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1、10申请公布号CN104069238A43申请公布日20141001CN104069238A21申请号201410266462822申请日20140616A61K36/79200601A61K36/57200601A61P35/0020060171申请人南京泽朗医药科技有限公司地址210046江苏省南京市栖霞区尧化街道甘家边108号05幢6楼72发明人刘东锋杨成东54发明名称一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用57摘要本发明涉及一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用，该植物提取物组合物由重量百分比2045红根草提取物、1535南五味子提取物、1020半枝莲提取物和510黄芪提取物。
2、制成。经药理实验表明，本发明提供的植物提取组合物具有的功能，主治。另外，本发明提供的植物提取物组合物制剂的制备方法，质量可控、有效成分含量高、适合工业化生产。51INTCL权利要求书1页说明书5页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页10申请公布号CN104069238ACN104069238A1/1页21一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用，其特征在于它由下列重量百分比的原料药制成红根草提取物2045、南五味子提取物1535、半枝莲提取物1020、黄芪提取物510，所述的红根草提取物由下列方法制备得到取红根草粗粉，平均置于5个串联的提取装置中，加入1。
3、520倍量75食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为02MPA，所得透过液上D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得红根草提取物；所述的南五味子提取物由下列方法制备得到将南五味子粉碎，加58倍量热水超声提取23次，每次提取12小时，合并提取液过AB8大孔吸附树脂柱层析，用050乙醇梯度洗脱，50乙醇洗脱液加0305药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得南五味子提取物；所述的半枝莲提取物由下列方法制备得到将半枝莲药材粉碎，加03。
4、05淀粉酶或纤维素酶酶解23天，加610倍量55乙醇温浸1天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取34次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得半枝莲提取物；所述的黄芪提取物由下列方法制备得到将黄芪粉末加510倍量水微波辅助提取2次，提取温度为5055，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，将下注液和水洗液合并，浓缩，喷雾干燥得黄芪提取物。2如权利要求1所述的组合物，其中各原料药的用量为红根草提取物35、南五味子提取物30、半枝莲提取物25、黄芪提取物10。3如权利要求1、2所述的组合物，其特征是该药。
5、物组合物和药学上可接受的载体制备成任何一种常用的口服制剂，所述的口服制剂是胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂或片剂。权利要求书CN104069238A1/5页3一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用技术领域0001本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用。背景技术0002肿瘤是危害人类健康最严重的一类常见病、多发病，最常见的治疗方法是手术、化疗和放疗，而化疗因毒副作用大，影响患者生活质量。近年来，中医药治疗肿瘤称为独特疗法，中医认为瘀血阻滞、痰湿凝聚、热毒内蕴、正气亏虚是导致肿瘤的病机，根据肿瘤的病因病机、发生发展规律，中药抗癌治疗主要有扶正固本、清热解。
