.5-3厘米、稍肥厚,腹面具宽槽,叶鞘长,叶片薄革质,翠绿色,通常(特别是叶面)有多数不规则的纯黄色斑块,全缘,不等侧的卵形或卵状长圆形,先端短渐尖,基部深心形,稍粗,两面略隆起。

绿萝原产地在印度尼西亚所罗门群岛的热带雨林中,性喜温暖、潮湿环境,要求土壤疏松肥沃、排水良好。在热带地区常攀援生长于岩石和树干上,成为巨大的观赏藤本植物,我国南方各地均有栽植。绿萝耐阴性强,终年常绿,叶面有较厚的角质层,能适应室内干燥的环境条件,是优良的室内观叶植物。此外,还能吸附和去除室内空气中的甲醛、苯、三氯乙烯等污染物,是天然的“空气净化器”,具有较大的市场前景。

本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法,包括选:取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体;将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织;将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得。本发明利用特定的诱导绿萝愈伤组织的培养基及促进愈伤组织快速生长的方法,其特点在于通过特定培养基加速诱导出愈伤组织,然后通过二次转接,利用特定培养基打破愈伤组织外部的黑色包围层,使愈伤组织得以迅速生长的方法。以绿萝茎段作为外植体材料,利用组织培养技术对绿萝进行快速繁殖,可有效地大量繁殖绿萝后代,具有高产、优质、抗逆性强等优良性状,为绿萝规模化生产提供一条有效途径。

优选地,所述选取母株,经预处理后取绿萝茎段外植体,包括:

选取母株运用多菌灵灌根;

取所述母株生长点处茎段;

将所述茎段消毒,得绿萝茎段外植体。

优选地,所述选取母株运用多菌灵灌根,包括:

选取母株使用80%多菌灵1000倍溶液进行灌根30天,每10天1次。

上述,为本发明中外植体选取和处理过程,具体的,包括选取形态正常、生长旺盛的健壮母株预处理(使用80%多菌灵可湿性粉剂1000倍液灌根,每10天一次),20天后,切取茎生长点处5~8cm茎段(至少带有一个节,去除叶及叶柄),经表面除杂、清洗后的外植体转入超净工作台进行消毒处理,得到无菌的绿萝茎段。绿萝母株的切面在外植体采集后,对切面进行防护处理,待恢复生长后可以重新取样。绿萝母株的切面在外植体采集后,对切面进行防护处理,待恢复生长后可以重新取样。

上述,多菌灵又名棉萎灵、苯并咪唑44号。多菌灵是一种广谱性杀菌剂,对多种作物由真菌(如半知菌、多子囊菌)引起的病害有防治效果。可用于叶面喷雾、种子处理和土壤处理等。

优选地,

所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号;

所述将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后,并接种至愈伤组织诱导培养基中,得第二愈伤组织,包括:

将所述绿萝茎段外植体修剪后,得茎段段样;

将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟;

将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行暗培养10天后,给予1500-20001X的光照继续培养,得初期绿萝愈伤组织;

将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行培养7天后,给予光照2001X继续加速培养,得第二愈伤组织。

上述,为本发明中愈伤组织诱导培养过程,具体的,包括将绿萝茎段修剪至长度为2~3cm的茎段,常规消毒后用聚乙烯吡硌烷酮(PVP)2g/L浸泡10-15分钟,然后接种到愈伤组织诱导培养基1号中,在温度为23~25℃,湿度为50~65%的条件下进行暗培养,暗培养10天后给予1500~20001x光照继续培养,20天后得到初期绿萝愈伤组织;将得到的初期绿萝愈伤组织转接入愈伤组织诱导培养基2号中,在温度为25~28℃,湿度为50~65%的条件下暗培养一周后给予光照条件20001x,继续培养,加速愈伤组织的形成。

优选地,所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下组分:

改良MS培养基1号、TDZ、萘乙酸、D丁酯、蔗糖、椰子水和琼脂粉;

所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下组分:

改良MS培养基2号、6-苄氨基腺嘌呤、KT、萘乙酸、IBA、水解酪蛋白、琼脂粉和蔗糖。

优选地,所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、0.2mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的D丁酯、30mg/L的蔗糖、100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉,调节PH值至5.6-5.8,即得;

所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置:

在改良MS培养基2号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的KT、0.2mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的IBA、200-500g/L的水解酪蛋白、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖,调节PH值至5.6-5.8,即得。

优选地,所述将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养,即得,包括:

将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、光照时间12小时/日、温度25℃-28℃条件下进行培养40天,获得第二代愈伤组织;

将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养,即得。

优选地,所述继代培养基1号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的ZT、0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、50mg/L的VC、25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

优选地,所述继代培养基2号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基3号中,按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的吲哚丁酸、1000mg/L的AC、30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

上述,为本发明中对绿萝外植体的愈伤组织的继代培养过程,具体的,包括将愈伤组织在超净工作台上及无菌条件下,转接到继代培养基1号中,然后将其置于LED灯作为光源的环境下,在光照强度为1500~20001x,每日光照时间为12小时,温度为25~28℃,湿度为50~65%的条件下,进行愈伤组织的继代培养,经过40天,获得第二代愈伤组织,此后继代使用继代培养基2号,并且可以根据褐化情况逐步减少使用AC,甚至不使用。

优选地,所述改良MS培养基1号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:1-5mg/L;

盐酸硫胺素:3-6mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5-2mg/L;

烟酸:0.5-3mg/L;

精氨酸:50mg/L;

天冬氨酸:100mg/L;

谷氨酸:150mg/L;

所述改良MS培养基2号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:1-5mg/L;

