《一种抗感染药物的检测方法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《一种抗感染药物的检测方法.pdf（22页珍藏版）》请在专利查询网上搜索。
1、(10)申请公布号 CN 103630648 A (43)申请公布日 2014.03.12 CN 103630648 A (21)申请号 201310480945.3 (22)申请日 2013.10.15 G01N 30/90(2006.01) G01N 30/88(2006.01) G01N 30/06(2006.01) (71)申请人 滨州医学院附属医院 地址 256600 山东省滨州市黄河二路 661 号 (72)发明人 丁长玲 崔俊凤 高华 赵永德 丁召兴 胡丽敏 (74)专利代理机构 济南舜源专利事务所有限公 司 37205 代理人 侯绪军 (54) 发明名称 一种抗感染药物的检测方。
2、法 (57) 摘要 本发明提供了一种抗感染药物的检测方法， 包括黄芩的鉴别， 还包括黄连的鉴别、 黄柏的鉴 别、 冰片的鉴别、 乙醇含量的检测、 黄芩含量的测 定和黄连和黄柏含量的测定， 这种抗感染药物的 检测方法， 采用气相色谱仪对复方三黄酊的乙醇 含量进行测定， 同时采用薄层色谱和高效液相色 谱仪进行各组份的鉴别和含量测定。 测定准确， 切 实保证了制剂的质量， 改变了药品质量无标准的 现状， 确保药物有效成分在合格范围， 从而保证了 患者用药安全、 有效。 (51)Int.Cl. 权利要求书 3 页 说明书 10 页 附图 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申。
3、请 权利要求书3页 说明书10页 附图8页 (10)申请公布号 CN 103630648 A CN 103630648 A 1/3 页 2 1. 一种抗感染药物的检测方法， 包括黄芩的鉴别， 其特征在于， 所述的抗感染药物是由 如下方法制备的， 原料药物的配比为， 黄连 90110 重量份、 黄柏 90110 重量份、 黄芩 90110重量份、 冰片46重量份 ； 按配比分别称取各原料药物， 将黄连、 黄柏、 黄芩研成粗 粉后， 按每 100g 粗粉加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液 250ml-300ml 的比例， 向粗粉 中加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液， 并搅拌均匀， 使。
4、粗粉充分膨胀， 然后将膨胀后的 粗粉装入渗漉筒内， 按每 100g 粗粉加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液 450-500ml 的比 例， 缓缓加入体积百分比浓度为50%的乙醇溶液， 待粗粉内的空气排出， 并有1822ml的乙 醇溶液从渗漉筒上的放料阀流出后， 关闭放料阀、 盖上渗漉筒， 浸渍 4650 小时， 用渗漉法 缓慢渗漉， 收集初漉液和续滤液， 静置、 滤过后成滤液， 加入冰片， 制成混合液， 用体积百分 比浓度为50%的乙醇溶液， 将每100g粗粉获得的滤液加入冰片制成的混合液的体积调整至 1000ml， 搅拌均匀， 分装， 制成抗感染药物 ； 所述的检测方法是， （1） 、。
5、 黄连的鉴别 供试品溶液的制备 ： 取上述方法制备的抗感染药物 10ml， 滤过， 滤液挥干， 残渣加甲醇 1ml 使其溶解， 作为供试品溶液 ； 对照药材溶液的制备 ： 取黄连对照药材 （购自中国药品生物制品检定所） 0.1g， 加甲醇 10ml， 超声处理 30 分钟， 滤过， 滤液浓缩至 2ml， 作为对照药材溶液 ； 对照品溶液的制备 ： 取盐酸小檗碱对照品 （购自中国药品生物制品检定所） 5.0mg， 加甲 醇 10ml， 制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 薄层板 ： 硅胶 G 薄层板 （TLC Silica gel 60， 50 Glass plates。
