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1、(10)申请公布号 CN 103837636 A (43)申请公布日 2014.06.04 CN 103837636 A (21)申请号 201410101266.5 (22)申请日 2014.03.18 G01N 30/90(2006.01) (71)申请人 安徽中医药大学第一附属医院 地址 230000 安徽省合肥市梅山路 117 号、 桐城南路 450 号 ( 曙光门诊部 ) (72)发明人 孟楣 刘健 王芳 陈莉 (54) 发明名称 一种以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 质量 评价方法 (57) 摘要 本发明涉及中药制剂质量信息进行监控和产 品质量评价领域， 具体是涉及一种以薏苡仁。
2、为参 照的新风胶囊 HPTLC 质量评价方法。首先建立 以薏苡仁为参照的 HPTLC 共有模， 再进行相似度 分析， 具体包括供试品溶液制备 ； 对照药材 溶液的制备 ； HPTLC 共有模的测定 ； HPTLC 共有指纹峰的标定及共有模式建立 ； 新风胶囊 HPTLC 共有模的相似度分析。本发明实验方案操 作简便、 色谱斑点清晰、 分离效果好， 方法学考察 则又可看出其精密度和重复性良好， 建立的以薏 苡仁为参照的高效薄层色谱共有模， 能为新风胶 囊的质量评价提供较全面的信息， 也为深入新风 胶囊药效物质基础研究和新药研发提供了参考。 (51)Int.Cl. 权利要求书 1 页 说明书 7 。
3、页 附图 6 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书7页 附图6页 (10)申请公布号 CN 103837636 A CN 103837636 A 1/1 页 2 1. 一种以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 质量评价方法， 其特征在于， 首先建立以薏 苡仁为参照的 HPTLC 共有模， 再进行相似度分析， 具体包括如下步骤 ： 、 供试品溶液制备 精密称取 10 个批次的新风胶囊内容物 5g， 分别置于 50ml 加塞锥形瓶中， 加 30ml 乙酸 乙酯， 超声处理 30min， 过滤， 滤液蒸干， 加乙酸乙酯定容于 2ml 容量瓶中， 即得。
4、供试品溶液 ； 、 对照药材溶液的制备 精密称取薏苡仁 5g， 提取浓缩蒸干后加 30ml 乙酸乙酯超声提取 30min， 过滤， 滤液蒸 干， 加乙酸乙酯定容于 2ml 容量瓶中， 即得薏苡仁对照药材溶液 ； 、 HPTLC 共有模的测定 将制备好的对照药材溶液及 10 批供试品溶液点样展开并显色， 获得新风胶囊的典型 HPTLC 薄层色谱图及三维图， 薄层色谱条件为 ： 薄层板为硅胶 H 高效预制薄层板， 展开剂为 体积比为8.31.70.1的石油醚、 乙醚、 冰醋酸， 点样量为6l， 展开条件为预饱和后展 开， 取出， 晾干， 喷以 5香草醛硫酸溶液， 105下加热显色至斑点清晰， 36。
5、5nm 紫外光灯下 检视 ； 、 HPTLC 共有指纹峰的标定及共有模式建立 将薄层色谱图导入共有模解决方案处理系统， 生成灰度扫描图并积分， 将样本数据 采用中位数法确定特征峰， 均数法计算特征值， 共指认 11 个特征色谱峰， 构成了新风胶囊 HPTLC 共有模共有模式 ； 、 新风胶囊 HPTLC 共有模的相似度分析 将10批新风胶囊样品的HPTLC共有模数据与新风胶囊薄层色谱共有模共有模式比较， 计算夹角余弦相似度， 以评价新风胶囊产品质量。 权 利 要 求 书 CN 103837636 A 2 1/7 页 3 一种以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 质量评价方法 技术领域 0001。
6、 本发明涉及中药制剂质量信息进行监控和产品质量评价领域， 具体是涉及一种以 薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 质量评价方法。 背景技术 0002 我国类风湿性疾病发病率逐年增加， 此类疾病致残率高， 早期合理治疗对控制病 情至关重要。 类风湿性疾病常见的有类风湿关节炎和强直性脊柱炎。 风湿性关节炎(RA)是 一种以关节和关节周围组织的非感染性炎症为主的全身性自身免疫性疾病， 其病理特点为 关节滑膜的慢性炎症细胞浸润， 滑膜翳形成， 软骨及骨组织的侵袭， 导致关节结构的破坏。 最终关节畸形、 功能障碍或丧失， 甚至残废， 丧失生活能力。 本病致残率高， 已成为世界公认 的难治性疾病之一。强直性。