盐酸硫胺素:3-6mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5-2mg/L;

烟酸:0.5-3mg/L;

精氨酸:100mg/L;

天冬氨酸:50mg/L;

谷氨酸:200mg/L;

所述改良MS培养基3号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,将其中成分调整为:

肌醇:1-5mg/L;

盐酸硫胺素:3-6mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5-4mg/L;

烟酸:0.5-5mg/L。

上述,需要理解的是,MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设计的,其特点是无机盐和离子浓度较高,是较稳定的离子平衡溶液,它的硝酸盐含量高,其养分的数量和比例合适,能满足植物细胞的营养和生理需要,因而适用范围比较广,多数植物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。基于此,这种培养基就用他们的名字来命名。其配方如表所示。

表1MS培养基配方表

实施例1:

按如下方法及培养溶液对绿萝外植体进行培养:

步骤1,选取母株使用80%多菌灵1000倍溶液进行灌根30天,每10天1次;

步骤2,取所述母株生长点处茎段;

步骤3,将所述茎段消毒,得绿萝茎段外植体;

步骤4,将所述绿萝茎段外植体修剪后,得茎段段样;

步骤5,将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟;

步骤6,将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行暗培养10天后,给予1500-20001X的光照继续培养,得初期绿萝愈伤组织;

步骤7,将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行培养7天后,给予光照2001X继续加速培养,得第二愈伤组织。

步骤8,将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、光照时间12小时/日、温度25℃-28℃条件下进行培养40天,获得第二代愈伤组织;

步骤9,将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养,即得。

培养药液配置:

1、所述改良MS培养基1号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4,微量元素为所述MS培养基原有含量的1/2;

还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:1mg/L;

盐酸硫胺素:3mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5mg/L;

烟酸:0.5mg/L;

精氨酸:50mg/L;

天冬氨酸:100mg/L;

谷氨酸:150mg/L;

2、所述改良MS培养基2号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4,微量元素为所述MS培养基原有含量的1/2;

还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:1mg/L;

盐酸硫胺素:3mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5mg/L;

烟酸:0.5mg/L;

精氨酸:100mg/L;

天冬氨酸:50mg/L;

谷氨酸:200mg/L;

3、所述改良MS培养基3号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,将其中成分调整为:

肌醇:1mg/L;

盐酸硫胺素:3mg/L;

盐酸吡哆醇:0.5mg/L;

烟酸:0.5mg/L。

4、所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、0.2mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的D丁酯、30mg/L的蔗糖、100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉,调节PH值至5.6-5.8,即得;

5、所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置:

在改良MS培养基2号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的KT、0.2mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的IBA、200-500g/L的水解酪蛋白、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖,调节PH值至5.6-5.8,即得。

6、所述继代培养基1号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的ZT、0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、50mg/L的VC、25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

7、所述继代培养基2号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基3号中,按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的吲哚丁酸、1000mg/L的AC、30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

实施例2:

按如下方法及培养溶液对绿萝外植体进行培养:

步骤1,选取母株使用80%多菌灵1000倍溶液进行灌根30天,每10天1次;

步骤2,取所述母株生长点处茎段;

步骤3,将所述茎段消毒,得绿萝茎段外植体;

步骤4,将所述绿萝茎段外植体修剪后,得茎段段样;

步骤5,将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟;

步骤6,将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行暗培养10天后,给予1500-20001X的光照继续培养,得初期绿萝愈伤组织;

步骤7,将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行培养7天后,给予光照2001X继续加速培养,得第二愈伤组织。

步骤8,将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、光照时间12小时/日、温度25℃-28℃条件下进行培养40天,获得第二代愈伤组织;

步骤9,将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养,即得。

培养药液配置:

1、所述改良MS培养基1号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4,微量元素为所述MS培养基原有含量的1/2;

还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:3mg/L;

盐酸硫胺素:4mg/L;

盐酸吡哆醇:1mg/L;

烟酸:2mg/L;

精氨酸:50mg/L;

天冬氨酸:100mg/L;

谷氨酸:150mg/L;

2、所述改良MS培养基2号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4,微量元素为所述MS培养基原有含量的1/2;

还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:3mg/L;

盐酸硫胺素:4mg/L;

盐酸吡哆醇:1mg/L;

烟酸:2mg/L;

精氨酸:100mg/L;

天冬氨酸:50mg/L;

谷氨酸:200mg/L;

3、所述改良MS培养基3号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,将其中成分调整为:

肌醇:3mg/L;

盐酸硫胺素:4mg/L;

盐酸吡哆醇:3mg/L;

烟酸:3mg/L。

4、所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、0.2mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的D丁酯、30mg/L的蔗糖、100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉,调节PH值至5.6-5.8,即得;

5、所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置:

在改良MS培养基2号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的KT、0.2mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的IBA、200-500g/L的水解酪蛋白、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖,调节PH值至5.6-5.8,即得。

6、所述继代培养基1号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的ZT、0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、50mg/L的VC、25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

7、所述继代培养基2号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基3号中,按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的吲哚丁酸、1000mg/L的AC、30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

实施例3:

按如下方法及培养溶液对绿萝外植体进行培养:

步骤1,选取母株使用80%多菌灵1000倍溶液进行灌根30天,每10天1次;

步骤2,取所述母株生长点处茎段;

步骤3,将所述茎段消毒,得绿萝茎段外植体;

步骤4,将所述绿萝茎段外植体修剪后,得茎段段样;

步骤5,将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟;

步骤6,将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行暗培养10天后,给予1500-20001X的光照继续培养,得初期绿萝愈伤组织;