6、 1020cm， 德国默克公 司生产） ； 展开剂 ： 甲苯异丙醇乙酸乙酯甲醇水 （6:1.5:3:1.5:0.3） ， 置于氨蒸气饱和 的展开缸中 ； 点样量 ： 吸取上述溶液各 2l ； 展开条件 ： 温度 26 、 相对湿度 62 ； 检视 ： 紫外灯 （365nm） 下 ； 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上， 显相同的黄色荧 光斑点 ； （2） 、 黄柏的鉴别 供试品溶液的制备 ： 取上述方法制备的抗感染药物 10ml， 滤过， 滤液挥干， 残渣加体积 百分比浓度为 1% 的醋酸甲醇溶液 1ml 使其溶解， 作为供试品溶液 ； 对照药材溶液的制备 ： 。
7、取黄柏对照药材 （购自中国药品生物制品检定所） 0.2g， 加体积 百分比浓度为 1% 的醋酸甲醇溶液 20ml， 超声处理 20 分钟， 滤过， 滤液浓缩至 2ml 作为对照 药材溶液 ； 薄层板 ： 硅胶 G 薄层板 （TLC Silica gel 60， 50 Glass plates 1020cm， 德国默克公 司生产） ； 展开剂 ： 三氯甲烷甲醇水 （30:15:4） 下层溶液， 置于氨蒸气饱和的展开缸中 ； 点样量 ： 吸取供试品溶液、 对照药材溶液各 2l ； 展开条件 ： 温度 26 、 相对湿度 62 ； 权 利 要 求 书 CN 103630648 A 2 2/3 页 3。
8、 检视 ： 紫外灯 （365nm） 下 ； 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同的黄色荧光斑点 ； （3） 冰片的鉴别 供试品溶液的制备 ： 取上述方法制备的抗感染药物 10ml， 滤过， 滤液挥干， 残渣加乙酸 乙酯 1ml 使其溶解， 作为供试品溶液 ； 对照品溶液的制备 ： 取冰片对照品 （购自中国药品生物制品检定所） 5mg， 加乙酸乙酯 10ml 制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液作为对照品溶液 ； 薄层板 ： 硅胶 G 薄层板 （TLC Silica gel 60， 50 Glass plates 1020cm， 德国默克公 司生产） ； 展开剂 ：。
9、 苯乙酸乙酯 （19:1） ； 点样量 ： 吸取上述溶液各 5l ； 展开条件 ： 温度 26 、 相对湿度 62 ； 显色剂 ： 将 1g 香草醛溶于 100ml 硫酸溶液中获得的香草醛硫酸溶液 ； 检视 ： 日光下 ； 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的暗红色斑点 ； （4） 乙醇含量的检测 仪器与试药 ： Agilent6890N 气相色谱仪， 乙醇和正丙醇为色谱纯 ； 色谱条件与系统适用性试验 ： 检测器 ： 火焰离子化检测器， 色谱柱 ： HP INNOWax Polyethlene Glycol， 产品号 ： 19091N 133， 内径 ： 250.。
10、00m， 长度 ： 30.0m， 液膜厚度 ： 0.25m ； 起始温度为 80， 维持 7 分钟， 再以每分钟 10的速率升温至 110 ； 进样口温度 ： 190 ； 检测器温度 ： 220， 理论板数按正丙醇峰计算不低于 8000， 乙醇峰与正丙醇峰的分 离度大于 2.0， 分流比 ： 20:1 ； 校正因子的测定 ： 精密量取恒温至20的无水乙醇4ml、 5ml、 6ml， 分别置于100ml量瓶 中， 分别精密加入恒温至 20的正丙醇 （内标物质） 5ml， 用水稀释至刻度， 摇匀， 作为对照品 溶液 ； 取上述三种溶液 1l， 注入液相色谱仪， 分别连续进样 3 次， 测定峰面积 。
11、； 经计算， 得 到校正因子 ； 供试品溶液的制备 ： 精密量取恒温至20的供试品10ml， 置于100ml量瓶中， 精密加入 恒温至 20的正丙醇 5ml， 用水稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液作为供试品溶液 ； 取 1l 续滤液注入气相色谱仪， 测定， 即得乙醇含量 ； （5） 黄芩含量的测定 仪器 ： Agilent1200 系列高效液相色谱仪 ； 色谱柱 ： Inertex C18 5u 2504.6mm， 甲醇为色谱纯， 黄芩苷对照品 （购自中国药 品生物制品检定所， 供含量测定用， 含量以质量百分比浓度计为 94.0%） ； 色谱条件 ： 选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ；。
