用于治疗人类炎症性疾病的脂质体皮质类固醇.pdf

本发明涉及用于人类炎症性疾病的位点特异性治疗的包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体的药物组合物，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括水溶形式的第一皮质类固醇，所述药物组合物以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量以不多于每两周一次的治疗频率为人类患者提供快速、强烈且持久的抗炎症效果。此外，本发明涉及上述药物组合物作为例如类风湿疾病或相关的炎症性结缔组织疾病、肾的炎症性疾病或炎症性肠病的炎症性疾病的介入治疗的应用，所述应用与第二游离皮质类固醇制剂的慢性治疗联合或与例如氨甲喋呤的疾病修饰剂的慢性治疗联合。

1.  一种药物组合物，所述药物组合物包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括水溶形式的第一皮质类固醇，以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量用在治疗人类炎症性疾病的方法中，其中所述治疗具有不多于每两周一次的治疗频率。

2.  用于治疗人类炎症性疾病的方法，所述方法包括对有该需求的人类给药药物组合物，所述药物组合物包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量的水溶形式的第一皮质类固醇，其中所述治疗具有不多于每两周一次的治疗频率。

3.  脂质体的用途，所述脂质体由不带电的形成囊泡的脂质组成，可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括水溶形式的第一皮质类固醇，以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量用于制备治疗人类炎症性疾病的药物，其中所述治疗具有不多于每两周一次的治疗频率。

4.  部件的试剂盒，包括：
a)药物组合物，所述药物组合物包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括水溶形式的第一皮质类固醇；和
b)包括第二游离皮质类固醇的药物组合物。

5.  用在治疗人类炎症性疾病的方法中的包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体的药物组合物和包括第二游离皮质类固醇的药物组合物的组合，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括水溶形式的第一皮质类固醇，以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量给药所述第一皮质类固醇，其中所述治疗具有不多于 每两周一次的治疗频率。

6.  用于治疗人类炎症性疾病的方法，所述方法包括对有该需求的人类给药包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体的药物组合物和包括第二游离皮质类固醇的药物组合物，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量的水溶形式的第一皮质类固醇，其中所述治疗具有不多于每两周一次的治疗频率。

7.  用在治疗人类炎症性疾病的方法中的包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体的药物组合物和包括疾病修饰剂的药物组合物的组合，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径并包括水溶形式的第一皮质类固醇。

8.  用于治疗人类炎症性疾病的方法，所述方法包括对有该需求的人类给药包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体的药物组合物和包括疾病修饰剂的药物组合物，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径并包括水溶形式的第一皮质类固醇。

9.  根据权利要求7所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合或根据权利要求8所述的方法，其中所述人类接受用包括疾病修饰剂的所述药物组合物的维持治疗，并且，其中所述人类在所述炎症性疾病发作后接受用包括脂质体的所述药物组合物的临时治疗。

10.  根据权利要求7至9的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合或方法，其中使用所述疾病修饰剂的所述治疗为所述炎症性疾病的维持治疗的一部分，并且其中使用所述脂质体的所述治疗为在所述炎症性疾病发作后的临时治疗。

11.  根据权利要求7至10的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合或方法，其中所述疾病修饰剂为氨甲喋呤、羟氯喹、来氟米特、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、5-ASA剂、6-巯基嘌呤、霉酚酸酯或硫唑嘌呤。

12.  根据权利要求7至11的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合或方法，其中所述治疗包括以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量给药包括脂质体的所述药物组合物，并且其中所述治疗具有不多于每两周一次的治疗频率。

13.  根据权利要求1至3或5至12的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述炎症性疾病为类风湿疾病或相关的炎症性结缔组织疾病、炎症性肠病或肾的炎症性疾病。

14.  根据权利要求1至13的任一项所述的用的在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、部件的试剂盒、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述第一皮质类固醇和/或所述第二游离皮质类固醇为用于全身性给药的皮质类固醇。

15.  根据权利要求14所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、部件的试剂盒、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇选自由泼尼松龙、地塞米松、甲基泼尼松龙组成的组中。

16.  根据权利要求1至15的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、部件的试剂盒、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述第一皮质类固醇和/或所述第二游离皮质类固醇为用于局部应用的皮质类固醇。

17.  根据权利要求16所述用在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、部件的试剂盒、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述皮质类固醇选自由布地奈德、氟尼缩松和氟替卡松丙酸盐组成的组中。

18.  根据权利要求1至3或12的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述剂量为：
不多于5mg/kg体重的泼尼松龙，或
不多于4mg/kg体重的甲基泼尼松龙或去炎松，或
不多于0.8mg/kg体重的地塞米松或倍他米松，或
不多于1.4mg/kg体重的氟氢可的松醋酸盐。

19.  根据权利要求1至3或12的任一项所述的用在治疗人类炎症性疾病的方法中的药物组合物、用在治疗人类炎症性疾病的方法中的组合、用途或方法，其中所述剂量为：
不多于2.5mg/kg体重的泼尼松龙，或
不多于2mg/kg体重的甲基泼尼松龙或去炎松，或
不多于0.4mg/kg体重的地塞米松或倍他米松，或
不多于0.7mg/kg体重的氟氢可的松醋酸盐。

