一种降钙素原(PCT)测试试剂盒及其测试方法技术领域
本发明涉及测定血清的试剂盒及其测试方法，尤其是涉及测定血清中降钙素原含量的试
剂盒及其测试方法。
背景技术
降钙素原(procalcitionin，检测PCT)是一种由116个氨基酸组成、分子量为13kDa的糖
蛋白，是血清降钙素(CT)的前体物，在人体内半衰期约为20-24小时，稳定性好。正常条件
下，PCT在甲状腺C细胞中生成并裂解成降钙素，人血清PCT含量极低，约2.5pg/ml。当严重细
菌、真菌、寄生虫感染以及脓毒症和多脏器功能衰竭时，PCT在血浆中的水平升高。自身免疫、
过敏和病毒感染时PCT不会升高。局部有限的细菌感染、轻微的感染和慢性炎症不会导致PCT
升高。PCT作为一种新的、具有创新意义的严重细菌感染等疾病的实验指标，PCT提高了临床
诊断的准确性，为重症监护、放化疗、服用免疫抑制剂或器官移植等患者合并发热时提供了
及其重要的诊断、进一步的检查和治疗的临床依据，PCT可广泛应用于ICU病房、血液科、肿
瘤科、儿科、早产儿及新生儿监护室、外科、内科、器官移植科、急诊科、介入诊断和治疗
实验室等。中国专利200710073309.3公开了一种降钙素原测试试剂盒及其测试方法，试剂盒
包含的试剂有：分离试剂、发光标记物、荧光素标记物以及采用纳米免疫磁性微珠作为分离
试剂、采用抗PCT单克隆抗体标记异鲁米诺衍生物作为发光标记物的测试方法，该PCT试剂盒
及其测试方法具有较高的灵敏度和特异性，但其出检测结果的时间较长，无形中增加了试剂
盒的试剂成本。
发明内容
有鉴于此，本发明所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足，提供一种特异性强，
灵敏度高，获得检测结果的时间短，操作方式简便，检测结果稳定可靠的降钙素原(PCT)的
测试试剂盒及其测试方法。
为达到上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，
质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记有小鼠抗
人PCT的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳米磁性微
球的浓度为132μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的PCT抗体，所述碱性磷酸酶标记的
PCT抗体浓度为0.6μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，质控品和校
准品：含有一定量PCT抗原的牛血清白蛋白(第五组分)(简称BSAV)溶液，所述标准品的
浓度为0(S0)、0.1(S1)、1(S2)、5(S3)、50(S4)、100(S5)ng/ml，所述质控品的浓
度为0.6,50ng/ml，所述校准品的浓度为1,50ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和
Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有牛血清白蛋白(第五组分)(BSAV)的溶液；发光底
物：金刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，该试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4％-6％，
试剂R14％-6％，试剂R24％-6％，标准品4％-6％，质控品1％-3％，校准品1％-3％，清洗浓缩液
20％-30％，稀释液10％-20％，发光底物25％-40％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂4％，试剂R14％，试剂R24％，
标准品4％，质控品1％，校准品3％，清洗浓缩液30％，稀释液20％，发光底物30％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂5.1％，试剂R15.1％，试剂R25.1％，
标准品5.1％，质控品1.8％，校准品1.8％，清洗浓缩液25％，稀释液17％，发光底物34％。
优选地，所述试剂盒由下述体积分数组成：磁分离试剂6％，试剂R16％，试剂R26％，
标准品6％，质控品3％，校准品1％，清洗浓缩液20％，稀释液12％，发光底物40％。
一种钙素原(PCT)测试试剂盒的制备方法，包括下述步骤：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中加适
量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L
容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间即
符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过
滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、磁分离试剂的配制：
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取2mgPCT
抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其中CDSS
指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离
心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.01-5.0μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用
试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将
步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加
0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去上清，
重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的PCT磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试剂盒中
磁分离试剂；
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g于烧瓶
中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；
过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)偶联的PCT单克隆抗体)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心大约
20分钟，浓缩至1毫升；
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟；
