一种长保质期的液态复合生物菌肥及其制备方法与应用.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103553828 A (43)申请公布日 2014.02.05 CN 103553828 A (21)申请号 201310561591.5 (22)申请日 2013.11.12 C05G 3/00(2006.01) (71)申请人 天津北洋百川生物技术有限公司 地址 300457 天津市滨海新区经济技术开发 区相安路 29 号 (72)发明人 乔长晟 王凡 李雪 罗喆 孙芳艳 (54) 发明名称 一种长保质期的液态复合生物菌肥及其制备 方法与应用 (57) 摘要 一种长保质期的液态复合生物肥料及其制备 方法和应用， 所述液态复合生物菌肥的组成包括 微生物菌体、 复合。

2、营养素、 菌体保护剂和添加剂 ； 其重量份数组成为， 微生物菌体 2-5， 复合营养素 80-130， 菌体保护剂 10-30， 添加剂 0.5-3.0， 其中 微生物菌体是以发酵液离心后的沉淀湿重计。所 述微生物菌体的组成包括 ： 苏云金芽孢杆菌、 巨 大芽孢杆菌、 胶质芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌， 其 中总活菌数达 5108-5109个 /mL。本发明所述 液态复合生物菌肥可用作生物农药， 可直接应用 于植物表面喷施， 或施用于浸种、 灌根等， 具有抗 虫、 解磷、 解钾、 解有机质、 抗虫害等效果且保质期 长。 (51)Int.Cl. 权利要求书 3 页 说明书 9 页 (19)中华人民。

3、共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书3页 说明书9页 (10)申请公布号 CN 103553828 A CN 103553828 A 1/3 页 2 1. 一种液态复合生物菌肥， 所述液态复合生物菌肥的组成包括微生物菌体、 复合营养 素、 菌体保护剂和添加剂 ； 其重量份数组成为， 微生物菌体 2-5， 复合营养素 80-130， 菌体保 护剂 10-30， 添加剂 0.5-3.0， 其中微生物菌体是以发酵液离心后的沉淀湿重计 ； 所述微生物菌体的组成包括 ： 苏云金芽孢杆菌 （Bacillus thuringiensis） 、 巨大芽孢 杆菌 （Bacillusmegate。

4、rium） 、 胶质芽孢杆菌 （Bacillus mucilaginosus） 、 解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amylolquefaciens） ， 其中总活菌数达 5108-5109个 /mL ； 所述复合营养素的重量份数组成为 ： 磷酸二氢钾 50-150， EDTA-Ca25-30， EDTA-Mg 或 EDTA-Mg 与 MgSO47H2O 二者混合物 50-80， EDTA-Zn 或 EDTA-Zn 与 ZnSO47H2O 或二者混合 物 0.15-0.18， EDTA-Mn 或 EDTA-Mn 与 MnSO4H2O 或二者混合物 0.3-0.5， EDTA-Fe0.1-0。

5、.3， EDTA-Cu0.06-0.08， 硼酸 0.1-0.3， 腐植酸 5-15， 大豆蛋白 20-100， 复合氨基酸 50， 海藻粉 20-100 ； 所述菌体保护剂为细胞固定化载体中的一种或几种 ； 所述添加剂为有机酸中的一种或几种。 2. 根据权利要求 1 所述的液态复合生物菌肥， 其特征在于， 所述复合氨基酸的重量份 数组成为 ： 丙氨酸 6.0-6.5， 精氨酸 6.5-6.8， 天冬氨酸 6.8-7.2， 胱氨酸 2.2-2.5， 甘氨酸 3.2-3.5， 组氨酸2.2-2.5， 赖氨酸6.4-6.5， 蛋氨酸3.0-3.2， 苯丙氨酸5-5.5， 脯氨酸4-4.2， 丝氨酸。

6、 8.4-8.5， 苏氨酸 4.8-5.0， 色氨酸 1.5-1.8， 酪氨酸 4.2-4.5， 缬氨酸 7.4-7.5。 3. 根据权利要求 1 所述的液态复合生物菌肥， 其特征在于， 所述菌体保护剂为硅藻土、 高岭土、 滑石粉中的一种或至少两种的混合物。 4. 根据权利要求 1 所述的液态复合生物菌肥， 其特征在于， 所述添加剂为苹果酸、 乳 酸、 柠檬酸中的一种或至少两种的混合物。 5. 根据权利要求 1 所述的液态复合生物菌肥， 其特征在于， 所述微生物菌体中四种 菌活菌数比例如下 ： 苏云金芽孢杆菌 : 巨大芽孢杆菌 : 胶质芽孢杆菌 : 解淀粉芽孢杆菌 =1-2:2-3:2-3:1。