12、 甲醇 0.2mol/L 磷酸溶液 （43 57） 为流动相 ； 检测波长 280nm， 理论板数以黄芩苷峰计不少于 3000， 柱温 ： 30， 流 速 ： 1.0m/lmin， 进样量 ： 5l ； 对照品溶液的制备 ： 精密称取黄芩苷对照品 7.30mg 和 6.33mg （含量以质量百分比浓度 计为 94.0%） ， 分别置于 100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 即得 （对照品溶液浓 度分别为 0.0686mg/ml 和 0.05950mg/ml） ； 权 利 要 求 书 CN 103630648 A 3 3/3 页 4 供试品溶液的制备 ： 精密量取上述方法制备的。
13、抗感染药物 6ml， 置于 25ml 容量瓶中， 加 入甲醇并稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得 ； 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得 ； （6） 黄连和黄柏含量的测定 仪 器 与 试 药 ： Agilent1200 系 列 高 效 液 相 色 谱 仪， 色 谱 柱 ： Inertex C18 5u 2504.6mm， 乙腈为色谱纯 （德国默克公司生产） ， 盐酸小檗碱对照品 （购自中国药品生物制 品检定所， 供含量测定用， 含量以质量百分比浓度计为 86.8%） ； 色谱条件 ： 选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 乙腈。
14、 0.05mol/L 磷酸二氢钾 （用磷 酸调 pH 值至 3.0） （30 70） 为流动相 ； 检测波长 :345 nm， 理论板数以盐酸小檗碱峰计不 少于 5000， 柱温 ： 30， 流速 ： 1.0m/lmin ； 对照品溶液的制备 ： 精密称取盐酸小檗碱对照品 13.08mg 和 11.41mg （含量以质量百分 比浓度计为86.8%） ， 分别置于50ml量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 精密量取10ml 置于 100ml 量瓶中， 加甲醇稀释至刻度摇匀， 过滤， 即得 （对照品溶液浓度为 ： 0.0227mg/ml 和 0.0198mg/ml） ； 供试品溶液的制备 。
15、： 精密量取上述方法制备的抗感染药物 1.20ml， 置于蒸发皿中， 水 浴蒸干， 用甲醇分次溶解转移至 50ml 容量瓶中， 加入甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤 液， 即得 ； 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 权 利 要 求 书 CN 103630648 A 4 1/10 页 5 一种抗感染药物的检测方法 技术领域 0001 本发明提供了一种药物的检测方法， 尤其是一种抗感染药物的检测方法。 背景技术 0002 急性创伤感染、 慢性皮肤溃疡、 褥疮、 烧烫伤是外科常见的疾病。传统的治疗方法 是采取清洁换药， 即使用抗菌消。
16、毒剂 （碘制剂， 乙醇， 醋酸氯己定等） 处理创面， 然后无菌包 扎 ； 治疗慢性皮肤溃疡即在上述治疗的基础上配合红外线照射。由于抗菌消毒药没有直接 抗炎消肿作用， 对改善创面红肿、 渗出等效果较差。采用复方三黄酊局部湿敷治疗， 使药物 直接持续地作用于患部， 药物以透皮给药的方式迅速渗透， 可快速发挥其抗菌消炎、 止痛消 肿、 祛腐生肌功效， 并及时缓解分泌物对组织的损害， 使患部组织有了体液连续性更新的条 件。且随着辅料的更换， 将细菌及坏死组织清除， 避免了细菌内、 外毒素和代谢产物对组织 的滞留性破坏， 为创面创造了清洁、 无菌的良性环境。复方三黄酊具有清热、 解毒、 抗菌消 炎， 消。
