一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法.pdf

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1、(10)申请公布号 CN 103869039 A (43)申请公布日 2014.06.18 CN 103869039 A (21)申请号 201410137113.6 (22)申请日 2014.04.08 G01N 30/88(2006.01) (71)申请人 福建中烟工业有限责任公司 地址 361012 福建省厦门市思明区莲岳路 118 号中烟工业大厦 申请人 厦门烟草工业有限责任公司 (72)发明人 苏明亮 赖炜扬 邓其馨 刘江生 张建平 许寒春 黄朝章 张廷贵 蔡国华 黄巧龙 简訸颖 (74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专 利商标事务所 11038 代理人 苏红梅 (54) 发明。

2、名称 一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的 方法 (57) 摘要 本发明公开了一种同时检测香精香料中七种 禁用化合物的方法， 所述的七种禁用化合物为甲 醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香及 芝麻酚。 本发明的检测方法可准确、 快速地检测香 精香料中七种禁用化合物的含量， 适用于食品、 日 用化工、 烟草、 制药等行业中香精料液、 辅助溶剂 的质量安全控制， 具有操作简单、 快速准确、 重复 性好、 灵敏度好等特点。 (51)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 8 页 附图 9 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书8。

3、页 附图9页 (10)申请公布号 CN 103869039 A CN 103869039 A 1/2 页 2 1. 一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法， 所述禁用化合物为甲醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香及芝麻酚， 该方法为气相色谱 - 质谱联用法， 以 CH2Cl2为 溶剂， 采用萘为内标物， 采用内标法定量， 采用毛细管色谱柱分离样品， 进样口温度 ： 200 ； 升温程序的初始温度为 35 ； 分流比为 10:1 30:1。 2. 权利要求 1 的检测方法， 其中， 在质谱检测时设置两次时间事件， 第一次是在进样后 3.20-4.50min 之间关闭质谱灯丝。

4、 ； 第二次是在进样后 15.30-16.00 关闭质谱灯丝。 3. 权 利 要 求 1 的 检 测 方 法，其 中 所 述 的 毛 细 管 色 谱 柱 的 规 格 为 30m250m0.25m， 优选为 HP-INNOWax 气相色谱柱。 4. 权利要求 1 的检测方法， 其中升温程序为 ： 初始温度 35， 保持 2min ； 9 /min 的速 率升温至65， 保持1min ； 8/min的速率升温至200， 保持2min ； 20/min的速率升温 至 230， 保持 8min。 5. 权利要求 1-4 任一项的检测方法， 其中， 气相色谱条件为 ： 进样口温度 ： 240 ； 进样 。

5、量 ： 1l， 分流进样， 分流比 ： 10:1 ； 载气 ： 纯度 99.999% 的氦气， 恒流模式， 流速 ： 1.0mL/ min ； 升温程序 ： 35 （2min） ， 9 /min 升温至 65 （1min） ， 8 /min 升温至 200 （2min） ， 20 /min 升温至 230（8min） ， 总运行时间 ： 34.708 分钟。 6. 权利要求 1-5 任一项的检测方法， 其中， 质谱分析条件 ： 电离方式 ： 电子轰击源 ： EI ； 电离能量 ： 70eV ； 传输线温度 ： 240， 离子源温度 ： 230； 四极杆温度 ： 150； 测定方式 ： 选 择离。

6、子监视方式扫描 ； 溶剂延迟 ： 2.50min。 7. 权利要求 1-6 任一项的检测方法， 其中， 样品前处理的方法为 ： 称取香精香料样品， 置于三角锥形瓶中， 加入含内标物的 CH2Cl2萃取液， 混合均匀后加 入除水剂 （例如无水硫酸钠或无水硫酸镁） 进行除水， 静置后移取清液， 用有机滤膜过滤， 收 集滤液待测。 8. 权利要求 7 的检测方法， 其中所述的无水硫酸钠使用前应在烘箱 200条件下烘烤 2h， 置于干燥器中冷却至室温后使用。 9.权利要求7的检测方法， 其中所述的无水硫酸镁使用前应在马弗炉550下烘烤2h， 置于干燥器中冷却至室温后使用。 10. 权利要求 1-9 任。

