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1、(10)申请公布号 CN 103575906 A (43)申请公布日 2014.02.12 CN 103575906 A (21)申请号 201310522573.6 (22)申请日 2013.10.29 G01N 33/68(2006.01) (71)申请人 青岛啤酒股份有限公司 地址 266000 山东省青岛市市南区五四广场 青啤大厦 (72)发明人 刘佳 余俊红 董建军 尹花 黄树丽 胡淑敏 黄淑霞 陈璐 杨梅 李天宇 (74)专利代理机构 青岛联信知识产权代理事务 所 37227 代理人 段秀瑛 王月玲 (54) 发明名称 一种检测麦芽敏感蛋白的方法 (57) 摘要 本发明涉及敏感蛋白。
2、的检测方法， 特别涉及 一种检测麦芽敏感蛋白的方法， 包括麦芽敏感蛋 白提取和麦芽敏感蛋白测定两个步骤， 按照一定 料水比称取麦芽粉加入去离子水， 再加入乳酸 ； 经过保温、 离心等处理， 合并两次上清液 ； 之后在 沸水浴中保温得麦芽蛋白提取液 ； 再利用单宁酸 检测麦芽敏感蛋白含量。本发明通过原料检测的 方法对下游产物起到预测的功能。能够通过调整 不同敏感蛋白含量的麦芽使用比例和麦汁制备工 艺， 稳定麦汁、 发酵液的敏感蛋白含量， 从而降低 下游胶体稳定性控制的压力， 保证了产品质量和 生产效率， 实际生产中麦芽的选择以及啤酒的胶 体稳定性的控制有积极指导意义。 (51)Int.Cl. 权。
3、利要求书 1 页 说明书 4 页 附图 1 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 附图1页 (10)申请公布号 CN 103575906 A CN 103575906 A 1/1 页 2 1. 一种检测麦芽敏感蛋白的方法， 其特征在于， 所述方法的步骤如下 ： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 按照料水比为 1:4-1:8(W/V)， 称取麦芽粉加入去离子水， 再加 入 0.02%-0.20%（V/V） 的乳酸 ； 50 -65下保温 20min-60min， 经过两次离心， 合并两次上 清液 ； 之后在沸水浴中保温 30min-60min， 。
4、待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取 液 ； （2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白提取液 中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L 单宁酸添加量时样品的浊度值作 为敏感蛋白的含量。 2. 根据权利要求 1 所述的检测麦芽敏感蛋白的方法， 其特征在于， 所述方法的步骤如 下 ： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 按照料水比为 1:4-1:6(W/V)， 称取麦芽粉加入去离子水， 再加 入 0.02%-0.1% （V/V） 的乳酸 ； 50 -55下保温 20min-40min， 每隔 5min 混匀一次 ； 。
5、提取结 束后离心， 取上清液， 沉淀物用去离子水洗一次 ； 然后再离心， 合并两次上清液 ； 之后在沸 水浴中保温 30min-50min， 待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取液 ； （2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白提取液 中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L 单宁酸添加量时样品的浊度值作 为敏感蛋白的含量。 3. 根据权利要求 2 所述的检测麦芽敏感蛋白的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中所述的料 水比为 1:4。 4. 根据权利要求 3 所述的检测麦芽敏感蛋白的方法， 其特征在于， 步。
6、骤 （1） 中所述的乳 酸加入量为 0.065%（V/V） 。 5. 根据权利要求 1-4 任一项所述的检测麦芽敏感蛋白的方法， 其特征在于， 步骤 （1） 中 实验条件为 50水浴下下保温 20min， 每隔 5min 混匀一次 ； 提取结束后离心， 取上清液， 沉 淀物用去离子水洗一次 ； 然后再离心， 合并两次上清液 ； 之后在沸水浴中保温 30min， 待冷 却至室温后用滤纸过滤。 权 利 要 求 书 CN 103575906 A 2 1/4 页 3 一种检测麦芽敏感蛋白的方法 技术领域 0001 本发明涉及敏感蛋白的检测方法， 特别涉及一种检测麦芽敏感蛋白的方法。 背景技术 0002。
7、 啤酒中富含蛋白、 糖、 多酚类物质。在高温、 振荡、 光照等条件下， 这些物质的聚合 会造成啤酒稳定性的改变， 进而析出沉淀造成啤酒混浊。其中敏感蛋白类物质对于啤酒稳 定性的影响较为严重， 控制也较为严格。 0003 敏感蛋白是一类富含脯氨酸的醇溶蛋白， 主要来源于大麦麦芽。麦芽中的醇溶蛋 白经过糖化溶解、 煮沸变性后形成稳定性的敏感蛋白后存在于啤酒中。因此如果能从原料 上判断敏感蛋白的含量， 就能从原料上控制其含量的多少。目前原料蛋白的评价指标主要 是针对可溶性氮等酵母可利用的蛋白类物质为主。缺乏敏感蛋白的评价指标。 0004 目前在啤酒生产过程中， 敏感蛋白的检测方法只能检测啤酒、 发酵。