7、-2。 6. 根据权利要求 1-5 任一所述的液态复合生物菌肥的生产方法， 包括如下步骤 ： （1） 菌种活化及种子液制备 将苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 胶质芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌菌株分别进行活化 并培养制得种子液 ； （2） 发酵培养 将培养好的苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌的种子液分别以 8%-10% 的接种量接种至 5L 发酵罐， 发酵培养基均为 3 号培养基， 37 40， 转速 300rpm， 通风比 1:1， 发酵 15-18h 后收集发酵液 ； 将培养好的胶质芽孢杆菌的种子液以 8%-10% 的接种量接种至 5L 发酵罐， 发酵培养基 为 4 号培养基。

8、， 37 40， 转速 400rpm， 通风比 1:1， 发酵 15-18h 后收集发酵液 ； 所述 3 号培养基组成 ： 以质量百分比计， 1.0%-1.2% 葡萄糖， 0.5%-0.6%K2HPO43H2O， 0.3%-0.5%KH2PO4， 0.1%-0.2%尿素， 0.4%-0.6%酵母粉， 0.35%-0.45MgSO4 7H2O， 其余为水， pH7.0-7.2 ； 所 述 4 号 培 养 基 ： 以 质 量 百 分 比 计， 1% 蔗 糖， 0.5%K2HPO43H2O， 0.5 酵 母 粉， 0.02 FeCl36H2O， 0.4 CaCO3， 0.2 MgSO47H2O， 其。

9、余为水， pH7.0 ； 权 利 要 求 书 CN 103553828 A 2 2/3 页 3 （3） 菌体收集与固定 将步骤 （2）收集的四种发酵液混合， 4， 3000rpm-5000rpm， 8min-10min 离心， 弃去 上清， 收集菌体， 菌体用混合发酵液总体积 1/5-1/10 的无菌水重新悬浮， 加入混合发酵液 5%-15%（W/V）的菌体保护剂， 在磁力搅拌器上进行吸附 30min-40min， 或手动搅匀， 静置 10-15min ； （4） 复合营养素与添加剂的加入 在步骤 （3） 得到的菌液中添加营养素与添加剂， 定容至离心前的混合发酵液体积 ； （5） 灌装 将步骤。

10、 （4） 所得含菌体、 营养素、 菌体保护剂与添加剂的液态复合生物菌肥加入经紫外 消毒的塑料瓶中， 贴产品标签， 即得所述液态复合生物肥料。 7. 根据权利要求 6 所述的液态复合生物菌肥的生产方法， 其特征在于， 包括如下步骤 ： （1） 菌种活化及种子液制备 将苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 胶质芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌菌株分别进行活化 并培养制得种子液 ； （2） 发酵培养 将培养好的四菌的种子液分别以10%的接种量接种至各自5L发酵罐， 装液量3L。 苏云 金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌， 3 号培养基， 37， 转速 300rpm， 通风比 1:1 ； 胶质芽孢杆菌。

11、， 4 号培养基， 37， 转速 400rpm， 通风比 1:1 ； 均发酵 15-18h 后收集发酵液 ； 3 号培养基 ： 以质量百分比计， 1.0% 葡萄糖， 0.6%K2HPO4， 0.3%KH2PO4， 0.15% 尿素， 0.5% 酵母粉， 0.4 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.2 ； 4 号 培 养 基 ： 以 质 量 百 分 比 计， 1% 蔗 糖， 0.5%K2HPO43H2O， 0.5 酵 母 粉， 0.02 FeCl36H2O， 0.4 CaCO3， 0.25 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.0 ； 发酵结束后， 经检测， 各发酵液菌浓度为 ： 巨大。

12、芽孢杆菌 8108个 /mL， 苏云金芽孢杆 菌 1109个 /mL， 解淀粉芽孢杆菌 5108个 /mL， 胶质芽孢杆菌 6108个 /mL， 各菌芽胞生 成率均达 95%。 （3） 菌体收集与固定 将步骤 （2） 收集的四种发酵液以体积比 3:2:3:4 混合， 4， 4000rpm， 10min 离心， 弃去 上清， 收集菌体， 菌体用总发酵液 1/5（V/V） 的无菌水重新悬浮， 加入总发酵液 10%（W/V） 的硅藻土， 在磁力搅拌器上进行吸附 30min， 静置 10min ； （4） 复合营养素与添加剂的加入 在 （3） 收集并固定得到的菌液中添加复合营养素与添加剂， 定容至离心。