7、脊柱炎 (AS) 是一种以中轴关节慢性炎症为主， 也可累及内脏及 其他组织的慢性进行性风湿性疾病， 其特征为韧带附着端的炎症， 迁延不愈， 反复发作， 进 行性加重， 后期多出现关节强直， 甚至残疾， 给患者及家属带来极大痛苦。我国类风湿关节 炎和强直性脊柱炎的患病率分别为0.32至0.36和0.3。 50类风湿关节炎患者在诊 断后两年内发展为中度功能丧失， 高达 60的强直性脊柱炎患者发生不同程度功能丧失。 0003 新风胶囊是安徽中医学院第一附属医院的专家们在进行了大量的文献研究、 中医 证候学调查、 长期临床实践基础上， 提出 RA 从 “脾” 论治的理论， 并创立具有自主知识产权 的组。
8、分配伍中药制剂。该制剂于 1998 年经安徽省食品药品监督管理局正式批准为院内制 剂， 2005 年取得医疗机构制剂许可证 ( 批准文号 ： 皖药制字 Z20050062)。该制剂处方由黄 芪、 薏苡仁、 蜈蚣等药物组成， 具有益气健脾， 化湿通络， 主治风湿性疾病如类风湿关节炎、 强直性脊柱炎的功能。大量药理学实验研究和临床研究证明， 该药具有显著减少活动期 RA 患者关节疼痛、 肿胀、 压痛数， 减轻关节疼痛、 肿胀、 压痛程度， 而且能缩短晨僵时间， 改善关 节功能， 降低 ESR、 CRP、 RF 滴度和 IgG、 IgA、 IgM 浓度， 维持 CD4+/CD8+ 在正常范围。临床使。
9、 用多年具广阔的前景， 受到医生及患者的一致好评。 0004 由于该制剂涉及的药材种类较多、 化学成分相对复杂， 各味药材易受产地、 药用部 位、 采收时间、 提取工艺等因素的影响， 为有效的控制及评价该制剂的质量带来了一定的困 难。 共有模技术反映的是样品整体的特征的质量评价方法， 可以解决药品质量控制和评价、 监督这一关键问题。 发明内容 0005 针对现有技术中存在的技术问题， 本发明的目的在于提供一种以薏苡仁为参照的 新风胶囊HPTLC质量评价方法， 根据新风胶囊处方药物成分的性质， 利用HPTLC共有模技术 对产品的质量信息进行监控， 为产品质量评价累积资料， 收集产品的均一性和稳定。
10、性数据， 确保产品的内在质量。并对 10 批样品进行了考察， 初步建立了以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 共有模。 0006 为了实现上述目的， 本发明所采用的技术方案为 ： 一种以薏苡仁为参照的新风胶 说 明 书 CN 103837636 A 3 2/7 页 4 囊 HPTLC 质量评价方法， 首先建立以薏苡仁为参照的 HPTLC 共有模， 再进行相似度分析， 具 体包括如下步骤 ： 0007 、 供试品溶液制备 0008 精密称取 10 个批次的新风胶囊内容物 5g， 分别置于 50ml 加塞锥形瓶中， 加 30ml 乙酸乙酯， 超声处理 30min， 过滤， 滤液蒸干， 加乙酸乙酯定。
11、容于 2ml 容量瓶中， 即得供试品 溶液 ； 0009 、 对照药材溶液的制备 0010 精密称取薏苡仁5g， 提取浓缩蒸干后加30ml乙酸乙酯超声提取30min， 过滤， 滤液 蒸干， 加乙酸乙酯定容于 2ml 容量瓶中， 即得薏苡仁对照药材溶液 ； 0011 、 HPTLC 共有模的测定 0012 将制备好的对照药材溶液及 10 批供试品溶液点样展开并显色， 获得新风胶囊的 典型 HPTLC 薄层色谱图及三维图， 薄层色谱条件为 ： 薄层板为硅胶 H 高效预制薄层板， 展开 剂为体积比为8.31.70.1的石油醚、 乙醚、 冰醋酸， 点样量为6l， 展开条件为预饱和 后展开， 取出， 晾。
12、干， 喷以 5香草醛硫酸溶液， 105下加热显色至斑点清晰， 365nm 紫外光 灯下检视 ； 0013 、 HPTLC 共有指纹峰的标定及共有模式建立 0014 将薄层色谱图导入共有模解决方案处理系统， 生成灰度扫描图并积分， 将样本数 据采用中位数法确定特征峰， 均数法计算特征值， 共指认 11 个特征色谱峰， 构成了新风胶 囊 HPTLC 共有模共有模式 ； 0015 、 新风胶囊 HPTLC 共有模的相似度分析 0016 将 10 批新风胶囊样品的 HPTLC 共有模数据与新风胶囊薄层色谱共有模共有模式 比较， 计算夹角余弦相似度， 以评价新风胶囊产品质量。 0017 本发明利用筛化优。