7、一项的检测方法， 该方法包括以下步骤 ： 1） 制备含内标萃取液 称取内标物萘， 以 CH2Cl2为溶剂， 配制含内标萘的 CH2Cl2萃取液 ； 2） 制备标准工作溶液 采用定量称取、 混合方式制备七种禁用化合物混合标准溶液， 采用逐步稀释法配制标 准工作溶液， 采用含内标的 CH2Cl2萃取液进行配制和稀释， 采用逐步稀释法制备各级标准 工作溶液 ； 3） 绘制标准工作曲线 以内标定量法， 绘制标准工作曲线， 横轴为各禁用化合物与内标的浓度比， 纵轴为各禁 用化合物与内标的响应比， 对其进行最小二乘法回归分析， 即得到标准工作曲线 ； 4） 样品前处理 称取香精香料样品， 置于三角锥形瓶中。

8、， 加入含内标的 CH2Cl2萃取液， 将三角锥形瓶放 在回旋振荡器上进行摇振， 振荡完毕后， 加入除水剂进行除水， 静置后移取清液， 用 0.22um 权 利 要 求 书 CN 103869039 A 2 2/2 页 3 有机滤膜过滤， 收集滤液待测 ； 5） 气相色谱 - 质谱联用分析 样品经前处理后， 滤液收集于色谱瓶中， 上机测试， 采用 SIM 模式 （选择离子监测模式） 采集响应信号， 各禁用物质与内标的响应比值， 代入标准工作曲线进行计算， 即可得出各禁 用物质的检测结果。 权 利 要 求 书 CN 103869039 A 3 1/8 页 4 一种同时检测香精香料中七种禁用化合物。

9、的方法 技术领域 0001 本发明属于香精香料理化检验、 分析测试技术领域， 主要涉及到香精香料中甲醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香及芝麻酚含量的同时测定方法。 背景技术 0002 在卷烟产品配方设计和制造过程中， 基于提高产品感官舒服度以及加工工艺需 求， 经常需要添加具有保润、 增香、 甜味、 助燃等功能添加剂， 同时也需要添加食用级酒精作 为辅助溶剂。香精香料作为卷烟的重要组成成分， 其质量安全性一直备受烟草行业及卷烟 消费者的重点关注。 0003 甲醇是具有类似酒精气味的易挥发性液体。可通过皮肤接触侵害人体细胞组织， 特别是对人体视觉神经网膜有破坏作用， 误饮含有。

10、甲醇的白酒可能会导致人体双目失明。 假冒食用级酒精可用于配制空气清新剂、 香水、 油漆， 消费者在使用时不知不觉会受到慢性 毒害， 不到严重时很难发现。 但甲醇价格只有酒精的一半， 工业酒精假冒食用酒精曾一度泛 滥成灾， 防范在香精香料中混入甲醇 （工业酒精） 是一个较为严峻的质量安全问题。 0004 仲丁醇是无色透明的易燃液体， 具备类葡萄酒的气息。 可用于制造甲乙酮等香料。 仲丁醇有刺激和麻醉作用， 吸入时对眼、 鼻、 喉有刺激作用， 并出现头痛、 眩晕、 倦怠、 恶心等 症状。 0005 黄樟素天然存在于黄樟油、 大叶樟油、 南美巴西黄樟油、 北美黄樟油等天然芳香油 中， 是许多天然香精。

11、如黄樟精油、 八角精油和樟脑油的主要成分， 曾经用于啤酒作为感官风 味修饰剂。采用黄樟、 肉豆蔻、 野姜、 月桂树等香料制成的香精中可能少量存在黄樟素。黄 樟素可与肝脏组织形成黄樟素与 DNA 加合物， 进而引起肝脏损伤甚至基因突变， 研究表明 黄樟素也可能是消化系统、 血液系统的强致癌物， 目前各国均已禁止使用黄樟素作为食品 添加剂。 0006 咪唑是含有两个间位氮原子的五元芳杂环化合物， 呈弱酸性， 可与强碱形成盐。 咪 唑类衍生物种类较多， 对人体和环境的危害性目前尚有争议， 其中可口可乐曾因 4- 甲基咪 唑问题陷入信任危机。 卷烟产品在吸燃时， 若含有咪唑， 不能排除吸燃时发生化学反。

