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1、10申请公布号CN104207983A43申请公布日20141217CN104207983A21申请号201410424736122申请日20140826A61K8/97200601A61K8/66200601A61Q11/0220060171申请人华南理工大学地址510640广东省广州市天河区五山路381号72发明人陈谷王宏74专利代理机构广州市华学知识产权代理有限公司44245代理人张燕玲54发明名称一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法57摘要本发明属于日用化学品技术领域，公开了一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法。所述假牙护理液由陈皮提取物、葡聚糖酶、葡聚糖酶、淀粉酶、食。
2、盐以及水组成；每100ML假牙护理液包括2510ML的陈皮提取物、02510MG葡聚糖酶、02510MG葡聚糖酶、02510MG淀粉酶以及1G食盐。本发明所制备的假牙护理液清除牙菌斑效果显著，能有效抑制需氧、厌氧菌生长，特别对链球菌的增殖有明显抑制作用；同时所述假牙护理液安全无毒、无刺激，假牙浸泡后可直接使用无需冲洗。51INTCL权利要求书1页说明书5页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书5页附图1页10申请公布号CN104207983ACN104207983A1/1页21一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于由陈皮提取物、葡聚糖酶、葡聚糖酶、淀。
3、粉酶、食盐以及水组成。2根据权利要求1所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于所述假牙护理液中各物质的用量关系为每100ML的假牙护理液由2510ML的陈皮提取物、02510MG的葡聚糖酶、02510MG的葡聚糖酶、02510MG的淀粉酶、1G的食盐以及余量水组成。3根据权利要求1所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于所述陈皮提取物的制备方法为将陈皮粉末加入乙醇溶液A中，均质，离心，取上清液；向离心后的沉淀中再加入乙醇溶液B，继续均质、离心，取上清液，如此反复处理，最后将各上清液合并、旋转蒸发浓缩，得到陈皮浓缩物；向陈皮浓缩物中加入水溶解，储存，得到陈皮提取物。4根据权利要求3所述含。
4、酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于所述陈皮粉末与乙醇溶液A的质量体积比为20G30ML；所述乙醇溶液A与乙醇溶液B浓度和用量相同；乙醇溶液A体积浓度为80100。5根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于所述陈皮粉末与水的质量体积比为20G10ML；所述水为反渗透纯净水。6根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于所述均质采用高速均质机进行均质，均质的转速为1000012000RPM，均质时间为510MIN；所述离心转速为30005000RPM，离心时间为38MIN；所述反复处理次数为36次。7根据权利要求3所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液，其特征在于所述。
5、蒸发浓缩采用的仪器为旋转蒸发仪，真空旋转蒸发浓缩至陈皮浓缩物中没有流动的液体。8根据权利要求1所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法，其特征在于包括以下步骤1将陈皮提取物、葡聚糖酶、葡聚糖酶、淀粉酶以及食盐溶于水中，得到混合液；2将步骤1中混合液离心，过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。9根据权利要求8所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法，其特征在于步骤1中所述水为反渗透纯净水；步骤2中所述离心条件为离心转速为500010000RPM，离心时间为510MIN，离心温度为420；步骤2中所述过滤采用灭菌的滤膜过滤，滤膜的孔径为022M。权利要求书CN104207983A1/5页3一。
6、种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法技术领域0001本发明属于日用化学品技术领域，具体涉及一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液及其制备方法。背景技术0002正确有效地清洁和护理假牙可以延长假牙使用寿命，避免因假牙上的致龋菌大量繁殖导致的假牙损伤、变形，甚至导致与假牙接触的周边自身牙的龋齿或牙龈炎。牙菌斑是口腔菌群、特别是与龋齿密切相关的变形链球菌在牙齿和假牙上形成的生物膜群落，富含葡聚糖和果聚糖等多糖成分，牙菌斑一旦大量形成，将有助于口腔致龋细菌的滋生，引发龋齿、溃疡或其他口腔疾病，更甚者会增加罹患其他全身疾病的风险。目前有很多的假牙护理产品，多添加消毒剂成分，尚未有针对清除牙菌斑的护理液。。
7、发明内容0003为了克服现有技术的缺点和不足，本发明的目的在于提供一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液。0004本发明的另一目的在于提供上述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法。0005本发明的目的通过以下技术方案实现0006一种含酶与陈皮提取物的假牙护理液，由陈皮提取物、葡聚糖酶50U/MG、葡聚糖酶50U/MG、淀粉酶50U/MG、食盐以及水组成。0007所述假牙护理液中各物质的用量关系为每100ML的假牙护理液由2510ML的陈皮提取物、02510MG的葡聚糖酶、02510MG的葡聚糖酶、02510MG的淀粉酶、1G的食盐以及余量水组成。0008所述陈皮提取物的制备方法为将陈皮粉末加入乙醇。