13、选后的薄层色谱条件 ( 石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1.7 0.1) 为展开剂， 2010cm 高效硅胶 H 薄层板， 6mm 长斑点， 点样量 ： 6L)， 以薏 苡仁为参照对 10 批新风胶囊样品进行了测定， 通过将薄层色谱图导入共有模解决方案软件， 确定了 11 个共有峰， 同时， 相似度分析则可看出各批样品共有模相似度均大于 0.94， 其相似 度平均值为0.968， 说明不同批次新风胶囊所含主要成分比例稳定。相似度高， 也说明了共有 模共有模式高度相似。实验方案操作简便、 色谱斑点清晰、 分离效果好， 方法学考察则又可看 出其精密度和重复性良好， 建立的。
14、以薏苡仁为参照的高效薄层色谱共有模， 能为新风胶囊的 质量评价提供较全面的信息， 也为深入新风胶囊药效物质基础研究和新药研发提供了参考。 附图说明 0018 图 1 为新风胶囊的典型 HPTLC 薄层色谱图， 图中 1、 12 代表薏苡仁对照药材， 2-11 分别代表 10 批供试品溶液。 0019 图 2 为新风胶囊的典型 HPTLC 薄层色谱三维图， 图中 1、 12 代表薏苡仁对照药材， 2-11 分别代表 10 批供试品溶液。 0020 图 3 为新风胶囊 HPTLC 共有模图谱。 0021 图 4 为新风胶囊 HPTLC 共有模相似度散点图。 0022 图 5 为薏苡仁对照药材 HP。
15、TLC 共有模图谱。 说 明 书 CN 103837636 A 4 3/7 页 5 0023 图 6 为新风胶囊单轨道 HPTLC 共有模图谱。 0024 图 7 为板内精密度试验色谱图。 0025 图 8 为板间精密度试验色谱图， 图中 A-E 分别代表了 5 块薄层板的色谱图。 0026 图 9 为重复性试验色谱图。 0027 图10为薄层色谱条件筛选试验色谱图， 图中A-G分别代表了7种薄层色谱条件的色谱图。 具体实施方式 0028 为进一步描述本发明， 下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细说明， 但并 不因此将本发明限制在所述的实施例范围之内。 0029 1 仪器与试药 0030 。
16、1.1 仪器 0031 CAMAG 紫外光灯 ( 瑞士 CAMAG 公司 )。 0032 CAMAG 电热板 ( 瑞士 CAMAG 公司 )。 0033 SK3200H 超声仪 ( 上海科导超声仪器有限公司 )。 0034 HH-S 型水浴锅 ( 巩义市英峪予华仪器厂 )。 0035 BP211D 十万分之一天平 ( 德国赛多利斯公司 )。 0036 硅胶 H 高效预制薄层板 ( 烟台信德化学有限公司 )。 0037 ChemPattern 化学共有模和代谢组学系统解决方案软件 1.0 版本 ( 科迈恩科技有 限公司， 北京 )。 0038 CAMAG 展开缸。 0039 TF-18 通风橱。。
17、 0040 定样毛细管。 0041 1.2 试药 0042 新风胶囊 ( 安徽中医学院第一附属医院制剂中心生产， 批号 ： 20120112、 20111025、 20110925、 20110725、 20110329、 20110325、 20101124、 20100925、 20100724、 20100325)。 0043 薏苡仁药材 ( 安徽中医学院第一附属医院中药房提供 )。 0044 其余试剂均为分析纯。 0045 2 方法 0046 2.1 供试品溶液制备 0047 精密称取以上各批次新风胶囊内容物5g， 分别置于50ml加塞锥形瓶中， 加30ml乙 酸乙酯， 超声处理 30。
18、min， 过滤， 滤液蒸干， 加乙酸乙酯定容于 2ml 容量瓶中， 即得供试品溶 液 (1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10)。 0048 2.2 对照药材溶液的制备 0049 精密称取薏苡仁 5g， 按新风胶囊提取工艺提取浓缩蒸干后加 30ml 乙酸乙酯超声 提取 30min， 过滤， 滤液蒸干， 加乙酸乙酯定容于 2ml 容量瓶中， 即得薏苡仁对照药材溶液。 0050 2.3 薄层色谱条件 0051 薄层板 ： 硅胶 H 高效预制薄层板。 0052 展开剂 ： 石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1.7 0.1)。 说 明 书 CN 103837。