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后立
即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时；
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时；
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜；
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时；
(8)3000rpm离心半小时，弃上清。沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M
PH7.4的PBS中；
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除铵离
子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1MMgcl2
溶液4℃保存。收集到的碱性磷酸酶(ALP)与PCT单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物稀释液
以1：1000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1；
第三步：试剂R2的配制操作过程
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于1L
烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述
1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4MNaOH
调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白(IgG)0.9g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um
滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第四步：标准品,质控品和校准品的配制：
(1)降钙素原(PCT)定量测定试剂盒PCT标准品原料配制成浓度点为0.5，1，5，20，100ng/ml；
质控品配制的浓度点为0.6，50ng/ml。校准品配制的浓度点为1,50ng/ml；
(2)充分混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上
述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用0.2um
滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第六步：稀释液配制过程：
(1)称取NaCl9.0g和BSAV60g于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.5ml加10ml纯化水溶解，倒入上述1L的容器中；
(3)最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第七步：发光底物配制操作规程：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4MNaOH
调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；
过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存。
本发明还公开了一种降钙素原(PCT)的测试方法，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内校准品(选)进行曲线校正，并用质控品进行质量控制。测试
结果在质控范围内方可进行样本的检测；
(2)加PCT标准品、质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加试剂R1至每一试管中；
(4)加试剂R2至每一试管中；
(5)加磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30秒后，置37℃水浴15分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟。缓慢的倒
转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除
去粘在管壁上的所有液滴；
(8)清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加稀释后的清洗液至每一试管中，置多管混匀器上轻
轻振荡混匀30s，加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出，混匀要彻底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测；
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用稀释液
对样品进行稀释。
本发明的有益效果在于：
(1)本发明试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合，提供了一种接近均相的反应体系，
与现有技术相比，在出结果时间上较传统酶联免疫法少10-20分钟，同时抗体的用量降低了
20％以上，在提高产品性能的同时，大大降低了产品成本。
(2)本发明公开了一种新的专用试剂R2，使得反应过程更加稳定可靠，具有更高的检测灵敏
度和特异性，并达到了较佳的性能参数。
(3)试剂盒中的磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液、稀
释液以及发光底物的配比均是反应体系下的最优配方，给该试剂盒的使用有效期及检测性能
提供了有力保障。
(4)本发明试剂盒的精确度、灵敏度以及稳定性均优于市场同类产品，并且成本低廉，操作
简单，应用前景广阔。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式，对本发明的优选实施例进行详细的描述。
实施例1：
本发明的一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，
标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记
有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳
米磁性微球的浓度为132μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的PCT抗体，所述碱性磷酸
酶标记的PCT抗体浓度为0.6μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，
质控品和校准品：含有一定量PCT抗原的牛血清白蛋白组分五(BSAV)溶液，所述标准品的