12、应形成 潜在危害性的咪唑类物质。因此， 为安全起见， 香精香料中应避免使用咪唑。 0007 香豆素又称双呋喃环和氧杂萘邻酮， 广泛存在于自然界的植物中， 芸香科、 伞形 科、 豆科、 兰科、 木樨科、 茄科和菊科植物等植物中均含有香豆素。 香豆素作为重要的香料原 料， 已经在各行各业中普遍使用， 具备成熟的工业合成生产方法。然而， 相关动物毒理学研 究表明， 香豆素对小鼠胚胎有毒性， 能引起痛觉消失， 使胆碱酯酶发生变化， 对大鼠为可疑 致肿瘤物， 因此很多国家均针对香豆素规定了使用限量要求。 0008 二甲苯麝香是具有麝香气味的人工合成硝基化合物， 主要作为定香剂存在于洗涤 用品和家用清洁用。

13、品中， 已有报道在润肤乳液、 香水和除臭剂中曾检出大剂量的二甲苯麝 香。二甲苯麝香能够在环境中稳定存在， 且具有较强生物富集性， 已经在城市地下水、 地表 水、 鱼类、 人体体脂和人乳中检出二甲苯麝香， 此外也有研究表明二甲苯麝香对某些贝类具 说 明 书 CN 103869039 A 4 2/8 页 5 有生理毒性。 作为高持久性、 高生物蓄积性物质， 二甲苯麝香已被欧盟化学品管理署列为高 度关注物质。 0009 芝麻酚天然存在于芝麻油中， 微溶于水， 具有较强的抗氧化能力， 常在食品、 医药 和香精香料中作为抗氧化剂。 然而毒理学研究表明， 芝麻酚可能对动物腺胃有毒性， 会引起 腺胃刺瘤或癌。

14、变。日本已将芝麻酚列为食品禁用添加剂。 0010 为确保卷烟质量安全， 需对可能添加的香精香料、 酒精等添加剂的质量安全进行 密切关注和监控， 对管理法规中明确要求禁用的物质， 甚至可能对人体健康有危害的物质 也应予以高度关注。 0011 现有测试技术中， 采用气相色谱质谱分析香精香料中禁用化合物 （甲醇、 仲丁 醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香及芝麻酚） 的研究报道较少， 限于上述物质的化学性 质不同， 目前尚未报道有一次性可同时检测七种禁用化合物的检测方法。 发明内容 0012 本发明目的是在于提供一种气相色谱 - 质谱联用检测方法， 可一次性同时准确检 测香精香料中七种禁用化。

15、合物， 当工业企业在采购香精香料时， 可快速准确地提供检测报 告， 及时发现可能有潜在质量安全的来料， 避免企业将含超限量禁用化合物的香精香料使 用在产品中， 进而保障企业产品的质量安全性。 0013 因此， 本发明提供一种同时检测香精香料中七种禁用化合物的方法， 所述禁用化 合物为甲醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香及芝麻酚， 该方法为气相色谱 - 质 谱联用法， 以 CH2Cl2为溶剂， 采用萘为内标物， 采用内标法定量， 采用毛细管色谱柱分离样 品， 进样口温度 ： 200 ； 升温程序的初始温度为 35 ； 分流比为 10:1 30:1。 0014 本发明所述的检测。

16、方法， 其中， 在质谱检测时设置两次时间事件， 第一次是在进样 后 3.20-4.50min 之间关闭质谱灯丝 ； 第二次是在进样后 15.30-16.00 关闭质谱灯丝。 0015 本 发 明 所 述 的 检 测 方 法，其 中 所 述 的 毛 细 管 色 谱 柱 的 规 格 为 30m250m0.25m， 优选为 HP-INNOWax 气相色谱柱。 0016 本发明所述的检测方法， 其中升温程序为 ： 初始温度 35， 保持 2min ； 9 /min 的 速率升温至65， 保持1min ； 8/min的速率升温至200， 保持2min ； 20/min的速率升 温至 230， 保持 8m。

