试剂、试剂盒、应用及检测方法技术领域
本发明涉及生物检测领域，特别涉及试剂、试剂盒、应用及检测方法。
背景技术
碘的英文名为Iodine，元素符号：I，原子量为126.90447，CAS：12190-71-5。
有“智力元素”之称的碘与人类的健康息息相关。成年人体内含有20-50mg的
碘，碘是维持人体甲状腺正常功能所必需的元素。但是人体摄入过多的碘也
是有害的，日常饮食碘过量会引起“甲亢”。单质碘呈紫黑色晶体，易升华，升
华后易凝华；有毒性和腐蚀性。碘单质遇淀粉会变蓝紫色。主要用于制药、
染料、碘酒、试纸和碘化合物等。
在药物的合成工艺中，碘及其化合物主要被当作催化剂、氧化剂使用。
所以，碘可能会以单质或者离子的形式残留在终产物中，从而能够准确、可
靠的分析出多肽药物中残留碘的含量，对于药物的生产控制和产品质量控制
具有重要的实用价值。然而，由于碘残留没有药效，甚至会影响产品的安全
性，故需对其进行检测。
碘含量的测定方法颇多，常用方法有：催化比色法、离子选择性电极法、
X-射线荧光法、阴极溶出伏安法、同位素稀释质谱法、电感耦合等离子体原
子发射光谱法和中子活化法等。但是每种方法都有一定的不足，比如比色法
需对样品进行氧化还原反应及其他处理，较为费时。这是由于碘元素具有易
挥发、不稳定、含量低等特点。紫外法检测碘离子的最大优势是灵敏度高，
但碘离子不仅受到基体中大的干扰峰拖尾的影响，大量有紫外吸收的小干扰
峰还使得基线非常复杂，这些干扰峰的位置会随淋洗液浓度的改变发生不同
程度的变化。且很多药物的活性成分或辅料为碱金属盐或碱土金属盐，用一
般的高效液相色谱方法进行测定，灵敏度不高，专属性不理想。虽然离子色
谱法测定微量碘的技术也有报道，但是相对于其他领域的应用，离子色谱法
在药物分析的领域起步较晚，在国内药物领域的应用也不多，虽然在食品领
域应用的比较多，但存在样品加标回收率低等问题。因此，离子色谱技术在
多肽药物中的应用开发意义重大。
发明内容
有鉴于此，本发明提供一种试剂、试剂盒、应用及检测方法。该方法专
属性强，灵敏度和回收率高，操作简便，浓度峰对称性好，干扰性小的离子
色谱分析多肽药中氧化剂碘残留的方法。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了硫代硫酸钠用于检测碘的应用。
本发明还提供了一种检测碘的试剂，包括硫代硫酸钠。
在本发明的一些具体实施方案中，所述试剂的空白溶液中硫代硫酸钠的
浓度为1～10μg/mL。
在本发明的另一些具体实施方案中，所述试剂的空白溶液中硫代硫酸钠
的浓度为2μg/mL。
本发明还提供了包括添加了硫代硫酸钠的试剂用于检测多肽药物中残留
氧化剂碘的应用。
本发明还提供了一种检测碘的试剂盒，包括硫代硫酸钠。
在本发明的一些具体实施方案中，试剂盒中硫代硫酸钠的浓度为
1～10μg/mL。
在本发明的另一些具体实施方案中，试剂盒中硫代硫酸钠的浓度为
2μg/mL。
本发明还提供了包括硫代硫酸钠的试剂盒用于检测多肽药物中残留氧化
剂碘的应用。
本发明还提供了一种检测碘的方法，取待测样品与硫代硫酸钠混合，检
测。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法中所述硫代硫酸钠的浓度为
1～10μg/mL。
在本发明的另一些具体实施方案中，所述方法中所述硫代硫酸钠的浓度
为2μg/mL。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法中所述待测样品的终浓度为
0.5～1mg/mL。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法中所述待测样品的称样量为
10～40mg。
在本发明的一些具体实施方案中，本发明提供的方法中所述检测为离子
色谱分析法。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法中所述碘为多肽药物中残留
的氧化剂碘。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法具体为：取所述待测样品与
2μg/mL的硫代硫酸钠混合，定量稀释制成所述待测样品的终浓度为1mg/mL
的待测溶液，离子色谱分析。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法采用外标法定量检测。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法具体为取所述待测样品与
2μg/mL的硫代硫酸钠混合，定量稀释制成所述待测样品的终浓度为1mg/mL
的待测溶液，经离子色谱分析，以外标法计算，得出样品中碘残留的含量。
在本发明的另一些具体实施方案中，所述方法中外标法计算过程中空白
溶液为稀硫代硫酸钠溶液，硫代硫酸钠溶液的浓度为1～10μg/mL，还直接使
用超纯水、硫代硫酸钠标准溶液以及定量测定碘的还原剂等溶剂。
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法的色谱条件为：所用预柱为
Thermo Dionex IonPac AG19(4.0*50mm)，所用色谱柱为Thermo
DIONEX IonPac AS19(4.0*250mm)或其他等效柱，也包括使用Thermo
Dionex IonPac AS26(4.0×250mm)，色谱柱长为15～25cm；内径：2.7～4.6mm；
