一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103837620 A (43)申请公布日 2014.06.04 CN 103837620 A (21)申请号 201410105963.8 (22)申请日 2014.03.21 G01N 30/02(2006.01) (71)申请人 上海硕源健标生物医学科技有限公 司 地址 201203 上海市浦东新区蔡伦路 781 号 1206 室 (72)发明人 徐立旭 (54) 发明名称 一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的 方法 (57) 摘要 本发明涉及一种同时检测人体血浆中多种氨 基酸含量的方法， 所述检测方法包括以下步骤 ： 采取人体血浆， 并将血浆用甲醇进行脱蛋白。

2、， 得 到含有多种氨基酸的上清液 ； 将所得到的含有 多种氨基酸的上清液与衍生化试剂进行衍生化反 应， 生成有紫外吸收的衍生化产物 ； 对衍生化 产物采用高效液相法进行分析。该检测方法操作 简单， 可同时检测出人体血液中所含的多种氨基 酸， 具有高准确度和高灵敏度。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 13 页 附图 2 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书13页 附图2页 (10)申请公布号 CN 103837620 A CN 103837620 A 1/1 页 2 1. 一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在。

3、于 ： 所述多种氨基酸分 别为 ： 天冬氨酸、 谷氨酸、 天冬酰胺、 丝氨酸、 谷氨酰胺、 甘氨酸、 组氨酸、 瓜氨酸、 牛磺酸、 精 氨酸、 苏氨酸、 丙氨酸、 脯氨酸、 氯化铵、 酪氨酸、 缬氨酸、 蛋氨酸、 半胱氨酸、 异亮氨酸、 亮氨 酸、 苯丙氨酸、 色氨酸、 鸟氨酸以及赖氨酸中的一种或几种 ； 所述方法包括以下步骤 ： 采取人体血浆， 并将血浆用甲醇进行脱蛋白， 得到含有多种氨基酸的上清液 ； 将所得到的含有多种氨基酸的上清液与衍生化试剂进行衍生化反应， 生成有紫外吸 收的衍生化产物 ； 对衍生化产物采用高效液相法进行分析。 2. 根据权利要求 1 所述的同时检测人体血浆中多种氨基。

4、酸含量的方法， 其特征在于 ： 步骤中脱蛋白的具体过程为 ： 取人体血浆样品置于离心管中， 加入甲醇， 震荡混匀， 再用 12000r/m 的转速离心 5min， 并取上清液置于干净的离心管中， 该上清液即为步骤所述的 含有多种氨基酸的上清液。 3. 根据权利要求 1 或 2 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在 于 ： 步骤中衍生化反应的具体过程为 ： 向所述的含有多种氨基酸的上清液中加入三乙胺 溶液、 异硫氰酸苯酯溶液和内标溶液， 均匀混合， 室温下衍生 1h， 加入正己烷， 漩涡混匀， 静 置 10min， 取下层溶液过 0.2m 的滤膜， 进样分析， 以色谱峰面积内。

5、标法定量。 4. 根据权利要求 3 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在于 ： 所述三乙胺溶液为三乙胺乙腈溶液， 所述异硫氰酸苯酯溶液为异硫氰酸苯酯乙腈溶液， 所 述内标溶液为用 0.1mol/L 盐酸将内标物溶解并稀释为 50mol/L 的内标溶液。 5. 根据权利要求 4 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在于 ： 所述内标物为正亮氨酸。 6. 根据权利要求 2 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在于 ： 所述人体血浆样品与所加甲醇的体积比为 ： 1 3。 7. 根据权利要求 4 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其。

6、特征在于 ： 所述含有多种氨基酸的上清液、 三乙胺乙腈溶液、 异硫氰酸苯酯乙腈溶液以及内标溶液的 体积比为 ： 2 1 1 1。 8. 根据权利要求 1 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在于 ： 在用高效液相法进行分析中， 所用流动相包括流动相 A 和流动相 B ； 流速 0.8mL/min ； 检测 波长 ： 254nm。 9. 根据权利要求 8 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在于 ： 所述流动相 A 为 0.05醋酸钠溶液， 所述醋酸钠溶液是在醋酸钠中加水， 并用冰醋酸调 PH 至 6.35， 摇匀后用 0.45m 的滤膜过滤， 超声脱气 10。