8、液、 麦汁等这些 后续产物中的， 通过添加一定量的单宁酸， 检测形成的混浊物质对麦汁、 酒液浊度的影响， 从而间接判断敏感蛋白含量的多少。但是对于原料 （比如麦芽） 中的敏感蛋白的含量却无法 进行检测， 主要是目前的提取方法不适合敏感蛋白的检测。 0005 传统的麦芽蛋白提取方法， 主要采用协定糖化法， 但是这种提取方法不适合敏感 蛋白的溶解和生成， 无法进行麦芽敏感蛋白的检测。同时该方法需要使用专门的糖化仪进 行操作， 设备投资大。 0006 目前， 还没有评价原料敏感蛋白的标准和方法， 对原料麦芽蛋白的评价主要是通 过规定的麦汁糖化程序制备协定麦汁， 再检测协定麦汁中的总蛋白含量， 并不是。
9、针对敏感 蛋白。但是该方法既存在操作复杂、 费时费力的缺点， 也存在无法检测敏感蛋白的问题。 发明内容 0007 本发明针对现有技术中的不足， 建立麦芽敏感蛋白的提取方法， 进而从原料上直 接判断敏感蛋白的含量的检测麦芽敏感蛋白的方法。 0008 本发明的技术方案是 ： 一种检测麦芽敏感蛋白的方法， 所述方法的步骤如下 ： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 按照料水比为 1:4-1:8(W/V)， 称取麦芽粉加入去离子水， 再加 入 0.02%-0.20%（V/V） 的乳酸 ； 50 -65下保温 20min-60min， 每隔 5min 混匀一次 ； 提取 结束后离心， 取上清液， 沉淀物用去离。
10、子水洗一次 ； 然后再离心， 合并两次上清液 ； 之后在 沸水浴中保温 30min-60min， 待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取液 ； （2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白提取液 中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L 单宁酸添加量时样品的浊度值作 为敏感蛋白的含量。 0009 在以上方案的基础上， 所述方法的步骤如下 ： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 按照料水比为 1:4-1:6(W/V)， 称取麦芽粉加入去离子水， 再加 说 明 书 CN 103575906 A 3 2/4 页 4 入 0.。
11、02%-0.1% （V/V） 的乳酸 ； 50 -55下保温 20min-40min， 每隔 5min 混匀一次 ； 提取结 束后离心， 取上清液， 沉淀物用去离子水洗一次 ； 然后再离心， 合并两次上清液 ； 之后在沸 水浴中保温 30min-50min， 待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取液 ； （2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白提取液 中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L 单宁酸添加量时样品的浊度值作 为敏感蛋白的含量。 0010 优选的， 步骤 （1） 中所述的料水比为 1:4。 001。
12、1 优选的， 步骤 （1） 中所述的乳酸加入量为 0.065%（V/V） 。 0012 优选的， 步骤 （1） 中实验条件为 50水浴下下保温 20min， 每隔 5min 混匀一次 ； 提 取结束后离心， 取上清液， 沉淀物用去离子水洗一次 ； 然后再离心， 合并两次上清液 ； 之后 在沸水浴中保温 30min， 待冷却至室温后用滤纸过滤。 0013 本发明的有益效果是 ： （1） 本发明中的提取条件中涉及的温度和调酸用 pH 值更加适合蛋白的溶解和变性， 有 利于敏感蛋白的生成， 从而能够被检测到。 0014 （2） 本发明可以直接检测麦芽中的敏感蛋白， 从而能够提前预测麦汁中敏感蛋白 的。
13、含量， 也就是通过原料检测的方法对下游产物起到预测的功能。 0015 （3） 提取方法简便省时， 能够一次检测多个麦芽样品的敏感蛋白。 具有高通量检测 的优点。 0016 （4） 本发明除了可以检测单一麦芽样品的敏感蛋白， 也可以检测搭配使用的麦芽 的敏感蛋白， 实际生产中都是不同品种的麦芽搭配使用， 因此本发明更能反映出实际生产 的情况， 更好地辅助实际生产。 0017 （5） 目前由于生产中使用的原料存在质量波动， 对下游的稳定性控制造成一定的 压力。通过检测原料麦芽的敏感蛋白， 能够通过调整不同敏感蛋白含量的麦芽使用比例和 麦汁制备工艺， 稳定麦汁、 发酵液的敏感蛋白含量， 从而降低下游。