步骤7,将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中,在温度25℃-28℃和湿度50%-65%的条件下进行培养7天后,给予光照2001X继续加速培养,得第二愈伤组织。

步骤8,将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、光照时间12小时/日、温度25℃-28℃条件下进行培养40天,获得第二代愈伤组织;

步骤9,将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养,即得。

培养药液配置:

1、所述改良MS培养基1号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4,微量元素为所述MS培养基原有含量的1/2;

还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:5mg/L;

盐酸硫胺素:6mg/L;

盐酸吡哆醇:2mg/L;

烟酸:3mg/L;

精氨酸:50mg/L;

天冬氨酸:100mg/L;

谷氨酸:150mg/L;

2、所述改良MS培养基2号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4,微量元素为所述MS培养基原有含量的1/2;

还包括以下成分,并调整含量为:

肌醇:5mg/L;

盐酸硫胺素:6mg/L;

盐酸吡哆醇:2mg/L;

烟酸:3mg/L;

精氨酸:100mg/L;

天冬氨酸:50mg/L;

谷氨酸:200mg/L;

3、所述改良MS培养基3号按如下方法配置:

以MS培养基为基础,将其中成分调整为:

肌醇:5mg/L;

盐酸硫胺素:6mg/L;

盐酸吡哆醇:4mg/L;

烟酸:5mg/L。

4、所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、0.2mg/L的萘乙酸、0.5mg/L的D丁酯、30mg/L的蔗糖、100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉,调节PH值至5.6-5.8,即得;

5、所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置:

在改良MS培养基2号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的KT、0.2mg/L的萘乙酸、0.1mg/L的IBA、200-500g/L的水解酪蛋白、7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗糖,调节PH值至5.6-5.8,即得。

6、所述继代培养基1号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基1号中,按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、1.0mg/L的ZT、0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、50mg/L的VC、25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

7、所述继代培养基2号,按如下方法进行配制:

在改良MS培养基3号中,按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、0.1mg/L的吲哚丁酸、1000mg/L的AC、30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉,即得。

应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施方式中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

发明人声明,本发明通过上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施方式的具体说明,但本发明并不局限于上述详细工艺设备和工艺流程。并且即不意味着本发明应依赖上述详细工艺设备和工艺流程才能实施。所属技术领域的技术人员应该明了,对本发明的任何改进,对本发明产品各原料的等效替换及辅助成分的添加、具体方式的选择等,均落在本发明的保护范围和公开范围之内。

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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201710658434.4 (22)申请日 2017.08.03 (71)申请人 东方上彩现代农业有限公司 地址 572634 海南省东方市板桥镇三间村 老园 (距省道中板线中沙路口一公里) (72)发明人 王健 刘坤 申亮 卢迪浩 郑德助 施金玉 包宇飞 (74)专利代理机构 北京超凡志成知识产权代理 事务所(普通合伙) 11371 代理人 王玉桂 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法 (57)摘要。

2、 本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生 长的方法, 包括以下步骤: 选取母株, 经预处理后 取绿萝茎段外植体; 将所述绿萝茎段外植体进行 聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导 培养基中, 得第二愈伤组织; 将所述第二愈伤组 织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培 养, 即得。 本发明利用特定的诱导绿萝愈伤组织 的培养基及促进愈伤组织快速生长的方法, 以绿 萝茎段作为外植体材料, 通过二次转接, 利用特 定培养基打破愈伤组织外部的黑色包围层, 使愈 伤组织得以迅速生长, 有效地大量繁殖绿萝后 代, 具有高产、 优质、 抗逆性强等优良性状, 为绿 萝规模化生产提供一条有效途径。 权利要。

3、求书3页 说明书12页 CN 107372112 A 2017.11.24 CN 107372112 A 1.一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 包括以下步骤: 选取母株, 经预处理后取绿萝茎段外植体; 将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导培养基 中, 得第二愈伤组织; 将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养, 即得; 所述继代培养基1号包括如下组分: 改良MS培养基1号、 6-苄氨基腺嘌呤、 ZT、 吲哚-3-乙酸、 VC、 蔗糖和琼脂粉; 所述继代培养基2号包括如下组分: 改良MS培养基3号、 6-苄氨基腺嘌呤、 吲哚丁。

4、酸、 AC、 蔗糖和琼脂粉。 2.如权利要求1所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述选取母株, 经预处理后取绿萝茎段外植体, 包括: 选取母株运用多菌灵灌根; 取所述母株生长点处茎段; 将所述茎段消毒, 得绿萝茎段外植体。 3.如权利要求2所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述选取母株运 用多菌灵灌根, 包括: 选取母株使用80多菌灵1000倍溶液进行灌根30天, 每10天1次。 4.如权利要求3所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2号; 所述将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡。

5、硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导培养 基中, 得第二愈伤组织, 包括: 将所述绿萝茎段外植体修剪后, 得茎段段样; 将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟; 将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中, 在温度25-28和湿 度50-65的条件下进行暗培养10天后, 给予1500-20001X的光照继续培养, 得初期绿萝 愈伤组织; 将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中, 在温度25-28和湿度50- 65的条件下进行培养7天后, 给予光照2001X继续加速培养, 得第二愈伤组织。 5.如权利要求4所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 。

6、所述愈伤组织诱 导培养基1号包括如下组分: 改良MS培养基1号、 TDZ、 萘乙酸、 D丁酯、 蔗糖、 椰子水和琼脂粉; 所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下组分: 改良MS培养基2号、 6-苄氨基腺嘌呤、 KT、 萘乙酸、 IBA、 水解酪蛋白、 琼脂粉和蔗糖。 6.如权利要求5所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述愈伤组织诱 导培养基1号按如下方法配置: 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.5mg/L的D丁 酯、 30mg/L的蔗糖、 100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉, 调节PH值至5.6-5.8, 即得; 。

