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1、(19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201611262535.1 (22)申请日 2016.12.30 (71)申请人 广西壮族自治区药用植物园 地址 530023 广西壮族自治区南宁市长岗 路189号 (72)发明人 李刚 唐美琼 王晓峰 李竞才 李小勇 周琼 闫志刚 覃芳 (74)专利代理机构 北京远大卓悦知识产权代理 事务所(普通合伙) 11369 代理人 靳浩 (51)Int.Cl. A01H 4/00(2006.01) (54)发明名称 罗汉果高效脱毒的组织培养方法 (57)摘要 本发明公开了一种罗汉果高。
2、效脱毒的组织 培养方法， 包括： 将外植体进行消毒得到无菌外 植体； 将所得无菌外植体接种至MS诱导培养基中 进行诱导培养得到无菌试管苗； 将所得无菌试管 苗于MS预培养基中进行预培养得到预培养试管 苗； 将所得的预培养试管苗接种至MS脱毒培养基 中进行脱毒培养得到试管丛生芽； 选取健壮的试 管丛生芽接种至1/2MS生根培养基中进行生根培 养得到带根植株， 最后将所得的带根植株进行练 苗和移栽； 其中， 所述MS诱导培养基至少包含 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮， 所述MS预培养基至少 包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮和0.1-0.6mg/L的 硝酸银。 本发明方法得到的罗汉果丛生芽增殖。
3、系 数达到20-30倍， 丛生芽健壮， 接种到生根培养基 后容易生根， 生根率可达95， 成活率95。 权利要求书1页 说明书5页 CN 106718922 A 2017.05.31 CN 106718922 A 1.一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 包括： 将外植体进行消毒得到无菌外植体； 将所得无菌外植体接种至MS诱导培养基中进行诱 导培养得到无菌试管苗； 将所得无菌试管苗于MS预培养基中进行预培养得到预培养试管 苗； 将所得的预培养试管苗接种至MS脱毒培养基中进行脱毒培养得到试管丛生芽； 选取健 壮的试管丛生芽接种至1/2MS生根培养基中进行生根培养得到带根植株， 最后将。
4、所得的带 根植株进行练苗和移栽； 其中， 所述MS诱导培养基至少包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮， 所述MS预培养基至少包含 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮和0.1-0.6mg/L的硝酸银。 2.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 选取带病毒的罗 汉果植株新萌发的嫩芽作为外植体， 然后将所得的外植体剥去叶后， 依次用体积分数为1- 3的洗洁精水溶液浸泡5-6min、 自来水冲洗15-20min、 添加了2-3滴吐温-20的100毫升体 积分数为0.1-0.2的升汞消毒8-10min、 无菌水冲洗3-5次， 最后用消毒滤纸除去表面水 分， 得到所述无菌外植体。 。
5、3.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 在接种至MS诱导 培养基之前， 先将无菌外植体切成带有一个腋芽的茎段。 4.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述MS诱导培养 基包含： 0.3mg/L的6-BA、 0.1mg/L的IAA、 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、 30g/L蔗糖和5g/L的琼 脂， pH值为5.5-6。 5.如权利要求4所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述诱导培养的 培养条件为： 温度23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小时/天， 培养时间为30天。 6.如权利要求1所述的罗。
6、汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述MS预培养基 包含： 0.5mg/L的6-BA、 0.2mg/L的IBA、 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、 0.1-0.6mg/L的硝酸银、 30g/L蔗糖， pH值为5.5-6， 预培养的时间为9-11天。 7.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述脱毒培养步 骤中， 从所述预培养试管苗剥取0.2-0.3mm的茎尖分生组织， 将所得的茎尖分生组织接种所 述脱毒培养基中， 温度为23-27的条件下黑暗培养20天， 得到所述试管丛生芽。 8.如权利要求7所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述脱毒培。