用于治疗人类炎症性疾病的脂质体皮质类固醇
技术领域
本发明涉及药物领域。更具体地，本发明涉及对炎症性疾病的皮质类固醇治疗。
背景技术
如炎症性结缔组织疾病(例如类风湿关节炎(RA)、肾的炎症性疾病和炎症性肠病(IBD)的炎症疾病，为慢性、进行性和衰退性疾病，经常导致残疾。泼尼松龙和其它皮质类固醇可对炎症疾病有效，但由于包括骨质疏松症、对下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的抑制、肌肉萎缩、胰岛素耐受、易发生皮肤擦伤、严重细菌感染的增加的风险和心血管状况的副作用(AE)的高发病率，上述皮质类固醇的全身性应用受限。在多数情况下，这些AE的严重性取决于处方药剂的剂量、暴露持续时间和效力。除了差的安全性状况，在体内发炎区域的差的定位性也限制了皮质类固醇在患者中的有效性，因为这需要频繁给药皮质类固醇以达到足够的疗效。
近年来，已经开展了数条研究路线以改善皮质类固醇的治疗指数。这些路线涵盖例如，开发选择性皮质类固醇(GC)受体激动剂(SEGRA)、将皮质类固醇与增强其在激活的炎症细胞中的效果的药物联合、开发控释制剂、和设计实现将皮质类固醇靶向输送至炎症的实际位点的高级剂型。可通过封装在长循环脂质体(LCL)中实现皮质类固醇的靶向输送，其中LCL在静脉注射后循环，并同时由于增加的血管渗透性而在炎症病变的位点处渗出，在靶位点选择性地建立皮质类固醇局部的补给(depot)。该方法例如在WO02/45688和WO03/105805中描述，并在对关节炎和其它炎症疾病的实验动物模型的临床前研究中被证明有效。
通常，在这些实验中，10mg/kg剂量的PEG-脂质体泼尼松龙磷酸盐(PLP)在治疗后导致炎症的消退长达1星期，此后炎症又缓慢恢复。20mg/kg的PEG-脂质体泼尼松龙磷酸盐可导致在治疗后两星期仍能观察到炎症的消退。同样剂量的游离泼尼松龙的单次治疗无效，而用游离泼尼松龙的每日重复治疗仅导致短暂的减轻的效果，如实施例1中的研究结果所示(图1A和1B)。
然而，以10mg/kg和20mg/kg的皮质类固醇的剂量水平对人类进行脂质体皮质类固醇静脉给药是不现实的。如果对体重为75kg的个体以每kg体重20mg剂量的泼 尼松龙给药，则总共给药1.5g泼尼松龙。通常脂质体泼尼松龙制剂的泼尼松龙含量为每mL1.5mg泼尼松龙。因此，每kg体重20mg的泼尼松龙的剂量将需要每次治疗一升的制剂(1.5g泼尼松龙/1.5mg/mL)。该制剂的这样的量则要求以超过12小时的时间输液，以避免输液反应或过敏反应，即由例如脂质体的颗粒对人类的静脉给药导致的假性变态反应。此外，这些高泼尼松龙剂量造成对患者给药巨大量的脂质体组分，例如磷脂和胆固醇。因此优选更低剂量的脂质体皮质类固醇用于治疗人类的炎症性疾病，因为在这种情况下，需要给药更少的脂质体皮质类固醇制剂，并且给药时间不必长达12个小时。然而，在动物研究中，低于10mg/kg的脂质体泼尼松龙的剂量具有小得多的持续效果，例如实施例1中所示(图2A和2B)。1mg/kg的泼尼松龙仅在4天内具有有限的效果。2mg/kg的泼尼松龙尽管稍微更有效，但显示同样的效力持续时间。甚至在5mg/kg时治疗活性也不会持续超过1周。
在现有公开中描述了相似的观察。例如，WO02/45688描述了10mg/kg的脂质体泼尼松龙磷酸盐的剂量在患有佐剂诱导的关节炎的大鼠中有效。尽管其提到1mg/kg的脂质体泼尼松龙磷酸盐同样有效，但是没有指出疗效的持续时间。类似的科学公开，Metselaar JM等2003，证明了1mg/kg的脂质体泼尼松龙磷酸盐的剂量在患有佐剂诱导的关节炎的大鼠中具有治疗活性，该活性仅持续4天(参见Metselaar JM.等的图3A)。因而在大鼠中1mg/kg的剂量的持续治疗会需要至少每4天一次的脂质体皮质类固醇的给药。
EP2127639描述了脂质体皮质类固醇在治疗心血管疾病中的用途。作为实例，描述了对患有主动脉粥样硬化斑块的兔子的治疗。以15mg/kg体重的剂量的脂质体泼尼松龙磷酸盐治疗兔子，这导致持续长达两周的疗效。没有测试或描述更低剂量的脂质体皮质类固醇。
WO2006/060759涉及脂质体去炎松用于治疗呼吸道的用途。描述了允许每一周至两周一次通过雾化器给药，没有提到脂质体去炎松的剂量。WO2006/060759的实验部分描述了哮喘的小鼠模型。每周用脂质体去炎松治疗小鼠一次。
因此，现有技术教导了以至少10mg/kg体重的剂量给药可导致在炎症性疾病的动物模型中持续至少两周的疗效。在这些动物中以更低剂量的脂质体皮质类固醇给药仅在以更高频率进行治疗时(例如每周一次或每4天一次)才具有令人类满意的疗效。因此，根据在现有公开和本申请实施例1中描述的在大鼠、小鼠和兔子中进行的实验，本领域技术人员会预期为了实现有效的治疗反应，低于10mg/kg的皮质类固醇的剂量水平的治疗会需要至少在一周内重复，可能甚至每4天重复。在本发明之前，预期低于10mg/kg的皮质类固醇的剂量不可能获得持续的治疗反应。最多会预期短期效果， 这需要给药多剂量的脂质体皮质类固醇。在临床情况下，这意味着，在这些低剂量水平，由于脂质体皮质类固醇会在门诊情况下给药，患者则需要每4至7天去一次医院以接受新的静脉输液，而这是不实际的。为了使脂质体皮质类固醇的治疗可行，患者需要获得能够让他/她在治疗后回家并无需重复治疗、或至少无需在之后的两周或甚至更长时间段内回到医院的持续的治疗反应。此外，治疗的输液时间优选不超过约4小时，因此治疗需要限制在最多200mL的脂质体皮质类固醇制剂。最后，治疗优选允许患者继续他/她的维持治疗，包括例如相对便宜且广泛使用的小分子疾病修饰剂(例如氨甲喋呤、羟氯喹、来氟米特、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、5-ASA剂、6-巯基嘌呤或硫唑嘌呤)。这样的疾病修饰剂对抑制炎症的临时恶化无效，也不用于抑制炎症的临时恶化，而是用于修饰疾病的长期过程。临床实践显示了，缺少对炎症的短期恶化的有效治疗时，患者有可能停止他/她的相对便宜的(常用的)疾病修饰剂的维持治疗，反而希望开始以相对较贵的生物产品(例如英夫利昔单抗、依那西普、阿达木单抗、阿那白滞素及相关产品)的治疗。与疾病修饰剂相比，这样的生物产品在急性情况下有效，但是像疾病修饰剂那样，需要用作为维持治疗。然而，使用这样的生物产品的维持治疗的成本比使用疾病修饰剂的治疗成本高很多倍，并且患者转向生物产品的趋势会最终造成医疗成本负担的巨大的增长。
发明内容
