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1、10申请公布号CN104067942A43申请公布日20141001CN104067942A21申请号201410333345922申请日20140714A01H4/0020060171申请人西北农林科技大学地址712100陕西省西安市杨凌示范区邰城路3号72发明人张东韩明玉王超李有梅韩静赵彩平74专利代理机构北京科亿知识产权代理事务所普通合伙11350代理人汤东凤54发明名称一种苹果砧木MM116组培快繁的方法57摘要本发明公开了一种苹果砧木MM116组培快繁的方法，该苹果砧木MM116组培快繁的方法，通过采用培养基为MS6BA05MG/LIBA01MGPVP500MG/L的培养基初代培养、。
2、采用MS6BA06MG/LIBA01MG/L处理的继代培养、采用生根培养基1/2MSIBA09MG/L的生根培养、用纯锯末的炼苗移栽；实现了苹果砧木MM116快速的繁殖，不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。51INTCL权利要求书1页说明书5页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图1页10申请公布号CN104067942ACN104067942A1/1页21一种苹果砧木MM116组培快繁的方法，其特征在于，苹果砧木MM116在组培技术下进行组培快繁，该苹果砧木MM116组培快繁的方。
3、法具体方法包括以下步骤步骤一，以苹果砧木MM116为材料，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MGPVP500MG/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养；步骤二，将获得的无菌外植体接种到MS6BA06MG/LIBA01MG/L，光照2000LUX的培养基中进行继代培养，即每升附加30G蔗糖，8G琼脂；步骤三，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM的植株，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L。
4、生根培养基中进行生根培养。2如权利要求1所述的苹果砧木MM116组培快繁的方法，其特征在于，在步骤一中以苹果砧木MM116为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培，水培为每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升汞处理7MIN；然后再用超声波清洗机清洗。3如权利要求1所述的苹果砧木MM116组培快繁的方法，其特征在于，在步骤三生根培养中当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行。
5、开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。4如权利要求3所述的苹果砧木MM116组培快繁的方法，其特征在于，在步骤五中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。待生根苗抽生出新芽之后即移出遮阴网。权利要求书CN104067942A1/5页3一种苹果砧木MM116组培快繁的方法技术领域0001本发明属于苹果苗木栽培技术领域，尤其涉及一种苹果砧木MM116组培快繁的方法。背景技术000。
6、2苹果产业在中国农业经济中占有非常重要的地位，2013年中国苹果种植面积2253万公顷，产量为3170万吨，占世界总产量的1/2。与世界苹果先进生产国家相比，我国的苹果生产还存在较大差距，主要表现为单位面积产量低、果品质量差、经济效益不高、在国际鲜果市场上的占有份额少，与我国苹果生产大国的地位极不相称，其中苹果苗木质量差是造成这种局面的重要原因之一。目前，我国的苹果生产模式由传统低效郁闭果园模式逐步的转变为现代化矮砧密植集约高效生产栽培模式。苗木是苹果生产栽培的基础，苗木的质量直接影响着苹果树体的生长、开花、结果以及抗逆性、抗病能力和寿命。苗木受到病毒的侵染之后，树体正常的细胞增殖，就会受到破。
7、坏，严重的话会影响果树的生长势、果实品质和产量等正常生理机制，这成为中国苹果产业发展的隐患。今后一段时期是我国苹果大规模更新换代的关键时期，如何从苗木方面提供支持和保障便成为一个值得高度重视的问题。目前，我国矮化苹果苗木市场供不应求，限制苗木产业发展的关键在于，一方面缺乏适应性广优良矮化砧木，另一方面对现有矮化砧木繁育技术尚未取得突破。MM116是由英国东茂林试验站利用M9和MM106亲本杂交培育而成的半乔化砧木，它兼具M9的早果性和MM106的良好抗性，本发明建立一种苹果砧木MM116组培快繁的方法，对于生产优质矮化无病毒苗木，具有重要意义，发展前景广阔。发明内容0003本发明实施例的目的在。
8、于提供一种苹果砧木MM116组培快繁的方法，旨在为我国苹果苗木的栽培提供一种组培快繁的方法，以加快我国苹果大规模更新换代。0004本发明实施例是这样实现的，一种苹果砧木MM116组培快繁的方法，该苹果砧木MM116组培快繁的方法包括以下步骤0005步骤一，以苹果砧木MM116为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培，每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升汞处理7MIN；0006步骤二，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3M。
9、IN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MGPVP聚乙烯吡咯烷酮500MG/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养；0007步骤三，将获得的MM116无菌外植体接种MS6BA06MG/LIBA01MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX的培养基中进行继代培养，每升附加30G蔗糖，8G琼脂；说明书CN104067942A2/5页40008步骤四，选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/。
10、L生根培养基中进行生根培养；0009步骤五，当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。0010进一步，在步骤五中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。待生根苗抽生出新芽之后即可移出遮阴网。0011本发明提供的苹果砧木MM116组培快繁的方法，通过采用培养基为MS6BA05MG/LIB。