8、溶液A中，均质，离心，取上清液；向离心后的沉淀中再加入乙醇溶液B，继续均质、离心，取上清液，如此反复处理，最后将各上清液合并、旋转蒸发浓缩，得到陈皮浓缩物；向陈皮浓缩物中加入水溶解，储存，得到陈皮提取物。0009所述陈皮粉末与乙醇溶液A的质量体积比为20G30ML；所述乙醇溶液A与乙醇溶液B浓度和用量相同；乙醇溶液A体积浓度为80100；所述乙醇溶液A与B为4预冷的乙醇溶液。0010所述陈皮粉末与水的质量体积比为20G10ML。0011所述水为反渗透纯净水。0012所述均质采用高速均质机进行均质，均质的转速为1000012000RPM，均质时间为510MIN；0013所述离心转速为300050。
9、00RPM，离心时间为38MIN；0014所述反复处理次数为36次；0015所述蒸发浓缩采用的仪器为旋转蒸发仪，于40下真空旋转蒸发浓缩至陈皮浓缩说明书CN104207983A2/5页4物中没有流动的液体；0016所述储藏的温度为40。0017所述含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备方法，包括以下步骤00181将陈皮提取物、葡聚糖酶、葡聚糖酶、淀粉酶以及食盐溶于水中，得到混合液；00192将步骤1中混合液离心，过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。0020步骤1中所述水为反渗透纯净水；0021步骤2中所述离心条件为离心转速为500010000RPM，离心时间为510MIN，离心温度为420；0。
10、022步骤2中所述过滤采用灭菌的滤膜过滤，滤膜的孔径为022M。0023葡聚糖酶作用于葡聚糖的1,6糖苷键；葡聚糖酶专一作用于葡聚糖的1,3及1,4糖苷键；淀粉酶可作用于1,4葡聚糖，无差别地随机切断糖链内部的1，4糖苷键。这三种酶组合可以降解牙菌斑，破坏口腔细菌生长的基础。陈皮提取物有良好地抑制口腔细菌形成牙菌斑的效果。0024与现有技术相比，本发明具有如下优点和效果00251本发明所制备的假牙护理液清除牙菌斑效果显著、有效抑制需氧、厌氧菌生长，特别对链球菌的增殖有明显抑制作用；00262所述假牙护理液安全无毒、无刺激；00273假牙浸泡后可直接使用无需冲洗。附图说明0028图1为实施例1所。
11、制备的陈皮提取物的高效液相色谱分析HPLC谱图。具体实施方式0029下面结合实施例以及附图对本发明做进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。0030实施例100311陈皮提取物的制备方法0032向30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为80中加入20G干燥的陈皮粉末，得到分散液；以12000RPM的转速，在高速均质机中将分散液均质5MIN；采用离心机以3000RPM的转速离心3MIN，收集上清液；0033向离心后的沉淀中加入30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为80继续均质转速为12000RPM，均质时间为5MIN、离心离心转速为3000RPM，离心时间为3MIN，取上清液，如此反复5次，。
12、合并上清液。0034将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓缩物，用10ML反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于40储存备用。所制备的陈皮提取物的高效液相色谱分析如图1所示。00352含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备0036将陈皮提取物25ML，葡聚糖酶50U/MG025MG；葡聚糖酶50U/说明书CN104207983A3/5页5MG025MG；淀粉酶50U/MG025MG；食盐1G加入到反渗透纯净水中，使得混合液至100ML；0037将混合液进行离心离心转速为5000RPM，离心时间为10MIN，温度20，022M滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。00。
13、38实施例200391陈皮提取物的制备方法0040向30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为90中加入20G干燥的陈皮粉末，得到分散液；以12000RPM的转速，在高速均质机中将分散液均质8MIN；采用离心机以4000RPM的转速离心5MIN，收集上清液；0041向离心后的沉淀中加入30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为90继续均质转速为11000RPM，均质时间为8MIN、离心离心转速为4000RPM，离心时间为5MIN，取上清液，如此反复6次，合并上清液。0042将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至所得浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓缩物，用10ML反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于40储存。
14、备用。00432含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备0044将陈皮提取物5ML，葡聚糖酶50U/MG5MG；葡聚糖酶50U/MG5MG；淀粉酶50U/MG5MG；食盐1G加入到反渗透纯净水中，使得混合液至100ML；0045将混合液进行离心离心转速为8000RPM，离心时间为8MIN，温度10，022M滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。0046实施例300471陈皮提取物的制备方法0048向30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为100中加入20G干燥的陈皮粉末，得到分散液；以10000RPM的转速，在高速均质机中将分散液均质10MIN；采用离心机以5000RPM的转速离心3MIN，收集。