本发明的目的是通过提供能够被用于在患有例如炎症性结缔组织疾病(尤其是类风湿关节炎)、肾的炎症性疾病或炎症性肠病的炎症性疾病的恶化或活跃期的患者中实现长期且具有临床意义的治疗反应的脂质体皮质类固醇制剂以克服上述限制。因此，本发明在一个方面提供了用于治疗人类炎症性疾病的方法，所述方法包括对有该需求的人类给药包括由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体的药物组合物，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量的水溶形式的第一皮质类固醇，其中所述治疗具有不多于两周一次的治疗频率。还提供了脂质体的用途，所述脂质体由不带电的形成囊泡的脂质组成，所述脂质体可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量的水溶形式的第一皮质类固 醇，所述第一皮质类固醇用于制备用于治疗人类炎症性疾病的药物，其中所述治疗具有不多于两周一次的治疗频率。
脂质体由不带电的形成囊泡的脂质组成，可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质和/或不多于10摩尔％的PEG化的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并包括水溶形式的第一皮质类固醇，这里也将所述脂质体称作“用于用在根据本发明的方法中的脂质体”和“如这里限定的脂质体”。
这里将包括这样的脂质体的药物组合物称作“用于用在根据本发明的方法的药物组合物”和“包括这里所述的脂质体的药物组合物”。
本发明提供了以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量对患有炎症性疾病的人类给药脂质体皮质类固醇造成多达2周或更长的出人意料的长期持续的疗效的启示。如实施例2中所示，在类风湿关节炎(RA)患者中以相对较低的150mg(约2mg/kg)的剂量显示出快速、强烈且持久的抗炎活性，所述活性与目前市场上用于这些疾病的相对较新的静脉注射的抗TNF-α的生物品相当(一滴EULAR DAS-28评分1.5点)。与大鼠中在这些剂量水平上的已知临床前研究结果相比，在这种低剂量水平(并因此临床上更实用)中观察到的长期持续效果是新的(参见图6中对实施例1中的大鼠临床前研究结果与实施例2中报道的根据本发明的对人类的临床研究结果的比较)。在临床实践中，这意味着，当患者经历炎症疾病的恶化或活跃期(即疾病发作)时，单次治疗可足以保持对疾病发作的控制。或者，如果需要重复治疗，只要恶化或活跃疾病期还在持续，两周一次或更低的治疗频率可足以保持对疾病发作控制。
将用于用在根据本发明的方法中的包括脂质体的药物组合物与包括游离的皮质类固醇的第二药物组合物有益地联合。本发明人类发现静脉注射的脂质体皮质类固醇的治疗与皮质类固醇的肌肉内注射剂型互补。如实施例2中所证明，与肌肉内给药的等效剂量的游离皮质类固醇(实施例2中的甲基泼尼松龙)相比，所述脂质体皮质类固醇在患有RA的人类中的治疗活性不仅更强，还更快。如图3至5中所示，脂质体皮质类固醇提供了快速且强烈的治疗反应，尤其在第一周内。在给药后第一个两周内其具有最高的治疗活性，即EULAR疾病活性评分的最大减少，此后该评分再次逐渐增加。另一方面，游离皮质类固醇的肌肉内注射剂型在几周后引起减轻的治疗反应。给药后治疗活性逐渐增加，并在给药后三至七周时达到其最大治疗活性。因此，肌肉内注射给药的游离皮质类固醇作用为贮库制剂。因此脂质体皮质类固醇与游离的皮质类固醇的联合尤其有益，因为同时实现了强 的直接治疗活性以及给药后几周的强治疗活性。因此，如果使用这样的联合，脂质体皮质类固醇作用为对炎症性疾病的直接治疗，并且游离皮质类固醇作用为贮库制剂，即更慢地建立的治疗。因此同时进行这两种治疗产生在更长的时间内(4至6周或更长)的有效性，这样可避免脂质体制剂的重复治疗至少4周的时间。
因此，在一个实施方式中，本发明提供了用于治疗人类炎症性疾病的方法，所述方法包括对具有该需求的人类给药包括这里所述的脂质体的药物组合物，以及包括第二游离皮质类固醇的药物组合物。优选不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量，以及不多于两周一次的脂质体皮质类固醇的治疗频率。
还提供了包括含这里所述的脂质体的药物组合物以及含第二游离皮质类固醇的药物组合物的部件的试剂盒。所述部件的试剂盒进一步优选包括用于不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇且治疗频率为不多于每两周一次的第一脂质体皮质类固醇的给药方案，及可选地0.5至5mg/kg体重之间的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的第二游离皮质类固醇的给药方案的说明书。优选所述部件的试剂盒包括对应于不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇且治疗频率为不多于每两周一次的给药方案的量的脂质体皮质类固醇。因此，所述部件的试剂盒优选包括一个或多个剂量单位，每个剂量单位适合以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙的剂量或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇给药第一脂质体皮质类固醇。此外，所述部件的试剂盒优选包括一个或多个剂量单位，每个剂量单位适于以0.5至5mg/kg体重之间的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量给药第二游离皮质类固醇。
此外提供的是包括这里所述的脂质体的药物组合物与包括第二游离皮质类固醇的药物组合物的组合，所述组合用在用于治疗人类炎症性疾病的方法中，优选不多于5mg/kg体重的脂质体泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量，其中所述治疗具有不多于每两周一次的治疗频率。
这里所用的“游离皮质类固醇”是指未包含在例如脂质体的微囊泡中的皮质类固醇。可选地，所述游离皮质类固醇与药学上可接受的载体偶合和/或存在于药学上可接受的稀释剂中，可选地在一种或多种药学上可接受的添加剂存在下。第二游离皮质类固醇优选为脂溶性形式，且可与第一脂质体皮质类固醇相同或不同。优选第二游离皮质类固醇为用在用于治疗人类炎症性疾病的临床实践中使用的皮质类固醇，通常为泼尼松龙、甲基泼尼松龙、去炎松、地塞米松、倍他米松、可 的松或它们各自的衍生物，例如泼尼松龙醋酸盐、甲基泼尼松龙醋酸盐、去炎松醋酸盐、倍他米松醋酸盐。