17、in。 0017 本发明所述的检测方法， 其中， 气相色谱条件为 ： 进样口温度 ： 200 ； 进样量 ： 1l， 分流进样， 分流比 ： 10:1 ； 载气 ： 纯度 99.999% 的氦气， 恒流模式， 流速 ： 1.0mL/min ； 升温程序 ： 35（2min） ， 9 /min 升温至 65（1min） ， 8 /min 升温至 200（2min） ， 20 /min 升温至 230（8min） ， 总运行时间 ： 34.708 分钟。 0018 本发明所述的检测方法， 其中， 质谱分析条件 ： 电离方式 ： 电子轰击源 ： EI ； 电离能 量 ： 70eV ； 传输线温度 ：。

18、 240， 离子源温度 ： 230； 四极杆温度 ： 150； 测定方式 ： 选择离子 监视方式扫描 ； 溶剂延迟 ： 2.50min。 0019 本发明所述的检测方法， 其中样品前处理的方法为 ： 0020 称取香精香料样品， 置于三角锥形瓶中， 加入含内标物的 CH2Cl2萃取液， 混合均匀 后加入除水剂 （例如无水硫酸钠或无水硫酸镁） 进行除水， 静置后移取清液， 用有机滤膜过 滤， 收集滤液待测。 说 明 书 CN 103869039 A 5 3/8 页 6 0021 本发明所述的检测方法， 其中所述的无水硫酸钠使用前应在烘箱 200条件下烘 烤 2h， 置于干燥器中冷却至室温后使用。。

19、 0022 本发明所述的检测方法， 其中所述的无水硫酸镁使用前应在马弗炉 550下烘烤 2h， 置于干燥器中冷却至室温后使用。 0023 本发明所述的检测方法， 具体包括以下步骤 ： 0024 1） 制备含内标萃取液 0025 称取内标物萘， 以 CH2Cl2为溶剂， 配制含内标萘的 CH2Cl2萃取液 ； 0026 2） 制备标准工作溶液 0027 采用定量称取、 混合方式制备七种禁用化合物混合标准溶液， 采用逐步稀释法配 制标准工作溶液， 采用含内标的 CH2Cl2萃取液进行配制和稀释， 采用逐步稀释法制备各级 标准工作溶液 ； 0028 3） 绘制标准工作曲线 0029 以内标定量法， 。

20、绘制标准工作曲线， 横轴为各禁用化合物与内标的浓度比， 纵轴为 各禁用化合物与内标的响应比， 对其进行最小二乘法回归分析， 即得到标准工作曲线 ； 0030 4） 样品前处理 0031 称取香精香料样品， 置于三角锥形瓶中， 加入含内标的 CH2Cl2萃取液， 将三角锥 形瓶放在回旋振荡器上进行摇振， 振荡完毕后， 加入除水剂进行除水， 静置后移取清液， 用 0.22um 有机滤膜过滤， 收集滤液待测 ； 0032 5） 气相色谱 - 质谱联用分析 0033 样品经前处理后， 滤液收集于色谱瓶中， 上机测试， 采用 SIM 模式 （选择离子监测 模式） 采集响应信号， 各禁用物质与内标的响应比。

21、值， 代入标准工作曲线进行计算， 即可得 出各禁用物质的检测结果。 0034 发明详述 0035 为实现本发明的目的， 本发明通过以下技术方案来实现 ： 一种同时检测香精香料 中七种禁用化合物的方法， 所述的七种禁用化合物为甲醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香及芝麻酚， 该方法包括以下步骤 ： 0036 步骤一， 制备含内标萃取液 ： 以萘为内标， 称取 400mg 萘， 精确至 0.1mg， 以 CH2Cl2 为溶剂， 定容于 100ml 的棕色容量瓶中， 得到 4mg/ml 的内标母液， 然后取 1ml 内标母液， 以 CH2Cl2为溶剂， 定容于 1000ml 的棕色。