7、min-15min。 10. 根据权利要求 8 所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其特征在于 ： 所述流动相 B 为分析纯的乙腈。 权 利 要 求 书 CN 103837620 A 2 1/13 页 3 一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法 技术领域 0001 本发明涉及化学分析检测领域， 尤其是一种操作简单、 检测成本低、 具有高度准确 性和高度灵敏的检测方法， 具体涉及一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法。 背景技术 0002 氨基酸是构成生物体蛋白质并同生命活动有关的最基本的物质， 是在生物体内构 成蛋白质分子的基本单位， 与生物的生命活动有着密切的关系。它在抗。

8、体内具有特殊的生 理功能， 是生物体内不可缺少的营养成分之一。 构成人体的最基本的物质， 有蛋白质、 脂类、 碳水化合物、 无机盐、 维生素、 水和食物纤维等。 作为构成蛋白质分子的基本单位的氨基酸， 无疑是构成人体最基本物质之一。 0003 蛋白质在机体内的消化和吸收式通过氨基酸来完成的 ： 作为机体内第一营养要素 的蛋白质， 它在食物营养中的作用是显而易见的， 它在人体内并不能直接被利用， 而是通过 变成氨基酸小分子被利用。 0004 生命的产生、 存在和消亡， 无一不与蛋白质有关， 正如恩格斯所说 ：“蛋白质是生命 的物质基础， 生命是蛋白质存在的一种形式。 ” 如果人体内缺少蛋白质， 。

9、轻者体质下降， 发育 迟缓， 抵抗力减弱， 贫血乏力， 重者形成水肿， 甚至危及生命。一旦失去了蛋白质， 生命也就 不复存在， 故有人称蛋白质为 “生命的载体” 。可以说， 它是生命的第一要素。 0005 蛋白质的基本单位是氨基酸。如果人体缺乏任何一种必需氨基酸， 就可导致生理 功能异常， 影响机体代谢的正常进行， 最后导致疾病。同样， 如果人体内缺乏某些非必需氨 基酸， 会产生机体代谢障碍。 精氨酸和瓜氨酸对形成尿素十分重要 ； 胱氨酸摄入不足就会引 起胰岛素减少， 血糖升高。又如创伤后胱氨酸和精氨酸的需要量大增， 如缺乏， 即使热能充 足仍不能顺利合成蛋白质。 总之， 氨基酸在人体内通过代。

10、谢可以发挥下列一些作用 ： 合成 组织蛋白质 ； 变成酸、 激素、 抗体、 肌酸等含氨物质 ； 转变为碳水化合物和脂肪 ； 氧化 成二氧化碳和水及尿素， 产生能量。因此， 氨基酸在人体中的存在， 不仅提供了合成蛋白质 的重要原料， 而且对于促进生长， 进行正常代谢、 维持生命提供了物质基础。如果人体缺乏 或减少其中某一种， 人体的正常生命代谢就会受到障碍， 甚至导致各种疾病的发生或生命 活动终止。由此可见， 氨基酸在人体生命活动中显得多么需要。 0006 目前国内外使用的检测方法有电化学法、 分光光度法、 高效液相色谱法、 毛细管电 泳法及气相色谱法等。高效液相色谱法是目前使用最为普遍的方法，。