13、前的混合发酵 液体积 ； 所述复合营养素的重量份数组成为 ： 磷酸二氢钾 150， EDTA-Ca28， MgSO4 7H2O+EDTA-Mg 60,EDTA-Zn+ZnSO4 7H2O0.16， EDTA-Mn+MnSO4 H2O0.4， EDTA-Fe0.2， EDTA-Cu0.07， 硼酸0.13， 腐植酸 10， 大豆蛋白 40， 复合氨基酸 50， 海藻粉 50 ； 其中复合氨基酸的组成为 ： 质量份数为， 丙氨酸 6.1， 精氨酸 6.6， 天冬氨酸 7.0， 胱氨 酸 2.3， 甘氨酸 3.5， 组氨酸 2.4， 赖氨酸 6.4， 蛋氨酸 3.1， 苯丙氨酸 5.0， 脯氨酸 4。

14、.2， 丝氨酸 8.4， 苏氨酸 5.0， 色氨酸 1.6， 酪氨酸 4.3， 缬氨酸 7.4 ； 所述添加剂为苹果酸和柠檬酸 1:2 体积混合 ； 权 利 要 求 书 CN 103553828 A 3 3/3 页 4 （8） 灌装 将上述混匀液体加入经紫外消毒的塑料瓶中， 铝箔封口再加盖塑料盖， 贴产品标签， 即 得所述液态复合微生物肥料 ； 所述液态复合生物菌肥的重量份数组成为， 微生物菌体 5， 复合营养素 110， 菌体保护 剂 30， 添加剂 3.0， 其中微生物菌体是以发酵液离心后的沉淀湿重计。 8. 权利要求 1-5 任一所述液态复合生物菌肥作为生物农药的用途。 权 利 要 求 。

15、书 CN 103553828 A 4 1/9 页 5 一种长保质期的液态复合生物菌肥及其制备方法与应用 技术领域 0001 本发明属于复合微生物菌肥领域， 具体涉及一种长保质期的液态复合生物肥料及 其制备方法和应用。 背景技术 0002 生态文明是当代的潮流， 而农业的发展又与生态环境息息相关， 健康的生态环境 会给农业提供强有力的支撑保证， 并且会是农业发展的重要基础和保障， 但由于长期以来 施用化学肥料或者有机肥料， 以及施肥结构的不合理导致我国面临着农业生态环境的污染 和破坏、 土壤理化性能下降的局面并且造成了许多严重问题。在绿色农业已成为世界农业 发展方向的今天， 我们应大力提倡、 发。

16、展和施用微生物肥料， 坚持走可持续发展的道路。 0003 微生物复合肥， 是以有益微生物为主， 配以有机、 无机成分而成的一种新型绿色肥 料。复合肥中微生物的生命活动， 可以活化土壤中的养分， 从而提高植物营养元素的供应 量， 通过微生物的生命活动产生植物生长刺激素， 刺激植物生长， 促进作物对营养元素的吸 收， 拮抗某些致病微生物， 减轻作物病虫害， 而增加产量。 0004 苏云金芽孢杆菌 （Bacillus thuringiensis） ， 可对昆虫产生特异性的杀灭作用， 分别对鳞翅目、 双翅目、 鞘翅目、 膜翅目、 同翅目、 直翅目、 食毛目等多种昆虫具有活性。 巨大 芽孢杆菌 （Bac。

17、illusmegaterium） ， 能分解难溶性磷化合物， 且具有较强的亚硝酸盐降解能 力。胶质芽孢杆菌 （Bacillus mucilaginosus） ， 可分解长石、 云母等铝硅酸盐类的原生态 矿物， 使土壤中难溶性 K、 P、 Si 等转变为可溶性供植物生长利用。还可以产生生长素、 细胞 分裂素等生物活性物质刺激植物生长。 据报道胶质芽孢杆菌对多种作物有增产、 改善品质、 提高作物抗逆能力等作用。同时在纯培养中还发现硅酸盐细菌可以产生多种氨基酸、 肽类 化合物， 以及生长素、 赤霉素等生理活性物质， 对棉花枯萎病、 烟草灰霉病、 小麦赤霉病等植 物病原菌有明显抑制作用， 在一定程度上。

18、可以减轻某些植物病害特别是一些土传病害的发 生。解淀粉芽孢杆菌 （Bacillus amyloliquefaciens） ， 有机质分解能力强， 代谢产物丰富， 产生多种对植物病原真菌有抑制作用的物质， 同时对腐败菌及病原菌的抑制力比较高， 繁 殖速度快， 形成聚麸胺酸， 构成土壤保护膜， 保湿性强。 0005 目前市场上出售的复合微生物菌肥越来越多， 但多数菌肥效果较为单一， 售价高 昂， 且大部分液态菌肥保质期短， 菌体易失活。本发明所述的液态复合生物菌肥， 采用低成 本的生产方式生产， 选用功能菌株使产品集抗虫、 解磷、 解钾、 解有机质从而达到作物增产 的效果于一体， 并且添加了功能盐。