17、肿、 祛腐生肌、 清凉止痛作用， 可加速创面的愈合， 具有很好的临床疗效。 0003 但由于该药物制备周期长， 难以控制主要成分的含量， 且提取溶媒乙醇的含量难 以测定， 原质量标准只能对其中一种主要成分黄芩苷进行鉴别 ； 主要成分的含量测定标准 没有建立， 无法保证药物的质量， 因而临床疗效不一。 发明内容 0004 本发明所要解决的技术问题是， 提供一种抗感染药物的检测方法， 以有效检测药 物的质量， 保证疗效。 0005 本发明是这样实现的， 一种抗感染药物的检测方法， 包括黄芩的鉴别， 所述的抗感 染药物是由如下方法制备的， 原料药物的配比为， 黄连 90110 重量份、 黄柏 901。
18、10 重 量份、 黄芩 90110 重量份、 冰片 46 重量份 ； 按配比分别称取各原料药物， 将黄连、 黄柏、 黄芩研成粗粉后， 按每 100g 粗粉加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液 250ml-300ml 的 比例， 向粗粉中加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液， 并搅拌均匀， 使粗粉充分膨胀， 然 后将膨胀后的粗粉装入渗漉筒内， 按每 100g 粗粉加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液 450-500ml 的比例， 缓缓加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液， 待粗粉内的空气排出， 并 有 1822ml 的乙醇溶液从渗漉筒上的放料阀流出后， 关闭放料阀、 盖上渗漉筒，。
19、 浸渍 46 50 小时， 用渗漉法缓慢渗漉， 收集初漉液和续滤液， 静置、 滤过后成滤液， 加入冰片， 制成混 合液， 用体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液， 将每 100g 粗粉获得的滤液加入冰片制成的混 合液的体积调整至 1000ml， 搅拌均匀， 分装， 制成抗感染药物 ； 所述的检测方法是， （1） 、 黄连的鉴别 供试品溶液的制备 ： 取上述方法制备的抗感染药物 10ml， 滤过， 滤液挥干， 残渣加甲醇 1ml 使其溶解， 作为供试品溶液 ； 对照药材溶液的制备 ： 取黄连对照药材 （购自中国药品生物制品检定所） 0.1g， 加甲醇 说 明 书 CN 103630648 A 5。
20、 2/10 页 6 10ml， 超声处理 30 分钟， 滤过， 滤液浓缩至 2ml， 作为对照药材溶液 ； 对照品溶液的制备 ： 取盐酸小檗碱对照品 （购自中国药品生物制品检定所） 5.0mg， 加甲 醇 10ml， 制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液， 作为对照品溶液 ； 薄层板 ： 硅胶 G 薄层板 （TLC Silica gel 60， 50 Glass plates 1020cm， 德国默克公 司生产） ； 展开剂 ： 甲苯异丙醇乙酸乙酯甲醇水 （6:1.5:3:1.5:0.3） ， 置于氨蒸气饱和 的展开缸中 ； 点样量 ： 吸取上述溶液各 2l ； 展开条件 ： 温度 26 、。
21、 相对湿度 62 ； 检视 ： 紫外灯 （365nm） 下 ； 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱和对照药材色谱相应的位置上， 显相同的黄色荧 光斑点 ； （2） 、 黄柏的鉴别 供试品溶液的制备 ： 取上述方法制备的抗感染药物 10ml， 滤过， 滤液挥干， 残渣加体积 百分比浓度为 1% 的醋酸甲醇溶液 1ml 使其溶解， 作为供试品溶液 ； 对照药材溶液的制备 ： 取黄柏对照药材 （购自中国药品生物制品检定所） 0.2g， 加体积 百分比浓度为 1% 的醋酸甲醇溶液 20ml， 超声处理 20 分钟， 滤过， 滤液浓缩至 2ml 作为对照 药材溶液 ； 薄层板 ： 硅胶 G 薄层板。
22、 （TLC Silica gel 60， 50 Glass plates 1020cm， 德国默克公 司生产） ； 展开剂 ： 三氯甲烷甲醇水 （30:15:4） 下层溶液， 置于氨蒸气饱和的展开缸中 ； 点样量 ： 吸取供试品溶液、 对照药材溶液各 2l ； 展开条件 ： 温度 26 、 相对湿度 62 ； 检视 ： 紫外灯 （365nm） 下 ； 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照药材色谱相应的位置上， 显相同的黄色荧光斑点 ； （3） 冰片的鉴别 供试品溶液的制备 ： 取上述方法制备的抗感染药物 10ml， 滤过， 滤液挥干， 残渣加乙酸 乙酯 1ml 使其溶解， 作为供试品溶液 ； 对。