11、 而高效液相色谱法中 的离子交换法和反相色谱法又是应用最广泛的两种。但目前的方法大多比较操作复杂。 发明内容 0007 本发明的目的是提供一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 该检测方 法操作简单， 可同时检测人体血浆中可能出现的 24 种氨基酸中的任意一种或几种或全部， 具有高准确度和高灵敏度。 0008 本发明的目的是通过以下技术方案来实现 ： 说 明 书 CN 103837620 A 3 2/13 页 4 0009 一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 所述多种氨基酸分别为 ： 天冬 氨酸、 谷氨酸、 天冬酰胺、 丝氨酸、 谷氨酰胺、 甘氨酸、 组氨酸、 瓜氨酸、 牛磺酸。

12、、 精氨酸、 苏氨 酸、 丙氨酸、 脯氨酸、 氯化铵、 酪氨酸、 缬氨酸、 蛋氨酸、 半胱氨酸、 异亮氨酸、 亮氨酸、 苯丙氨 酸、 色氨酸、 鸟氨酸以及赖氨酸中的一种或几种或全部 ； 所述方法包括以下步骤 ： 采取人 体血浆， 并将血浆用甲醇进行脱蛋白， 得到含有多种氨基酸的上清液 ； 将所得到的含有多 种氨基酸的上清液与衍生化试剂进行衍生化反应， 生成有紫外吸收的衍生化产物 ； 对衍 生化产物采用高效液相法进行分析。 0010 进一步地， 步骤中脱蛋白的具体过程为 ： 取人体血浆样品置于离心管中， 加入甲 醇， 震荡混匀， 再用 12000r/m 的转速离心 5min， 并取上清液置于干净。

13、的离心管中， 该上清液 即为步骤所述的含有多种氨基酸的上清液。 0011 进一步地， 步骤中衍生化反应的具体过程为 ： 向所述的含有多种氨基酸的上清 液中加入三乙胺溶液、 异硫氰酸苯酯溶液和内标溶液， 均匀混合， 室温下衍生 1h， 加入正己 烷， 漩涡混匀， 静置 10min， 取下层溶液过 0.2m 的滤膜， 进样分析， 以色谱峰面积内标法定 量。 0012 进一步地， 所述三乙胺溶液为三乙胺乙腈溶液， 所述异硫氰酸苯酯溶液为异硫氰 酸苯酯乙腈溶液， 所述内标溶液为用0.1mol/L盐酸将内标物溶解并稀释为50mol/L的内 标溶液。 0013 进一步地， 所述内标物为正亮氨酸 (Nle)。

14、。 0014 进一步地， 所述人体血浆样品与所加甲醇的体积比为 ： 1 3。 0015 进一步地， 所述含有多种氨基酸的上清液、 三乙胺乙腈溶液、 异硫氰酸苯酯乙腈溶 液以及内标溶液的体积比为 ： 2 1 1 1。 0016 进一步地， 在用高效液相法进行分析中， 所用流动相包括流动相 A 和流动相 B ； 流 速 0.8mL/min ； 检测波长 ： 254nm。 0017 进一步地， 所述流动相 A 为 0.05醋酸钠溶液， 所述醋酸钠溶液是在醋酸钠中加 水， 并用冰醋酸调 PH 至 6.35， 摇匀后用 0.45m 的滤膜过滤， 超声脱气 10min-15min。 0018 进一步地， 。

15、所述流动相 B 为分析纯的乙腈。 0019 本发明提供了一种同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法， 其主要具有的有 益效果为 ： 本发明所述的方法能够同时检测出血液中可能存在的 24 种氨基酸中的任何一 种或几种或全部， 此方法操作简单、 具有高准确度和高灵敏度， 在临床上具有重要的应用价 值。 附图说明 0020 下面根据附图对本发明作进一步详细说明。 0021 图 1 是本发明实施例所述的以 0.1mol/L 的盐酸溶液作为阴性对照所得的高效液 相色谱图 ； 0022 图 2 是本发明实施例所述的含 24 种氨基酸的标准溶液的高效液相色谱图 ； 0023 图 3 是本发明实施例所述的正常。