19、类， 可作为微量元素为植物提供营养， 亦可使产品达到高 渗透压的体系， 有助于提高芽孢的得率、 稳定性， 改善皮层结构， 并增加其热抵抗力。同时， 添加了食品用防腐剂， 抑制体系中菌体的生长活动， 达到更长的保质期。 0006 海藻中所特有的海藻多糖、 藻朊酸、 高度不饱和脂肪酸和多种天然植物生长调节 剂， 具有很高的生物活性， 可刺激植物体内非特异性活性因子的产生， 调节内源激素平衡。 海藻中含有天然植物生长调节剂如 ： 生长素、 细胞分裂素类物质和赤霉素等， 具有很高的生 物活性， 各种物质的比例与陆生植物中各激素比例相近。海藻中的海藻酸可以降低水的表 说 明 书 CN 103553828。

20、 A 5 2/9 页 6 面张力， 在植物表面形成一层薄膜， 增大接触面积， 使水溶性物质比较容易透过茎叶表面细 胞膜进入植物细胞， 使植物最有效地吸收海藻提取液中的营养成分， 因此如果海藻液体肥 和杀虫剂、 杀菌剂以及化学肥料混合使用， 效果更佳， 可降低喷洒费用， 对农药和化学肥料 具有增效作用。海藻可直接使土壤或通过植物使土壤增加有机质， 激活土壤中的各种有益 微生物， 这些生物可在植物微生物代谢物循环中起着催化剂的作用， 使土壤的生物效力 增加。植物和土壤微生物的代谢物可为植物提供更多的养分。海藻可与植物土壤生态系 统和谐地起作用。它含有的天然化合物如藻朊酸钠是天然土壤调理剂， 能促进。

21、土壤团粒结 构的形成， 改善土壤内部孔隙空间， 协调土壤中固、 液、 气三者比例， 恢复由于土壤负担过重 和化学污染而失去的天然胶质平衡， 增加土壤生物活力， 促进速效养分的释放， 有利于根系 生长， 提高作物的抗逆性。 发明内容 0007 本发明的目的是提供一种具有抗虫、 解磷、 解钾、 解有机质、 抗虫害效果且保质期 长的液态复合生物菌肥及其生产方法。 0008 为了实现上述目的， 本发明采用如下技术方案 ： 0009 所述液态复合生物菌肥的组成包括微生物菌体、 复合营养素、 菌体保护剂和添加 剂 ； 其重量份数组成为， 微生物菌体 2-5， 复合营养素 80-130， 菌体保护剂 10-。

22、30， 添加剂 0.5-3.0， 其中微生物菌体是以发酵液离心后的沉淀湿重计。 0010 所述微生物菌体的组成包括 ： 苏云金芽孢杆菌 （Bacillus thuringiensis） 、 巨大 芽孢杆菌 （Bacillusmegaterium） 、 胶质芽孢杆菌 （Bacillus mucilaginosus） 、 解淀粉芽孢 杆菌 （Bacillus amylolquefaciens） ， 其中总活菌数达 5108-5109个 /mL。 0011 优选的， 微生物菌体中四种菌活菌数比例如下 ： 苏云金芽孢杆菌 : 巨大芽孢杆菌 : 胶质芽孢杆菌 : 解淀粉芽孢杆菌 =1-2:2-3:2-3。

23、:1-2。 0012 所述复合营养素的重量份数组成为 ： 0013 磷酸二氢钾 50-150， 0014 EDTA-Ca25-30， 0015 EDTA-Mg 或 EDTA-Mg 与 MgSO47H2O 二者混合物 50-80， 0016 EDTA-Zn 或 EDTA-Zn 与 ZnSO47H2O 或二者混合物 0.15-0.18， 0017 EDTA-Mn 或 EDTA-Mn 与 MnSO4H2O 或二者混合物 0.3-0.5， 0018 EDTA-Fe0.1-0.3， 0019 EDTA-Cu0.06-0.08， 0020 硼酸 0.1-0.3， 0021 腐植酸 5-15， 0022 大。

24、豆蛋白 20-100， 0023 复合氨基酸 50， 0024 海藻粉 20-100 ； 0025 所述复合氨基酸的重量份数组成为 ： 丙氨酸 6.0-6.5， 精氨酸 6.5-6.8， 天冬氨 酸 6.8-7.2， 胱氨酸 2.2-2.5， 甘氨酸 3.2-3.5， 组氨酸 2.2-2.5， 赖氨酸 6.4-6.5， 蛋氨酸 3.0-3.2， 苯丙氨酸5-5.5， 脯氨酸4-4.2， 丝氨酸8.4-8.5， 苏氨酸4.8-5.0， 色氨酸1.5-1.8， 说 明 书 CN 103553828 A 6 3/9 页 7 酪氨酸 4.2-4.5， 缬氨酸 7.4-7.5 ； 0026 所述菌体保护。