11、A01MGPVP500MG/L的培养基初代培养，成活率为4138，有利于MM116组培苗的建立；采用MS6BA06MG/LIBA01MG/L处理的继代培养，扩繁系数高达546；采用生根培养基1/2MSIBA09MG/L的生根培养且生根率高达910用纯锯末进行炼苗移栽成活率高达90；重复的对MM116品种进行继代培养，生根培养和移栽能够在较短的时间内实现了苹果砧木MM116无病毒苗木的组培快繁。通过组织培养技术不仅保证了较高的成活率，而且也保留了砧木的优良特性，为苹果产业的发展和进一步扩大提供了便捷的方法和途径。附图说明0012图1是本发明实施例提供的苹果砧木MM116组培快繁的方法流程图。具体。
12、实施方式0013为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。0014下面结合附图及具体实施例对本发明的应用原理作进一步描述。0015如图1所示，本发明实施例的苹果砧木MM116组培快繁的方法包括以下步骤0016S101以苹果砧木MM116为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培，每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理。
13、8S，01升汞处理7MIN；0017S102进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MGPVP聚乙烯吡咯烷酮500MG/L的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养；0018S103将获得的MM116无菌外植体接种最优培养基处理M14，即MS6BA06MG/LIBA01MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX的培养基中进行继代培养，每升附加30G蔗糖，8G琼脂；0019S104选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM，生长时间为20天的。
14、芽子，说明书CN104067942A3/5页5接种于1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L生根培养基中进行生根培养；0020S105当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后用纯锯末移栽到的营养钵中。0021在步骤S105中，移栽苗的管理方式为移栽后将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。待生根苗抽生出新芽之后即可移出。
15、遮阴网。0022本发明的具体步骤如下0023步骤一，初代培养0024苹果砧木MM116为材料，选择生长健壮无病虫害的母树，于3月份取1年生枝条，放置25的温室内进行水培每升水含有30G蔗糖，每隔3D换一次水并剪掉旧剪口，当水培的一年生枝条上的芽抽生为1520CM时，剪取嫩芽，去除展开叶片，在自来水下冲洗68H，用75酒精处理8S，01升汞处理7MIN，进行消毒处理后，用超声波清洗机清洗3MIN，再用无菌水冲洗34次，将处理好的嫩芽接种到MS6BA05MG/LIBA01MG/L不同浓度处理0、03、05、07、10G/L的聚乙烯吡咯烷酮PVP的培养基中进行培养，每升培养基附加30G蔗糖，8G琼脂。
16、，每个三角瓶接3个芽，每处理15瓶，然后放置在光照16H/D、光照2000LUX，26条件下进行培养，14D后分别调查污染率、褐化率、成活率，得出MM116的初代培养是最适宜的培养基为MS6BA05MG/LIBA01MGPVP500MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L；0025步骤二，继代培养0026将获得的无菌外植体接种到含有不同浓度6BA行继代培养，每升附加30G蔗糖，8G琼脂，每瓶3株，每个处理10瓶，重复3次，MM116的最优培养基为，即MS6BA06MG/LIBA01MG/L琼脂8G/L，光照2000LUX；0027步骤三，生根培养0028选择继代培养获得的生长健壮，高度大于15CM。
17、的植株，生长时间为20天的芽子，接种于1/2MS不同浓度IBA处理0、08、09、10、11MG/L的生根培养中进行生根培养，每瓶接种3个，每个处理10瓶，重复3次，得到MM116最适宜的生根培养基为1/2MSIBA09MG/L蔗糖30G/L，琼脂8G/L；0029步骤四，炼苗移栽0030当组培苗根长度达到2CM后，移到室外遮阴炼苗1012天左右，然后将培养容器瓶口打开，自然光下进行开瓶炼苗24天后，将生根苗从培养基中取出，放入浓度为01多菌灵溶液中浸泡5MIN，并把根部多余的培养基清洗干净，最后用清水冲洗23次，然后移栽到容量相同的不同基质处理纯锯末、锯末基质、纯基质、基质珍珠岩的营养钵中，。
18、移栽苗的管理方式为将生根苗在遮阴网下进行管理，第一周采用浓度为01多菌灵溶液进行喷灌，第二周每天用水喷灌一次，保持基质湿润透气。于14天后统计炼苗移栽成活率，得出用纯锯末的炼苗移栽成活率最好。0031通过以下的实验和数据对本发明的原理做进一步的说明00321、参考表1不同浓度PVP处理对外植体生长的影响；说明书CN104067942A4/5页60033表1不同浓度PVP处理对外植体生长的影响00340035注同列数相同字母表示差异不显著P005，不同字母表示差异显著P005。数据为MEANSE平均值标准误；下同。00362、不同6BA浓度处理对MM116继代培养的影响0037表2不同6BA浓度。
19、对MM116继代培养的影响0038基本培养基6BAMG/LIBAMG/L扩繁系数MS001124007CMS030112008CMS0401229032BMS0501394012ABMS0601546031A00393、不同IBA浓度处理MM116生根的影响0040表3不同IBA浓度处理MM116生根的影响004100424不同炼苗基质对生根苗生长的影响说明书CN104067942A5/5页70043表4不同栽培基质处理对移栽苗生长的影响0044基质处理MM116移栽成活率锯末9000532A锯末基质8250233B基质7250342C基质珍珠岩7750233BC0045以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。说明书CN104067942A1/1页8图1说明书附图CN104067942A。