心脑片中大黄素的含量测定方法 【技术领域】
本发明涉及中药有效成分的含量测定方法，尤其涉及心脑片中大黄素的含量测定方法。
背景技术
心脑片主要由灯盏细辛、虎杖等几味中药组成，具有活血化瘀、通络止痛的功效，临床主要用于淤血闭阻引起的胸痹、眩晕、胸闷、胸痛、心悸头晕、头痛、耳鸣等，以及用于治疗冠心病心绞痛、脑动脉硬化、高脂血症等。中药有效成分的测定通常采用薄层扫描方法和胶束毛细管电动色谱法，但对于含有多种成分的中药制剂，各成分的色谱峰与临近杂质的色谱峰不能实现基线分离，无法准确测定出其中的含量。
【发明内容】
为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种心脑片中大黄素的RP-HPLC测定方法，具有良好的分离效果，便于制剂的质量控制。
本发明是通过以下技术方案来实现地：心脑片中大黄素的含量测定方法，其特征在于该方法是以Hypersil ODS为色谱柱，以甲醇∶2g/L磷酸溶液＝(75∶25)为流动相的RP-高效液相色谱法。
前述心脑片中大黄素的含量测定方法，其特征在于具体测定方法为：色谱条件与系统适应性试验：用Hypersil ODS为色谱柱；甲醇∶2g/L磷酸溶液＝(75∶25)为流动相；流速为1.0mL/min；检测波长为438nm；理论板数按大黄素计算不低于4000。
对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品适量，用甲醇溶解并定量稀释制成含大黄素51.2mg/L的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取样品适量，除去包衣，研细，精密称取约2g，置于带塞子的锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定质量；超声处理20min，放冷，再称定质量；用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过；精密吸取续滤液10mL，挥至近干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液20mL，加热回流1h，稍冷；加氯仿25mL，继续回流2h，冷却；移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并人分液漏斗中；分取氯仿层，酸液再用氯仿提取2次，每次10mL，合并氯仿液，蒸干；残渣加氯仿5mL使溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
阴性样品溶液的制备按处方比例和样品制备工艺制成不含虎杖的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
测定法分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20uL注人高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算供试品中大黄素的含量。
本发明的有益效果是：本发明应用RP-HPLC法测定心脑片中大黄素的含量，分离效果好，重现性高，操作简便，结果准确，适于该制剂的含量控制。
【附图说明】
图1是本发明大黄素对照品的色谱图；
图2是阴性样品的色谱图；
图3是心脑片的色谱图。
【具体实施方式】
下面将详细说明本发明的具体实施方式：
1、仪器与试剂：
仪器：
Agilent 1100型高效液相色谱仪，紫外-可见检测器，超声波清洗机(上海华岩仪器设备有限公司，KQ-5200型)，电子分析天平(德国赛多利斯天平有限公司)。
试剂：
甲醇为色谱纯试剂，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。
2、方法与结果
色谱条件与系统适应性试验：用Hypersil ODS(250mm*4.6mm，5um)为色谱柱；柱温：25℃；甲醇∶2g/L磷酸溶液＝(75∶25)为流动相；流速为1.0mL/min；检测波长为438nm；理论板数按大黄素计算不低于4000。
对照品溶液的制备精密称取大黄素对照品10.24mg，置于200mL量瓶中，用甲醇溶解并定量稀释制成含大黄素51.2mg/L的溶液，作为对照品溶液。
供试品溶液的制备取样品适量，除去包衣，研细，精密称取约2g，置于带塞子的锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定质量；超声处理20min，放冷，再称定质量；用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过；精密吸取续滤液10mL，挥至近干，残渣加2.5mol/L硫酸溶液20mL，加热回流1h，稍冷；加氯仿25mL，继续回流2h，冷却；移至分液漏斗中，用少量氯仿洗涤容器，并人分液漏斗中；分取氯仿层，酸液再用氯仿提取2次，每次10mL，合并氯仿液，蒸干；残渣加氯仿5mL使溶解，转移至25mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。
阴性样品溶液的制备按处方比例和样品制备工艺制成不含虎杖的阴性对照样品，再按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。
线性范围的考察精密吸取上述对照品溶液2、4、6、8、10和20ul，按上述色谱条件测定，以进样量对峰面积进行线性回归，结果表明在0.10-1.02ug范围内，大黄素峰面积值与进样量呈良好的线性关系。
测定法分别取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各20uL注人高效液相色谱仪，记录峰面积，按外标法计算供试品中大黄素的含量。
结果如图1-3所示，在大黄素吸收峰处，阴性对照无吸收，对测定结果无影响。心脑片中大黄素的平均含量为0.35mg/片
以上已以较佳实施例公开了本发明，然其并非用以限制本发明，凡采用等同替换或者等效变换方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围之内。