6、毒、活血化瘀、软坚散结四个基本法则。中药治疗肿瘤的机制主要是对肿瘤细胞的直接抑制和杀灭作用、抑制肿瘤血管生成、抑制端粒酶活性、诱导细胞分化、调节细胞信号传导、抗微管作用、免疫增强作用、逆转多药耐药作用等。中药应用历史悠久、价格低廉、药源广泛、疗效好、低毒性等优势，在肿瘤治疗中的前景也将越来越广。0003红根草为唇形科鼠尾草属植物黄埔鼠尾SALVIAPRIONITISHANCE，以全草入药。性味苦、微辛，平。具有疏风清热；利湿；止血安胎功效。用于感冒发热；急性扁桃体炎；肺炎咳喘；咽喉肿痛；肝炎胁痛；腹泻；痢疾；肾炎；吐血；胎漏。现代研究表明，红根草中的红根草邻醌对白血病P388细胞有很强的抑制作。
7、用，1G/ML时抑制率可达927；红根草对醌对白血病P388细胞也有明显的细胞毒性，根部的红根草内酯体外亦有抗淋巴白血病P388和鼻咽癌KB细胞的作用，ED50分别为280G/ML和168G/ML。0004南五味子为木兰科南五味子属植物南五味子KADSURALONGEPEDUNCULATAFINETETGAGNEP（KPELTIGERAREHDETWILS），以根、根皮与茎入药。味辛、苦，性温，具有收敛固涩，益气生津，补肾宁心的功效。用于久嗽虚喘，梦遗滑精，遗尿尿频，久泻不止，自汗，盗汗，津伤口渴，短气脉虚，内热消渴，心悸失眠。应用广泛。南五味子中主要含有萜类化合物，近年来发现，南五味子中萜类。
8、化合物具有抗癌活性。CHENDAOFENG等从披针叶南五味子中得到的披针叶南五味子内酯CLANCILACTONESC具有抗HIV病毒活性，IC50为14MG/L。NIGRANOICACID具有抑制HIV1逆转录酶的活性；YEGAOCHEN等从中南五味子KADSURAANANOSMA中得到的3个羊毛甾三萜酸ANANOSICA,B和C对CCRFCEM肺癌细胞和HELA细胞具有细胞毒性JIANXINPU等从南五味子叶中分离得到两种新的源于环安坦烷的三萜双内酯KADLONGILACTONESAANDB对人类K562肿瘤细胞具有抑制活性，IC50140和171G/ML。WANGW等从异形南五味子中分离得。
9、到6个新的三萜内酯HETEROCLITALACTONESAF以及五内酯B、ESCHISANLACTONEB、E对人类肿瘤细胞系BEL7402,BGC823,MCF7和HL60显示中等细胞毒性，其中HETEROCLITALACTONED对于HL60显示的细胞毒性最强，IC50676MICROM。0005半枝莲为唇形科黄芩属植物半枝莲SCUTELLARIABARBATADDONSRIVULARISWALL的全草，又名狭叶韩信草、并头草、牙刷草等，最早见于外科正宗，味辛、苦，性寒，具有清热解毒、止血、消肿的功效，主治热毒痈肿，咽喉疼痛，肺痈肠痈，瘰疬，蛇毒咬伤，跌打说明书CN104069238A2/。
10、5页4损伤，各种出血，水肿，腹水及癌症。现代临床应用治疗癌症、肝炎、感染等。近年来的研究表明，半枝莲主要通过抗突变、抑制肿瘤细胞的增殖、诱导肿瘤细胞的凋亡、增强机体的免疫力、抗氧化以及截断肿瘤细胞的营养供给等而发挥抗肿瘤作用。半枝莲的主要生理活性物质为黄酮类化合物，半枝莲全草含多种黄酮，其中以木犀草素和芹菜素抗肿瘤活性最为明显，有广泛的应用前景。半枝莲水提液有增强癌症患者的免疫功能，与化疗同用有增效作用，并且可以防止因放疗引起的白细胞减少。0006黄芪是豆科植物蒙古黄芪ASTRAGALUSMEMBRANACEUSFISCHBGEVARMONGHOLICUSBGEHSIAO或膜荚黄芪ASTRAG。
11、ALUSMEMBRANACEUSFISCHBGE的干燥根，具有补气升阳、益卫固表、利水消肿等功效，是扶正固本药，能提高化疗疗效，减轻毒副反应，促进机体对癌细胞的免疫作用，黄芪含有多种有效成分，如多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、苷类、黄酮类等。其中多糖的免疫活性尤为突出，黄芪多糖能促进巨噬细胞NO合成，并能显著增强小鼠腹腔巨噬细胞对黑色素瘤细胞的杀伤作用，可明显增强机体非特异性免疫功能，调节细胞免疫和体液免疫趋于正常。可见黄芪有明显的抗肿瘤作用，其机制可能是通过机体免疫功能实现的。0007目前，利用红根草提取物、南五味子提取物、半枝莲提取物和黄芪提取物的中药组合物相互作用、配伍组方，制备用于抗肿瘤。