进样量为1～200微升，柱温为20～40℃，所用检测器为抑制型电导检测器，
抑制器电流为120～170mA，流速为0.8～2mL/min。淋洗液：KOH在线发生
梯度洗脱，KOH浓度范围为10～58mM。洗脱梯度如表1所示：
表1洗脱梯度
时间(min)
0
10
40
42
42.1
46
KOH浓度(mM)
10
10
58
58
10
10
在本发明的一些具体实施方案中，所述方法能够准确定量的浓度为50～
1500ppm。
在本发明的另一些具体实施方案中，所述方法能够准确定量的浓度为
300ppm。
本发明提供了硫代硫酸钠用于检测碘的应用。还提供了专属性强，灵敏
度和回收率高，操作简便，浓度峰对称性好，干扰性小的离子色谱分析多肽
药中氧化剂碘残留的方法。该方法能准确定量的供试品中含碘残留，能准确
定量的浓度为50～1500ppm。供试品测得含碘残留量为300ppm，不超过规定
限度(1000ppm)。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实
施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示对照品的离子色谱图；
图2示待测样品的离子色谱图；
图3示样品加对照品的离子色谱图；
图4示测定多肽药物中碘残留含量的离子色谱图；
图5示测定多肽药物中碘残留含量的离子色谱图。
具体实施方式
本发明公开了一种试剂、试剂盒、应用及检测方法，本领域技术人员可
以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的
替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发
明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能
在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的方法和应用进行改动或适
当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明的技术方案为：选用Thermo DIONEX IonPac AS19
(4.0*250mm)或其他等效柱作为分析色谱柱，取本品，精密称定，加2μg/mL
的硫代硫酸钠溶解并定量稀释制成每1mL含1mg的溶液，直接进离子色谱分
析，以外标法计算，得出样品中碘残留的含量。(供试品：1mg/mL)
本发明提供的仪器、试剂、试剂盒、应用及检测方法中所用原料及试剂
均可由市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1：
为了保证该分析方法的可行性，首先进行了系统适用性试验，结果如下：
空白溶液：称取201.00mg硫代硫酸钠，加水稀释至50mL。取上述溶液
1mL，加水溶解并稀释至2000mL。(S2O32-:0.002mg/mL)
碘化钠母液：称取碘化钠118.60mg，置于100mL量瓶中，加空白溶液溶
解并稀释至刻度。(I-：1.004mg/mL)
对照品储备液：取碘化钠母液5.0mL，置于50mL量瓶中，加空白溶液稀
释至刻度。(I-：0.1004mg/mL)
对照品溶液：取对照品储备液1.0mL至100mL量瓶中，加空白溶液稀
释至刻度。(I-：1.004μg/mL)
结果如表2：
表2系统适用性试验结果
对照品
峰面积
保留时间
拖尾因子
分离度
R-011
0.0520
26.441
1.03
4.03
R-012
0.0527
26.440
1.02
3.98
R-013
0.0524
26.430
1.01
4.01
R-014
0.0522
26.444
1.02
4.01
R-015
0.0522
26.434
1.01
4.00
平均值
0.0523
26.438
---
---
RSD
0.51％
0.02％
---
---
连续进样对照品溶液5针，计算峰面积和保留时间的RSD，其结果分别
为0.51％、0.02％，可见结果符合要求。
实施例2：
供试品溶液：称取供试品约20mg，加2μg/mL的硫代硫酸钠溶解并定量
稀释制成每1mL含1mg的溶液(供试品：1mg/mL)。
供试品加标溶液：称取供试品约20mg，加对照品溶液溶解并定量稀释制
成每1mL含1mg的溶液。(供试品：1mg/mL，I-：1.004μg/mL)
分别把空白溶液、供试品溶液、供试品加标溶液和实施例1中的对照品
溶液各进样1针，结果见附图1、图2、图3。可以看出，空白溶液没有干扰，
对照品溶液、供试品加标溶液中峰保留时间基本一致，且样品中无杂峰干扰。
实施例3：
分别量取实施例1中的对照品储备液0.3mL、0.5mL、0.75mL、1.0mL、
1.25mL、1.5mL置于100mL容量瓶中，加空白溶液稀释至刻度，作为30％、
50％、75％、100％、125％、150％水平的对照品线性溶液，进样分析，结果：
碘离子的线性方程为Y＝0.059X－0.0037，R2＝0.9991；可见线性良好。
实施例4：分析方法准确度的测定
具体过程为：
4.1.对照品液的配置：
50％浓度水平对照品液：取实施例1中的对照品储备液1mL，置于200mL
容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度。(I-：0.502μg/mL)
