一种霉菌毒素净化柱及霉菌毒素净化方法.pdf

本发明提供了一种装有复合填料的霉菌毒素净化柱及其净化方法。该净化柱主要包括柱体、装填在柱体内的填料和设置在填料上下两端的筛板，所述填料分层装填，自上而下依次为：硅藻土助滤剂、中性氧化铝和硅胶，填料粒径为5～100μm。本发明的净化方法利用吸附剂填料的吸附作用原理，利用填料可以对流过的提取液中的杂质进行选择性吸附，再利用洗脱剂冲洗净化柱，收集上样流出液和洗脱液。使杂质吸附在柱上，达到去除杂质的效果。本发明的霉菌毒素净化柱及其净化方法的优点在于净化柱成本低廉，制造方便，且能根据需要改变填料配比；净化方法速度快，适用范围广，操作方便，净化效果好。

权利要求书
1.   一种霉菌毒素净化柱，主要包括柱体、装填在柱体内的填料和设置在填料上下两端的筛板，其特征在于：所述填料分层装填，自上而下依次为：助滤剂、中性氧化铝和硅胶，填料粒径为5～100μm。

2.   如权利要求1所述的霉菌毒素净化柱，其特征在于所述填料质量组成为：助滤剂5～50％、中性氧化铝5～90％、硅胶5～90％。

3.   如权利要求1所述的霉菌毒素净化柱，其特征在于所述助滤剂为硅藻土助滤剂。

4.   如权利要求3所述的助滤剂，其特征在于所述的硅藻土助滤剂为Celite545、Celite-hyflosuper-cell或ZX-616。

5.   如权利要求1～4之一所述的霉菌毒素净化柱，其特征在于所述柱体容积为0.1～1000mL，内径为1～50mL。

6.   如权利要求1～4之一所述的霉菌毒素净化柱，其特征在于所述筛板厚度为0.5～5mm，筛板孔的孔径小于填料粒径。

7.   如权利要求1所述的霉菌毒素净化柱，其特征在于所述的填料质量组成为：硅藻土助滤剂10％、中性氧化铝20～60％、硅胶30～70％。

8.   一种利用权利要求1所述霉菌毒素净化柱的霉菌毒素净化方法，所述方法是以极性有机容剂为洗脱液对含有霉菌毒素的提取液进行洗脱，分离出霉菌毒素，所述的极性有机溶剂为甲醇、乙腈或乙酸乙酯。