15、上清液；0049向离心后的沉淀中加入30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为100继续均质转速为10000RPM，均质时间为10MIN、离心离心转速为5000RPM，离心时间为3MIN，取上清液，如此反复3次，合并上清液。0050将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至所得浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓缩物，用10ML反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于40储存备用。00512含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备0052将陈皮提取物10ML，葡聚糖酶50U/MG10MG；葡聚糖酶50U/MG10MG；淀粉酶50U/MG10MG；食盐1G加入到反渗透纯净水中，使得混合液至100ML；0053将混合液进行。
16、离心离心转速为10000RPM，离心时间为5MIN，温度4，022M滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。0054对比例00551陈皮提取物的制备方法0056向30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为80中加入20G干燥的陈皮粉末，得到分散液；以12000RPM的转速，在高速均质机中将分散液均质5MIN；采用离心机以说明书CN104207983A4/5页63000RPM的转速离心3MIN，收集上清液；0057向离心后的沉淀中加入30ML预冷的乙醇溶液质量百分比浓度为80继续均质转速为12000RPM，均质时间为5MIN、离心离心转速为3000RPM，离心时间为3MIN，取上清液，如此反复3。
17、次，合并上清液。0058将合并的上清液于旋转蒸发仪浓缩至所得浓缩物中没有流动的液体，得到陈皮浓缩物，用10ML反渗透纯净水溶解陈皮浓缩物，分装后于40储存备用。00592含酶与陈皮提取物的假牙护理液的制备0060将陈皮提取物125ML，葡聚糖酶50U/MG025MG；葡聚糖酶50U/MG025MG；淀粉酶50U/MG025MG；食盐1G加入到反渗透纯净水中，使得混合液至100ML；0061将混合液进行离心离心转速为5000RPM，离心时间为10MIN，温度20，022M滤膜过滤，得到含酶与陈皮提取物的假牙护理液。0062效果测试0063采用羟基磷灰石圆片模拟假牙，与新鲜唾液培养后有口腔细菌附着。
18、在羟基磷灰石圆片上。考察所制备的假牙护理液对稳固附着在羟基磷灰石圆片上的细菌的清除和抑制生长的效果。0064采集志愿者人群20人的新鲜唾液每人2ML，并在采集后20分钟内充分混匀并分装到无菌的48孔组织培养板的孔中每孔05ML。将羟基磷灰石圆片96WELLCOMPATIBLEHADISC，购自美国3DBIOTECK公司通过高压蒸汽灭菌后无菌转移入48孔组织培养板上分装有唾液的孔中。将接种后的培养板室温下置于频率为200次/MIN的摇床上摇晃20MIN以使唾液混合均匀，羟基磷灰石圆片充分浸润在新鲜唾液中。之后将培养板在厌氧培养箱中37，75N2，25CO2培养14H左右。去除唾液，添加05ML对。
19、比例与实施例13中制备的假牙护理液，以不含酶和陈皮提取物的食盐水质量体积比为1G100ML为空白对照组，在200次/MIN的摇床上室温摇晃30MIN。取出羟基磷灰石圆片，轻柔地浸泡在无菌磷酸盐缓冲液中一小时，以去除蓬松的细菌。再次用无菌磷酸盐缓冲液温和冲洗羟基磷灰石圆片，此时留在羟基磷灰石圆片上的细菌即为较为稳固附着生长的细菌，类似牙菌斑菌群。0065将羟基磷灰石圆片上的细菌群落通过剧烈漩涡振荡分散到硫乙醇酸盐液体培养基中，稀释接种到各种培养基营养琼脂培养基NA培养基，适合需氧菌和兼性厌氧菌，WILKINSCHALGREN琼脂培养基WC培养基，适合厌氧菌，链球菌培养基KF培养基，适合链球菌。除。
20、营养琼脂培养基外另外两种培养基通过覆盖一层较稀的琼脂层以营造厌氧环境。将接种好的培养基于37培养数天后进行菌落计数，统计得出经假牙护理液处理后仍稳固附着在羟基磷灰石圆片上的活菌数，从而评价假牙护理液降解牙菌斑、杀菌抑菌的效果。测试结果如表1所示。0066表1假牙护理液对各种细菌的清除效果0067空白对照组对比例实施例1实施例2实施例3NA培养基000000155930915000说明书CN104207983A5/5页7WC培养基0001228209771057723KF培养基000000920628478160068从表中可知，以空白组的菌落数为对照，统计各实施例的抑菌效果，实施例13与对比例。
21、制备的假牙护理液减少了羟基磷灰石圆片上稳固附着的细菌。对在NA培养基、WC培养基和KF培养基上生长的细菌清除效果明显随酶含量和陈皮提取物添加量的增加而增加。其中NA培养基适合需氧和兼性厌氧菌生长，WC培养基上生长为厌氧菌，KF培养基上生长为链球菌。对比例的假牙护理液，虽然对NA培养基、KF培养基上的细菌没有抑制作用，但能清除1228的WC培养基上生长的厌氧菌。实施例1的假牙护理液对NA、WC、KF培养基上生长的细菌清除率分别为1559，2097和92。实施例2和3的假牙护理液清除效果明显，其中实施例3对链球菌的清除效果达到7816，有效清除稳固附着生长的链球菌。0069因此，经所述假牙护理液处理后羟基磷灰石圆片上稳固附着的细菌数量显著降低，表明本发明制备的的假牙护理液较有效地清除稳固附着生长的细菌，可用于清除牙菌斑和消减口腔细菌。0070上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。说明书CN104207983A1/1页8图1说明书附图CN104207983A。