100％浓度水平对照品液：取实施例1中的对照品储备液2mL，置于200mL
容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度。(I-：1.004μg/mL)
150％浓度水平对照品液：取实施例1中的对照品储备液3mL，置于200mL
容量瓶中，用空白溶液稀释至刻度。(I-：1.506μg/mL)
4.2.回收样品溶液的配置：
50％浓度水平的样品溶液：称供试品19.58、20.10、20.05mg分别置于20mL
量瓶中，用50％浓度水平对照品液稀释至刻度。平行配3份。(供试品：1mg/mL，
I-：0.502μg/mL)
100％浓度水平的样品溶液：分别称取供试品20.20、20.08、20.06mg置
于20mL量瓶中，用100％浓度水平对照品液稀释至刻度。平行配3份。(供
试品：1mg/mL，I-：1.004μg/mL)
150％浓度水平的样品溶液：分别称取供试品20.16、20.03、20.10mg置
于20mL量瓶中，用150％浓度水平对照品液稀释至刻度。平行配3份。(供
试品：1mg/mL，I-：1.506μg/mL)
将以上各回收样品溶液进样分析，以实施例1中的对照品液，作为对照
品进行测定，计算回收率。结果见表3：
表3检测结果
三个浓度水平的平均回收率为99.32％，回收率RSD为1.97％，可见此方
法可以对样品中的碘残留进行准确测定。
实施例5：测定多肽药物中碘残留的含量
分别称取本品20.02、20.15mg置于20mL量瓶中，加对照品溶液，作为
精密度溶液；
另取实施例1中的对照品液，作为对照品溶液。
色谱条件：流速为1.0mL/min；柱温为30℃。抑制器电流为144mA，用
Thermo DIONEX IonPac AS19(4.0*250mm)色谱柱；在Thermo ICS2100
仪器上，以KOH在线发生梯度洗脱，KOH浓度范围为10～58mM，按表4进
行梯度洗脱：
表4洗脱条件
时间(min)
0
10
40
42
42.1
46
KOH浓度(mM)
10
10
58
58
10
10
精密量取对照品品溶液和精密度溶液各25μl，分别注入离子色谱仪，记
录色谱图，结果见附图4。按外标法以峰面积计算。结果：本品中含碘残留
300ppm。
实施例6：测定多肽药物中碘残留的含量
分别称取特利加压素20.02、20.15mg置于20mL量瓶中，加对照品溶液，
作为精密度溶液；
另取实施例1中的对照品液，作为对照品溶液。
色谱条件：流速为1.0mL/min；柱温为30℃。检测波长为223nm。以甲
醇-水(体积比为30：70)溶液为流动相，用Waters Atlantis dC18
(5um,4.6*250mm)色谱柱；在Waters e2695仪器上，精密量取对照品溶液和
精密度溶液各10μl,分别注入液相色谱仪，记录图谱，见附图5。按外标法以
峰面积计算。结果：本品中含碘残留302ppm。
实施例7：测定多肽药物中碘残留的含量
分别称取特利加压素40.17、40.06mg置于40mL量瓶中，加对照品溶液，
作为精密度溶液；另取实施例1中的对照品液，作为对照品溶液。色谱条件：
流速为1.5mL/min；柱温为40℃。抑制器电流为120mA,用Thermo Dionex
IonPac AS26(4.0×250mm)色谱柱；在Thermo ICS2100仪器上，以KOH在
线发生梯度洗脱，KOH浓度范围为10～58mM，按表5进行梯度洗脱：
表5洗脱条件
时间(min)
0
10
40
42
42.1
46
KOH浓度(mM)
15
15
56
56
15
15
精密量取对照品品溶液和精密度溶液各25μl，分别注入离子色谱仪，记录
色谱图，按外标法以峰面积计算。结果：本品中含碘残留296ppm。
实施例8：
分别称取利拉鲁肽10.54、10.17mg置于10mL量瓶中，加对照品溶液，
作为精密度溶液；另取实施例1中的对照品液，作为对照品溶液。
色谱条件：流速为0.8mL/min；柱温为28℃。检测波长为223nm。以乙
腈-水(体积比为30：70)溶液为流动相，用Waters Atlantis dC18
(5um,4.6*150mm)色谱柱；在Waters e2498仪器上，精密量取对照品溶液和
精密度溶液各200μl,分别注入液相色谱仪，记录图谱，按外标法以峰面积计算。
结果：本品中含碘残留310ppm。
实施例9：
分别称取爱啡肽25.00、25.24mg置于25mL量瓶中，加对照品溶液，作
为精密度溶液；另取实施例1中的对照品液，作为对照品溶液。
色谱条件：流速为1.8mL/min；柱温为35℃。检测波长为223nm。以乙腈-水
(体积比为25：75)溶液为流动相，用Waters Atlantis dC18(2.7um,4.6*250mm)
色谱柱；在Waters e2695仪器上，精密量取对照品溶液和精密度溶液各200μl,
分别注入液相色谱仪，记录图谱，按外标法以峰面积计算。结果：本品中含
碘残留307ppm。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普
通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润
饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。