25、剂为细胞固定化载体中的一种或几种， 包括但不限于硅藻土、 高岭 土、 滑石粉等 ； 0027 所述添加剂为有机酸中的一种或几种， 包括但不限于苹果酸、 柠檬酸、 乳酸等。 0028 所述液态复合生物菌肥的生产方法如下 ： 0029 （1） 菌种活化及种子液制备 0030 将苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 胶质芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌菌株分别进行 活化并培养制得种子液 ； 0031 （2） 发酵培养 0032 将培养好的苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌的种子液分别以 8%-10%的接种量接种至5L发酵罐， 发酵培养基均为3号培养基， 3740， 转速300rpm， 通风比 1。

26、:1， 发酵 15-18h 后收集发酵液 ； 0033 将培养好的胶质芽孢杆菌的种子液以 8%-10% 的接种量接种至 5L 发酵罐， 发酵培 养基为 4 号培养基， 37 40， 转速 400rpm， 通风比 1:1， 发酵 15-18h 后收集发酵液 ； 0034 所 述 3 号 培 养 基 组 成 ：以 质 量 百 分 比 计， 1.0%-1.2% 葡 萄 糖， 0.5%-0.6%K2HPO43H2O， 0.3%-0.5%KH2PO4， 0.1%-0.2% 尿素， 0.4%-0.6% 酵母粉， 0.35%-0.45 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.0-7.2 ； 0035 所述。

27、 4 号培养基 ： 以质量百分比计， 1% 蔗糖， 0.5%K2HPO43H2O， 0.5酵母粉， 0.02 FeCl36H2O， 0.4 CaCO3， 0.2 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.0 ； 0036 （3） 菌体收集与固定 0037 将步骤 （2） 收集的四种发酵液混合， 4， 3000rpm-5000rpm， 8min-10min 离心， 弃 去上清， 收集菌体， 菌体用混合发酵液总体积 1/5-1/10 的无菌水重新悬浮， 加入混合发酵 液 5%-15%（W/V） 的菌体保护剂， 在磁力搅拌器上进行吸附 30min-40min， 或手动搅匀， 静置 10-15min 。

28、； 0038 （4） 复合营养素与添加剂的加入 0039 在步骤 （3） 收集并固定后得到的菌液中添加复合营养素与添加剂， 定容至离心前 的混合发酵液体积。 0040 （5） 灌装 0041 将步骤 （4） 所得含菌体、 营养素、 菌体保护剂与添加剂的液态复合生物菌肥加入经 紫外消毒的塑料瓶中， 贴产品标签， 即得本发明所述液态复合生物肥料。 0042 本发明所述液态复合生物菌肥可用作生物农药， 可直接应用于植物表面喷施， 或 施用于浸种、 灌根等。 0043 施用方法 ： 将本发明所述液态复合生物菌肥稀释 200-300 倍， 静置 30min， 再搅匀， 直接喷施于种植物叶面 ； 或者将本。

29、发明所述液态复合生物菌肥稀释 150-250 倍后直接用于 浸种 ； 也可将本发明所述液态复合生物菌肥稀释 100-200 倍后用于灌根， 每亩地施加复合 生物菌肥 200mL-400mL。 0044 有益效果 ： 0045 （1） 本发明采用苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 胶质芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌 作为复合微生物肥料的生产菌株， 配以优化的生产工艺， 使得终产品中所含各功能菌活菌 说 明 书 CN 103553828 A 7 4/9 页 8 数均达 108个 /mL 以上， 是普通市售产品菌浓的 10-15 倍， 具有高效性 ； 菌株可达到抗虫、 解 磷钾、 分解有机质、 调节土壤 。

30、pH 等综合功能。 0046 （2） 本发明菌肥同时复配以有机 - 无机复合功能营养素， 为提高土壤肥力， 改善作 物生长环境、 改良土壤与促进植物生长起到了积极作用 ； 复配的营养盐造成高渗体系， 并添 加有机酸与食品防腐剂等添加剂， 安全无毒， 降低体系 pH 环境， 加强微生物的休眠状态， 共 同达到抑制菌体的生命活动、 延长保质期的效果 ； 本发明所述的液态复合生物菌肥可在室 温避光的条件下保藏至少 6 个月。 0047 （2） 本发明中菌肥复配以有机 - 无机复合功能营养素， 添加螯合态的微量元素， 起 到元素间相互协调、 依赖和制约的作用。 由于加入的螯合盐结构的特殊性， 使复配离。