7、养基 包含： 0.2-1.0mg/L的TDZ、 0.1-0.5mg/L的ZT、 0.1-1.0mg/L的IBA、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， pH值为5.5-6。 9.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述生根培养基 包含： 0.2-1.0mg/L的NAA、 1.5g/L的AC、 10/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8； 所述生根培养的条件为： 温度为23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小时/天， 培养时间为20天。 10.如权利要求1所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 其特征在于， 所述练苗和移 栽具体包括： 将所得。
8、的带根植株使用自来水培养一周， 待表面角质形成后， 将幼苗取出， 洗 净根部， 再使用完全培养液培养一个月后移栽到大田即得到罗汉果幼株。 权 利 要 求 书 1/1 页 2 CN 106718922 A 2 罗汉果高效脱毒的组织培养方法 技术领域 0001 本发明涉及罗汉果植物繁殖领域， 特别是一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法。 技术背景 0002 罗汉果(Siraitiagrosvenorii)是我国传统出口创汇商品之一， 味甘性凉， 有润肺 止咳、 生津止渴的功效、 适用于肺热或肺燥咳嗽、 百日咳及暑热伤津口渴等， 此外还有润肠 通便的功效。 是国家首批批准的药食两用材料之一， 在广西民间。
9、以有300多年的药用历史， 被誉为 “东方神果” 。 0003 长期以来， 罗汉果在种植过程中主要采用压蔓方式进行繁殖， 以致品种退化、 病虫 危害严重等问题， 尤其是病毒病， 严重地块其发病率高达100， 造成巨大泾济损失。 近年 来， 罗汉果生产中主要采用组培苗繁殖， 但实践表明， 市场上销售的组培苗因为大多具有潜 伏病毒病， 以致大田种植中病毒病暴发， 严重影响产量和品质(林纬等,广西罗汉果病毒病 发生情况调查.植物保护,2003.29(4):27-30； 唐学军与孙桂春,罗汉果病毒病综合治理.广 西农学报,2006.21(5):43-44； 梁惠凌,蒋水元与李虹,罗汉果组培苗病毒病流行。
10、因子的调 查.特产研究,2008.30(2):50-52)。 申请号为201510290985.0的发明专利公开了一种罗汉 果组培苗繁育方法， 其选取的是健康的罗汉果植株作为繁殖素材， 并不是专门针对含有带 有病毒的罗汉果植株， 其公开的处理方法中只是对繁殖素材进行简单地杀菌处理， 虽取得 一定效果， 但尚需改善提高， 并且其利用的培养基成分比较普通， 无法在培养中进一步杀 毒， 真正杜绝病毒病的爆发。 0004 因此， 设计一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法成为一个亟需解决的问题。 发明内容 0005 本发明的一个目的是解决至少上述问题或缺陷， 并提供至少后面将说明的优点。 0006 为了实现。
11、根据本发明的这些目的和其它优点， 提供了一种罗汉果高效脱毒的组织 培养方法， 其中包括： 0007 将外植体进行消毒得到无菌外植体； 将所得无菌外植体接种至MS诱导培养基中进 行诱导培养得到无菌试管苗； 将所得无菌试管苗于MS预培养基中进行预培养得到预培养试 管苗； 将所得的预培养试管苗接种至MS脱毒培养基中进行脱毒培养得到试管丛生芽； 选取 健壮的试管丛生芽接种至1/2MS生根培养基中进行生根培养得到带根植株， 最后将所得的 带根植株进行练苗和移栽得到罗汉果幼株； 0008 其中， 所述MS诱导培养基至少包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮， 所述MS预培养基至少 包含0.5-1.0mg/L。
12、的金刚烷酮和0.1-0.6mg/L的硝酸银。 0009 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 选取带病毒的罗汉果植株 新萌发的嫩芽作为外植体， 然后将所得的外植体剥去叶后， 依次用体积分数为1-3的洗洁 精水溶液浸泡5min、 自来水冲洗15-20min、 添加了2-3滴吐温-20的100毫升体积分数为0.1- 0.2的升汞消毒8-10min、 无菌水冲洗3-5次， 最后用消毒滤纸除去表面水分， 得到所述无 说 明 书 1/5 页 3 CN 106718922 A 3 菌外植体。 0010 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 在接种至MS诱导培养基之 前， 先将无。
13、菌外植体切成带有一个腋芽的茎段。 0011 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述MS诱导培养基包含： 0.3mg/L的6-BA、 0.1mg/L的IAA、 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， pH值为 5.5-6。 0012 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述诱导培养的培养条件 为： 温度23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小时/天， 培养时间为30天。 0013 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述MS预培养基包含： 0.5mg/L的6-BA、 0.2mg/L的IBA、 0.。