16、人体血浆液中 24 种氨基酸的高效液相色谱图 ； 0024 图 4 是本发明实施例所述的苯丙氨酸异常者血浆中 24 种氨基酸的高效液相色谱 图 ； 说 明 书 CN 103837620 A 4 3/13 页 5 0025 在图 1 4 中 ： 1、 天冬氨酸 (asp) ； 2、 谷氨酸 (glu) ； 3、 天冬酰胺 (asn) ； 4、 丝氨 酸 (ser) ； 5、 谷氨酰胺 (Gln) ； 6、 甘氨酸 (gly) ； 7、 组氨酸 (his) ； 8、 瓜氨酸 (cit) ； 9、 牛磺酸 (tau) ； 10、 精氨酸(arg) ； 11、 苏氨酸(thr) ； 12、 丙氨酸(a。

17、la) ； 13、 脯氨酸(pro) ； 14、 氯化铵 (NH4Cl) ； 15、 酪氨酸(tyr) ； 16、 缬氨酸(val) ； 17、 蛋氨酸(met) ； 18、 半胱氨酸(cys) ； 19、 异 亮氨酸 (ile) ； 20、 亮氨酸 (leu) ； 21、 苯丙氨酸 (phe) ； 22、 色氨酸 (trp) ； 23、 鸟氨酸 (orn) ； 24、 赖氨酸 (lys)。 具体实施方式 0026 如图 1-4 所示， 本发明所述的所有 24 种氨基酸均指下述 24 种， 且其分别对应附图 标记为 ： 1、 天冬氨酸(asp) ； 2、 谷氨酸(glu) ； 3、 天冬酰胺(。

18、asn) ； 4、 丝氨酸(ser) ； 5、 谷氨酰 胺 (Gln) ； 6、 甘氨酸 (gly) ； 7、 组氨酸 (his) ； 8、 瓜氨酸 (cit) ； 9、 牛磺酸 (tau) ； 10、 精氨酸 (arg) ； 11、 苏氨酸 (thr) ； 12、 丙氨酸 (ala) ； 13、 脯氨酸 (pro) ； 14、 氯化铵 (NH4Cl) ； 15、 酪 氨酸 (tyr) ； 16、 缬氨酸 (val) ； 17、 蛋氨酸 (met) ； 18、 半胱氨酸 (cys) ； 19、 异亮氨酸 (ile) ； 20、 亮氨酸(leu) ； 21、 正亮氨酸(Nle， 为内标， 不属于。

19、本发明所述的24种氨基酸) ； 22、 苯丙 氨酸 (phe) ； 23、 色氨酸 (trp) ； 24、 鸟氨酸 (orn) ； 25、 赖氨酸 (lys)。 0027 本发明所述的同时检测人体血浆中多种氨基酸含量的方法具体包括以下步骤 ： 采取人体血浆， 并将血浆用甲醇进行脱蛋白， 即取人体血浆 200L 的样品置于 1.5mL 的离 心管中， 加入600L的甲醇， 震荡混匀， 再用12000r/m的转速离心5min ； 取步骤a中所得 上清取 200L 置于另一离心管中， 再加入三乙胺乙腈溶液、 异硫氰酸苯酯乙腈溶液和内标 各 100L， 混匀 3min， 室温下衍生 1h ； 加入正己。

20、烷 400L， 漩涡混匀， 静置 10min， 取下层溶 液 ( 即为所得的衍生化产物 ) ； 对衍生化产物采用高效液相法进行进样分析， 以色谱峰面 积内标法定量， 其中， 流动相包括流动相 A 和流动相 B， 流速 0.8mL/min ； 检测波长 ： 254nm ； 所述流动相 A 是 0.05醋酸钠溶液， 用醋酸调 PH 至 6.35， 摇匀后用 0.45m 的滤膜过滤， 超声脱气 10min-15min ； 所述流动相 B 是分析纯的乙腈。流动相 A 和流动相 B 的体积百分 比与时间的对应关系可参见下表。 0028 时间 (min) 流动相 A( ) 流动相 B( ) 0964 59。