31、子内电 荷趋于中性， 在土壤中避免了阳离子交换而可以快速到达作物根系表面， 更容易被根系吸 收， 喷施在叶面上具有较好的流动性， 容易被气孔吸收， 在无需光合作用的情况下可直接参 与机体的蛋白合成， 其肥效大于单独添加无机盐或等量的无机氮肥。 据报道， 螯合态微肥的 肥效是无机微肥的 2 5 倍。 0048 （3） 本发明菌肥添加有机酸， 安全无毒， 降低体系 pH 环境， 加强微生物的休眠状 态， 共同达到抑制菌体的生命活动、 延长保质期的效果 ； 本发明所述的液态复合生物菌肥可 在室温避光的条件下保藏至少 6 个月。 0049 （4） 本发明采用廉价的原料作为菌体液态发酵的培养基， 采用高。

32、效的发酵方法， 降 低了生产成本， 提供了一种高效廉价的制备生物菌肥的方法 ； 本发明优化的培养基具有快 速生孢作用， 使菌体在培养 12-15h 就可达到 90% 的芽孢生成率。 0050 （4） 本发明所提供的复合生物菌肥， 在吊兰、 小白菜、 香菜等植物的种植实验中发 现， 施肥组在叶长、 根长、 株高、 鲜重、 产量等方面均明显优于空白对照组， 同时可抗虫害， 调 节碱性土壤的 pH ； 0051 （5） 本发明菌肥所含四种生产菌株均为芽孢类细菌， 生长繁殖能力旺盛， 对环境的 适应性强， 易于在土壤内定殖， 本发明采用的发酵工艺及培养基使微生物发酵达终点时芽 孢形成率均达 90%-9。

33、5%。 0052 （6） 本发明添加了菌体保护剂如硅藻土、 高岭土等， 使菌体在储存期间在该物质中 处于休眠状态， 保护细胞更好地耐受菌肥体系的高渗透压。 待其被使用时， 菌体保护剂可以 很快被溶解， 使菌体快速溶出恢复活力， 不像白云石或碳酸钙等结构致密物质需要较长时 间才能使菌体脱离溶出。 0053 （7） 本发明所添加的海藻粉中含有吲哚乙酸、 植物生长激动素、 海藻酚等有机物 质， 配合功能菌与营养素后用于种植业中可以起到更优的抗旱、 抗盐碱渗透、 耐寒、 杀菌和 促生长作用。 具体实施方式 0054 下面通过具体的实施方案叙述本发明。除非特别说明， 本发明中所用的技术手段 均为本领域技。

34、术人员所公知的方法。 另外， 实施方案应理解为说明性的， 而非限制本发明的 范围， 本发明的实质和范围仅由权利要求书所限定。 对于本领域技术人员而言， 在不背离本 发明实质和范围的前提下， 对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也 属于本发明的保护范围。 说 明 书 CN 103553828 A 8 5/9 页 9 0055 实施例 1 0056 （1） 培养基的配制 0057 1 号 培 养 基 ：以 质 量 百 分 比 计， 0.8%-1.2% 蛋 白 胨， 0.5%-1% 酵 母 粉， 0.3%-1.0%NaCl， 其余为水， pH7.2-7.4。 0058 2 号培养基 。

35、： 以质量百分比计， 1%-2% 甘露醇或蔗糖， 0.1 -0.12 CaSO42H2O， 0.18 -0.25 K2HPO4， 0.5%-0.6%CaCO3， 0.15 -0.2 MgSO47H2O， 0.2 -0.25 NaCl， 1.4%-2% 琼脂， 其余为水。 0059 3 号 培 养 基 ： 以 质 量 百 分 比 计， 1.0%-1.2% 葡 萄 糖， 0.5%-0.6%K2HPO43H2O， 0.3%-0.5%KH2PO4， 0.1%-0.2%尿素， 0.4%-0.6%酵母粉， 0.35%-0.45MgSO4 7H2O， 其余为水， pH7.0-7.2。 0060 4 号 培 。

36、养 基 ： 以 质 量 百 分 比 计， 1% 蔗 糖， 0.5%K2HPO43H2O， 0.5 酵 母 粉， 0.02 FeCl36H2O， 0.4 CaCO3， 0.2 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.0。 0061 （2） 斜面活化 0062 将苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌接种于 1 号平板培养基活化 培养， 将胶质芽孢杆菌划线接种于 2 号培养基活化培养。 0063 （3） 种子液制备 0064 挑取苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌活化的菌落， 分别接种于 3 号培养基， 制备种子液 ； 挑取胶质芽孢杆菌活化的菌落， 接种于 4 号培养基，。

37、 制备种子液。 0065 （4） 发酵培养 0066 将培养好的四菌的种子液分别以 10% 的接种量接种至各自 5L 发酵罐， 装液量 3L。 苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌， 3 号培养基， 40， 转速 300rpm， 通风比 1:1 ； 胶质芽孢杆菌， 4号培养基， 40， 转速400rpm， 通风比1:1 ； 均发酵15-18h后收集发酵 液。 0067 发酵结束后， 经检测， 各发酵液菌浓度均达到 108个 /mL 以上。 0068 （5） 将步骤 （4） 收集的四种发酵液混合， 4， 5000rpm， 8min 离心， 弃去上清， 收集 菌体， 菌体用总发酵液 1。