12、方面的药物，尚未见报道。发明内容0008为满足临床需要，扩大用药品种，更好地治疗癌症，提供一种抗肿瘤的植物提取组合物及其制备方法和应用。0009所述的一种抗肿瘤的植物提取组合物，其特征在于它由下列重量百分比的原料药制成红根草提取物2045、南五味子提取物1535、半枝莲提取物1020、黄芪提取物510，所述的红根草提取物由下列方法制备得到取红根草粗粉，平均置于5个串联的提取装置中，加入1520倍量75食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为02MPA，所得透过液上D101大孔吸附树脂柱，先以水。
13、洗脱杂质，再用60食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得红根草提取物；所述的南五味子提取物由下列方法制备得到将南五味子粉碎，加58倍量热水超声提取23次，每次提取12小时，合并提取液过AB8大孔吸附树脂柱层析，用050乙醇梯度洗脱，50乙醇洗脱液加0305药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得南五味子提取物；所述的半枝莲提取物由下列方法制备得到将半枝莲药材粉碎，加0305淀粉酶或纤维素酶酶解23天，加610倍量55乙醇温浸1天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取34次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得半枝莲提取物；所述的黄芪提取物由下列方法制备得到将黄芪粉。
14、末加510倍量水微波辅助提取2次，提取温度为5055，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，将下注液和水洗液合并，浓缩，喷雾干燥得黄芪提取物。0010所述的组合物，其中各原料药的用量为红根草提取物35、南五味子提取物20、半枝莲提取物35、黄芪提取物10。0011所述的一种抗肿瘤的植物提取组合物的制备方法，其特征在于该药物组合物和说明书CN104069238A3/5页5药学上可接受的载体制备成任何一种常用的口服制剂，所述的口服制剂是胶囊剂、颗粒剂、口服液、丸剂或片剂。0012本发明植物提取组合物可采用现有制药领。
15、域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、黏合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。0013本发明根据中医药理论，主要通过清热解毒和增强人体自身的免疫能力从而达到抗肿瘤的效果，无毒副作用。其肿瘤抑制率为9426（P001），抑制率大于现有抗癌药物环磷酰胺，但毒性明显低于环磷酰胺。本发明采用的组方配伍合理，原料均来自天然植物，同时本发明提供的中药组合物的制备方法，可操作性强，尤其是根据各味中药有效成分化学性质涉及提取工艺，所得提取物有效成分含量高，具有药效高、临床用量少等优点，且工艺稳定，适合工业大。
16、生产。0014具体实施方式以下通过实施例和实验例来进一步说明本发明。0015实施例11、组方红根草提取物35KG、南五味子提取物30KG、半枝莲提取物25KG、黄芪提取物10KG。00162、制法（1）红根草提取物取红根草粗粉，平均置于5个串联的提取装置中，加入15倍量75食用乙醇作为提取溶媒采用连续逆流法提取2次，每次提取3小时，合并提取液，回收乙醇，离心取上清液在卷式膜分离设备中依次进行微滤、超滤，操作压力为02MPA，所得透过液上D101大孔吸附树脂柱，先以水洗脱杂质，再用60食用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩、喷雾干燥得红根草提取物，备用；（2）南五味子提取物将南五味子粉碎，加6倍量热。
