一种检测尿纤维连接蛋白浓度水平的试剂盒及方法技术领域
本发明属于生物工程领域，涉及一种试剂盒，具体来说是一种检测尿纤维连接蛋
白浓度水平的试剂盒及方法。
背景技术
现有技术中，对于人体尿液及组织中纤维连接蛋白(FN)水平的检测方法主要有两
种，一种是酶联免疫吸附法(ELISA)，另一种是放射免疫扩散法。ELISA法检测时间长，操作
步骤复杂；放射免疫扩散法虽检测时间短，但需有放射性保护。而且两种方法中单次可检测
的样本量少，故两种检测方法都不能实现快速、准确地检测批量的尿纤维连接蛋白(FN)水
平，不能满足临床的需求。
发明内容
针对现有技术中的上述技术问题，本发明提供了一种检测尿纤维连接蛋白(FN)浓
度水平的试剂盒及方法，所述的这种检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的试剂盒及方法要
解决现有技术中的检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的方法时间长、操作步骤复杂、单次
检测样本量少的技术问题。
本发明提供了一种检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的试剂盒，包括：磷酸氢二
钠-柠檬酸缓冲液、PEG800、抗人纤维连接蛋白抗体或包被于载体的抗人纤维连接蛋白抗
体，所述的PEG800的质量百分比浓度为10-800g/L；所述的抗人纤维连接蛋白抗体或包被于
载体的抗人纤维连接蛋白抗体的体积浓度为0.1-1000ml/L；还包括尿维连接蛋白标准品。
进一步的，所述的磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液和PEG800组成试剂Ⅰ；所述的磷酸氢
二钠-柠檬酸缓冲液、PEG800和抗人纤维连接蛋白抗体组成试剂Ⅱ。
进一步的，包被抗人纤维连接蛋白抗体的载体为胶乳微粒或者乳胶微粒，也可以
是其它可以包被蛋白的微粒载体。
进一步的，所述抗人纤维连接蛋白抗体来源于使用人纤维连接蛋白免疫羊、免、
鼠、马、驴动物产生的抗血清；或者来源于单克隆抗人纤维连接蛋白抗体或抗纤维连接蛋白
中A单抗、B单抗、C单抗、D单抗中的任意一种，单抗的效价为1:1-1024。
本发明还提供了采用上述的试剂盒检测尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平的方法，向
试剂Ⅰ中加入待测样本，37℃孵育5min，测量透射光强度A1；然后加入试剂II，37℃孵育
5min，测量最终产物的透射光强度A2，向试剂Ⅰ中加入标准品，37℃孵育5min，测量透射光强
度B1；然后加入试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度B2，
进一步的，所述的检测方法包括但不限于免疫透射比浊法，免疫散射比浊法，免疫
增强透射比浊法，免疫增强散射比浊法。
本发明还提供了另外一种采用上述的试剂盒(FN单试剂)检测尿纤维连接蛋白
(FN)浓度水平的方法，向所述试剂Ⅰ中加入所述试剂II，混合，然后加入待测样本，反应至终
点，测量最终产物的透射或者散射光强度值A，向所述试剂Ⅰ中加入所述试剂II，混合，然后
加入标准品，反应至终点，测量最终产物的透射或者散射光强度值B，
具体的，所述尿纤维连接蛋白(FN)浓度水平适用任何一种自动化分析仪可以实现
检测计算功能的装置。
具体的，所述试剂Ⅰ中PEG800的质量百分比浓度为0.1-800g/L，优选为60g/L。所述
试剂Ⅱ中PEG800的质量百分比浓度为0.1-800g/L，优选为60g/L。所述抗人纤维连接蛋白
(FN)抗体的体积浓度为0.1-1000ml/L，优选为600ml/L。
本发明采用抗原-抗体检测原理及测量散射光、透射光的测量方法，提供一种可以
快速检测尿液或组织液或组织样本中纤维连接蛋白(FN)水平、并可同时检测大量样本、操
作简单的方法。
本发明的检测原理是：待测尿样本与试剂成分反应，测量反应初始产物与最终产
物的透射光或散射光的强度差变化。或测量试剂空白与反应最终产物的透射光或散射光的
强度变化。具体的测量过程是将A2与A1的差值除以标准品的B2与B1的差值，乘以标准品尿
纤维连接蛋白(FN)的已知浓度，得到待测样本中纤维连接蛋白(FN)的浓度值。或者将A除以
标准品的B，乘以标准品纤维连接蛋白(FN)的已知浓度，得到待测样本中纤维连接蛋白(FN)
的浓度值。
本发明的优点：
1、本发明提供的方法检测区间广，在10-200mg/l浓度范围内的尿纤维连接蛋白
(FN)水平都可以检测，具有较好的临床应用价值。
2、本发明方法检测效率高，可以在10分钟内检测出一个样本的尿纤维连接蛋白
(FN)的浓度。
3、本发明方法对尿液的保存条件要求低，保存温度在-20℃的尿液样本、保存长达
60天的尿液样本、反复冻融过5次以内的尿液样本都可以进行检测，且检测结果不受影响。
4、本发明提供的方法操作简单，仅对待测样本和标准品前后的吸光度进行测定和
计算，就可测定人体尿液中纤维连接蛋白(FN)的水平，因此检测成本低，普适性高。本发明
快速，结果准确、稳定；适用于自动化批量检测。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描
述。需要说明的是，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基
于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其
他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1尿纤维结合蛋白(FN)双试剂检测1：
试剂Ⅰ：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG800 60g/L。
试剂Ⅱ：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG800 60g/L
兔抗人纤维连接蛋白(FN)抗血清600ml/L。
操作方法：向试剂Ⅰ中加入待测样本，37℃孵育5min，测量透射光强度A1；然后加入
试剂II，37℃孵育5min，测量最终产物的透射光强度A2。标准品与待测样本同样操作测量分
别得到B1、B2。
计算结果：
实施例II尿纤维结合蛋白(FN)双试剂(胶乳增强)检测2：
试剂I：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG分子量800 60g/L
试剂II：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG分子量800 60g/L
兔抗人纤维连接蛋白(FN)抗体包被交联胶乳600ml/L
操作方法及计算结果同双试剂1。
实施例III尿纤维结合蛋白(FN)单试剂检测：
试剂：磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液
PEG分子量800 60g/L，
兔抗人FN抗体600ml/L。
操作方法：
测量试剂的透射光强度A1；然后加入待测样本，37℃孵育10min，测量透射光强度
A2。标准品与待测样本同样操作测量分别得到B1、B2。
计算结果：