38、/10（V/V） 的无菌水重新悬浮， 加入总发酵液 5%（W/V） 的滑石粉， 在磁力搅拌器上进行吸附 40min， 静置 15min ； 0069 （6） 复合营养素与添加剂的加入 0070 在 （5） 收集并固定得到的菌液中添加复合营养素与添加剂， 定容至离心前的混合 发酵液体积。 0071 复 合 营 养 素 的 重 量 份 数 组 成 为 ：磷 酸 二 氢 钾 100， EDTA-Ca25， EDTA-Mg80,EDTA-Zn0.18， EDTA-Mn0.3， EDTA-Fe0.1， EDTA-Cu0.08， 硼酸 0.3， 腐植酸 15， 大 豆蛋白 100， 复合氨基酸 50， 海。

39、藻粉 20。 0072 复合氨基酸的重量份数组成为 ： 丙氨酸 6.5， 精氨酸 6.8， 天冬氨酸 6.8， 胱氨酸 2.5， 甘氨酸 3.2， 组氨酸 2.2， 赖氨酸 6.5， 蛋氨酸 3.2， 苯丙氨酸 5.5， 脯氨酸 4， 丝氨酸 8.5， 苏氨酸 4.8， 色氨酸 1.8， 酪氨酸 4.5， 缬氨酸 7.5。 0073 所述添加剂为苹果酸。 0074 （8） 灌装 0075 将上述混匀液体加入经紫外消毒的塑料瓶中， 铝箔封口再加盖塑料盖， 贴产品标 说 明 书 CN 103553828 A 9 6/9 页 10 签， 即得本发明所述液态复合微生物肥料。 0076 本实施例所述液态。

40、复合生物菌肥的组成包括 ； 重量份数组成为， 微生物菌体 2， 复 合营养素 80， 菌体保护剂 20， 添加剂 0.5， 其中微生物菌体是以发酵液离心后的沉淀湿重 计。 0077 实施例 2 0078 （1） 培养基的配制 0079 1 号培养基 ： 以质量百分比计， 1% 蛋白胨， 0.5% 酵母粉， 0.3%NaCl， 其余为水， pH7.2 ； 0080 2 号培养基 ： 以质量百分比计， 1% 甘露醇， 0.1 CaSO42H2O， 0.2 K2HPO4， 0.5%CaCO3， 0.2 MgSO47H2O， 0.2 NaCl， 1.4% 琼脂， 其余为水 ； 0081 3 号培养基 。

41、： 以质量百分比计， 1.0% 葡萄糖， 0.6%K2HPO4， 0.3%KH2PO4， 0.15% 尿素， 0.5% 酵母粉， 0.4 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.2 0082 4 号 培 养 基 ： 以 质 量 百 分 比 计， 1% 蔗 糖， 0.5%K2HPO43H2O， 0.5 酵 母 粉， 0.02 FeCl36H2O， 0.4 CaCO3， 0.25 MgSO47H2O， 其余为水， pH7.0， 0083 （2） 斜面活化 0084 将 4保存的各菌菌株活化， 后将苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆 菌分别划线接种于1号平板培养基上， 30-37培养1。

42、d ； 将胶质芽孢杆菌划线接种于2号 培养基， 25 -30培养 1-2d。 0085 （3） 种子液制备 0086 挑取苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌活化的菌落， 分别接种于 3 号培养基， 37， 200rpm， 培养 16h ； 0087 挑取胶质芽孢杆菌活化的菌落， 接种于 4 号培养基， 37， 200rpm， 培养 16h ； 此时 四菌的菌浓菌均达 108个 /mL。 0088 （4） 发酵培养 0089 将培养好的四菌的种子液分别以 10% 的接种量接种至各自 5L 发酵罐， 装液量 3L。 苏云金芽孢杆菌、 巨大芽孢杆菌、 解淀粉芽孢杆菌， 3 号培养基， 。

43、37， 转速 300rpm， 通风比 1:1 ； 胶质芽孢杆菌， 4号培养基， 37， 转速400rpm， 通风比1:1 ； 均发酵15-18h后收集发酵 液。 0090 发酵结束后， 经检测， 各发酵液菌浓度为 ： 巨大芽孢杆菌 8108个 /mL， 苏云金芽 孢杆菌 1109个 /mL， 解淀粉芽孢杆菌 5108个 /mL， 胶质芽孢杆菌 6108个 /mL， 各菌芽 胞生成率均达 95%。 0091 （5） 菌体收集与固定 0092 将步骤 （3） 收集的四种发酵液以体积比 3:2:3:4 混合， 4， 4000rpm， 10min 离心， 弃去上清， 收集菌体， 菌体用总发酵液 1/5。