浓度为0(S0)、0.1(S1)、1(S2)、5(S3)、50(S4)、100(S5)ng/ml，所述质控品的浓
度为0.6,50ng/ml，所述校准品的浓度为1,50ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和
Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有牛血清白蛋白组分五(BSAV)的溶液；发光底物：金
刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例的一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂4％，
试剂R14％，试剂R24％，标准品4％，质控品1％，校准品3％，清洗浓缩液30％，稀释液20％，
发光底物30％。
本发明上述降钙素原(PCT)测定试剂盒的制备方法，其具体步骤如下：
第一步：磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程：配方见表1，以配制1L为例：
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中，称取0.96gTween-20于20ml容器中加适
量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述1L
容器中；然后在1L容器中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(3)调节PH计测量其PH值；用4MHCl或4MNaOH调PH，测量其PH在7.95－8.05之间即
符合要求；
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中；
(5)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95－8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过
滤即得；过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存；
磁珠缓冲液(表1)
二、磁分离试剂的配制
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中，即浓度为20mg/mL；取2mgPCT
抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml；
(2)计算DSS的投入量，按照以下公式计算：(抗体质量/16000)×10×368/CDSS)，其中CDSS
指代DSS的物质的量浓度mol/L；
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中，置室温90min；
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离
心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml；
(5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直径在0.01-5.0μm之间，加入5ml反应杯中，放入专用
试管架，经磁铁吸附2分钟后吸取上清；
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB，混匀30秒，上架，去上清，重复操作3次；将
步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中，混匀后室温反应4小时，保持混匀状态；
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟，其中Tris的加样量为1mg抗体加
0.15mlTris；
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠，混匀30秒，上架，去上清，
重复操作3次；
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶，即为0.05％的PCT磁分离试剂；
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1：1的比例混匀，即得本发明试剂盒中
分离试剂；
第二步：试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程：配方见表2，以配制1L为例：
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g于烧瓶
中；然后在烧瓶中加入800ml纯化水，充分搅拌，使试剂完全溶解；
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH，测量使PH在7.35-7.45范围内；
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中；
(4)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；
过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
试剂R1稀释液(表2)
二、试剂R1的配制(碱性磷酸酶(ALP)标记的小鼠抗人PCT单克隆抗体)
(1)取10mgALP加入5ml生理盐水中，加入到Centricon-10浓缩管中，3000rpm离心大约
20分钟，浓缩至1毫升；
(2)于上液中加入0.2ml新配的0.1MNaIO4溶液，室温下避光搅拌20分钟；
(3)将上述溶液装入透析袋中，用1mMPH4.4的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；
(4)加20μl0.2MPH9.5碳酸盐缓冲液，使以上醛化ALP的PH升高到9.0～9.5，然后立
即加入2.5mgIgG抗体，在1ml0.01M碳酸盐缓冲液中，室温避光轻轻搅拌2小时；
(5)加0.1ml新配的4mg/mlNaBH4液，混匀，再置4℃2小时；
(6)将上述液装入透析袋中，对0.15MPH7.4PBS透析，4℃过夜；
(7)在搅拌下逐滴加入等体积饱和硫酸铵，置4℃1小时；
(8)3000rpm离心半小时，弃上清，沉淀物用半饱和硫酸铵洗二次，最后沉淀物溶于少量0.15M
PH7.4的PBS中；
(9)将上述溶液装入透析袋中，对0.15MPH7.4的PB缓冲盐水透析约5个小时，去除铵离
子后，10000rpm离心30分钟去除沉淀，上清液即为酶结合物，加入体积1/100的1MMgcl2
溶液4℃保存，收集到的碱性磷酸酶(ALP)与PCT单克隆抗体的偶联物用上述酶反应物稀释液
以1：1000的体积比混合均匀，即得本发明试剂盒中试剂R1；
第三步：试剂R2的配制操作规程：配方见(表3)，以配制1L为例：
(1)称取Tris(三羟甲基氨基甲烷，分子式:(HOCH2)3CNH2)1.56g和NaCl4.23g于1L