在根据本发明的方法中，优选对有该需求的人类口服、关节、静脉、皮下给药或最优选肌肉内给药包括所述第二游离皮质类固醇的药物组合物。优选静脉给药，更优选通过静脉输液给药包括这里所述的脂质体的药物组合物。
如果使用包括这里所述的脂质体和第二游离皮质类固醇的给药的联合治疗，那么所述治疗优选包括以不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量以不多于每两周一次的治疗频率给药包括所述脂质体的药物组合物。所述第二游离皮质类固醇优选以0.5至5mg/kg之间的剂量给药，优选1至5mg/kg，给药频率为不多于每两周一次。最优选地，所述第一脂质体皮质类固醇和所述第二游离皮质类固醇共同给药。“共同”是指第一和第二皮质类固醇同时或几乎同时给药。第二游离皮质类固醇优选在给药第一脂质体皮质类固醇开始前一小时之内、在给药第一脂质体皮质类固醇期间、或在给药第一脂质体皮质类固醇结束后一小时之内给药，更优选在给药第一脂质体皮质类固醇之前或之后30分钟之内给药，甚至更优选在给药第一脂质体皮质类固醇之前或之后15分钟之内或在给药第一脂质体皮质类固醇期间给药。
用在根据本发明的方法中的包括脂质体的药物组合物还有益地与包括疾病修饰剂的药物组合物联合。根据本发明，用在根据本发明的方法中的包括脂质体的药物组合物特别适合阻碍炎症性疾病的活跃发作。当本来由于疾病修饰剂的持续治疗而具有相当稳定的病程的患者偶尔且意外地经受炎症的活跃发作或恶化时，这样的药物脂质体组合物提供了有效的介入治疗。优选不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除泼尼松龙以外的皮质类固醇的剂量，以及不多于每两周一次的脂质体皮质类固醇的治疗频率。
因此，在一个实施方式中，本发明提供了用于治疗人类炎症性疾病的方法，包括对具有该需求的人类给药包括这里所述的脂质体的药物组合物和包括疾病修饰剂的药物组合物。所述治疗包括用含疾病修饰剂的所述药物组合物的维持治疗和用包括脂质体皮质类固醇的药物组合物的对炎症的恶化的临时治疗(Temporary treatment)。
还提供了包括这里所述的脂质体的药物组合物与包括疾病修饰剂的药物组合物的组合，以用在用于治疗人类炎症性疾病的方法中。
如实施例2中详述，发现接受氨甲喋呤的维持治疗的患有类风湿关节炎的患者比未摄取氨甲喋呤或摄取另一种疾病修饰剂的患者对脂质体皮质类固醇的治疗 更敏感。尽管事实上文献中并未报道皮质类固醇与氨甲喋呤的联合治疗，实施例2中报道的临床试验显示接受游离皮质类固醇与氨甲喋呤联合的肌肉内给药的患者并没有显示出比接受游离皮质类固醇的而没有氨甲喋呤的肌肉内给药患者更好的反应(图7)。相反，根据本发明，与单独的脂质体皮质类固醇相比，脂质体皮质类固醇与氨甲喋呤的联合确实提供了更好的结果。因此，这里所述的脂质体与氨甲喋呤联合的维持治疗在降低疾病活性方面高度有效，而用游离皮质类固醇与氨甲喋呤的联合治疗这样的患者的却不是这样。在临床实践中，这意味着本来被相对便宜的口服疾病修饰剂(如氨甲喋呤)的维持治疗成功治疗且经受了该疾病的活跃期或恶化的患者现在可以非常有效地被脂质体皮质类固醇的单次输液或仅仅几次重复输液治疗。这允许具有低频率的疾病发作的患者能够快速回到疾病的低活跃期并继续他们相对便宜的疾病修饰剂的治疗，不必或无需转到更贵的生物品的治疗，这种治疗近来更多地进入了炎症疾病的领域。除了患者的方便外，从卫生经济学的视角来说这也很重要，因为需要使用脂质体皮质类固醇的治疗有助于将与炎症疾病的治疗相关的成本保持在限度以内。
因此，在优选的实施方式中，患有炎症性疾病的人类接受包括疾病修饰剂的药物组合物的维持治疗并在所述炎症性疾病的发作后接受包括脂质体的药物组合物的临时治疗。
本领域中已知术语“疾病修饰剂”，并指在炎症疾病中被用作的维持治疗的小分子药物，即患者在长时间段内摄取该药物以调节疾病的进程，所述时间段通常长于一个月，但更通常长于三个月。例如，用于类风湿关节炎的治疗的疾病修饰剂为疾病修饰抗风湿药物(DMARD)。用作炎症疾病中的维持治疗的这样的小分子药物优选具有不多于800道尔顿的分子量。优选用在根据本发明的方法中的疾病修饰剂选自用于炎症疾病的持续治疗的临床实践中给出的相对便宜的疾病修饰剂的组中，例如氨甲喋呤、羟氯喹、来氟米特、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、5-ASA剂、6-巯基嘌呤、霉酚酸酯和硫唑嘌呤。在特别优选的实施方式中，所述疾病修饰剂为氨甲喋呤。如果根据本发明治疗的疾病为类风湿疾病或相关的炎症性结缔组织疾病，所述疾病修饰剂优选选自由氨甲喋呤、羟氯喹、来氟米特、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、5-ASA剂、6-巯基嘌呤和硫唑嘌呤组成的组中，最优选所述疾病修饰剂为氨甲喋呤。如果根据本发明治疗的疾病为肾的炎症性疾病，所述疾病修饰剂优选选自由羟氯喹、霉酚酸酯、硫唑嘌呤和环磷酰胺组成的组中。如果根据本发明治疗的疾病为炎症性肠病，所述疾病修饰剂优选选自由5-ASA剂、硫唑嘌呤、6-巯基嘌呤和氨甲喋呤组成的组中。
如这里所用的“维持治疗”是指患者在长时间段内接受的关于调节疾病的进程的治疗，通常长于一个月，但更通常长于三个月。通常，维持治疗包括以每日剂量给药药物，如疾病修饰剂。
如这里所用的“临时治疗”是指患者通过单独剂量或有限次数(即小于10，优选小于5，例如2或3次的剂量)接受的治疗。这里使用“临时治疗”以与“维持治疗”的治疗区分，如上所述，“维持治疗”需要在长时间段内的治疗。
如这里所用的“发作”是指炎症性疾病进入活跃期或恶化，因而疾病表现的严重性的增加的期间。
优选地，包括疾病修饰剂的药物组合物以用于口服的片剂、胶囊或酏剂口服的形态给药。包括如这里所述的脂质体的药物组合物优选静脉给药，更优选通过静脉输液给药。如果使用包括如这里所述的脂质体和疾病修饰剂的给药的联合治疗，所述治疗优选包括以不多于5mg/kg体重的皮质类固醇的剂量以不多于每两周一次的治疗频率给药含所述脂质体的药物组合物。