17、水超声提取3次，每次提取15小时，合并提取液过AB8大孔吸附树脂柱层析，用050乙醇梯度洗脱，50乙醇洗脱液加05药用活性炭加热回流，趁热过滤，滤液浓缩，喷雾干燥得南五味子提取物，备用；（3）半枝莲提取物将半枝莲药材粉碎，加0305淀粉酶或纤维素酶酶解23天，加610倍量55乙醇温浸1天，过滤得提取液，浓缩所得浸膏加水分散，用水饱和正丁醇萃取34次，萃取液加丙酮沉淀，沉淀物干燥得半枝莲提取物，备用；（4）黄芪提取物将黄芪粉末加10倍量水微波辅助提取2次，提取温度为55，过滤合并提取液，过HPD100大孔吸附树脂柱，收集下注液，先用水洗至无糖反应，再用60乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液浓缩至无醇，将下。
18、注液和水洗液合并，浓缩，喷雾干燥得加等体积正丁醇萃取，萃取液浓缩、干燥得黄芪皂苷，将下注液和水洗液合并，浓缩，加乙醇沉淀，滤出沉淀，喷雾干燥得黄芪多糖，合并黄芪皂苷和黄芪多糖得黄芪提取物，备用；（5）合并步骤（1）得到的红根草提取物、步骤（2）得到的南五味子提取物、步骤（3）得到的半枝莲提取物和步骤（4）得到的黄芪提取物，粉碎成细粉，加入硬脂酸镁，混合均匀，灌装胶囊。0017实施例2本发明植物提取组合物急性毒性实验1、材料说明书CN104069238A4/5页6药物实施例1植物提取组合物，自制。0018动物昆明种小鼠12只，雌雄各半，体重2030G。00192、方法将小鼠随机分为3组，禁食12。
19、小时后分别灌胃给予02G/ML本发明植物提取组合物胶囊制剂10、20、40ML/KG体重，给药剂量为2、4、8G/KG，连续观察2天，未见明显毒性反应。00203、结论本实验中未出现死亡，推测本发明植物提取组合物胶囊剂毒性较低，故进行最大耐受量试验。0021实施例3本发明植物提取组合物最大耐受试验1、材料药物实施例1植物提取组合物，自制。0022动物昆明种小鼠24只，雌雄各半，体重2030G、2、方法取健康昆明种小鼠，禁食12小时，按10G/KG给药剂量和40ML/KG的给药体积灌胃给予本发明植物提取组合物胶囊制剂。灌胃后密切观察小鼠的毒性反应和死亡情况，4小时后，改为每天观察一次，连续观察1。
20、4天。灌胃给予本发明植物提取组合物胶囊制剂后，4小时内未见异常变化，14天内，小鼠毛色、饮食、体重、行为活动都无异常变化。观察结束后，脱颈处死小鼠解剖，观察心、肝、肺、肾等组织，均未见异常变化。00233、结论小鼠灌胃给予本发明植物组合物胶囊制剂的最大耐受量为10G/KG，根据动物间等效剂量换算（即小鼠与人），小鼠标准体重是20G，承认标准体重是60KG，换算结果得人临床用药剂量是081MG/KG。0024实施例4本发明植物提取组合物抗肿瘤药效学研究对S180实体瘤生长的影响1材料与方法11材料药物实施例1植物提取组合物，自制；环磷酰胺，02G/瓶，购自江苏恒瑞医药股份有限公司。0025动物昆。
21、明种小鼠，雌性，体重182G。0026细胞株SARCOMA180腹水型瘤株（S180）。00272、方法取50只小鼠，均皮下接种S180瘤液，次日随机分成5组，每组10只，分别为空白对照组、阳性对照组、本发明组合物低剂量组、本发明组合物中剂量组、本发明组合物高剂量组，称体重。腹腔注射给药，每次依次，连续10天，停药次日称体重，初四动物，剥离皮下瘤块，称瘤重，并计算抑瘤率。00283、结果本发明植物提取组合物对小鼠S180皮下荷瘤有明显的抑制作用，抑瘤率为68329426，结果见表1。0029抑瘤率（）（1治疗组平均瘤重/空白对照组平均瘤重）说明书CN104069238A5/5页7表1本发明植物提取组合物对S180皮下荷瘤小鼠的抑瘤作用（N10，S）组别给药剂量（MG/KG）瘤重（G）抑瘤率（）空白对照组202021阳性对照组300850175792本发明组合物低剂量组10000640146832本发明组合物中剂量组20000580237129本发明组合物高剂量组40000120259426注与阳性对照组相比，P001。说明书CN104069238A。