19、636 A 5 4/7 页 6 0053 点样量 ： 6l。 0054 展开条件 ： 预饱和后展开， 取出， 晾干， 喷以 5香草醛硫酸溶液， 105下加热显 色至斑点清晰， 紫外光灯 (365nm) 下检视。 0055 3 结果 0056 3.1HPTLC 共有模的测定 0057 将制备好的对照药材溶液及 10 批供试品溶液按上述薄层色谱条件点样展开并显 色， 获得新风胶囊的典型 HPTLC 薄层色谱图及三维图， 如图 1、 2 所示。 0058 3.2HPTLC 共有指纹峰的标定及共有模式建立 0059 将紫外灯 (365nm) 下获得的薄层色谱图导入共有模解决方案软件， 生成灰度扫描 图。
20、并积分， 将样本数据采用中位数法确定特征峰， 均数法计算特征值， 共指认 11 个特征色 谱峰， 平均相对位移为 0.10， 0.13， 0.16， 0.18， 0.25， 0.37， 0.44， 0.59， 0.69， 0.78， 0.87， 构 成了新风胶囊 HPTLC 共有模共有模式， 如图 3 所示。 0060 3.3 新风胶囊 HPTLC 共有模的相似度分析 0061 将 10 批新风胶囊样品的 HPTLC 共有模数据与新风胶囊薄层色谱共有模共有模式 比较， 各批次新风胶囊特征峰的比例较近， 计算夹角余弦相似度 ( 如表 1 所示 )， 结果显示 10 批次新风胶囊的相似度均在 0.。
21、94 以上， 其相似度平均为 0.968， 这表明不同批次新风胶 囊所含主要成分比例稳定。相似度高， 说明其共有模共有模式高度相似。以序号为横坐标、 相似度为纵坐标绘制的散点图如图 4 所示， 更加直观地说明了它们具有极高的相似度。 0062 表 1 新风胶囊 HPTLC 共有模相似度计算结果 0063 编号批号相似度 1201201120.9319 2201110250.9898 3201109250.9899 4201107250.9482 5201103291.0000 6201103250.9846 7201011240.9605 8201009250.9421 9201007240.。
22、9863 10201003250.9463 0064 3.4 以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 共有模共有峰的指认 说 明 书 CN 103837636 A 6 5/7 页 7 0065 以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 共有模测定中， 薏苡仁对照药材溶液与供试品 溶液有 3 个对应峰， 分别为供试品溶液中的物质 3、 4 和 5， 如图 5、 6 所示。 0066 3.5 方法学考察 0067 由上述以薏苡仁为参照的新风胶囊 HPTLC 共有模共有峰的指认中， 可见薏苡仁对 照药材溶液与供试品溶液有 3 个对应峰， 分别为供试品溶液中的物质 3、 4 和 5， 同时， 物质 4 峰形。
23、和分离度均较好， 所以可选择斑点 4 作为参照点进行方法学考察中的精密度试验和重 复性试验。 0068 3.5.1 精密度试验 0069 取批号为 20130325 的样品， 按 “2.1” 项方法制备供试品溶液， 在同一薄层板上重 复点样 6 次， 点样量为 6L， 进行板内精密度试验， 如图 7 及表 2 所示， RSD 为 2.9， 表明 精密度好。 0070 表 2 板内精密度试验数据 0071 0072 0073 取批号为 20130325 的样品， 按 “2.1” 项方法制备供试品溶液， 在 5 块薄层板上分 别点样 6L， 进行板间精密度试验， 如图 8 及表 3 所示， RSD。
24、 为 3.4， 表明精密度好。 0074 表 3 板间精密度试验数据 0075 0076 3.5.2 重复性试验 0077 取批号为 20130325 的样品， 按 “2.1” 项方法制备供试品溶液 6 份， 分别点样 6L， 进行重复性试验， 如图 9 及表 4 所示， RSD 为 3.9， 表明重复性好。 0078 表 4 重复性试验数据 0079 0080 4 讨论 说 明 书 CN 103837636 A 7 6/7 页 8 0081 4.1HPTLC 共有模技术的应用 0082 本发明利用筛选优化后的薄层色谱条件建立了快速、 直观、 操作方便、 使用成本较 低的高效薄层色谱共有模， 。