7、所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置: 在改良MS培养基2号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的KT、 权 利 要 求 书 1/3 页 2 CN 107372112 A 2 0.2mg/L的萘乙酸、 0.1mg/L的IBA、 200-500g/L的水解酪蛋白、 7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗 糖, 调节PH值至5.6-5.8, 即得。 7.如权利要求1所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述将所述第二 愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养, 即得, 包括: 将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-2000。

8、1x、 光照时间12小 时/日、 温度25-28条件下进行培养40天, 获得第二代愈伤组织; 将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养, 即得。 8.如权利要求7所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述继代培养基 1号, 按如下方法进行配制: 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 1.0mg/L的ZT、 0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、 50mg/L的VC、 25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 9.如权利要求7所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述继代培养基 2号, 按如下方法进行配制: 在改良MS培养基。

9、3号中, 按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的吲哚丁 酸、 1000mg/L的AC、 30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 10.如权利要求1-9任一项所述促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 其特征在于, 所述 改良MS培养基1号按如下方法配置: 以MS培养基为基础, 还包括以下成分, 并调整含量为: 肌醇: 1-5mg/L; 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 盐酸吡哆醇: 0.5-2mg/L; 烟酸: 0.5-3mg/L; 精氨酸: 50mg/L; 天冬氨酸: 100mg/L; 谷氨酸: 150mg/L; 所述改良MS培养基2号按如下方法配置: 以MS培养基为。

10、基础, 还包括以下成分, 并调整含量为: 肌醇: 1-5mg/L; 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 盐酸吡哆醇: 0.5-2mg/L; 烟酸: 0.5-3mg/L; 精氨酸: 100mg/L; 天冬氨酸: 50mg/L; 谷氨酸: 200mg/L; 所述改良MS培养基3号按如下方法配置: 以MS培养基为基础, 将其中成分调整为: 肌醇: 1-5mg/L; 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 盐酸吡哆醇: 0.5-4mg/L; 权 利 要 求 书 2/3 页 3 CN 107372112 A 3 烟酸: 0.5-5mg/L。 权 利 要 求 书 3/3 页 4 CN 107372112 A 4 一种。

11、促进绿萝愈伤组织快速生长的方法 技术领域 0001 本发明涉及植物培养技术领域, 具体地说, 涉及一种促进绿萝愈伤组织快速生长 的方法。 背景技术 0002 绿萝(学名: Epipremnum aureum), 属于麒麟叶属植物, 大型常绿藤本, 生长于热带 地区, 常攀援生长在雨林的岩石和树干上, 其缠绕性强, 气根发达, 可以水培种植。 成熟枝上 叶柄粗壮, 长30-40厘米, 基部稍扩大, 上部关节长2.5-3厘米、 稍肥厚, 腹面具宽槽, 叶鞘长, 叶片薄革质, 翠绿色, 通常(特别是叶面)有多数不规则的纯黄色斑块, 全缘, 不等侧的卵形 或卵状长圆形, 先端短渐尖, 基部深心形, 稍。

12、粗, 两面略隆起。 0003 绿萝原产地在印度尼西亚所罗门群岛的热带雨林中, 性喜温暖、 潮湿环境, 要求土 壤疏松肥沃、 排水良好。 在热带地区常攀援生长于岩石和树干上, 成为巨大的观赏藤本植 物, 我国南方各地均有栽植。 绿萝耐阴性强, 终年常绿, 叶面有较厚的角质层, 能适应室内干 燥的环境条件, 是优良的室内观叶植物。 此外, 还能吸附和去除室内空气中的甲醛、 苯、 三氯 乙烯等污染物, 是天然的 “空气净化器” , 具有较大的市场前景。 0004 绿萝的繁殖目前是通过扦插进行繁殖, 由于绿萝生长环境高温高湿, 扦插繁殖的 后代极易感病菌, 生产中经常出现大规模茎腐、 根腐现象, 给绿。

13、萝的培育造成一定的经济损 失。 发明内容 0005 有鉴于此, 本发明要解决的技术问题在于克服绿萝的繁殖目前是通过扦插进行繁 殖, 由于绿萝生长环境高温高湿, 扦插繁殖的后代极易感病菌, 生产中经常出现大规模茎 腐、 根腐现象, 给绿萝的培育造成一定的经济损失的缺陷。 0006 为解决上述问题, 本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 包括以下 步骤: 0007 选取母株, 经预处理后取绿萝茎段外植体; 0008 将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导培养 基中, 得第二愈伤组织; 0009 将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养, 。

14、即得; 0010 所述继代培养基1号包括如下组分: 0011 改良MS培养基1号、 6-苄氨基腺嘌呤、 ZT、 吲哚-3-乙酸、 VC、 蔗糖和琼脂粉; 0012 所述继代培养基2号包括如下组分: 0013 改良MS培养基3号、 6-苄氨基腺嘌呤、 吲哚丁酸、 AC、 蔗糖和琼脂粉。 0014 优选地, 所述选取母株, 经预处理后取绿萝茎段外植体, 包括: 0015 选取母株运用多菌灵灌根; 0016 取所述母株生长点处茎段; 说 明 书 1/12 页 5 CN 107372112 A 5 0017 将所述茎段消毒, 得绿萝茎段外植体。 0018 优选地, 所述选取母株运用多菌灵灌根, 包括:。