如这里所用的“治疗频率”是指用在根据本发明的方法中的(包括)脂质体(的药物组合物)的给药频率。例如，每两周一次的治疗频率是指每两周一次对患者给药该药物组合物，即两次不同剂量的给药被隔开约两周。在临床实践中，这可以是两周加减一天或两天。不多于两周一次的治疗频率是指以两周一次或通常更少对患者给药该药物组合物，例如每三周一次或每四周一次。因此，两次服药之间的时间为至少两周，或者根本没有给药第二个剂量。如这里所述的药物组合物的唯一或单独给药也涵盖在术语“不多于每两周一次的治疗频率”中。
根据本发明，用在根据本发明的方法中的包括脂质体的药物组合物的剂量为不多于5mg/kg体重的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇。如这里所用的“等效剂量”定义为需要产生与给定剂量的泼尼松龙的药理效果相同的药理效果的皮质类固醇的剂量。例如，如果泼尼松龙的剂量为2.5mg/kg，另一种皮质类固醇的等效剂量为具有与2.5mg/kg的泼尼松龙相同的药理效果的剂量。术语“药理效果”是指皮质类固醇在人体上的效果，优选疗效。与泼尼松龙相比，甲基泼尼松龙和去炎松具有1.25的效价比。如这里所用的“效价比”是指皮质类固醇与泼尼松龙的药理效果的比，而泼尼松龙的效力被设定为1。因此，具有1.25的效价比的皮质类固醇是指5/1.25＝4mg/kg的剂量的所述皮质类固醇具有与5mg/kg的剂量的泼尼松龙相当的效果。因此所述4mg/kg的剂量为5mg/kg的泼尼松龙的等效剂量。如前所述，与泼尼松龙相比，甲基泼尼松龙和去炎松具有1.25的效价比。因此，在一个实施方式中，用在根据本发明的方法中的脂质体包括甲 基泼尼松龙或去炎松，并且所述剂量为不多于4mg/kg体重的甲基泼尼松龙或去炎松。与泼尼松龙相比，地塞米松和倍他米松具有6.5的效价比。因此，在另一个实施方式中，用在根据本发明的方法的脂质体包括地塞米松或倍他米松，并且所述剂量为不多于0.8mg/kg体重的地塞米松或倍他米松，因为所述剂量为与5mg/kg体重的泼尼松龙等效的剂量。作为另一个实施例，与泼尼松龙相比，氟氢可的松醋酸盐具有3.5的效价比。因此，在另一个实施方式中，用在根据本发明的方法中的脂质体包括氟氢可的松醋酸盐，并且所述剂量为不多于1.4mg/kg体重的氟氢可的松醋酸盐，因为所述剂量为与5mg/kg体重的泼尼松龙等效的剂量。
该剂量通常可为4mg/kg的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇或更低，例如不多于3.5mg/kg的泼尼松龙的剂量或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇，或不多于3mg/kg的泼尼松龙的剂量或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇。优选不多于2.5mg/kg体重的泼尼松龙的剂量或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇。优选剂量的实例为2.5mg/kg、2mg/kg、1.5mg/kg和1mg/kg。在一个实施方式中，用在根据本发明的方法的脂质体包括甲基泼尼松龙或去炎松，且所述剂量为不多于2mg/kg体重的甲基泼尼松龙或去炎松。在另一个实施方式中，用在根据本发明的方法中的脂质体包括地塞米松或倍他米松，并且所述剂量为不多于0.4mg/kg体重的地塞米松或倍他米松。在再一个实施方式中，用在根据本发明的方法的脂质体包括氟氢可的松醋酸盐，并且(包括)所述剂量(的药物组合物)为不多于0.7mg/kg体重的氟氢可的松醋酸盐。上述剂量都为与5mg/kg体重的泼尼松龙等效的剂量。最优选地，所述剂量为不多于2.5mg/kg体重的泼尼松龙。
可在两周后重复治疗，然而三周、四周或更长的治疗间隔也是可能的。或者，如果该单独治疗足以克服人类炎症疾病的活跃期或恶化，那么可使用用在根据本发明的方法中的具有不多于5mg/kg的泼尼松龙或等效剂量的除了泼尼松龙以外的皮质类固醇的药物组合物的单独治疗，所述剂量优选为不多于4mg/kg，更优选不多于3mg/kg，更优选不多于2.5mg/kg。
用于用在根据本发明的方法中的包括脂质体、游离皮质类固醇或疾病修饰剂的药物组合物优选进一步包括药学上可接受的载体、稀释剂和/或赋形剂。
用于用在根据本发明的方法中的脂质体具有40nm至200nm的平均粒径，使用Malvern DLS测量激光装置通过动态光散射确定所述平均粒径。优选脂质体具有75nm和150nm之间的直径。脂质体优选具有相对较低的多分散性系数，即0.2以下，这意味着粒径分布较窄。
用在根据本发明的方法中的脂质体通常包括不带电的形成囊泡的脂质，所述脂质来自磷脂的组中，所述磷脂可以是人工合成的或来自天然来源，可选地被人工修饰。优选所述不带电的形成囊泡的脂质为部分合成或全部合成。包括由天然来源获得的或部分或全部合成的，或可变的脂质链长和不饱和度的磷脂酰胆碱(PC)适合用于本发明中。如这里使用，术语“部分合成的或完全合成的形成囊泡的磷脂”意思是至少一种形成囊泡的磷脂，所述磷脂为人工制造的或来源于天然产生的磷脂，所述磷脂被人工修饰。优选的磷脂含有产生具有相对较高的转变温度的双分子层的饱和烷基链。特别优选二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、氢化大豆磷脂酰胆碱(HSPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)和氢化蛋磷脂酰胆碱(HEPC)。用在根据本发明的方法中的脂质体包括不多于10摩尔％的PEG化的脂质和/或不多于10摩尔％的带负电荷的脂质。优选的PEG化的脂质由在一端的具有200至20,000道尔顿之间的分子量的PEG聚合物和在另一端的亲脂性脂锚定分子组成。通常锚定分子选自磷脂和固醇的组中。优选的PEG化的脂质为PEG2000-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)和PEG2000-胆固醇。带负电荷的脂质优选为二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)和二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)。用于用在根据本发明的方法中的脂质体进一步优选包括合成的或天然来源的固醇或类固醇，所述固醇和类固醇在A环的3位上具有羟基。在固醇化合物的组中，优选胆固醇。