21、28 168713 177822 366634 506634 0029 下面以具体实验案例为例来说明具体实施方式， 应当理解， 此处所描述的具体实 施例仅仅用以解释本发明， 并不用于限定本发明。 说 明 书 CN 103837620 A 5 4/13 页 6 0030 实施例 1 0031 下面将结合附图说明本发明的具体实施方式 ： 0032 1、 所用到的主要仪器设备与试剂 ： 仪器 ： Waters2695、 超声仪、 振荡器、 真空泵、 PH 计等 ； 试剂 ： 乙腈、 超纯水、 甲醇、 HUL、 三乙胺、 无水错酸钠、 冰醋酸、 正己烷等。 0033 2、 检测方法 0034 色谱条件。

22、 ： 色谱柱 ： PntulipsTM， BP-C18， 5m， 4.6*250mm， 柱温 ： 40 ； 流动相 A ： 乙腈， 流动相 B ： 0.05醋酸钠溶液 (pH6.35) ； 梯度洗脱程序如下表所示， 流速 ： 0.8mL/ min ； 检测波长 ： 254nm ； 进样量 ： 10L。 0035 时间 (min) 流动相 A流动相 B 0964 5928 168713 177822 366634 506634 0036 标准液及其他溶液的配制 ： 0037 标准溶液配制 ： 精确称取 24 种氨基酸的标准品， 并用 0.1mol/L 盐酸溶液稀释， 配 制成含 24 种氨基酸的。

23、标准溶液， 其浓度分别为 5mol/L、 10mol/L、 20mol/L、 50mol/ L、 100mol/L、 200mol/L、 500mol/L、 1000mol/L。 0038 内标溶液配制 ： 再精确称取内标物正亮氨酸 (Nle) 适量， 用 0.1mol/L 盐酸溶液溶 解并稀释配成 50mol/L 的 Nle 内标溶液 ； 然后将配制好的混合氨基酸标准溶液和 Nle 内 标溶液置于 4冰箱中保存备用。 0039 三乙胺乙腈溶液配制 ： 取三乙胺 1.4mL， 再加乙腈 8.6mL， 混合均匀即为三乙胺乙 腈溶液。 0040 异硫氰酸苯酯乙腈溶液配制 ： 取异硫氰酸苯酯 25L。

24、， 加乙腈 2mL， 混合均匀即为 异硫氰酸苯酯乙腈溶液。 0041 醋酸钠溶液配制 ： 取醋酸钠 8.2g， 加水溶解并加水至 1000mL， 再用冰醋酸调 pH 至 6.35， 混匀、 过膜、 脱气即得醋酸钠溶液。 0042 血样处理 ： 0043 正常人体血浆样品衍生化处理 ： 取血浆或血清样品 200L 置于离心管， 加甲醇 600L， 振摇， 12000r/min离心5min， 取上清液200L， 置于1.5mL具塞尖底塑料离心管中， 加上述配制好的 Nle 内标溶液 100L、 三乙胺乙腈溶液 100L 以及异硫氰酸苯酯乙腈溶 液 100L， 混匀， 室温放置 1h， 加入正己烷 。

25、400L， 振荡， 放置 10min， 然后再取下层溶液， 过 0.2m 滤膜， 得到正常人体血浆衍生后的溶液， 为含有 24 种氨基酸的溶液 ( 衍生后的溶 说 明 书 CN 103837620 A 6 5/13 页 7 液 ) ； 再采用高效液相进行分析， 进样， 记录色谱图各峰的面积， 内标法以峰面积定量。 0044 苯丙氨酸异常者血浆样品衍生化处理 ： 方法同正常人体血浆样品衍生化处理方 法， 得到苯丙氨酸异常者血浆液。 0045 高效液相法检测 ： 0046 在上述色谱条件下， 以 0.1mol/L 的盐酸溶液作为阴性对照得到色谱图 1， 见图 1， ( 由于不能得到不含氨基酸的空白。