15、 0019 选取母株使用80多菌灵1000倍溶液进行灌根30天, 每10天1次。 0020 优选地, 0021 所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2 号; 0022 所述将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导 培养基中, 得第二愈伤组织, 包括: 0023 将所述绿萝茎段外植体修剪后, 得茎段段样; 0024 将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟; 0025 将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中, 在温度25-28 和湿度50-65的条件下进行暗培养10天后, 给予1500-20001X的光。

16、照继续培养, 得初期 绿萝愈伤组织; 0026 将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中, 在温度25-28和湿度 50-65的条件下进行培养7天后, 给予光照2001X继续加速培养, 得第二愈伤组织。 0027 优选地, 所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下组分: 0028 改良MS培养基1号、 TDZ、 萘乙酸、 D丁酯、 蔗糖、 椰子水和琼脂粉; 0029 所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下组分: 0030 改良MS培养基2号、 6-苄氨基腺嘌呤、 KT、 萘乙酸、 IBA、 水解酪蛋白、 琼脂粉和蔗糖。 0031 优选地, 所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置: 0032 在改良。

17、MS培养基1号中, 按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.5mg/L 的D丁酯、 30mg/L的蔗糖、 100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉, 调节PH值至5.6-5.8, 即得; 0033 所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置: 0034 在改良MS培养基2号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的KT、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.1mg/L的IBA、 200-500g/L的水解酪蛋白、 7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗 糖, 调节PH值至5.6-5.8, 即得。 0035 优选地, 所述将所述第二愈伤组织转接至继代培养。

18、基1号和继代培养基2号中培 养, 即得, 包括: 0036 将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、 光照时间 12小时/日、 温度25-28条件下进行培养40天, 获得第二代愈伤组织; 0037 将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养, 即得。 0038 优选地, 所述继代培养基1号, 按如下方法进行配制: 0039 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 1.0mg/L的ZT、 0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、 50mg/L的VC、 25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0040 优选地, 所述继代培养。

19、基2号, 按如下方法进行配制: 0041 在改良MS培养基3号中, 按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的吲哚 丁酸、 1000mg/L的AC、 30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0042 优选地, 所述改良MS培养基1号按如下方法配置: 0043 以MS培养基为基础, 还包括以下成分, 并调整含量为: 说 明 书 2/12 页 6 CN 107372112 A 6 0044 肌醇: 1-5mg/L; 0045 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 0046 盐酸吡哆醇: 0.5-2mg/L; 0047 烟酸: 0.5-3mg/L; 0048 精氨酸: 50mg。

20、/L; 0049 天冬氨酸: 100mg/L; 0050 谷氨酸: 150mg/L; 0051 所述改良MS培养基2号按如下方法配置: 0052 以MS培养基为基础, 还包括以下成分, 并调整含量为: 0053 肌醇: 1-5mg/L; 0054 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 0055 盐酸吡哆醇: 0.5-2mg/L; 0056 烟酸: 0.5-3mg/L; 0057 精氨酸: 100mg/L; 0058 天冬氨酸: 50mg/L; 0059 谷氨酸: 200mg/L; 0060 所述改良MS培养基3号按如下方法配置: 0061 以MS培养基为基础, 将其中成分调整为: 0062 肌醇: 。

21、1-5mg/L; 0063 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 0064 盐酸吡哆醇: 0.5-4mg/L; 0065 烟酸: 0.5-5mg/L。 0066 本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 包括选: 取母株, 经预处理后 取绿萝茎段外植体; 将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组 织诱导培养基中, 得第二愈伤组织; 将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养 基2号中培养, 即得。 本发明利用特定的诱导绿萝愈伤组织的培养基及促进愈伤组织快速生 长的方法, 其特点在于通过特定培养基加速诱导出愈伤组织, 然后通过二次转接, 利用特定 培养基打破愈伤组织外。

22、部的黑色包围层, 使愈伤组织得以迅速生长的方法。 以绿萝茎段作 为外植体材料, 利用组织培养技术对绿萝进行快速繁殖, 可有效地大量繁殖绿萝后代, 具有 高产、 优质、 抗逆性强等优良性状, 为绿萝规模化生产提供一条有效途径。 具体实施方式 0067 为了更清楚地说明本发明的技术方案, 下面结合具体实施例对本发明的权利要求 做进一步的详细说明, 可以理解的是, 以下仅示出了本发明的某些实施例, 因此不应被看作 是对范围的限定, 任何人在本发明权利要求范围内所做的有限次的修改, 仍在本发明的权 利要求范围之内。 0068 为解决上述问题, 本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 包括以下 。

23、步骤: 0069 选取母株, 经预处理后取绿萝茎段外植体; 说 明 书 3/12 页 7 CN 107372112 A 7 0070 将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导培养 基中, 得第二愈伤组织; 0071 将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培养, 即得; 0072 所述继代培养基1号包括如下组分: 0073 改良MS培养基1号、 6-苄氨基腺嘌呤、 ZT、 吲哚-3-乙酸、 VC、 蔗糖和琼脂粉; 0074 所述继代培养基2号包括如下组分: 0075 改良MS培养基3号、 6-苄氨基腺嘌呤、 吲哚丁酸、 AC、 蔗糖和琼脂粉。 007。