23、照品溶液的制备 ： 取冰片对照品 （购自中国药品生物制品检定所） 5mg， 加乙酸乙酯 10ml 制成每 1ml 含 0.5mg 的溶液作为对照品溶液 ； 薄层板 ： 硅胶 G 薄层板 （TLC Silica gel 60， 50 Glass plates 1020cm， 德国默克公 司生产） ； 展开剂 ： 苯乙酸乙酯 （19:1） ； 点样量 ： 吸取上述溶液各 5l ； 展开条件 ： 温度 26 、 相对湿度 62 ； 显色剂 ： 将 1g 香草醛溶于 100ml 硫酸溶液中获得的香草醛硫酸溶液 ； 检视 ： 日光下 ； 结果 ： 供试品色谱中， 在与对照品色谱相应的位置上， 显相同的暗。
24、红色斑点 ； （4） 乙醇含量的检测 仪器与试药 ： Agilent6890N 气相色谱仪， 乙醇和正丙醇为色谱纯 ； 说 明 书 CN 103630648 A 6 3/10 页 7 色谱条件与系统适用性试验 ： 检测器 ： 火焰离子化检测器， 色谱柱 ： HP INNOWax Polyethlene Glycol， 产品号 ： 19091N 133， 内径 ： 250.00m， 长度 ： 30.0m， 液膜厚度 ： 0.25m ； 起始温度为 80， 维持 7 分钟， 再以每分钟 10的速率升温至 110 ； 进样口温度 ： 190 ； 检测器温度 ： 220， 理论板数按正丙醇峰计算不低于。
25、 8000， 乙醇峰与正丙醇峰的分 离度大于 2.0， 分流比 ： 20:1 ； 校正因子的测定 ： 精密量取恒温至20的无水乙醇4ml、 5ml、 6ml， 分别置于100ml量瓶 中， 分别精密加入恒温至 20的正丙醇 （内标物质） 5ml， 用水稀释至刻度， 摇匀， 作为对照品 溶液 ； 取上述三种溶液 1l， 注入液相色谱仪， 分别连续进样 3 次， 测定峰面积 ； 经计算， 得 到校正因子 ； 供试品溶液的制备 ： 精密量取恒温至20的供试品10ml， 置于100ml量瓶中， 精密加入 恒温至 20的正丙醇 5ml， 用水稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液作为供试品溶液 ； 取 。
26、1l 续滤液注入气相色谱仪， 测定， 即得乙醇含量 ； （5） 黄芩含量的测定 仪器 ： Agilent1200 系列高效液相色谱仪 ； 色谱柱 ： Inertex C18 5u 2504.6mm， 甲醇为色谱纯， 黄芩苷对照品 （购自中国药 品生物制品检定所， 供含量测定用， 含量以质量百分比浓度计为 94.0%） ； 色谱条件 ： 选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 甲醇 0.2mol/L 磷酸溶液 （43 57） 为流动相 ； 检测波长 280nm， 理论板数以黄芩苷峰计不少于 3000， 柱温 ： 30， 流 速 ： 1.0m/lmin， 进样量 ： 5l ； 对照品溶液的制备 ： 。
27、精密称取黄芩苷对照品 7.30mg 和 6.33mg （含量以质量百分比浓度 计为 94.0%） ， 分别置于 100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 即得 （对照品溶液浓 度分别为 0.0686mg/ml 和 0.05950mg/ml） ； 供试品溶液的制备 ： 精密量取上述方法制备的抗感染药物 6ml， 置于 25ml 容量瓶中， 加 入甲醇并稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得 ； 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各 5l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得 ； （6） 黄连和黄柏含量的测定 仪 器 与 试 药 ： Agilent1200 系 列 。
