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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201610744590.8 (22)申请日 2016.08.26 (71)申请人 新疆赛湖渔业科技开发有限公司 地址 833500 新疆维吾尔自治区博尔塔拉 蒙古自治州温泉县孟克特南街9号 申请人 新疆农业大学 (72)发明人 李胜忠 马壮 王清 程先友 张治平 侯玉军 (74)专利代理机构 北京细软智谷知识产权代理 有限责任公司 11471 代理人 王金宝 (51)Int.Cl. A01K 61/10(2017.01) (54)发明名称 一种凹目白鲑精子复方激活液及其配制方 。
2、法 (57)摘要 本发明提供了一种凹目白鲑精子复方激活 液， 所述精子复方激活液由葡萄糖和氯化钠组 成， 其中氯化钠对凹目白鲑鱼苗孵化过程中水霉 病的发生有一定抑制作用， 葡萄糖对凹目白鲑精 子的激活效果较好， 本发明通过科学配比， 在降 低糖类物质的使用量同时， 又增加了盐类物质的 使用量， 起到了既利用了糖类物质良好的激活作 用， 又利用了盐类物质良好的抑制水霉病发生作 用， 优点互补。 实验发现， 不使用精子复方激活液 激活的精液， 其精子快速运动激活比例为80， 精子快速运动时间持续20s左右； 使用精子复方 激活液激活的精液， 其精子快速运动激活比例为 95以上， 精子快速运动时间持。
3、续55.2s左右， 所 述精子复方激活液能够明显提高凹目白鲑精子 活力。 权利要求书1页 说明书4页 CN 106359183 A 2017.02.01 CN 106359183 A 1.一种凹目白鲑精子复方激活液， 其特征在于， 包括的组分及组分浓度为： 葡萄糖85- 163.5mmol/L， 氯化钠40-55mmol/L， 所述精子复方激活液的温度为5-8。 2.根据权利要求1所述的精子复方激活液， 其特征在于， 包括的组分及组分浓度为： 葡 萄糖85-163.5mmol/L， 氯化钠40-48mmol/L。 3.根据权利要求2所述的精子复方激活液， 其特征在于， 包括的组分及组分浓度为：。
4、 葡 萄糖85-146.8mmol/L， 氯化钠40-48mmol/L。 4.根据权利要求3所述的精子复方激活液， 其特征在于， 包括的组分及组分浓度为： 葡 萄糖114mmol/L， 氯化钠55mmol/L。 5.一种权利要求1-4任一所述精子复方激活液的配制方法， 其特征在于， 包括以下步 骤： A、 按照所述组分浓度， 称取葡萄糖和氯化钠； B、 将称取好的葡萄糖和氯化钠置于容器中， 加水至组分浓度， 即得到常温精子复方激 活液； C、 在使用前， 将溶液降温至5-8， 即得所述精子复方激活液。 6.根据权利要求5所述的配制方法， 其特征在于， 步骤A中， 使用电子天平称取分析纯葡 萄糖。
5、和分析纯氯化钠。 7.根据权利要求5所述的配制方法， 其特征在于， 步骤B中， 使用一部分水将所述葡萄糖 和氯化钠在烧杯中溶解， 并将溶解液转移至容量瓶中， 再使用水洗涤烧杯二至三次， 并将洗 涤液转移至容量瓶中， 定容后摇晃均匀， 即得到常温精子复方激活液。 8.根据权利要求5所述的配制方法， 其特征在于， 步骤B中， 所述水为去离子水或蒸馏 水。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106359183 A 2 一种凹目白鲑精子复方激活液及其配制方法 技术领域 0001 本发明属于精子激活液技术领域， 具体涉及一种凹目白鲑精子复方激活液及其配 制方法。 背景技术 0002 凹目白鲑(C。
6、oregonus autumnalis)原产于俄罗斯， 属鲑形目， 鲑科， 白鲑属。 为著 名的冷水性经济鱼类， 其肉质细腻， 无肌间刺， 味道鲜美， 营养丰富， 深受广大消费者喜爱， 我国新疆赛里木湖于1998年首次从俄罗斯引进凹目白鲑发眼卵进行人工养殖。 随着我国经 济的不断发展， 冷水鱼消费市场的不断扩大， 凹目白鲑等冷水性高端水产品的养殖需求不 断扩大。 0003 但由于凹目白鲑洄游产卵特性、 繁殖条件苛刻等原因， 我国的凹目白鲑苗种产量 一直处于供不应求的状态， 阻碍了凹目白鲑的养殖推广。 在我国凹目白鲑人工繁殖过程中 发现， 凹目白鲑雄鱼普遍存在精液量少， 受精率较低的问题， 直接。