24、6 绿萝(学名: Epipremnum aureum), 属于麒麟叶属植物, 大型常绿藤本, 生长于热带 地区, 常攀援生长在雨林的岩石和树干上, 其缠绕性强, 气根发达, 可以水培种植。 成熟枝上 叶柄粗壮, 长30-40厘米, 基部稍扩大, 上部关节长2.5-3厘米、 稍肥厚, 腹面具宽槽, 叶鞘长, 叶片薄革质, 翠绿色, 通常(特别是叶面)有多数不规则的纯黄色斑块, 全缘, 不等侧的卵形 或卵状长圆形, 先端短渐尖, 基部深心形, 稍粗, 两面略隆起。 0077 绿萝原产地在印度尼西亚所罗门群岛的热带雨林中, 性喜温暖、 潮湿环境, 要求土 壤疏松肥沃、 排水良好。 在热带地区常攀援生。

25、长于岩石和树干上, 成为巨大的观赏藤本植 物, 我国南方各地均有栽植。 绿萝耐阴性强, 终年常绿, 叶面有较厚的角质层, 能适应室内干 燥的环境条件, 是优良的室内观叶植物。 此外, 还能吸附和去除室内空气中的甲醛、 苯、 三氯 乙烯等污染物, 是天然的 “空气净化器” , 具有较大的市场前景。 0078 本发明提供一种促进绿萝愈伤组织快速生长的方法, 包括选: 取母株, 经预处理后 取绿萝茎段外植体; 将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组 织诱导培养基中, 得第二愈伤组织; 将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养 基2号中培养, 即得。 本发明利用特定的诱。

26、导绿萝愈伤组织的培养基及促进愈伤组织快速生 长的方法, 其特点在于通过特定培养基加速诱导出愈伤组织, 然后通过二次转接, 利用特定 培养基打破愈伤组织外部的黑色包围层, 使愈伤组织得以迅速生长的方法。 以绿萝茎段作 为外植体材料, 利用组织培养技术对绿萝进行快速繁殖, 可有效地大量繁殖绿萝后代, 具有 高产、 优质、 抗逆性强等优良性状, 为绿萝规模化生产提供一条有效途径。 0079 优选地, 所述选取母株, 经预处理后取绿萝茎段外植体, 包括: 0080 选取母株运用多菌灵灌根; 0081 取所述母株生长点处茎段; 0082 将所述茎段消毒, 得绿萝茎段外植体。 0083 优选地, 所述选取。

27、母株运用多菌灵灌根, 包括: 0084 选取母株使用80多菌灵1000倍溶液进行灌根30天, 每10天1次。 0085 上述, 为本发明中外植体选取和处理过程, 具体的, 包括选取形态正常、 生长旺盛 的健壮母株预处理(使用80多菌灵可湿性粉剂1000倍液灌根, 每10天一次), 20天后, 切取 茎生长点处58cm茎段(至少带有一个节, 去除叶及叶柄), 经表面除杂、 清洗后的外植体转 入超净工作台进行消毒处理, 得到无菌的绿萝茎段。 绿萝母株的切面在外植体采集后, 对切 面进行防护处理, 待恢复生长后可以重新取样。 绿萝母株的切面在外植体采集后, 对切面进 行防护处理, 待恢复生长后可以重。

28、新取样。 0086 上述, 多菌灵又名棉萎灵、 苯并咪唑44号。 多菌灵是一种广谱性杀菌剂, 对多种作 物由真菌(如半知菌、 多子囊菌)引起的病害有防治效果。 可用于叶面喷雾、 种子处理和土壤 说 明 书 4/12 页 8 CN 107372112 A 8 处理等。 0087 优选地, 0088 所述愈伤组织诱导培养基包括愈伤组织诱导培养基1号和愈伤组织诱导培养基2 号; 0089 所述将所述绿萝茎段外植体进行聚乙烯吡硌烷酮浸泡后, 并接种至愈伤组织诱导 培养基中, 得第二愈伤组织, 包括: 0090 将所述绿萝茎段外植体修剪后, 得茎段段样; 0091 将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷。

29、酮浸泡10-15分钟; 0092 将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中, 在温度25-28 和湿度50-65的条件下进行暗培养10天后, 给予1500-20001X的光照继续培养, 得初期 绿萝愈伤组织; 0093 将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中, 在温度25-28和湿度 50-65的条件下进行培养7天后, 给予光照2001X继续加速培养, 得第二愈伤组织。 0094 上述, 为本发明中愈伤组织诱导培养过程, 具体的, 包括将绿萝茎段修剪至长度为 23cm的茎段, 常规消毒后用聚乙烯吡硌烷酮(PVP)2g/L浸泡10-15分钟, 然后接种到愈伤 组织诱导培养基1。

30、号中, 在温度为2325, 湿度为5065的条件下进行暗培养, 暗培养 10天后给予150020001x光照继续培养, 20天后得到初期绿萝愈伤组织; 将得到的初期绿 萝愈伤组织转接入愈伤组织诱导培养基2号中, 在温度为2528, 湿度为5065的条件 下暗培养一周后给予光照条件20001x, 继续培养, 加速愈伤组织的形成。 0095 优选地, 所述愈伤组织诱导培养基1号包括如下组分: 0096 改良MS培养基1号、 TDZ、 萘乙酸、 D丁酯、 蔗糖、 椰子水和琼脂粉; 0097 所述愈伤组织诱导培养基2号包括如下组分: 0098 改良MS培养基2号、 6-苄氨基腺嘌呤、 KT、 萘乙酸、。

31、 IBA、 水解酪蛋白、 琼脂粉和蔗糖。 0099 优选地, 所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置: 0100 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.5mg/L 的D丁酯、 30mg/L的蔗糖、 100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉, 调节PH值至5.6-5.8, 即得; 0101 所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置: 0102 在改良MS培养基2号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的KT、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.1mg/L的IBA、 200-500g/L的水解酪蛋白、 7g/L的琼。