22、容量瓶中， 制得到浓度为 4g/ml 的含内标萃取液。 0037 步骤二， 制备标准工作溶液 ： 分别称取 100mg 甲醇、 100mg 仲丁醇、 100mg 黄樟素、 100mg 咪唑、 500mg 香豆素、 50mg 二甲苯麝香、 100mg 芝麻酚， 以步骤一所述内标萃取液进行 溶解， 分别定容于 100ml 棕色容量瓶中， 制得各禁用目标物母液。分别移取上述七种目标物 母液各 1ml， 以内标萃取液稀释， 定容于 100ml 棕色容量瓶中， 制得混标， 如表 1 所示。 0038 表 1 七种香精香料中禁用化合物混标母液 0039 0040 采用逐步稀释法制备标准工作溶液， 采用微量。

23、移液器， 分别移取 1ml、 500l、 说 明 书 CN 103869039 A 6 4/8 页 7 200l、 100l、 50l、 20l、 10l 混标， 以内标萃取液稀释， 定容于 10ml 棕色容量瓶中， 分别记为 S7， S6， S5， S4， S3， S2， S1。各级标准溶液浓度如表 2 所示。 0041 表 2 香精香料中 7 种禁用物质标准溶液 0042 0043 0044 步骤三， 绘制标准工作曲线 ： 将步骤二所得各级标准工作溶液， 进行气相色谱质谱 联用分析， 以内标定量法， 绘制标准工作曲线， 横轴为各禁用化合物与内标的浓度比， 纵轴 为各禁用化合物与内标的响应比。

24、， 对其进行最小二乘法回归分析， 即得到标准工作曲线， 工 作曲线线性相关系数 R20.99。 0045 步骤四， 样品前处理 ： 称取 0.3g 香精香料样品， 精确记录至 0.001g， 置于 50ml 具 塞三角锥形瓶中， 加入 10ml 步骤一所述内标萃取液， 将具塞三角锥形瓶放在回旋振荡器上 进行摇振 30min， 速率为 200rpm， 振荡完毕后， 加入 2g 除水剂 （无水硫酸钠， 或无水硫酸镁） 进行除水， 静置后移取清液， 用 0.22um 有机滤膜过滤， 收集滤液待测。 0046 步骤五， 气相色谱 - 质谱联用分析 ： 将步骤四所得前处理后的滤液， 转移至色谱瓶 中， 。

25、进行气相色谱质谱联用分析， 得出待测目标物响应信号， 根据步骤三所得的标准工作曲 线， 计算可得香精香料样品中甲醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香和芝麻酚的 实测含量。 0047 进一步， 所述的气相色谱质谱联用分析条件为 ： 0048 气 相 色 谱 条 件 ：色 谱 柱 ： Agilent19091N-133， HP-INNOWax，规 格 为 30m250m0.25m ； 进样口温度 ： 240 ； 进样量 ： 1l， 分流进样， 分流比 ： 10:1 ； 载气 ： 纯度 99.999% 的氦气， 恒流模式， 流速 ： 1.0mL/min ； 升温程序 ： 35（2m。

26、in） ， 9 /min 升 温至 65（1min） ， 8 /min 升温至 200（2min） ， 20 /min 升温至 230（8min） ， 总运行 时间 ： 34.708 分钟 ； 0049 质谱分析条件 ： 电离方式 ： 电子轰击源 （EI） ； 电离能量 ： 70eV ； 传输线温度 ： 240， 离子源温度 ： 230 ； 四极杆温度 ： 150 ； 测定方式 ： 选择离子监视方式扫描 ； 溶剂延迟 ： 2.50min ； 0050 时间事件条件 ： 3.20-4.50min 关闭质谱灯丝， 屏蔽 CH2Cl2溶剂峰以及乙醇或其他 杂质峰 ； 15.30-16.00min 关。