28、高 效 液 相 色 谱 仪， 色 谱 柱 ： Inertex C18 5u 2504.6mm， 乙腈为色谱纯 （德国默克公司生产） ， 盐酸小檗碱对照品 （购自中国药品生物制 品检定所， 供含量测定用， 含量以质量百分比浓度计为 86.8%） ； 色谱条件 ： 选用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂 ； 乙腈 0.05mol/L 磷酸二氢钾 （用磷 酸调 pH 值至 3.0） （30 70） 为流动相 ； 检测波长 :345 nm， 理论板数以盐酸小檗碱峰计不 少于 5000， 柱温 ： 30， 流速 ： 1.0m/lmin ； 对照品溶液的制备 ： 精密称取盐酸小檗碱对照品 13.08mg 和 1。
29、1.41mg （含量以质量百分 比浓度计为86.8%） ， 分别置于50ml量瓶中， 加甲醇溶解并稀释至刻度， 摇匀， 精密量取10ml 置于 100ml 量瓶中， 加甲醇稀释至刻度摇匀， 过滤， 即得 （对照品溶液浓度为 ： 0.0227mg/ml 和 0.0198mg/ml） ； 供试品溶液的制备 ： 精密量取上述方法制备的抗感染药物 1.20ml， 置于蒸发皿中， 水 说 明 书 CN 103630648 A 7 4/10 页 8 浴蒸干， 用甲醇分次溶解转移至 50ml 容量瓶中， 加入甲醇稀释至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤 液， 即得 ； 测定法 ： 分别精密吸取对照品溶液与供试品。
30、溶液各 5l， 注入液相色谱仪， 测定， 即 得。 0006 这种抗感染药物的检测方法， 采用气相色谱仪对复方三黄酊的乙醇含量进行测 定， 同时采用薄层色谱和高效液相色谱仪进行各组份的鉴别和含量测定。 测定准确， 切实保 证了制剂的质量， 改变了药品质量无标准的现状， 确保药物有效成分在合格范围， 从而保证 了患者用药安全、 有效。 附图说明 0007 图1是黄连薄层色谱图。 图中， 2、 3为供试品， 1为黄连对照药材， 4为盐酸小檗碱。 0008 图 2 是黄柏薄层色谱图。图中， 1 为黄柏对照药材 ； 2、 3、 4 为供试品。 0009 图 3 是冰片薄层色谱图。图中， 1 为供试品 。
31、； 2 为冰片对照品。 0010 图 4 是乙醇含量对照品溶液气相色谱图。 0011 图 5 是供试品溶液气相色谱图。 0012 图 6 是黄芩苷对照品 HPLC 色谱图。 0013 图 7 是供试品 HPLC 色谱图。 0014 图 8 是黄芩苷标准曲线图。 0015 图 9 是盐酸小檗碱对照品 HPLC 色谱图。 0016 图 10 是供试品 HPLC 色谱图。 0017 图 11 是盐酸小檗碱标准曲线图。 具体实施方式 0018 下面进一步说明本发明。 0019 在抗感染药物的制备中， 黄连、 黄柏、 黄芩研成的粗粉的粗细度为过 10 目筛。 0020 在抗感染药物的制备中， 渗漉速度等。
32、其他操作工艺与现有的单渗漉法相同， 不再 详述。 0021 在抗感染药物的制备中，“按每 100g 粗粉加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液 450-500ml 的比例， 缓缓加入体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液， ” 中， 粗粉的重量以加入乙 醇溶液前计。同样，“用体积百分比浓度为 50% 的乙醇溶液将每 100g 粗粉获得的滤液加入 冰片制成的混合液的体积调整至 1000ml， ” 粗粉的重量也以加入乙醇溶液前计。 0022 所述的色谱柱 HP INNOWax Polyethlene Glycol， 为 HP-INNOWAX(Crosslinkws Polyethlene Glyc。
33、ol交链聚乙二醇)。 Agilent6890N气相色谱仪又称为安捷伦6890N气相 色谱仪。 0023 黄芩的鉴别方法是， 取上述方法制备的抗感染药物 5ml， 蒸干， 残渣加甲醇 1ml 使 其溶解， 作为供试品溶液。另取黄芩苷对照品， 加甲醇制成每 1ml 含 1 g 的溶液， 作为对 照品溶液。按照薄层色谱法 （中国药典 2010 年版一部附录 B） 试验， 吸取上述两种溶液 各 3l， 分别点于同一聚酰胺薄膜上， 以醋酸为展开剂， 展开， 取出， 晾干， 喷以将 1g 三氯化 铁溶于 100ml 乙醇溶液中获得的三氯化铁乙醇溶液。供试品色谱中， 在与对照品色谱相应 说 明 书 CN 1。