32、脂粉和30g/L的蔗 糖, 调节PH值至5.6-5.8, 即得。 0103 优选地, 所述将所述第二愈伤组织转接至继代培养基1号和继代培养基2号中培 养, 即得, 包括: 0104 将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、 光照时间 12小时/日、 温度25-28条件下进行培养40天, 获得第二代愈伤组织; 0105 将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养, 即得。 0106 优选地, 所述继代培养基1号, 按如下方法进行配制: 0107 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 1.0mg/L的ZT、 0.3mg/。

33、L的吲哚-3-乙酸、 50mg/L的VC、 25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0108 优选地, 所述继代培养基2号, 按如下方法进行配制: 说 明 书 5/12 页 9 CN 107372112 A 9 0109 在改良MS培养基3号中, 按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的吲哚 丁酸、 1000mg/L的AC、 30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0110 上述, 为本发明中对绿萝外植体的愈伤组织的继代培养过程, 具体的, 包括将愈伤 组织在超净工作台上及无菌条件下, 转接到继代培养基1号中, 然后将其置于LED灯作为光 源的环境下, 在光。

34、照强度为150020001x, 每日光照时间为12小时, 温度为2528, 湿度 为5065的条件下, 进行愈伤组织的继代培养, 经过40天, 获得第二代愈伤组织, 此后继 代使用继代培养基2号, 并且可以根据褐化情况逐步减少使用AC, 甚至不使用。 0111 优选地, 所述改良MS培养基1号按如下方法配置: 0112 以MS培养基为基础, 还包括以下成分, 并调整含量为: 0113 肌醇: 1-5mg/L; 0114 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 0115 盐酸吡哆醇: 0.5-2mg/L; 0116 烟酸: 0.5-3mg/L; 0117 精氨酸: 50mg/L; 0118 天冬氨酸: 。

35、100mg/L; 0119 谷氨酸: 150mg/L; 0120 所述改良MS培养基2号按如下方法配置: 0121 以MS培养基为基础, 还包括以下成分, 并调整含量为: 0122 肌醇: 1-5mg/L; 0123 盐酸硫胺素: 3-6mg/L; 0124 盐酸吡哆醇: 0.5-2mg/L; 0125 烟酸: 0.5-3mg/L; 0126 精氨酸: 100mg/L; 0127 天冬氨酸: 50mg/L; 0128 谷氨酸: 200mg/L; 0129 所述改良MS培养基3号按如下方法配置: 0130 以MS培养基为基础, 将其中成分调整为: 0131 肌醇: 1-5mg/L; 0132 盐。

36、酸硫胺素: 3-6mg/L; 0133 盐酸吡哆醇: 0.5-4mg/L; 0134 烟酸: 0.5-5mg/L。 0135 上述, 需要理解的是, MS培养基是Murashige和Skoog于1962年为烟草细胞培养设 计的, 其特点是无机盐和离子浓度较高, 是较稳定的离子平衡溶液, 它的硝酸盐含量高, 其 养分的数量和比例合适, 能满足植物细胞的营养和生理需要, 因而适用范围比较广, 多数植 物组织培养快速繁殖用它作为培养基的基本培养基。 基于此, 这种培养基就用他们的名字 来命名。 其配方如表所示。 0136 表1MS培养基配方表 说 明 书 6/12 页 10 CN 107372112。

37、 A 10 0137 0138 实施例1: 0139 按如下方法及培养溶液对绿萝外植体进行培养: 0140 步骤1, 选取母株使用80多菌灵1000倍溶液进行灌根30天, 每10天1次; 0141 步骤2, 取所述母株生长点处茎段; 0142 步骤3, 将所述茎段消毒, 得绿萝茎段外植体; 0143 步骤4, 将所述绿萝茎段外植体修剪后, 得茎段段样; 0144 步骤5, 将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟; 0145 步骤6, 将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中, 在温度25 -28和湿度50-65的条件下进行暗培养10天后, 给予1500-200。

38、01X的光照继续培养, 得初期绿萝愈伤组织; 0146 步骤7, 将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中, 在温度25-28和湿 度50-65的条件下进行培养7天后, 给予光照2001X继续加速培养, 得第二愈伤组织。 0147 步骤8, 将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、 光 照时间12小时/日、 温度25-28条件下进行培养40天, 获得第二代愈伤组织; 0148 步骤9, 将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养, 即得。 0149 培养药液配置: 0150 1、 所述改良MS培养基1号按如下方法配置: 0151 以MS培养基为基础。

39、, 调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4, 微量元素 为所述MS培养基原有含量的1/2; 0152 还包括以下成分, 并调整含量为: 0153 肌醇: 1mg/L; 0154 盐酸硫胺素: 3mg/L; 说 明 书 7/12 页 11 CN 107372112 A 11 0155 盐酸吡哆醇: 0.5mg/L; 0156 烟酸: 0.5mg/L; 0157 精氨酸: 50mg/L; 0158 天冬氨酸: 100mg/L; 0159 谷氨酸: 150mg/L; 0160 2、 所述改良MS培养基2号按如下方法配置: 0161 以MS培养基为基础, 调整其中大量元素为所述MS培养基原有。

40、含量的1/4, 微量元素 为所述MS培养基原有含量的1/2; 0162 还包括以下成分, 并调整含量为: 0163 肌醇: 1mg/L; 0164 盐酸硫胺素: 3mg/L; 0165 盐酸吡哆醇: 0.5mg/L; 0166 烟酸: 0.5mg/L; 0167 精氨酸: 100mg/L; 0168 天冬氨酸: 50mg/L; 0169 谷氨酸: 200mg/L; 0170 3、 所述改良MS培养基3号按如下方法配置: 0171 以MS培养基为基础, 将其中成分调整为: 0172 肌醇: 1mg/L; 0173 盐酸硫胺素: 3mg/L; 0174 盐酸吡哆醇: 0.5mg/L; 0175 烟。