7、影响了人工孵化出苗率， 从而导致凹目白鲑苗种生产效率的低下。 0004 在凹目白鲑受精过程中， 当精液从雄鱼性腺排入水中时， 精子便激活解除抑制状 态从而获得运动能力， 并游向卵与之结合完成受精； 在正常水体中大部分淡水鱼类精子激 活后运动时间为40-60s左右， 而凹目白鲑精子在赛里木湖湖水中的运动时间仅为24s左右， 直接影响了人工孵化出苗率， 从而导致凹目白鲑苗种生产效率的低下。 发明内容 0005 为了解决现有技术存在的上述问题， 本发明提供了一种凹目白鲑精子复方激活液 及其配制方法。 所述精子复方激活液由葡萄糖、 氯化钠组成， 在降低糖类物质的使用量同 时， 又增加了盐类物质的使用量。
8、， 起到了既利用了糖类物质良好的激活作用， 又利用了盐类 物质良好的抑制水霉病发生作用， 优点互补。 0006 申请人发现， 凹目白鲑的精子运动能量供给主要来自于精细胞内线粒体的呼吸作 用提供， 但其大部分能量主要用于精子对外界渗透压的调节， 仅少量用于精子鞭毛运动当 中。 因此， 如何减少精子在渗透压调节的消耗， 让更多的能量能为精子的鞭毛运动所用， 从 而延长凹目白鲑精子的运动时间， 使精子与卵结合的机会更高， 从而提高受精率。 对于这一 问题， 解决的方法是使用具有一定渗透压的溶液代替原水体对凹目白鲑精子进行激活， 从 而减少精子内外渗透压差异所带来的调节损耗， 延长精子的运动时间， 提。
9、升其受精率。 0007 在凹目白鲑人工繁殖时， 使用盐类和糖类单方激活液是各有利弊的， 使用葡萄糖 和果糖等糖类单方激活液时， 凹目白鲑精子的激活效果好， 但会导致鱼苗孵化过程中水霉 病的发生； 使用NaCl等盐类单方激活液时， 对凹目白鲑精子的激活效果稍差， 但对鱼苗孵化 过程中水霉病的发生有一定抑制作用。 因此， 有必要研制和发明凹目白鲑盐类和糖类结合 的复方激活液， 起到盐类和糖类物质优点互补的作用。 0008 本发明所采用的技术方案为： 一种凹目白鲑精子复方激活液， 包括的组分及组分 说 明 书 1/4 页 3 CN 106359183 A 3 浓度为： 葡萄糖85-163.5mmol。
10、/L， 氯化钠40-55mmol/L， 所述精子复方激活液的温度为5-8 。 0009 优选地， 所述精子复方激活液包括的组分及组分浓度为： 葡萄糖85-163.5mmol/L， 氯化钠40-48mmol/L。 0010 优选地， 所述精子复方激活液包括的组分及组分浓度为： 葡萄糖85-146.8mmol/L， 氯化钠40-48mmol/L。 0011 进一步地， 所述精子复方激活液包括的组分及组分浓度为： 葡萄糖114mmol/L， 氯 化钠55mmol/L。 0012 本发明还提供了一种所述精子复方激活液的配制方法， 包括以下步骤： 0013 A、 按照所述组分浓度， 称取葡萄糖和氯化钠；。
11、 0014 B、 将称取好的葡萄糖和氯化钠置于容器中， 加水至组分浓度， 即得到常温精子复 方激活液； 0015 C、 在使用前， 将溶液降温至5-8， 即得所述精子复方激活液。 0016 步骤A中， 使用电子天平称取分析纯葡萄糖和分析纯氯化钠。 0017 步骤B中， 使用一部分水将所述葡萄糖和氯化钠在烧杯中溶解， 并将溶解液转移至 容量瓶中， 再使用水洗涤烧杯二至三次， 并将洗涤液转移至容量瓶中， 定容后摇晃均匀， 即 得到常温精子复方激活液； 所述水为去离子水或蒸馏水。 0018 本发明的有益效果为： 0019 1、 本发明提供了一种凹目白鲑精子复方激活液， 所述精子复方激活液由葡萄糖、 。
12、氯化钠组成， 其中氯化钠对凹目白鲑鱼苗孵化过程中水霉病的发生有一定抑制作用， 葡萄 糖对凹目白鲑精子的激活效果较好， 本发明通过科学配比， 在降低糖类物质的使用量同时， 又增加了盐类物质的使用量， 起到了既利用了糖类物质良好的激活作用， 又利用了盐类物 质良好的抑制水霉病发生作用， 优点互补。 实验发现， 不使用精子复方激活液激活的精液， 其精子快速运动激活比例为80， 精子快速运动时间持续20s左右； 使用精子复方激活液激 活的精液， 其精子快速运动激活比例为95以上， 精子快速运动时间持续55.2s左右， 所述 精子复方激活液能够明显提高凹目白鲑精子活力。 0020 2、 本发明还提供了一。