25、为检测新风胶囊提供了一个较为科学的依据， 完善了新风胶囊 的质量控制方法。同时， 运用共有模系统解决方案软件， 确定了共有模式， 并进行了相似度 分析， 所建立的新风胶囊 HPTLC 对照共有模， 为深入新风胶囊药效物质基础研究和新药研 发提供了参考。 0083 4.2 色谱条件的优化筛选 0084 为了让新风胶囊中有效成分在薄层板上尽可能的得到体现和分离， 对其薄层色谱 条件进行了优选， 总共采用了 7 种方法， 分别如下 ： 0085 方法一 ： 采用石油醚 (60 -90 )- 乙酸乙酯 - 冰醋酸 (10 3 1) 为展开剂， 1010cm 普通薄层板， 点样量 ： 4L， 展开剂极性。
26、太大， 斑点数目少， 结果见图 10A。 0086 方法二 ： 采用石油醚 (60 -90 )- 乙酸乙酯 - 冰醋酸 (10 2 0.5) 为展开 剂， 1010cm 普通薄层板， 点样量 ： 4L， 展开剂极性稍有降低， 但斑点数目仍太少， 结果见 图 10B。 0087 方 法 三 ：采 用 石 油 醚 (60 -90 )- 乙 醚 - 乙 酸 乙 酯 - 冰 醋 酸 (8.3 1.7 1 0.5) 为展开剂， 1010cm 普通薄层板， 点样量 ： 4L， 斑点太高且数目太 少， 结果见图 10C。 0088 方法四 ： 采用石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1。
27、.7 0.1) 为展开剂， 1010cm 普通薄层板， 点样量 ： 6L， 斑点数目有所增加， 但可能由于点样量增加造成分离 度变差， 结果见图 10D。 0089 方法五 ： 采用石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1.7 0.12) 为展开 剂， 510cm 普通薄层板， 点样量 ： 4L， 斑点数目较多但边缘效应严重， 结果见图 10E。 0090 方法六 ： 采用石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1.7 0.12) 为展开 剂， 1010cm 普通薄层板， 点样量 ： 4L， 虽然斑点总数目较多， 但斑点不清晰， 上方斑点数 目较少， 下面。
28、斑点分离度较差， 结果见图 10F。 0091 方法七 ： 采用石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1.7 0.1) 为展开剂， 1010cm高效硅胶H薄层板， 6mm长斑点， 点样量 ： 6L， 呈现11个斑点且分离度较好， 结果 见图 10G。 0092 通过图 10 中七种图谱的对比， 最终优选出方法七为最佳薄层色谱条件。 0093 5 结论 0094 本发明利用筛化优选后的薄层色谱条件 ( 石油醚 (60 -90 )- 乙醚 - 冰醋酸 (8.3 1.7 0.1) 为展开剂， 2010cm 高效硅胶 H 薄层板， 6mm 长斑点， 点样量 ： 6L)， 以 薏苡仁。
29、为参照对 10 批新风胶囊样品进行了测定， 通过将薄层色谱图导入共有模解决方案 软件， 确定了 11 个共有峰， 同时， 相似度分析则可看出各批样品共有模相似度均大于 0.94， 其相似度平均值为 0.968， 说明不同批次新风胶囊所含主要成分比例稳定。相似度高， 也说 明了共有模共有模式高度相似。实验方案操作简便、 色谱斑点清晰、 分离效果好， 方法学考 察则又可看出其精密度和重复性良好， 建立的以薏苡仁为参照的高效薄层色谱共有模， 能 为新风胶囊的质量评价提供较全面的信息， 也为深入新风胶囊药效物质基础研究和新药研 发提供了参考。 说 明 书 CN 103837636 A 8 7/7 页 。
30、9 0095 以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明， 所属本技术领域的技术人员 对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代， 只要不偏离发明 的构思或者超越本权利要求书所定义的范围， 均应属于本发明的保护范围。 说 明 书 CN 103837636 A 9 1/6 页 10 图 1 图 2 说 明 书 附 图 CN 103837636 A 10 2/6 页 11 图 3 图 4 说 明 书 附 图 CN 103837636 A 11 3/6 页 12 图 5 图 6 说 明 书 附 图 CN 103837636 A 12 4/6 页 13 图 7 图 8 说 明 书 附 图 CN 103837636 A 13 5/6 页 14 图 9 说 明 书 附 图 CN 103837636 A 14 6/6 页 15 图 10 说 明 书 附 图 CN 103837636 A 15 。