27、闭质谱灯丝， 屏蔽丙二醇峰。 0051 进一步， 采用较低浓度的 S1 或 S2 标准工作溶液， 连续测定 10 次， 计算结果标准方 说 明 书 CN 103869039 A 7 5/8 页 8 差， 以 3 倍方差记为检出限， 以 10 倍方差记为定量限。采用标准加入法， 分别加入中浓度、 低浓度标准溶液， 经前处理方法处理， 进气相色谱质谱联用分析， 连续测试 6 次， 评估检测 方法的重复性， 并计算中浓度、 低浓度条件下回收率， 评估方法的可靠性。结果如表 3 所示。 0052 表 3 香精香料中七种禁用化合物检测限、 定量限、 重复性、 回收率 0053 0054 进一步， 在所述。

28、的步骤一之前还包括测定用器皿的准备步骤 ： 实验所用的具塞三 角锥形瓶、 玻璃滴管等器皿洗净后， 用二次蒸馏水淋洗三次， 烘箱 150条件下烘烤 2h， 冷 却至室温备用。 0055 发明的有益效果 0056 与现有技术相比， 本发明的检测方法具有如下优良效果 ： 0057 1） 七种目标禁用化合物的化学性质差异较大， 目前尚未见同时测定上述七种禁用 化合物的文献报道。而本发明方法采用 HP-INNOWax 气相色谱柱作为色谱分离柱， 规格为 30m250m0.25m， 该色谱柱极性合适， 分离条件优化后， 七种目标物和样品本底干扰 物质、 溶剂干扰峰均可较好地分离， 因此可得到较好地定量结果。

29、。 0058 2） 采用本发明的检测方法， 可一次性同时测定七种禁用化合物， 大大节约了检测 时间， 大大提高了工作效率。 0059 3） 香精香料样品中普遍使用水、 乙醇、 丙二醇等溶剂， 本发明的检测方法针对香精 香料样品特点， 优化分离条件， 致使目标物甲醇在溶剂峰 （即 CH2Cl2溶剂峰） 之前出峰， 然后 关闭灯丝 （第一次时间事件） ， 屏蔽了随后的 CH2Cl2溶剂峰和乙醇等杂质峰。随后也有相应 的时间事件 （第二次时间事件） ， 滤掉潜在的庞大的丙二醇峰 （该物质在香精香料中存在几 率较高， 且含量较高） 。这两次时间事件很好地保护了灯丝和质谱离子源。本发明的检测 方法实现了。

30、准确分离测试烟草添加剂中七种禁用化合物的同时， 也大大提高了仪器的耐用 性， 实测约 1200 个样品后， 未出现灯丝烧断现象。 0060 4） 本发明的检测采用色谱纯级 CH2Cl2作为溶剂是合适的选择， 香精香料分析中普 遍采用的乙醇溶剂， 即使色谱纯级乙醇溶剂中偶尔难免会有微量甲醇干扰， 进而破坏了目 标物甲醇的定量准确性。而根据本发明方法， 色谱纯 CH2Cl2难以避免微量 CHCl3则会杂在 溶剂峰中， 不会对甲醇准确定量带来干扰。 0061 5） 本发明的检测方法的程序升温的起始温度仅为 35， 并停留 2min， 该条件可使 得甲醇完全分离开， 定量效果较好。 若仅关注甲醇单项指。

31、标， 3min内在溶剂峰出峰之前即可 说 明 书 CN 103869039 A 8 6/8 页 9 完成检测。如附图 16 所示， 图 16 的左上 TIC 图可看出， 甲醇杂在溶剂峰中， 基于 innowax 色谱柱， 降低升温程序的初始温度， 如图 16 的右上 TIC 图所示， 进一步改善并修改分离条 件， 可获得甲醇峰初步分离， 改良措施包括 ： 降低进样口初始温度， 降低升温程序初始温度， 适当升高分流比。为了保证甲醇峰形获得良好分离 （如图 16 中的下图所示） ， 同时为保护灯 丝， 本发明的检测方法设定了溶剂峰延迟以及两次时间事件， 从而获得了甲醇良好的分离 结果。 0062 。