14、5-1.0mg/L的金刚烷酮、 0.1-0.6mg/L的硝酸银、 30g/L蔗 糖， pH值为5.5-6， 预培养的时间为9-11天。 0014 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述脱毒培养步骤中， 从所 述预培养试管苗剥取0.2-0.3mm的茎尖分生组织， 将所得的茎尖分生组织接种所述脱毒培 养基中， 温度为23-27的条件下黑暗培养20天， 得到所述试管丛生芽。 0015 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述脱毒培养基包含： 0.2- 1.0mg/L的TDZ、 0.1-0.5mg/L的ZT、 0.1-1.0mg/L的IBA、 30g/L蔗糖和5g/L。
15、的琼脂， pH值为 5.5-6。 0016 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述生根培养基包含： 0.2- 1.0mg/L的NAA、 1.5g/L的AC、 10/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8； 0017 所述生根培养的条件为： 温度为23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小 时/天， 培养时间为20天。 0018 优选的是， 所述的罗汉果高效脱毒的组织培养方法中， 所述练苗和移栽具体包括： 将所得的带根植株使用自来水培养一周， 待表面角质形成后， 将幼苗取出， 洗净根部， 再使 用完全培养液培养一个月后移栽到大田即得到罗汉果幼株。 完。
16、全培养液为常规使用的植物 培养液， 在市场上可以购得， 或是自行配制， 只要能将幼苗培养成幼株即可。 0019 本发明具有以下有益效果： 首先本发明用生物技术对罗汉果进行组织培养脱毒繁 殖， 通过罗汉果芽原基脱毒的培养， 在短时间内可培育出大量适合栽培种植的罗汉果幼苗， 保障罗汉果种苗的增殖系数和种苗质量， 实现规模化生产， 满足生产上的需要。 0020 其次， 采用本发明所述的培养方法得到的罗汉果丛生芽增殖系数达到20-30倍， 丛 生芽健壮， 接种到生根培养基后容易生根， 生根率可达95以上， 成活率95。 。 0021 再次， 本发明针对的是带有病毒的罗汉果植株， 对其进行杀菌后， 利用。
17、特别地培养 基进行诱导培养和预培养， 得到真正无毒的试管苗， 然后在利用这样无毒的试管苗进行培 养得到丛生芽， 再培养得到带根植株， 最后进行练苗和移栽得到真正无毒的罗汉果幼株。 0022 最后， 本发明的MS诱导培养基包含0.5-1.0mg/L的金刚烷酮， MS预培养基至少包含 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮和0.1-0.6mg/L的硝酸银， 能够在培养过程中有效清除组织携带的 病毒， 得到真正无毒无菌的试管苗。 具体实施方式 0023 下面结合实施例对本发明做详细说明， 以令本领域普通技术人员参阅本说明书后 说 明 书 2/5 页 4 CN 106718922 A 4 能够据以实施。 0。
18、024 一种罗汉果高效脱毒的组织培养方法， 包括以下步骤： 0025 (1)外植体的选择与消毒： 取罗汉果带病毒的植株新萌发的嫩芽作为外植体， 剥去 叶后， 依次用2(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、 线状自来水冲洗15-20min、 添加了2-3滴吐 温-20的100毫升0.1(v/v)升汞消毒8-10min、 无菌水冲洗3-5次， 最后用消毒滤纸除去表 面水分， 得到无菌外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0026 (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗： 将步骤(1)得到的无菌外植体将步骤(1)得 到的外植体置于超净工作台内， 用解剖刀切成带有一个腋芽的茎段， 接种到MS培养基中，。
19、 在 培养温度为23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到无 菌试管苗， 其中MS诱导培养基中添加0.3mg/L的6-BA、 0.1mg/L的IAA、 0.5-1.0mg/L的金刚烷 酮、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0027 (3)试管苗脱毒预培养： 将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于液体MS预培养基中， 震荡培养10天得到预培养试管苗， 其中MS预培养基中添加0.5mg/L的6-BA、 0.2mg/L的IBA、 0.5-1.0mg/L的金刚烷酮、 0.1-0.6mg/L的硝酸银、 30g/L蔗糖， 培养基的pH值。