烧杯中；用移液器将Proclin-300量取0.2ml于少量纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上述
1L容器中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCL或4MNaOH
调PH，测量其范围在7.35-7.45之间；
(3)称取牛γ球蛋白IgG0.9g于800ml纯化水的烧杯中；
(4)最后定容1000ml，完全溶解后，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，用0.2um
滤器过滤；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
试剂R2的配制(表3)
第四步：标准品和质控品的配制：
(1)最高点：最高浓度点为X，目标点浓度为A,B,C,D,E,F，配制V体积的溶液时，需加入
原料的体积为分别为：(表4)
浓度
加入标准品稀释液体积
加入X体积
A
V-A*V/X
A*V/X
B
V-B*V/X
B*V/X
C
V-C*V/X
C*V/X
D
V-D*V/X
D*V/X
E
V-E*V/X
E*V/X
F
V-F*V/X
F*V/X
(2)降钙素原(PCT)定量测定试剂盒PCT标准品原料配制成浓度点为0，0.1，1，5，50，
100ng/ml；质控品配制的浓度点为0.6，50ng/ml。校准品配制的浓度点为1，50ng/ml
(3)完全溶解后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
第五步：清洗浓缩液配制操作规程：配方见(表5)，以配制1L为例：
(1)称取Tris12.54g和NaCl325.6g于1L容器中；
(2)称取5gTween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
(3)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml纯化水的烧杯中完全溶解后，倒入上
述1L容器中；
(4)用量筒量取800ml纯化水于上述1L容器中，充分搅拌，直至完全溶解；
(5)用4MHCL或4MNaOH调PH，测量其范围在7.35－7.45之间；
(6)最后定容1000ml，测PH值，范围在7.35-7.45之间即符合要求，完全溶解后用0.2um
滤器过滤即得；过滤完后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
清洗浓缩液的配制(表5)
第六步：稀释液配方见(表6)，以配制1L为例：
(1)称取NaCl9.0g和BSAV60g于1L的容器中；
(2)用移液器将Proclin-300量取0.5ml加10ml纯化水溶解，倒入上述1L的容器中；
(3)最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2um滤器过滤，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
稀释液的配制(表6)
第七步：发光底物配制操作规程：配方见(表7)，以配制1L为例：
(1)称取Tris2.35g、NaCl6.41g、Na2SO30.002g和Proclin-3000.2ml于1L烧杯中；
(2)用量筒量取800ml纯化水于烧杯中，充分搅拌，直至完全溶解；用4MHCl或4MNaOH
调PH，测量其范围在7.95-8.05之间；
(3)最后定容至1000ml，测PH值，范围在7.95-8.05之间即符合要求，用0.2um滤器过滤；
过滤完后，加入250mlIUMIPHOS530，混匀后，贴好标签于2-8℃冷库贮存；
发光底物的配制(表7)
本发明一种降钙素原(PCT)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内3μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl(X<1μl)质控
品进行质量控制，测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加4μlPCT标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加4μl试剂R1至每一试管中；
(4)加4μl试剂R2至每一试管中；
(5)加4μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30s后，置37℃水浴15分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟，缓慢的倒
转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除
去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将30μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管中，
置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s；加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出，混匀要彻
底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加30μl底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测；
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用20μl
稀释液对样品进行稀释。
实施例2：
本发明的一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，
标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记
有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳
米磁性微球的浓度为132μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的PCT抗体，所述碱性磷酸
酶标记的PCT抗体浓度为0.6μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，
质控品和校准品：含有一定量PCT抗原的牛血清白蛋白组分五(BSAV)溶液，所述标准品的
浓度为0(S0)、0.1(S1)、1(S2)、5(S3)、50(S4)、100(S5)ng/ml，所述质控品的浓
度为0.6,50ng/ml，所述校准品的浓度为1,50ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和
Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有牛血清白蛋白组分五(BSAV)的溶液；发光底物：金
刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂5.1％，