26、血清， 因而以 0.1mol/L 盐酸溶液作阴性对照， 即将其按 上述方法进行衍生化处理， 以考察衍生化试剂及该衍生化试剂反应后的产物对各种氨基酸 衍生化产物峰是否有干扰 ) ； 再分别以含 24 种氨基酸的标准溶液、 正常人体血浆中 24 种氨 基酸、 苯丙氨酸异常者血浆中 24 种氨基酸为实验对象采用高效液相进行分析， 分别得到色 谱图 2、 3、 4， 见图 2、 图 3 和图 4。 0047 从附图 1 4 可知， 各种氨基酸可在 50min 内全部出峰， 分离效果良好， 大部分分 离度大于1.5， 且异硫氰酸苯酯等试剂对测定无干扰。 由于图3和图4中所加的内标物的量 是一定的， 故能。

27、够将各种氨基酸的峰面积与内标物 21 的峰面积进行比较， 便可知道各种氨 基酸的含量与标准含量相比是高或低， 由此现象可推知患者可能患的病因。如图 3 中， 正常 人体血浆中苯丙氨酸 22 的峰面积比内标物 21 的峰面积小， 而图 4 中， 苯丙氨酸 22 的峰面 积比内标物 21 的峰面积明显大很多， 且蛋氨酸 17 和丝氨酸 4 也有略微的提高， 再结合其它 的一些病症图 4 中的患者诊断为苯丙酮尿症。 0048 图 3 中各种氨基酸和内标物的峰面积如下表所示， 其中峰面积的单位可以认为是 Au s， 即是纵坐标的单位(Au， 即检测器的响应度， 为一种电压信号)乘以横坐标的单位(s， 。

28、秒 ) 构成。 说 明 书 CN 103837620 A 7 6/13 页 8 0049 0050 0051 图 4 中各种氨基酸和内标物的峰面积如下表所示， 其中峰面积的单位可以认为是 Au s， 即是纵坐标的单位(Au， 即检测器的响应度， 为一种电压信号)乘以横坐标的单位(s， 秒 ) 构成。 说 明 书 CN 103837620 A 8 7/13 页 9 0052 0053 利用上述方法测定了 132 人的 132 例血浆标本， 检测中， 发现有 3 例苯丙氨酸异常 患者， 该苯丙氨酸异常者的 HPLC 色谱图见图 4 所示。结合智力低下、 惊厥、 神经精神症状等 临床表现及其它实验室。

29、检验， 最后确诊为苯丙酮尿症， 使患儿得到了及时治疗和干预。 0054 实施例 2 ： 线性和最低检测限 0055 取 浓 度 分 别 为 5mol/L、 10mol/L、 20mol/L、 50mol/L、 100mol/L、 200nol/L、 500mol/L 和 1000mol/L 的含 24 种氨基酸的标准溶液各 200L， 共 8 个梯 度浓度， 每个加甲醇 600L， 再按本发明所述方法进行衍生化反应处理方法处理并分别测 定， 以氨基酸峰的峰面积与内标物的峰面积之比 (y) 对各浓度 (x) 进行线性回归， 得氨基 酸回归方程 ( 见下表 )。24 种氨基酸的线性范围均为 5-1。

30、000mol/L。稀释低浓度标准溶 液， 当使 S/N 3 时 ( 即信号 / 噪音 3)， 此时氨基酸浓度为最低检测限。RSD(Relative Standard Deviation， 相对标准偏差 ) 即表示精密度的意思。下表为线性范围和最低检测 限试验结果检测成份回归方程 (n 7) 相关系数最低检测限， 由下表可知， 该 24 种氨基酸 通过本发明所述方法进行处理， 都能够检测出来。 说 明 书 CN 103837620 A 9 8/13 页 10 0056 0057 0058 实施例 3 ： 回收率及精密度 . 0059 首先， 检测儿童血浆并计算。再在儿童血浆中加入含 24 种氨基。