34、03630648 A 8 5/10 页 9 的位置上， 显相同颜色的斑点。 0024 在乙醇含量的检测、 黄芩含量的测定、 黄连和黄柏含量的测定中， 按选定的色谱条 件进行试验， 色谱峰分离条件好。 0025 在进行所述的乙醇含量的检测中， 校正因子的测定时， 实际测定对照品溶液的峰 面积及校正因子得到表 1 所示结果。 0026 表 1 乙醇含量测定对照品溶液的峰面积及校正因子 在进行所述的乙醇含量的检测中， 取1l注入气相色谱仪， 进行实际测定时， 测定6批 样品， 得到表 2 所示结果。 0027 表 2 6 批样品乙醇含量测定结果 根据配方及工艺流程， 6批含量测定在47.9%53.8。
35、%， 结果平均值为51.7%， 因此确定 乙醇含量为 45.0% 55.0% 为合格标准。 0028 在黄芩含量的测定中， 可进行方法学考察。 说 明 书 CN 103630648 A 9 6/10 页 10 0029 1、 线性关系的考察 对照品溶液的制备 ： 精密称取黄芩苷对照品 7.30mg， 置 100ml 量瓶中， 加甲醇溶解并稀 释至刻度， 摇匀， 作为对照品溶液 （对照品溶液浓度为 ： 0.06862mg/ml） 。 0030 分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液 1l、 2l、 4l、 6l、 8l， 10l 注入液 相色谱仪， 分别测定峰面积积分值。以对照品的进样量为横坐标， 峰。
36、面积积分值为纵坐标， 进行线性回归， 得回归方程为y = 3652.55866 x -2.06597 ， 相关系数r2=1。 结果见表3及 图 8。 0031 表 3 黄芩苷线性关系考察结果 试验结果表明， 黄芩苷在 0.06862 0.6862 之间进样量与峰面积积分值 呈良好的线性关系。 0032 2、 仪器精密度试验 精密吸取黄芩苷对照品溶液 （浓度 0.06862mg/ml） 5l， 注入液相色谱仪， 连续进样 6 次， 按上述测定方法进行测定， 计算 RSD。结果见表 4。 0033 表 4 仪器精密度试验结果 试验结果显示仪器精密度良好。 0034 3、 黄芩苷对照品稳定性试验 精。
37、密吸黄芩苷对照品溶液 （浓度 0.06862mg/ml） 5l， 注入液相色谱仪， 每隔一段时间 进样一次， 测定黄芩苷的峰面积积分值， 共考察 12 小时， 计算 RSD， 以观察样品溶液在检测 过程中待测成分的稳定性。结果见表 5。 0035 表 5 稳定性试验结果 试验结果表明供试品溶液在 12 小时内稳定性良好， 能够满足测定需要。 0036 4 、 重复性试验 说 明 书 CN 103630648 A 10 7/10 页 11 取上述方法制备的抗感染药物 （生产单位 ： 滨州医学院附属医院 ； 批号 ： 20120508） ， 按 照供试品溶液的制备方法， 平行制备 6 份样品， 按。
38、上述方法和条件进行测定， 计算每份的含 量。结果见表 6。 表 6 重复性试验结果 试验结果表明测定方法的重复性良好。 0037 5、 加样回收率试验 取已测知黄芩苷含量的样品 （生产单位 ： 滨州医学院附属医院 ； 批号 ： 20120508， 黄芩 苷含量 0.351mg/ml ） 3.00ml， 共取 6 份， 置 25ml 容量瓶中， 精密加入黄芩苷对照品储备液 （浓度为 0.111mg/ml） 10.00ml， 加入甲醇至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得。按上述测定 方法进行测定， 计算回收率。结果见表 7。 0038 表 7 加样回收率试验结果 试验结果表明测定方法的回收率。
39、良好。 6、 样品测定 按上述测定方法和条件， 对已生产的 6 批样品进行了测定， 测定结果见表 8。 0039 表 8 黄芩苷含量测定结果 说 明 书 CN 103630648 A 11 8/10 页 12 根据 6 批样品测定结果， 含黄芩以黄芩苷计不少于 0.30mg/ml 为合格标准。 0040 在黄连和黄柏含量的测定中， 也可进行方法学考察。 0041 1、 线性关系的考察 对照品溶液的制备 ： 精密称取盐酸小檗碱对照品 11.41mg， 置 50ml 量瓶中， 加甲醇溶解 并稀释至刻度， 摇匀， 精密量取 10ml， 置 100ml 量瓶中， 加甲醇稀释至刻度摇匀， 滤过 （对照 。