试剂R15.1％，试剂R25.1％，标准品5.1％，质控品1.8％，校准品1.8％，清洗浓缩液25％，稀
释液17％，发光底物34％。
本发明一种降钙素原(PCT)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内1.8μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl(X<1.8μl)
质控品进行质量控制，测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加5.1μlPCT标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加5.1μl试剂R1至每一试管中；
(4)加5.1μl试剂R2至每一试管中；
(5)加5.1μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30s后，置37℃水浴15分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟，缓慢的倒
转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除
去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将25μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管中，
置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s；加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出，混匀要彻
底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加34μl底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测；
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用17μl
稀释液对样品进行稀释。
本实施例采用所述的试剂盒各组分的配制方法与实施例1相同。
实施例3：
本发明的一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，该试剂盒由磁分离试剂，试剂R1，试剂R2，
标准品，质控品，校准品，清洗浓缩液，稀释液及发光底物组成，其中：磁分离试剂：标记
有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳米磁性微球，所述标记有小鼠抗人PCT的单克隆抗体的纳
米磁性微球的浓度为132μg/ml；试剂R1：含有碱性磷酸酶标记的PCT抗体，所述碱性磷酸
酶标记的PCT抗体浓度为0.6μg/ml；试剂R2：含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液；标准品，
质控品和校准品：含有一定量PCT抗原的牛血清白蛋白组分五(BSAV)溶液，所述标准品的
浓度为0(S0)、0.1(S1)、1(S2)、5(S3)、50(S4)、100(S5)ng/ml，所述质控品的浓
度为0.6,50ng/ml，所述校准品的浓度为1,50ng/ml；清洗浓缩液：含有Tween-20和
Proclin-300的缓冲液；稀释液：含有牛血清白蛋白组分五(BSAV)的溶液；发光底物：金
刚烷的衍生物IUMIPHOS530，所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml；
本实施例一种降钙素原(PCT)测试试剂盒，由下述体积分数组成的：磁分离试剂6％，
试剂R16％，试剂R26％，标准品6％，质控品3％，校准品1％，清洗浓缩液20％，稀释液12％，
发光底物40％。
本发明一种降钙素原(PCT)的测试方法(以100μl为例)，包括下列步骤：
(1)使用前，需使用试剂盒内1μl校准品(选)进行曲线校正，并用Xμl(X<3μl)质控
品进行质量控制，测试结果在质控范围内方可进行样本的检测。
(2)加6μlPCT标准品、(1-X)μl质控品、待测标本至对应试管底部；
(3)加6μl试剂R1至每一试管中；
(4)加6μl试剂R2至每一试管中；
(5)加6μl磁分离试剂至每一试管中；
(6)用塑料薄膜覆盖试管，多管混匀器轻轻振荡试管架30s后，置37℃水浴15分钟；
(7)试管连架放至磁分离器上，确保每支试管都与分离器表面接触，沉淀2分钟，缓慢的倒
转分离器倒出上清液，把倒转的试管连同分离器一起放在滤纸上，用力拍击分离器底部以除
去粘在管壁上的所有液滴；
(8)将20μl清洗浓缩液用纯化水稀释7倍后，加200μl稀释后的清洗液至每一试管中，
置多管混匀器上轻轻振荡混匀30s；加样时应避免加样力度过大而导致磁珠溅出，混匀要彻
底；
(9)重复步骤6、7、6一遍；
(10)加40μl底物溶液至试管中混匀3秒，迅速用准备好的发光检测仪进行检测；
(11)如遇到高值HOOK样本，建议临床医师根据其余测试指标选择合适的稀释倍数用12μl
稀释液对样品进行稀释。
本实施例采用所述的试剂盒各组分的配制方法与实施例1相同。
临床试验：
1、检测数据
标本采自1000例正常体检、供血者。样本体检结果均无肝、脑、肾、消化道疾病，半年
内无输血和大手术史，妇女不在妊娠期和哺乳期。将测值进行统计学分析，得出正常血清参
考范围：<0.05ng/ml
本数据仅供参考，不同地区、不同个体以及采用不同方法进行检测，所测得的PCT水平
也会有所不同，建议各实验室建立自己的正常值范围。不可仅凭本方法得出的PCT值作出诊
断，仅作为中间数据参考作用，应结合临床其他资料分析结果，包括病人的具体情况和治疗
状况。通过其他方法得到的样品中的PCT浓度值与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。
超出试剂盒测定范围的样本，系统将无法给出确切的数值。如欲测定其确切的结果，建议稀
释后再进行测定。本试剂盒的检测结果仅供临床参考，不能单独作为确诊或排除病例的依据，
为达到诊断目的，此检测结果要与临床检查、病史和其它的检查结合使用。本品可用于血清
样本的测定，用于其他体液样本中PCT浓度测定的可靠性未得到充分确认。
2、本发明试剂盒性能指标
分析灵敏度定义为：对20次零标准品的测定，取其2倍的平均偏差，其在标准曲线上所
对应的浓度即为分析灵敏度；分析灵敏度：0.03ng/ml；精密性：批内变异CV％≦10.0％；
批间变异CV％≦15.0％；线性系数：r≥0.9900；线性范围：0.03-100ng/ml：
与主要类似物的交叉反应情况：
最后说明的是，以上优选实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述
优选实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和
细节上对其作出各种各样的改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。