13、种所述精子复方激活液的配制方法， 所述配制方法操作简 单， 易于推广。 具体实施方式 0021 下面结合实施例， 更具体地说明本发明的内容。 应当理解， 本发明的实施并不局限 于下面的实施例， 对本发明所做的任何形式上的变通和/或改变都将落入本发明保护范围。 0022 在本发明中， 若非特指， 所有的份、 百分比均为重量单位， 所有的设备和原料等均 可从市场购得或是本行业常用的。 下述实施例中的方法， 如无特别说明， 均为本领域的常规 方法。 0023 实施例1 0024 本实施例为凹目白鲑精子复方激活液不同配比用量和配制方法的实施例。 0025 一种凹目白鲑精子复方激活液， 包括的组分及组分。
14、浓度如表1所示： 0026 表1： 精子复方激活液不同配比用量表 说 明 书 2/4 页 4 CN 106359183 A 4 0027 0028 上述精子复方激活液的配制方法， 包括以下步骤： 0029 A、 按照所述组分浓度及最终精子复方激活液的体积， 计算出葡萄糖和氯化钠的用 量， 并使用电子天平称取分析纯葡萄糖和分析纯氯化钠； 0030 B、 使用一部分水将所述葡萄糖和氯化钠在烧杯中溶解， 并将溶解液转移至容量瓶 中， 再使用水洗涤烧杯二至三次， 并将洗涤液转移至容量瓶中， 定容后摇晃均匀， 即得到常 温精子复方激活液； 所述水为去离子水或蒸馏水； 0031 C、 在使用前， 将溶液降。
15、温至5-8， 即得所述精子复方激活液。 0032 实施例2 0033 本实施例是实施例1中精子复方激活液的精子激活实验。 0034 一、 亲鱼选择 0035 试验共选用雄鱼10条， 平均体重为532g。 所选亲鱼体质健壮， 体外无伤， 性腺发育 成熟， 轻压腹部精液可自动流出。 0036 二、 精液采集 0037 使用亲鱼夹或两人各抓住亲鱼头尾， 保定亲鱼后， 一人先用毛巾轻轻抹去亲鱼生 殖孔周围的体表水分， 然后沿鱼腹两侧轻微压迫， 使精液流入量杯中。 0038 三、 精子活力观察及检测方法 0039 观察时， 先于载玻片上加一滴试剂(湖水或所述精子复方激活液)， 用洁净牙签尖 端挑取少许精。
16、液与其混合， 即刻移至1040倍显微镜下， 依次完成同一条鱼精液在湖水与 所述精子复方激活液中的快速运动观测。 观察以一个视野为准。 当精液与试剂相混时， 立即 用秒表开始计时。 当有70以上的精子从快速运动转为中速运动时， 立即掐表， 即得快速运 动时间。 本实施例中， 选用实施例1中序号为1、 3和5的精子复方激活液， 与湖水进行对比。 0040 四、 实验结果 0041 本实施例， 对每条亲鱼的精液分别使用河流水和实施例1中3种精子复方激活液处 理， 结果如表2所示： 0042 表2实验结果对比表 说 明 书 3/4 页 5 CN 106359183 A 5 0043 实验组别试验次数/。
17、次快速运动时间/s 湖水组1020.72.9 序号1组1051.14.9 序号3组1055.26.7 序号4组1059.35.4 0044 使用湖水激活的精液， 其精子快速运动激活比例为80； 使用所述精子复方激活 液激活的精液， 其精子快速运动激活比例为95以上。 0045 实验结果表明， 使用所述精子复方激活液激活后的凹目白鲑精子可获得较高的精 子快速运动时间， 能够有效提高凹目白鲑精子的活力， 这对提高受精率至关重要。 0046 最后所应说明的是， 以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制， 尽管参 照较佳实施例对本发明进行了详细说明， 所应理解的是， 以上所述仅为本发明的具体实施 方式而已， 并不用于限定本发明的保护范围， 凡在本发明的精神和原则之内， 所做的任何修 改、 等同替换、 改进等， 均应包含在本发明的保护范围之内。 说 明 书 4/4 页 6 CN 106359183 A 6 。