32、6） 萘的气息很重很特殊， 微量萘气息即可被人体察觉， 因此通常萘不存在于香精 香料中， 本发明方法采用萘作为内标， 在定量上不会受到干扰。 0063 采用本发明的检测方法， 可快速、 准确地检测香精香料中七种禁用化合物 （甲醇、 仲丁醇、 黄樟素、 咪唑、 香豆素、 二甲苯麝香和芝麻酚） 的含量， 适用于食品、 日用化工、 烟草、 制药等行业中香精料液、 辅助溶剂的质量安全控制， 具有操作简单快速、 定量准确性好、 重 复性好、 灵敏度高等特点。 0064 本发明的检测方法不必对各检测目标进行分步分别测试， 既能保障烟草添加剂原 料质量安全， 同时也能够提高作业效率， 大大节省检测环节所需时。

33、间， 并提高了质谱仪器的 耐用度。 附图说明 0065 图 1 甲醇标准工作曲线 ； 0066 图 2 仲丁醇标准工作曲线 ； 0067 图 3 黄樟素标准工作曲线 ； 0068 图 4 咪唑标准工作曲线 ； 0069 图 5 香豆素标准工作曲线 ； 0070 图 6 二甲苯麝香标准工作曲线 ； 0071 图 7 芝麻酚标准工作曲线 ； 0072 图 8 内标 （萘） 质谱图 ； 0073 图 9 甲醇质谱图 ； 0074 图 10 仲丁醇质谱图 ； 0075 图 11 黄樟素质谱图 ； 0076 图 12 咪唑质谱图 ； 0077 图 13 香豆素质谱图 ； 0078 图 14 二甲苯麝香质。

34、谱图 ； 0079 图 15 芝麻酚质谱图 ； 0080 图 16 优化分离条件前后， 甲醇的出峰情况 ； 0081 图 17 标准样品选择离子扫描色谱图， 其中 1 ： 甲醇， 2 ： 仲丁醇， 3 ： 黄樟素， 4 ： 咪唑， 5 ： 香豆素， 6 ： 二甲苯麝香， 7 ： 芝麻酚， IS ： 内标 ； 0082 图 18 实施例 3 的样品选择离子扫描色谱图 ； 0083 图 19 实施例 4 的样品选择离子扫描色谱图。 具体实施方式 说 明 书 CN 103869039 A 9 7/8 页 10 0084 以下结合具体实施方式对本发明做进一步说明。 0085 下面实施例中用到的标准品和。

35、内标如表 4 所示。 0086 表 4 七种禁用化合物标准品及内标信息 0087 0088 其它试剂 ： CH2Cl2， 色谱纯。无水硫酸钠 / 无水硫酸镁， 分析纯。 0089 其它辅助设备 ： 分析天平 （感量 0.0001g） ， 回旋振荡器， 微量移液器， 烘箱。 0090 主要检测仪器 ： 气相色谱质谱联用仪。 0091 实施例 1 定性确证与定量计算 0092 本发明实际仪器条件下， 定性离子、 定量离子的选择主要依据图8-图15各物质质 谱图的碎片及丰度确定。 待测样品液和标准工作溶液的选择离子色谱峰应在相同保留时间 处 （0.01min） 出现， 且对应质谱碎片离子的质荷比与标。

36、准品一致， 其丰度比与标准品相比 应符合 ： 相对丰度 50% 时， 允许 10% 偏差 ； 相对丰度 20% 50% 时， 允许 15% 偏差 ； 相 对丰度 10% 20% 时， 允许 20% 偏差 ； 相对丰度 10% 时， 允许有 50% 偏差， 此时可定性 确证目标分析物。以各自碎片相对丰度最高的质荷比作为定量离子。各禁用化合物的保留 时间、 定性离子和定量离子如表 5 所示。 0093 表 5 七种禁用化合物及内标物定量和定性选择离子表 0094 说 明 书 CN 103869039 A 10 8/8 页 11 0095 试样中各禁用化合物的含量按式 （1） 进行计算 ： 0096。