20、为5.8。 0028 (4)试管苗脱毒培养： 将步骤(3)中得到的预培养试管苗剥去0.2-0.3mm的茎尖分 生组织， 将所得的茎尖分生组织接种到MS脱毒培养基中， 在培养温度23-27的条件下黑暗 培养20天得到试管苗丛生芽， 其中MS脱毒培养基中含0.2-1.0mg/L的TDZ、 0.1-0.5mg/L的 ZT、 0.1-1.0mg/L的IBA、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 TDZ为植物生长调节 剂， 市场有售， ZT为玉米素， 是细胞分离素， 市场有售。 0029 (5)重复步骤(4)35次得到大量健壮的罗汉果试管丛生芽。 0030 (6)将步骤(5)中得。
21、到的健壮的试管从芽剪切成单芽接种到1/2MS生根培养基中， 在培养温度为23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小时/天的条件下培养20天， 得 到完整带根植株， 其中MS生根培养基中含0.2-1.0mg/L的NAA、 1.5g/L的AC、 10/L蔗糖和5g/L 的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 AC为活性炭。 0031 (7)炼苗与移栽： 组培瓶中加入50ml自来水， 松开瓶盖， 炼苗一周， 待表面角质形成 后， 将幼苗取出， 洗净根部培养基， 立即移栽到营养杯中， 在营养杯中生长一个月后移栽到 大田。 0032 实施例1： 0033 (1)植体的选择与消毒： 取罗汉果。
22、带病毒的植株新萌发的嫩芽作为外植体， 剥去叶 后外， 依次用2(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、 线状自来水冲洗15min、 添加了2滴吐温-20 的100毫升0.1(v/v)升汞消毒8min、 无菌水冲洗3次， 最后用消毒滤纸除去表面水分， 得到 无菌外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0034 (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗： 将步骤(1)得到的无菌外植体置于超净工作 台内， 用解剖刀切成带有一个腋芽的茎段， 接种到MS培养基中， 在培养温度为23， 光照强 度1500lux， 光照时间为8小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗， 其中MS诱导培养基中 添加0.3mg/L的。
23、6-BA、 0.1mg/L的IAA、 0.5mg/L的金刚烷酮、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基 的pH值为5.8。 0035 (3)试管苗脱毒预培养： 将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于液体MS预培养基中， 震荡培养10天得到预培养试管苗， 其中MS预培养基中添加0.5mg/L的6-BA、 0.2mg/L的IBA、 说 明 书 3/5 页 5 CN 106718922 A 5 0.5mg/L的金刚烷酮、 0.2mg/L的硝酸银、 30g/L蔗糖， 培养基的pH值为5.8。 0036 (4)试管苗脱毒培养： 将步骤(3)中得到的预培养试管苗剥去0.2mm的茎尖分生组 织， 将茎尖分生。
24、组织接种到MS脱毒培养基中， 在培养温度23-27的条件下黑暗培养30天得 到试管苗丛生芽， 其中MS脱毒培养基中含0.5mg/L的TDZ、 0.3mg/L的ZT、 0.5mg/L的IBA、 0.1- 0.5mg/L的硝酸银、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0037 (5)重复步骤(4)3次得到大量健壮的罗汉果试管丛生芽。 0038 (6)将步骤(5)中得到的健壮试管丛生芽剪切成单芽接种到1/2MS生根培养基中， 在培养温度为23， 光照强度1500lux， 光照时间为8小时/天的条件下培养20天， 得到完整 带根植株， 其中1/2MS培养基中添加了0.5mg/L。
25、的NAA、 1.5g/L的AC、 10/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0039 (7)炼苗与移栽： 组培瓶中加入50ml自来水， 松开瓶盖， 将带根植株炼苗一周， 待表 面角质形成后， 将幼苗取出， 洗净根部培养基， 立即移栽到营养杯中， 在营养杯中生长一个 月后移栽到大田。 0040 经观察和记录发现， 生根率达96， 成活率达95。 0041 实施例2 0042 (1)植体的选择与消毒： 取罗汉果带病毒的植株新萌发的嫩芽作为外植体， 剥去叶 后外， 依次用2(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、 线状自来水冲洗20min、 添加了3滴吐温-20 的100毫升0.1(v/。
26、v)升汞消毒9min、 无菌水冲洗4次， 最后用消毒滤纸除去表面水分， 得到 无菌外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0043 (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗： 将步骤(1)得到的无菌外植体置于超净工作 台内， 用解剖刀切成带有一个腋芽的茎段， 接种到MS诱导培养基中， 在培养温度为23-27， 光照强度1500lux， 光照时间为8-10小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗， 其中MS诱 导培养基中添加0.3mg/L的6-BA、 0.1mg/L的IAA、 0.7mg/L的金刚烷酮、 30g/L蔗糖和5g/L的 琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0044 (3)试管苗脱毒预培养。