基于制剂中形成囊泡的脂质的总摩尔比，聚合物脂质缀合物和带负电荷的脂质的部分为0至10摩尔％，且优选1至10摩尔％，更优选2.5至10摩尔％。带负电荷的脂质，特别是聚合物-脂质缀合物在脂质体制剂中的存在稳定了该制剂，并在脂质体的循环时间上具有有利的效果。然而，通过以物理指标仔细地选择具体的脂质组合物，可获得合适的长循环时间，而不使用PEG-脂质缀合物或带负电荷的脂质。例如，50nm至100nm的DSPC和胆固醇和/或如鞘磷脂的鞘脂的脂质体适用于根据本发明的方法中。
在特别优选的实施方式中，本发明提供了用于根据本发明的用途或根据本发明的方法中的脂质体，其中所述脂质体包括0至50mol％的胆固醇、50至90mol％的不带电的部分合成或全部合成的形成囊泡的脂质、0至10mol％的与聚乙二醇偶合的两亲性形成囊泡的脂质和0至10mol％的带负电荷的形成囊泡的脂质。例如根据WO02/45688或WO03/105805中所述的方法制造这样脂质体。然而，其中并未描述根据本发明的低剂量和治疗频率。用于用在根据本发明的方法中的脂质体优选具有约75nm至150nm之间的平均粒径尺寸范围。如上所述，所述部分合成或 全部合成的形成囊泡的脂质优选选自由DSPC、DPPC、HSPC和HEPC组成的组中。
用在根据本发明的方法中的脂质体的具体实例为：
·由不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体，包括不多于10摩尔％的由聚乙二醇衍生处理的两亲性形成囊泡的脂质，并且可选地包括不多于10摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并且含有皮质类固醇，其特征在于所述皮质类固醇以水溶形式存在；
·由胆固醇和选自DSPC、HSPC、HEPC和DPPC的不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径且含有皮质类固醇，其特征在于所述皮质类固醇以水溶形式存在；
·由不带电的形成囊泡的脂质体和不多于5摩尔％的带负电荷的二棕榈酰磷脂酰甘油组成的脂质体，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并且含有皮质类固醇，其特征在于所述皮质类固醇以水溶形式存在；
·由胆固醇和选自部分或全部合成的磷脂的不带电的形成囊泡的脂质组成的脂质体，，可选地包括不多于5摩尔％的带负电荷的形成囊泡的脂质，所述脂质体具有在40nm至200nm的尺寸范围内的选定的平均粒径，并且含有皮质类固醇，其特征在于所述皮质类固醇以水溶形式存在。
如所述，可根据在制备常用的脂质体或PEG-脂质体中所使用的方法(例如WO02/45688或WO03/105805中所公开的方法)制备根据本发明使用的脂质体。通过将皮质类固醇溶解在水相中以将活性成分被动加载至脂质体内足以达到充分的封装，但也可以使用其它方法，以进一步增加封装效率。用于形成脂质体的脂质组分可选自各种形成囊泡的脂质，例如磷脂、鞘脂和固醇。通过例如鞘磷脂和麦角固醇代替(全部或部分)这些基本组分看来是可能的。为了在脂质体中的有效封装水溶性皮质类固醇，从而避免药物从脂质体中泄漏，尤其是具有饱和、固化的酰基链的磷脂组分显示为有效。
用于用在根据本发明的方法中的脂质体组合物包括水溶性皮质类固醇。这里将术语“水溶性”定义为在25℃的温度下在水中或缓冲为中性pH的水中具有至少10g/l的溶解度。根据本发明可被有益地使用的水溶性皮质类固醇为由具有游离羟基的皮质类固醇与例如C2至C12脂肪性饱和和不饱和二羧酸的有机酸、和例如 磷酸和硫酸的无机酸制备的碱金属盐和铵盐。作为碱金属盐，优选钾盐和钠盐。也可使用其它的带正电荷或负电荷的皮质类固醇的衍生物。水溶性皮质类固醇的具体实例为倍他米松磷酸钠、地奈德磷酸钠、地塞米松磷酸钠、氢化可的松磷酸钠、氢化可的松琥珀酸钠、甲基泼尼松龙磷酸二钠、甲基泼尼松龙琥珀酸钠、氢化泼尼松磷酸钠、氢化泼尼松琥珀酸钠、泼尼索酯盐酸、泼尼松龙磷酸二钠、泼尼松龙琥珀酸钠、曲安奈德磷酸二钠和曲安奈德磷酸二钠。在这些皮质类固醇中，优选泼尼松龙磷酸二钠、泼尼松龙琥珀酸钠、甲基泼尼松龙磷酸二钠、甲基泼尼松龙琥珀酸钠、地塞米松磷酸二钠和倍他米松磷酸二钠。上述皮质类固醇通常被用于抗炎症疾病和障碍的全身性治疗中。因此，在一个实施方式中，第一皮质类固醇包括在用于根据本发明的方法中的脂质体中，和/或第二游离皮质类固醇为用于全身性给药的皮质类固醇。如这里所用，“用于全身性给药的皮质类固醇”意思是所述皮质类固醇是在用于抗炎症疾病的全身性治疗中的临床实践中。
由于已经证明了通过在具有40nm至200nm的平均粒径的长循环脂质体中使用水溶形式的皮质类固醇，发生了药物对发炎位点的有效靶定，因此本发明也可有利地应用于皮质类固醇，由于各种原因，所属皮质类固醇通常被用于局部应用。这样的皮质类固醇例如包括阿氯米松双丙酸盐、安西缩松、倍氯米松单丙酸盐、倍他米松17-戊酸盐、环甲松(ciclomethasone)、氯倍他索丙酸盐、氯倍他松丁酸盐、地泼罗酮丙酸盐、地奈德、去氧米松、地塞米松醋酸盐、双氟可龙戊酸盐、二氟拉松二醋酸盐、双氟可龙、二氟泼尼酯、特戊酸氟米松、氟尼缩松、氟轻松醋酸盐、醋酸氟轻松、特戊酸氟考龙、氟米龙醋酸盐(fluormetholone acetate)、氟泼尼定醋酸盐、哈西缩松、卤米松、氢化可的松醋酸盐、甲羟孕酮、甲基泼尼松龙醋酸盐、莫米松糠酸盐、帕拉米松醋酸盐、泼尼卡酯、泼尼松龙醋酸盐、泼尼立定、瑞美松龙、特戊酸氢可的松和己曲安奈德。特别感兴趣的局部用皮质类固醇为，例如，布地奈德、氟尼缩松和氟替卡松丙酸盐，一旦这些药物在体循环中变得可用，所述局部用皮质类固醇就被快速有效地清除(clearance)。通过根据本发明制备水溶形式的这些类固醇并将其封装至长循环的脂质体中，现在可能全身性给药这些皮质类固醇，以达到位点特异性的药物输送，从而避免与全身性治疗相关的副作用，并克服皮质类固醇所固有的问题，例如快速释放。在这方面，显示布地奈德磷酸二钠为具有很大意义的盐。因此在一个实施方式中，用于用在根据本发明的方法中的包含在脂质体中的第一皮质类固醇和/或第二游离皮质类固醇为用于局部应用的皮质类固醇。如这里使用，“用于局部给药的皮质类固醇”意思是所述皮质类固醇用在抗炎症疾病的局部治疗的临床实践中，即所述皮质类 固醇被应用于例如皮肤的体表或例如阴道粘膜、肛门粘膜、喉粘膜和眼粘膜的粘膜上。