14、胶体稳定性控制的压力， 保证了产品质量和生产效率， 实际生产中麦芽的选择以及啤酒的胶体稳定性的控制有积极 指导意义。 附图说明 0018 附图 1 为本发明检测的麦芽敏感蛋白和麦芽制备的麦汁敏感蛋白的对应关系曲 线图。 具体实施方式 0019 本发明的具体实施方式如下 ： 实施例 1 ： 一种检测麦芽敏感蛋白的方法， 所述方法的步骤如下 ： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 称取 A 麦芽粉 2.5g， 加入 20mL 去离子水 , 加入 13L 的乳酸。 50水浴下保温 20min ， 每隔 5min 混匀一次。提取结束后在 1000rpm 下离心 10min， 取上 清液， 沉淀物用 13mL。
15、 去离子水洗一次， 然后在 1000rpm 下离心 10min， 合并两次上清液。之 后在沸水浴中保温 30min， 待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取液。 说 明 书 CN 103575906 A 4 3/4 页 5 0020 （2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白 提取液中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L 单宁酸添加量时样品的浊 度值作为敏感蛋白的含量。 0021 结果显示麦芽 A 的敏感蛋白含量为 6.5 EBC。 0022 实施例 2 ： 一种检测麦芽敏感蛋白的方法， 所述方法的步骤如下 。
16、： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 称取 B 麦芽粉 4g， 加入 20mL 去离子水， 加入 40L 的乳酸。 65水浴下保温 60min ， 每隔 5min 混匀一次。提取结束后在 1000rpm 下离心 10min， 取上 清液， 沉淀物用 13mL 去离子水洗一次， 然后在 1000rpm 下离心 10min， 合并两次上清液。之 后在沸水浴中保温 60min， 待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取液。 0023 （2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白提 取液中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L。
17、 单宁酸添加量时样品的浊度 值作为敏感蛋白的含量。 0024 结果显示麦芽 B 的敏感蛋白含量为 8.4 EBC。 0025 实施例 3 ： 一种检测麦芽敏感蛋白的方法， 所述方法的步骤如下 ： （1） 麦芽敏感蛋白提取 ： 称取C麦芽粉5g， 加入20mL去离子水， 加入5L的乳酸。 60 水浴下保温 40min ， 每隔 5min 混匀一次。提取结束后在 1000rpm 下离心 10min， 取上清液， 沉淀物用13mL去离子水洗一次， 然后在1000rpm下离心10min， 合并两次上清液。 之后在沸 水浴中保温 40min， 待冷却至室温后用滤纸过滤， 即得麦芽蛋白提取液。 0026 。
18、（2） 麦芽敏感蛋白测定 ： 将 100mg/L 单宁溶液缓慢滴加到步骤 （1） 所得麦芽蛋白提 取液中作为样品， 检测样品 90角的浊度值， 利用 10.0 mg/L 单宁酸添加量时样品的浊度 值作为敏感蛋白的含量。 0027 结果显示麦芽 C 的敏感蛋白含量为 13.4 EBC。 0028 实施例 4 ： 选择了实施例 1 和实施例 3 中的麦芽 A 和 C 样品， 经过实施例 1 和实施例 3 对麦芽敏 感蛋白含量检测可知。实施例 1 中 A 敏感蛋白含量相对较低， 只有 6.5 EBC 左右。实施例 3 中 C 敏感蛋白含量较高， 达到 13.4EBC 左右。单独使用 C 麦芽会造成后。
19、期产物麦汁的敏感 蛋白过高， 从而影响麦汁的胶体稳定性。为了稳定麦汁的胶体稳定性， 将 A 和 C 配使用后制 备麦汁， 麦汁的敏感蛋白较为合理。通过 A 麦芽和 C 麦芽按照 1:1 的比例搭配使用， 麦汁的 敏感蛋白有所降低， 为 8.3 EBC。 0029 表 1 敏感蛋白含量对比表 敏感蛋白 EBC 麦芽 A6.5 麦芽 C13.4 麦芽 A 制备麦汁7.1 麦芽 C 制备麦汁12.4 50% 麦芽 A+50% 麦芽 C 制备麦汁8.3 结果表明， 目前通过检测原料麦芽的敏感蛋白， 能够进一步指导调整不同敏感蛋白含 量的麦芽使用比例和麦汁制备工艺， 稳定麦汁、 发酵液的敏感蛋白含量， 。
20、从而降低下游胶体 稳定性控制的压力， 保证了产品质量和生产效率， 避免不必要的浪费， 对于实际生产中麦芽 说 明 书 CN 103575906 A 5 4/4 页 6 的选择以及啤酒的胶体稳定性的控制有积极指导意义。 0030 实验例 1 ： 选择 9 个麦芽样品， 分别测定其麦芽敏感蛋白和制备的麦汁的敏感蛋白。结果发现， 两 者间有明显的对应关系， 相关系数达到 0.967（见图 1） 。当麦汁敏感蛋白含量处于较高水 平时， 其对应的麦芽敏感蛋白含量也处于较高水平。说明利用麦芽的敏感蛋白能提前预测 出麦汁的敏感蛋白含量， 从而可以及时调整麦芽搭配比例， 从而降低麦汁的敏感蛋白。 说 明 书 CN 103575906 A 6 1/1 页 7 图 1 说 明 书 附 图 CN 103575906 A 7 。