41、酸: 0.5mg/L。 0176 4、 所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置: 0177 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.5mg/L 的D丁酯、 30mg/L的蔗糖、 100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉, 调节PH值至5.6-5.8, 即得; 0178 5、 所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置: 0179 在改良MS培养基2号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的KT、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.1mg/L的IBA、 200-500g/L的水解酪蛋白、 7g/L的琼脂粉和30g/L。

42、的蔗 糖, 调节PH值至5.6-5.8, 即得。 0180 6、 所述继代培养基1号, 按如下方法进行配制: 0181 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 1.0mg/L的ZT、 0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、 50mg/L的VC、 25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0182 7、 所述继代培养基2号, 按如下方法进行配制: 0183 在改良MS培养基3号中, 按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的吲哚 丁酸、 1000mg/L的AC、 30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0184 实施例2: 0185 按。

43、如下方法及培养溶液对绿萝外植体进行培养: 0186 步骤1, 选取母株使用80多菌灵1000倍溶液进行灌根30天, 每10天1次; 0187 步骤2, 取所述母株生长点处茎段; 说 明 书 8/12 页 12 CN 107372112 A 12 0188 步骤3, 将所述茎段消毒, 得绿萝茎段外植体; 0189 步骤4, 将所述绿萝茎段外植体修剪后, 得茎段段样; 0190 步骤5, 将所述茎段段样用2g/L的聚乙烯吡硌烷酮浸泡10-15分钟; 0191 步骤6, 将药物浸泡的所述茎段段样接种至愈伤组织诱导培养基1号中, 在温度25 -28和湿度50-65的条件下进行暗培养10天后, 给予15。

44、00-20001X的光照继续培养, 得初期绿萝愈伤组织; 0192 步骤7, 将所述初期绿萝愈伤组织转接入诱导培养基2号中, 在温度25-28和湿 度50-65的条件下进行培养7天后, 给予光照2001X继续加速培养, 得第二愈伤组织。 0193 步骤8, 将所述第二愈伤组织转接至亟待培养基1号中在光照强度1500-20001x、 光 照时间12小时/日、 温度25-28条件下进行培养40天, 获得第二代愈伤组织; 0194 步骤9, 将所述第二代愈伤组织使用继代培养基2号进行继代培养, 即得。 0195 培养药液配置: 0196 1、 所述改良MS培养基1号按如下方法配置: 0197 以MS。

45、培养基为基础, 调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4, 微量元素 为所述MS培养基原有含量的1/2; 0198 还包括以下成分, 并调整含量为: 0199 肌醇: 3mg/L; 0200 盐酸硫胺素: 4mg/L; 0201 盐酸吡哆醇: 1mg/L; 0202 烟酸: 2mg/L; 0203 精氨酸: 50mg/L; 0204 天冬氨酸: 100mg/L; 0205 谷氨酸: 150mg/L; 0206 2、 所述改良MS培养基2号按如下方法配置: 0207 以MS培养基为基础, 调整其中大量元素为所述MS培养基原有含量的1/4, 微量元素 为所述MS培养基原有含量的1/2; 0。

46、208 还包括以下成分, 并调整含量为: 0209 肌醇: 3mg/L; 0210 盐酸硫胺素: 4mg/L; 0211 盐酸吡哆醇: 1mg/L; 0212 烟酸: 2mg/L; 0213 精氨酸: 100mg/L; 0214 天冬氨酸: 50mg/L; 0215 谷氨酸: 200mg/L; 0216 3、 所述改良MS培养基3号按如下方法配置: 0217 以MS培养基为基础, 将其中成分调整为: 0218 肌醇: 3mg/L; 0219 盐酸硫胺素: 4mg/L; 0220 盐酸吡哆醇: 3mg/L; 说 明 书 9/12 页 13 CN 107372112 A 13 0221 烟酸: 3。

47、mg/L。 0222 4、 所述愈伤组织诱导培养基1号按如下方法配置: 0223 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入0.5mg/L的TDZ、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.5mg/L 的D丁酯、 30mg/L的蔗糖、 100mL/L的椰子水和7g/L的琼脂粉, 调节PH值至5.6-5.8, 即得; 0224 5、 所述愈伤组织诱导培养基2号按如下方法配置: 0225 在改良MS培养基2号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的KT、 0.2mg/L的萘乙酸、 0.1mg/L的IBA、 200-500g/L的水解酪蛋白、 7g/L的琼脂粉和30g/L的蔗 糖, 。

48、调节PH值至5.6-5.8, 即得。 0226 6、 所述继代培养基1号, 按如下方法进行配制: 0227 在改良MS培养基1号中, 按照浓度加入2.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 1.0mg/L的ZT、 0.3mg/L的吲哚-3-乙酸、 50mg/L的VC、 25g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0228 7、 所述继代培养基2号, 按如下方法进行配制: 0229 在改良MS培养基3号中, 按照浓度加入3.0mg/L的6-苄氨基腺嘌呤、 0.1mg/L的吲哚 丁酸、 1000mg/L的AC、 30g/L的蔗糖和7g/L的琼脂粉, 即得。 0230 实施例3: 0231 按如下方法及培养溶液对绿萝外植体进行培养: 0232 步骤1, 选取母株使用80多菌灵1000倍溶液进行灌根30天, 每10天1次; 。

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