31、酸的标准溶液， 分 说 明 书 CN 103837620 A 10 9/13 页 11 别配制成含 24 种氨基酸的 50mol/L、 200mol/L、 600mol/L 的低、 中、 高三个浓度系列 各 5 份， 按本发明所述方法进行脱蛋白和衍生化处理， 再按下方法处理并测定， 以测得值与 加入值 ( 即为加入的含 24 种氨基酸的标准溶液中的值 ) 的比值计算回收率， 并计算精密 度， 结果见下表。 0060 0061 0062 实施例 4 ： 方法的重复性 0063 取浓度为 100mol/L 的含 24 种氨基酸的标准溶液， 按本发明所述处理方怯进行 衍生化等处理并分别测定， 连续进。

32、样5次， 计算保留时间和峰面积的RSD直， 结果见下表， 24 种氨基酸保留时间和峰面积的相对标准偏差检测成份。 说 明 书 CN 103837620 A 11 10/13 页 12 0064 0065 0066 以下实施例 5 7 为对血浆样品稳定性的试验。 0067 实施例 5 ： 血浆样品室温放置稳定性 0068 用人体体检血浆在室温条件下放置， 再分别于 0、 2、 4、 8、 12h 时按本发明所述方法 进行脱蛋白与衍生化等处理样品， 再按上述方法进行测定， 并计算各种氨基酸的浓度， 结果 样品在室温放置 12h 内稳定， 结果见下表所示。 0069 说 明 书 CN 1038376。

33、20 A 12 11/13 页 13 0070 实施例 6 ： 血浆样品在 2下放置的稳定性 0071 用人体体检血浆在 2条件下密闭放置， 再分别于 0、 3、 7、 10 天 (d) 时按本发明所 述方法进行脱蛋白与衍生化等处理样品， 再按上述方法进行测定， 并计算各种氨基酸的浓 度， 结果样品在 2条件下密闭放置 30 天内稳定， 结果见下表所示。 0072 说 明 书 CN 103837620 A 13 12/13 页 14 0073 实施例 7 ： 血浆样品冷冻放置稳定性 0074 将人体血浆在 -20的条件下冷冻放置， 再分别于 0、 10、 20、 30 天 (d) 时按本发明 。

34、所述方法进行脱蛋白与衍生化等处理样品， 再按上述方法测定， 并计算各种氨基酸的浓度， 结果显示， 该血浆样品在 -20条件下冷冻放置 30 天内稳定， 结果见下表所示。 0075 说 明 书 CN 103837620 A 14 13/13 页 15 0076 通过上述测定结果可知， 本法操作简便、 分析快速、 检出限低、 重复性好。 0077 实施例 8 0078 大多数氨基酸本身不具有紫外吸收， 也不发射荧光， 因此， 需衍生化才能进行测 定。按本发明所述方法所检测的氨基酸能够在 50min 内分离 24 种氨基酸， 使其在医院的临 床应用中具有实用性。 由于本法测定的成份多， 为保证测得结。

35、果的可靠， 测定过程中应严格 室内质控， 实验衍生化条件应一致， 最好每批样品测定时用氨基酸标准溶液做质控标准。 体 内氨基酸浓度受多种因素影响， 如食物、 药物等， 因而采集血样前应了解受试者最近食用食 物、 药物等情况 ( 是否服用了含氨基酸的保健品、 药品， 是否注射了复方氨基酸注射液或含 氨基酸酸根如精氨酸、 赖氨酸等酸根相结合的药物 )， 否则， 所测浓度将不是其正常状况下 的浓度。此外， 测定时最好在 24h 内进样。 0079 本发明不局限于上述最佳实施方式， 任何人在本发明的启示下所作的有关本发明 的任何修饰或变更， 凡是具有与本申请相同或相近似的技术方案， 均落在本发明的保护范 围之内。 说 明 书 CN 103837620 A 15 1/2 页 16 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103837620 A 16 2/2 页 17 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103837620 A 17 。