37、 0097 式中 ： 0098 Xi试样中禁用化合物的含量， 单位为毫克每千克 （mg/kg） ； 0099 Ci由标准曲线得出的试样中禁用化合物浓度， 单位为微克每毫升 （g/mL） ； 0100 Ci0空白本底含量值， 单位为微克每毫升 （g/mL） ； 0101 Vc萃取液的体积， 单位为毫升 （mL） ； 0102 m试样质量， 单位为克 （g） 。 0103 实施例 2 绘制标准工作曲线 0104 将表 2 中不同浓度的标准工作溶液 S1-S7 分别转移至色谱瓶中， 进行气相色谱质 谱联用分析， 采用内标法进行定量， 采用最小二乘法进行线性拟合， 结合香精香料实际样品 中禁用化学物含。

38、量较少特性， 采用强制过原点模式， 确保微量定量检测时的准确性和可靠 性。 0105 横轴为各禁用化合物与内标的浓度比， 纵轴为各禁用化合物与内标的响应比， 对 其进行最小二乘法回归分析， 即得到标准工作曲线， 工作曲线线性相关系数 R20.99。实际 测试中每个标准点测试两次， 取平均值进行计算， 实测时除咪唑外， 工作曲线线性相关系数 R20.999。各禁用化合物的标准工作曲线如图 1 图 7 所示。各禁用化合物全扫描质谱图 如图 17 所示。 0106 实施例 3 实际香精香料样品中七种禁用化合物测定 0107 将某香精香料样品摇匀， 用玻璃滴管吸取样品取样至 50ml 具塞三角锥形瓶中。

39、， 同 时用电子天平进行准确读数， 实际称量为 0.2987g， 加入 10ml 内标萃取液 （含有的 4g/ml 的 CH2Cl2溶液） ， 将具塞三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振 30min， 速率为 200rpm， 振 荡完毕后， 加入2g无水硫酸钠进行除水， 静置后移取清液， 用0.22um有机滤膜过滤， 收集滤 液， 上气相色谱质谱联用仪进行测试， 工作曲线同实施例 2， 定性定量方法同实施例 1， 选择 离子扫描色谱图如附图 18 所示， 将选择离子扫描条件下各物质响应信号代入标准工作曲 线计算， 求得该样品中甲醇含量为 243.34mg/kg， 其它禁用化合物未检出。 0108。

40、 实施例 4 实际香精香料样品中七种禁用化合物测定 0109 将某香精香料样品摇匀， 用玻璃滴管吸取样品取样至 50ml 具塞三角锥形瓶中， 同 时用电子天平进行准确读数， 实际称量为 0.3123g， 加入 10ml 内标萃取液 （含有的 4g/ml 的 CH2Cl2溶液） ， 将具塞三角锥形瓶放在回旋振荡器上进行摇振 30min， 速率为 200rpm， 振 荡完毕后， 加入2g无水硫酸钠进行除水， 静置后移取清液， 用0.22um有机滤膜过滤， 收集滤 液， 上气相色谱质谱联用仪进行测试， 工作曲线同实施例 2， 定性定量方法同实施例 1， 选择 离子扫描色谱图如附图 19 所示， 将选。

41、择离子扫描条件下各物质响应信号代入标准工作曲 线计算， 求得该样品中甲醇含量 50.22mg/kg， 香豆素含量 1.16mg/kg， 其它禁用化合物未检 出。 0110 最后应说明的是 ： 以上所述仅为本发明较佳实施例， 谨说明而非限制本发明的实 施范围， 参照上述实施例进行详细说明， 本领域技术人员应当理解， 对本发明进行修改或等 同替换， 而未脱离本发明的范围和实质的， 皆应仍属本发明涵盖的范围内。 说 明 书 CN 103869039 A 11 1/9 页 12 图 1 图 2 图 3 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 12 2/9 页 13 图 4 图 5 图 6 说。

42、 明 书 附 图 CN 103869039 A 13 3/9 页 14 图 7 图 8 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 14 4/9 页 15 图 9 图 10 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 15 5/9 页 16 图 11 图 12 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 16 6/9 页 17 图 13 图 14 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 17 7/9 页 18 图 15 图 16 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 18 8/9 页 19 图 17 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 19 9/9 页 20 图 18 图 19 说 明 书 附 图 CN 103869039 A 20 。