可被根据本发明的脂质体组合物成功治疗的炎症性疾病的实例为炎症性结缔组织疾病、肾的炎症性疾病和炎症性肠病(IBD)。炎症性结缔组织疾病的具体实例为类风湿关节炎、全身性红斑狼疮(以例如狼疮性肾炎作为其显著的临床表现之一)、强直性脊柱炎、骨关节炎和牛皮癣性关节炎。根据本发明的方法治疗的炎症性疾病优选为风湿性疾病，更优选类风湿关节炎、或炎症性肠病、或肾的炎症性疾病。在炎症性肠病中，根据本发明治疗的炎症性疾病优选溃疡性结肠炎和克罗恩病。根据本发明治疗的肾的炎症性疾病优选为肾小球肾炎、狼疮性肾炎、急性移植排斥反应和动静脉瘘衰竭。
在以下实施例中进一步解释本发明。这些实施例不限制本发明的范围，而仅用于说明本发明。
附图说明
图1.脂质体和游离泼尼松龙磷酸盐(PLP)在患有佐剂诱导的关节炎的大鼠中的治疗的治疗活性。
A.用10mg/kg的PLP-聚乙二醇(PEG)脂质体(实心圆)、10mg/kg的游离PLP(实心方形)和生理盐水对照治疗(空心方形)的单独治疗的肉眼检查爪炎症评分的效果。
B.用20mg/kg的PLP-(PEG)脂质体(实心圆)的评分、20mg/kg的游离PLP(实心方形)和生理盐水对照(空心方形)的每日治疗的评分的效果。棒形显示5只大鼠的平均值和SEM。在第14天进行治疗。
图2.增加剂量水平的泼尼松龙磷酸盐(PLP)-聚乙二醇(PEG)脂质体在患有佐剂诱导的关节炎的大鼠中的单独治疗的治疗活性。
A.用1mg/kg的PLP-PEG脂质体(灰色圆)、10mg/kg的游离PLP(实心方形)和生理盐水对照治疗(空心方形)的肉眼检测爪炎症评分的效果。
B.用2mg/kg的PLP-PEG脂质体(灰色圆)、5mg/kg的PLP-PEG脂质体(实心方形)和生理盐水对照(空心方形)的评分的效果。
棒形显示3至5只大鼠的平均值和SEM。在第14天(A)和第13天(B)进行治疗。
图3.用150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂质体(实心圆)和等效剂量的120mg(1.6mg/kg)的甲基泼尼松龙(肌肉内贮库制剂，空心方形)的EULAR疾病活性 评分(DAS28分)的效果。棒形显示两个治疗组中的7位受试人类的平均值和SEM。值表示为在治疗当天的疾病评分(基线)的％，基线定义为100％。
图4.在150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂质体(测试药物)或等效剂量的120mg(1.6mg/kg)的甲基泼尼松龙(对照药物)后达到良好、减轻或无EULAR响应的患者的分布。棒形显示两个治疗组中的7位受试人类的平均值和SEM。
图5.在150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂质体(测试药物)或等效剂量的120mg(1.6mg/kg)的甲基泼尼松龙(对照药物)后由VAS评分确定的疼痛强度。
棒形显示两个治疗组中的7位受试人类的平均值和SEM。值表示为治疗当天的VAS评分的％。
图6.大鼠与人类中的2mg/kg的泼尼松龙磷酸盐(PLP)PEG-脂质体的单独治疗的治疗活性。
A.大鼠中作为基线(100％)的％的肉眼检查疾病评分的效果。
B.人类中作为基线(100％)的％的EULAR疾病活性评分(DAS28评分)的效果。
棒形显示3至5只大鼠(A)和7个人类(B)的平均值和SEM。
图7.用以下单独治疗的EULAR疾病活性评分(DAS28评分)的效果：
A.150mg(2mg/kg)的PLP-PEG脂质体，接受慢性氨甲喋呤治疗的患者(实心圆，n＝4)与对未摄取氨甲喋呤的患者(空心方形，n＝3)相比较。
B.等效剂量的120mg(1.6mg/kg)的甲基泼尼松龙(肌肉内贮库制剂)，接受慢性氨甲喋呤治疗的患者(实心圆，n＝4)与对未摄取氨甲喋呤的患者(空心方形，n＝3)相比较。
棒形显示平均值和SEM。值表示为治疗当天的疾病评分的％，基线定义为100％。
具体实施方式
实施例1：大鼠的实验性关节炎研究
制剂
含有泼尼松龙磷酸盐的PEG脂质体是由750mg的二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、250.8mg的胆固醇和267.6mg的PEG-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)组成。称重这些组分并将其在100ml的圆底烧瓶中混合。将脂质溶解在约30ml的乙醇中，然后在40℃下于旋转蒸发仪中在1小时内真空蒸发至干燥。称重1200mg的泼尼松龙磷酸二钠并将其溶解在12ml的无菌水中。将该溶液加入干燥的脂质膜，并在玻璃珠的 存在下在一小时内振荡以使脂质膜完全水化。将脂质体悬浮液转移至挤出机(Avestin，最大体积15ml)并使用孔径低于100nm的聚碳酸酯滤膜使用氮气在压力下挤出。然后，用无菌生理盐水透析。通过动态光散射确定脂质体的平均粒径，并发现其为93.1±1.2nm，多分散性系数为0.095±0.024。通过HPLC方法确定泼尼松龙磷酸盐的封装效率，并发现其在3％至4％之间。在4℃于氮气气氛下储存脂质体的悬浮液，并发现其在长于一年的时间内稳定。
大鼠，实验关节炎和研究方案
使用在弗氏不完全佐剂中的热灭活的结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)在尾根部对刘易斯鼠进行皮下免疫。在免疫后9至12天之间开始爪炎症，约在20天后达到最严重，之后逐渐愈合。通过肉眼评分爪炎症的严重性进行对疾病的评估，每只爪的最高分4分，并测量由疾病诱导的体重较少。将脂质体泼尼松龙磷酸盐对这些变量的治疗效力与相同剂量的未封装的药物比较。当平均分大于6时(在疾病诱导后14或15天)对大鼠进行治疗。
结果
在使用单剂量的脂质体泼尼松龙磷酸盐(10mg/kg的泼尼松龙磷酸盐)治疗后3天内在5只大鼠的4只中观察到炎症的完全缓解(图1A)。未封装的泼尼松龙磷酸盐在单次注射后未显著改变疾病的进程。因此，决定每天注射甚至更高剂量的20mg/kg的未封装的泼尼松龙，注射7天。该治疗方案使炎症评分从平均6.5分(第14天)减小至从第15天至第21天的约5.0的平均分(每天使用生理盐水的对照治疗在第20天达到10.6的最高分，图1B)。然而，在第14天单次注射相同剂量的20mg/kg的脂质体泼尼松龙磷酸盐导致佐剂性关节炎(AA))症状直到第20天才消失。
还在大鼠佐剂性关节炎模型中测试了低于10mg/kg的脂质体泼尼松龙的剂量水平。证明在这些剂量水平下的效力持续时间短。1mg/kg的脂质体泼尼松龙仅在4天内具有有限的效果(图2A)，而2mg/kg尽管稍微更有效，但是显示出相同的效果持续时间(图2B)。即使在5mg/kg下，治疗活性持续不超过1周(图2B)。