27、： 将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于液体MS预培养基中， 震荡培养10天得到预培养试管苗， 其中MS预培养基中添加0.5mg/L的6-BA、 0.2mg/L的IBA、 0.8mg/L的金刚烷酮、 0.3mg/L的硝酸银、 30g/L蔗糖， 培养基的pH值为5.8。 0045 (4)试管苗脱毒培养： 将步骤(3)中得到的预培养试管苗剥去0.3mm的茎尖分生组 织， 将茎尖分生组织接种到MS脱毒培养基中， 在培养温度25的条件下黑暗培养30天得到 试管苗丛生芽， 其中MS脱毒培养基中含0.7mg/L的TDZ、 0.3mg/L的ZT、 0.5mg/L的IBA、 0.1- 0.5mg/L的硝酸银、 。
28、30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0046 (5)重复步骤(4)4次得到大量健壮的罗汉果试管丛生芽。 0047 (6)将步骤(5)中得到的健壮试管丛生芽剪切成单芽接种到1/2MS生根培养基中， 在培养温度为25， 光照强度1500lux， 光照时间为9小时/天的条件下培养20天， 得到完整 带根植株， 其中1/2MS生根培养基中添加了0.5mg/L的NAA、 1.5g/L的AC、 10/L蔗糖和5g/L的 琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0048 (7)炼苗与移栽： 组培瓶中加入50ml自来水， 松开瓶盖， 炼苗一周， 待表面角质形成 后， 将幼苗取出， 洗净根部培。
29、养基， 立即移栽到营养杯中， 在营养杯中生长一个月后移栽到 大田。 说 明 书 4/5 页 6 CN 106718922 A 6 0049 经记录统计， 发现生根率达97， 成活率达97。 0050 实施例3 0051 (1)植体的选择与消毒： 取罗汉果带病毒的植株新萌发的嫩芽作为外植体， 剥去叶 后外， 依次用2(v/v)洗洁精水溶液浸泡5min、 线状自来水冲洗30min、 添加了3滴吐温-20 的100毫升0.1(v/v)升汞消毒10min、 无菌水冲洗5次， 最后用消毒滤纸除去表面水分， 得 到无菌外植体， 其中无菌水为经高压灭菌的蒸馏水。 0052 (2)外植体初代诱导获得无菌试管苗。
30、： 将步骤(1)得到的无菌外植体置于超净工作 台内， 用解剖刀切成带有一个腋芽的茎段， 接种到MS诱导培养基中， 在培养温度为27， 光 照强度1500lux， 光照时间为0小时/天的条件下培养30天得到无菌试管苗， 其中MS繁殖培养 基中添加0.3mg/L的6-BA、 0.1mg/L的IAA、 1.0mg/L的金刚烷酮、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培 养基的pH值为5.8。 0053 (3)试管苗脱毒预培养： 将步骤(2)中得到的无菌试管苗置于液体MS预培养基中， 震荡培养10天得到无菌试管苗， 其中MS预培养基中添加0.5mg/L的6-BA、 0.2mg/L的IBA、 1.0mg/。
31、L的金刚烷酮、 0.6mg/L的硝酸银、 30g/L蔗糖， 培养基的pH值为5.8。 0054 (4)试管苗脱毒培养： 将步骤(3)中得到的无菌试管苗剥去0.3mm的茎尖分生组织， 将茎尖分生组织接种到MS脱毒培养基中， 在培养温度27的条件下黑暗培养30天得到试管 苗丛生芽， 其中MS脱毒培养基中含1.0mg/L的TDZ、 0.5mg/L的ZT、 0.5mg/L的IBA、 0.1-0.5mg/ L的硝酸银、 30g/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养基的pH值为5.8。 0055 (5)重复步骤(4)5次得到大量健壮的罗汉果试管丛生芽。 0056 (6)将步骤(5)中得到的健壮丛生芽剪切成单芽接。
32、种到1/2MS生根培养基中， 在培 养温度为27， 光照强度1500lux， 光照时间为10小时/天的条件下培养20天， 得到完整带根 植株， 其中1/2MS培养基中添加了0.5mg/L的NAA、 1.5g/L的AC、 10/L蔗糖和5g/L的琼脂， 培养 基的pH值为5.8。 0057 (7)炼苗与移栽： 组培瓶中加入50ml自来水， 松开瓶盖， 炼苗一周， 待表面角质形成 后， 将幼苗取出， 洗净根部培养基， 立即移栽到营养杯中， 在营养杯中生长一个月后移栽到 大田。 0058 经记录统计， 生根率达到97， 成活率为99。 0059 尽管本发明的实施方案已公开如上， 但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列 运用， 它完全可以被适用于各种适合本发明的领域， 对于熟悉本领域的人员而言， 可容易地 实现另外的修改， 因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下， 本发明并不限 于特定的细节。 说 明 书 5/5 页 7 CN 106718922 A 7 。