40、品溶液浓度为 ： 0.0198mg/ml） 作为对照品溶液。 0042 分别精密吸取上述黄芩苷对照品溶液 1l、 2l、 4l、 6l、 8l， 10l 注入液 相色谱仪， 分别测定峰面积积分值。以对照品的进样量为横坐标， 峰面积积分值为纵坐标， 进行线性回归， 得回归方程为 y = 10487.18694 x-9.51589 ， 相关系数 r2=0.99994。结果 见表 9 及图 11。 0043 表 9 盐酸小檗碱线性关系考察结果 试验结果表明， 盐酸小檗碱在 0.0198 0.198 之间的进样量与峰面积积分值呈 良好的线性关系。 0044 2、 仪器精密度试验 精密吸取盐酸小檗碱对照。
41、品溶液 （浓度 0.0198mg/ml） 5l， 注入液相色谱仪， 连续进样 6 次， 按上述测定方法进行测定， 计算 RSD。结果见表 10。 0045 表 10 仪器精密度试验结果 说 明 书 CN 103630648 A 12 9/10 页 13 试验结果显示仪器精密度良好。 0046 3、 盐酸小檗碱对照品稳定性试验 精密吸取盐酸小檗碱对照品溶液 （浓度 0.0227mg/ml） 5l， 注入液相色谱仪， 每隔一段 时间进样一次， 测定盐酸小檗碱的峰面积积分值， 共考察 12 小时， 计算 RSD， 以观察样品溶 液在检测过程中待测成分的稳定性。结果见表 11。 0047 表 11 稳。
42、定性试验结果 试验结果表明供试品溶液在 12 小时内稳定性良好， 能够满足测定需要。 0048 4、 重复性试验 取取上述方法制备的抗感染药物 （生产单位 ： 滨州医学院附属医院 ； 批号 ： 20120508） ， 按照供试品溶液的制备方法， 平行制备 6 份样品， 按上述方法和条件进行测定， 计算每份的 含量。结果见表 12。 0049 表 12 重复性实验结果 试验结果表明测定方法的重复性良好。 0050 5、 加样回收率试验 取已测知盐酸小檗碱含量的样品 （生产单位 ： 滨州医学院附属医院 ； 批号 ： 20111128， 黄芩苷含量 0.452mg/ml ） 0.500ml， 共取 。
43、6 份， 置 50ml 容量瓶中， 精密加入盐酸小檗碱对照 品溶液 （浓度为 0.198mg/ml） 2.00ml， 加入甲醇至刻度， 摇匀， 滤过， 取续滤液， 即得。按上述 测定方法进行测定， 计算回收率。结果见表 13。 说 明 书 CN 103630648 A 13 10/10 页 14 0051 表 13 加样回收率试验结果 试验结果表明测定方法的回收率良好。 6、 样品测定 按上述测定方法和条件， 对已生产的 6 批样品进行了测定， 测定结果见表 14。 0052 表 14 盐酸小檗碱含量测定结果 据 6 批样品测定结果， 含黄连和黄柏以盐酸小檗碱计不少于 0.40mg/ml 为合。
44、格标准。 说 明 书 CN 103630648 A 14 1/8 页 15 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 15 2/8 页 16 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 16 3/8 页 17 图 5 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 17 4/8 页 18 图 6 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 18 5/8 页 19 图 7 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 19 6/8 页 20 图 8 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 20 7/8 页 21 图 9 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 21 8/8 页 22 图 10 图 11 说 明 书 附 图 CN 103630648 A 22 。