44、（V/V） 的无菌水重新悬浮， 加入总发酵液 10%（W/ V） 的硅藻土， 在磁力搅拌器上进行吸附 30min， 静置 10min ； 0093 （6） 复合营养素与添加剂的加入 0094 在 （5） 收集并固定得到的菌液中添加复合营养素与添加剂， 定容至离心前的混合 发酵液体积。 0095 所述复合营养素的重量份数组成为 ： 磷酸二氢钾 150， EDTA-Ca28， MgSO4 7H2O+EDT 说 明 书 CN 103553828 A 10 7/9 页 11 A-Mg60,EDTA-Zn+ZnSO4 7H2O0.16， EDTA-Mn+MnSO4 H2O0.4， EDTA-Fe0.2，。

45、 EDTA-Cu0.07， 硼酸 0.13， 腐植酸 10， 大豆蛋白 40， 复合氨基酸 50， 海藻粉 50。 0096 其中复合氨基酸的组成为 ： 质量份数为， 丙氨酸 6.1， 精氨酸 6.6， 天冬氨酸 7.0， 胱 氨酸 2.3， 甘氨酸 3.5， 组氨酸 2.4， 赖氨酸 6.4， 蛋氨酸 3.1， 苯丙氨酸 5.0， 脯氨酸 4.2， 丝氨 酸 8.4， 苏氨酸 5.0， 色氨酸 1.6， 酪氨酸 4.3， 缬氨酸 7.4。 0097 所述添加剂为苹果酸和柠檬酸 1:2 体积混合。 0098 （8） 灌装 0099 将上述混匀液体加入经紫外消毒的塑料瓶中， 铝箔封口再加盖塑料盖。

46、， 贴产品标 签， 即得本发明所述液态复合微生物肥料。 0100 本实施例所述液态复合生物菌肥的组成包括 ； 重量份数组成为， 微生物菌体 5， 复 合营养素 110， 菌体保护剂 30， 添加剂 3.0， 其中微生物菌体是以发酵液离心后的沉淀湿重 计。 0101 本发明所述液态复合生物菌肥总活菌数为 6.9108个 /mL， pH4.0， 离子强度 80ms/cm。 0102 将制备所得的液态复合生物菌肥于不高于 30的室温静置、 避光保藏， 定期测定 产品总活菌数， 产品总活菌数在 3 个月之内未有明显下降， 6 个月内未大幅下降， 保藏至 12 个月时， 依旧复合国家标准所要求的不低于 。

47、0.5108个 /mL。 0103 表 1 液态复合生物菌肥不同贮藏时间的总活菌数 0104 0105 上述菌种购买自 ： 苏云金芽孢杆菌 (Bacillus thuringiensis) ： 广东省微生物菌 种保藏中心 （广州市先烈中路100号省微生物所实验楼五楼， 邮编510070） ， 编号GIM1.151 ； 巨大芽孢杆菌 (Bacillus megatherium) ： 中国普通微生物菌种保藏管理中心 （北京市朝 阳区北辰西路 1 号院 3 号， 邮编 100101） ， 编号 CGMCC1.223 ； 解淀粉芽孢杆菌 : 中国工业 微生物菌种保藏管理中心 （北京市朝阳区酒仙桥中路 。

48、24 号院 6 号楼， 邮编 100015） ， 编号 CICC23845 ； 胶质芽孢杆菌 （Bacillus mucilaginosu） ： 中国工业微生物菌种保藏管理中心， 编号 CICC23575。 0106 实施例 3 0107 按照实施例 2 中 （1） -（4） 所述方法制备实施例 2 中所述四种菌的发酵液， 将收集 的四种发酵液等体积混合， 4， 3000rpm， 8min 离心， 弃去上清， 收集菌体， 菌体用总发酵液 1/8（V/V） 的无菌水重新悬浮， 加入总发酵液 15%（m/V） 的高岭土， 在磁力搅拌器上进行吸 附30min， 静置10min ； 加入复合营养素与添加剂， 定容至离心前的混合发酵液体积。 按实施 例 1 中 （8） 所述方法灌装保藏， 同时， 以未添加菌体保护剂与添加剂的产品为对照。定期测 定其总活菌数。 0108 所述复合营养素的重量份数组成为 ： 磷酸二氢钾 50， EDTA-Ca30， MgSO4 7H2O+EDTA -Mg50,EDTA-Zn0.15， EDTA-Mn+MnSO4H2O0.5， EDTA-Fe0.3， EDTA-Cu0.06， 硼酸 0.2， 腐植酸 5， 大豆蛋白 20， 复合氨基酸 50， 海藻粉 100。 说 。