实施例2：人类RA研究
制剂
含有聚乙二醇(PEG)的泼尼松龙由包围水性区室的脂质双分子层组成，所述水性区室中封装有泼尼松龙的水溶性磷酸二钠衍生物。每mL制剂含有1.5mg/mL泼尼松龙磷酸钠、30mg的棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、9mg的二硬脂酰磷脂酰乙醇胺-PEG2000(PEG-DSPE)和8mg的类固醇。将脂质体分散在用磷酸盐缓冲液缓冲的pH7.4的10％的蔗糖中。
通过将脂质成分与皮质类固醇的水溶液混合、随后重复高剪切均化以减少所形成囊泡的尺寸来制备该制剂。用切向流过滤除去未封装的皮质类固醇。使用0.2微米滤膜通过死端式过滤进行灭菌。
制剂经以下表征和质量控制：粒子尺寸和多分散性指数(分别为100nm和<0.1，由动态光散射测量)，通过HPLC分析测量的泼尼松龙和脂质赋形剂的含量，无菌状态和致热原性(后者由LAL分析(Biowhittaker，Walkersville，MD)测量)，和残留溶剂测试。所有购买的原材料都经过GMP认证，并在GMP条件下进行脂质体制造。
患者
为了评估泼尼松龙PEG-脂质体制剂在炎症疾病中的治疗活性，在临床试验中招募了16名患有活跃RA的自愿的患者，其中用150mg的静脉输液的泼尼松龙-PEG-脂质体(约2mg/kg体重的泼尼松龙)治疗8名患者被一次，且等效剂量的120mg的甲基泼尼松龙贮库制剂(肌肉内)治疗8名患者被一次。合格的标准如下：年龄≥18岁，根据修订的1987年ARA标准(Arnett FC等，1988)的RA，筛选访视时，如修改后的疾病活性评分(DAS28，Prevoo ML等，1995)定义的活跃疾病≥3.2。
排除标准包括肾功能、肝功能和血液测试异常、妊娠期、哺乳期、感染或恶性肿瘤、临床上严重或不稳定的身体状况和内分泌失调。在进入研究前2周内不允许口服GC，在基线前8周内不允许关节内或肌肉内GC，并且在测试开始前12周内使用疾病修饰抗类风湿药物(DMARD)的治疗必须稳定。
研究方案
在满足入选和排除标准后，设计研究的药物的给药。在第1天，允许患者进入病房，在那里他们接受泼尼松龙PEG-脂质体/安慰剂或甲基泼尼松龙/安慰剂。在基线后，在多达12周期间对患者每周评价。每次访问包括临床评估、评价疾病活性、生命体征、安全性评价和血液取样。使用疾病活性评分(DAS28)由相同的评价者测量疾病活性，并使用欧洲风湿病防治联合会(EULAR)标准(Zandbelt MM等，2011；Van Gestel AM等，1996)评价对治疗的响应。在每周评价中，通过DAS28的>1.2的增加或如果其导致>5.1的DAS28则是DAS的0.6至1.2的增加定义为疾病发作(Den Broeder AA等，2002)。
数据分析
DAS28评分为测量测试干预的效力的主要结果指标(primary outcome measure)。为了分析主要结果，控制类型I差误在0.05的显著性水平。分析几个次要疗效指标以证实主要指标的结果。这些包括DAS的单独部分、患者的疼痛评价、对疾病活性的医师评价。由于这是对有限数量的患者的测试，因此多数分析仅是描述性的。使用能够 应用两个样本的t检验的统计分析。
结果
在16名患者中，14名患者(每组7名)被评估为有效。在治疗后第一周内在测试药物(泼尼松龙PEG-脂质体)组中发现了明显的治疗改善。在对照药物组(肌肉内甲基泼尼松龙)中可见更慢的和更减轻的治疗改善(图3)。
测试药物组显示了根据对治疗响应的EULAR定义更高百分比的响应者。有趣的是，只有在测试药物组中的患者具有良好的EULAR响应(图4)。在对照药物中，观察到的响应仅为减轻。在“不疼”至“非常疼”的范围内的100mm线上测量疼痛强度。在LCLP组中疼痛改善得更好且降低得更快(图5)。与对照药物相比，在“研究者对RA活性的评估”的水平上发现了测试药物的显著更好的效力。
安全性分析显示两个治疗组中的不良反应的相当的模式。有一个严重的不良反应(轻微的输液反应)可能与测试药物有关。测试药物没有带来进一步的毒性关注。
有趣的是，在人类研究中2mg/kg的泼尼松龙PEG-脂质体的效力被证明比相同的剂量在大鼠实验性关节炎中的效力长得多，后者的效力没有持续长过几天。图6A显示了2mg/kg的脂质体泼尼松龙在大鼠关节炎中的单独治疗的效力，并且图6B显示了在人类中在关节炎症水平上的效力(为了比较，将治疗当天的基线值定义为100％)。
图7显示了用于接收氨甲喋呤的慢性治疗的患者和不接受这样的治疗的患者的测试药物和对照药物的疗效。进行氨甲喋呤的慢性治疗的患者比不摄取氨甲喋呤或其它疾病修饰剂的患者对用脂质体泼尼松龙的治疗更敏感(图7A)。然而，接受对照药物(肌肉内甲基泼尼松龙)与氨甲喋呤联合的患者并没有显示比接收未与氨甲喋呤联合的对照药物的患者对结合更好的响应。
实施例3：人类炎症性肠病研究
制剂
如实施例2所述制备含有PEG脂质体的泼尼松龙。
患者
根据以下主要入选/排除标准在14天的筛选阶段期间选择20名年龄在18岁和75岁之间的患有活跃的溃疡性结肠炎(UC)的患者：年龄≥18岁至75岁，通过内窥镜评价并由组织学测量证实的UC历史档案(至少6个月)，Mayo评分≥5，其中内窥镜的子评分≥2，并且直肠出血的子评分≥1，且稳定服药(6-MP/硫唑嘌呤、5-ASA、MTX、生物品)，并且由病史和身体检查确定有良好的身心健康(除了被研究的疾病)。
研究方案
当将受试者随机分配到研究产品分支时，在第1天和第15天以至少1小时的期间 单独输液250mL生理盐水中的150mg PEG脂质体泼尼松龙磷酸钠(Nanocort)IV(约2mg/kg体重的泼尼松龙)。当将受试者随机分配到安慰剂分支时，在第1天和第15天在至少1小时的期间以250mL生理盐水(无Nanocort)的单独输液。
在基线后，在长达8周的时间内对患者每周评价一次。每次访问包括临床评估、评价疾病活性、生命体征、安全性评价和血液取样。疾病活性测量为在第15、29、57和85天获得临床缓解或响应的受试者的测量的％，通过Nanocort与安慰剂组的部分Mayo评分测量，并且通过在Nanocort与安慰剂组中用显微镜评估对活检样品的组织病理学评价(急性炎症评分和炎症分级)来评分。
结果
目前招募了7名患者。在多数患者中可见快速和大量有益的疗效。
参考文献
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