9.   如权利要求8所述的方法，其特征在于所述的极性有机容剂为乙腈。

10.   如权利要求8所述的方法，其特征在于所述的含有霉菌毒素的提取液是用乙腈体积浓度10～20％的水溶液，提取样品中霉菌毒素，得到含有霉菌毒素的提取液。

说明书一种霉菌毒素净化柱及霉菌毒素净化方法
(一)技术领域
本发明涉及一种霉菌毒素净化柱，以及利用该霉菌毒素净化柱对样品中霉菌毒素进行净化的方法。
(二)背景技术
对食品及饲料提取液中的霉菌毒素进行净化是为了后续程序中准确检测食品、饲料中污染和残留的霉菌毒素，目前进行这种净化所采用的各种净化柱及净化方法存在处理时间长，应用范围有限，成本较高，净化效果并不理想等缺点。
(三)发明内容
本发明目的是提供一种价格低廉、能够同时净化多种类的霉菌毒素，且净化效果理想的净化柱，以及利用该霉菌毒素净化柱对样品中霉菌毒素进行净化的方法。
本发明采用的技术方案是：
一种霉菌毒素净化柱，主要包括柱体、装填在柱体内的填料和设置在填料上下两端的筛板，其特征在于：所述填料分层装填，自上而下依次为：助滤剂、中性氧化铝、硅胶，填料粒度为5～100μm。
具体的，所述填料质量组成为：助滤剂5～50％、中性氧化铝5～90％、硅胶5～90％。
所述助滤剂为本领域常用助滤剂，如硅藻土助滤剂或珍珠岩助滤剂等，本发明优选为硅藻土助滤剂，所述硅藻土助滤剂优选为：Celite545、Celite-hyflosuper-cell或ZX-616等。
优选的，所述柱体容积为0.1～1000mL，内径为1～50mL。
优选的所述筛板厚度为0.5～5mm，直径与柱体内径匹配，所述的筛板孔的孔径，特别是下端筛板孔的孔径小于填料粒径，通常筛板孔的孔径为1～100μm。
本发明优选所述的填料质量组成为：硅藻土助滤剂10％、中性氧化铝20～60％、硅胶30～70％。
本发明还涉及一种霉菌毒素净化柱的霉菌毒素净化方法，所述方法如下：以极性有机容剂为洗脱液对含有霉菌毒素的提取液进行洗脱，分离出霉菌毒素，所述的极性有机溶剂为甲醇、乙腈或乙酸乙酯。所述的极性有机溶剂优选为乙腈。
所述的含有霉菌毒素的提取液的获得：用乙腈体积浓度10～20％的水溶液，提取样品中霉菌毒素，得到含有霉菌毒素的提取液。
整个过程中，液体流速最好控制在不超过4ml/min。
本发明的有益效果主要体现在：
1.采用本发明的霉菌毒素净化柱，洗脱分离，能够快速地对食品和饲料的提取液进行净化分离，整个操作过程不超过20分钟；
2.本发明采用不同的填料配置适用于不同基质的样品、不同种类的霉菌毒素(样品为玉米粉、花生酱、稻谷时：硅胶减少，氧化铝增加)，适用范围广，净化效果好，满足对不同种类的样品、不同种类的霉菌毒素的分析要求；
3.本发明使用的填料为常见化学物质，性质稳定，成本低廉，易于制造和保存，使用方便快捷。
(四)附图说明
图1为本发明实施例1涉及的霉菌毒素净化柱结构侧视图。
图2为本发明实施例1涉及的霉菌毒素净化柱结构俯视图。
图3为实施例1进行净化处理后样品分析的色谱图。
图4为实施例4净化效果比较的色谱图；A：未经净化柱处理，B：经过净化柱处理。
(五)具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步描述，但本发明的保护范围并不仅限于此：
本发明霉菌毒素净化柱结构参见图1～2，净化柱整体外形类似注射器桶，其由柱体1、上筛板2、下筛板3和置于上下筛板之间的填料4，5，6构成。柱体容积为6cc，填料2.5g，粒度范围在5～100微米。上筛板1和下筛板2的厚度为2毫米，其上的网孔结构物理化学性质稳定，能够起过滤和阻隔作用，防止填料出来，阻止大粒径物质进入。本发明霉菌毒素净化柱的作用机理是利用复合填料的吸附、过滤(成盐作用、氢键、配位作用等)，对杂质选择性地吸附、保留，在净化过程中利用适当的洗脱溶剂将少部分被吸附目标分析物洗脱下来。
实施例1：
待检物：花生酱；
霉菌毒素类型：黄曲霉毒素；
净化柱填料配置：填料2.5g，其中硅胶(青岛海浪硅胶干燥剂厂)1.35g，中性氧化铝(郑州英诺色谱实验技术有限公司)0.9g，助滤剂(硅藻土ZX-616，北京朗洁普道过滤技术公司)0.25g；
净化方法包括下列步骤：
第一步，制备上样液，用20ml乙腈/水(v/v：10/90)混合液分两次提取花生酱中的目标分析物，合并提取液；
第二步，上样，取提取液2ml加至净化柱中，收集流出液；
第三步，以甲醇为洗脱液进行洗脱，用4ml乙腈流过净化柱，负压下抽干，收集流出液；
分析物回收率：目标分析物为17种霉菌毒素，采用液质联用仪检测，色谱图见图3。85～101％，相对标准偏差：小于5％。
实施例2：
待检物：稻谷；
霉菌毒素类型：黄曲霉毒素，单端孢霉烯族类；
净化柱填料配置：填料2.5g，其中硅胶0.9g，中性氧化铝1.35g，助滤剂(硅藻土Celite545，默克化工技术(上海)公司)0.25g；
净化方法包括下列步骤：
第一步，制备上样液，用20ml乙腈/水(v/v：16/84)混合液分两次提取稻谷中的分析物，合并提取液；
第二步，上样，取提取液2ml加至净化柱中，收集流出液；
第三步，以乙腈为洗脱液进行洗脱，用4ml乙腈流过净化柱，负压下抽干，收集流出液；
分析物回收率：90～105％，相对标准偏差：小于5％。
实施例3：
待检物：玉米粉；
霉菌毒素污染类型：单端孢霉烯族类；
净化柱填料配置：填料2.5g，其中硅胶1.8g，中性氧化铝0.45g，助滤剂(Celite-hyflosuper-cell，默克化工技术(上海)公司)0.25g；
净化方法包括下列步骤：
第一步，制备上样液，用20ml乙腈/水(v/v：20/80)混合液分两次提取玉米中的分析物，合并提取液；
第二步，上样，取提取液2ml加至净化柱中，收集流出液；
第三步，以乙酸乙酯为洗脱液进行洗脱，用4ml乙腈流过净化柱，负压下吸干，收集流出液；
分析物回收率：82～98％，相对标准偏差：小于5％。
实施例4：效果验证
待检物：稻谷；
霉菌毒素类型：黄曲霉毒素，单端孢霉烯族类；
取同一样品，A为不经过本专利净化柱处理，直接进样色谱分离；B为经本专利净化柱处理后再进样色谱分离，净化柱填料配置与净化方法按照实施例2实施。
在该实施例中，经过净化柱处理，杂质吸附在净化柱上，分析物随着流出液流出。净化柱处理效果参见图4，未经净化柱处理的样品因杂质干扰而看不到明显的色谱峰。