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1、10申请公布号CN104119575A43申请公布日20141029CN104119575A21申请号201410273710122申请日20140619C08L5/00200601C08B37/00200601A23L1/0920060171申请人无限极（中国）有限公司地址529156广东省江门市新会区会城镇七堡工贸城北区三号72发明人马方励胡明华王培培梁明74专利代理机构广州知友专利商标代理有限公司44104代理人李海波54发明名称一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖及其制备方法和应用57摘要本发明公开了一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多。
2、糖复配而成，所述党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖10250、枸杞多糖590，该党参和枸杞复合多糖的纯度及活性高，具有调节肿瘤微环境的功效。还公开了上述党参和枸杞复合多糖的制备方法，该制备方法其工艺简单稳定高效，适合工业化生产，成本低，本发明还公开了上述党参和枸杞多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。51INTCL权利要求书1页说明书8页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书8页10申请公布号CN104119575ACN104119575A1/1页21一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成。
3、，所述党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖10250、枸杞多糖590。2根据权利要求1所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是所述的党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖50150、枸杞多糖2080。3根据权利要求2所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是所述的党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖50、枸杞多糖50。4根据权利要求1、2或3所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是所述的党参多糖或枸杞多糖通过以下方法制备获得选取党参或枸杞为原料，采用沸水提取多次，合并提取液并浓缩得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋进行透析得透析液B。
4、1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液B2，将透析液B2浓缩得浓缩液A3，在浓缩液A3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物经干燥处理即得党参多糖或枸杞多糖。5根据权利要求4所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是采用沸水提取时，共提取15次，每次提取时沸水的用量为党参或枸杞原料总质量的1020倍，每次提取时间为45H。6根据权利要求4所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为1535，其用量与浓缩液A2的体积相同，进行蛋白沉淀时间。
5、为34H。7根据权利要求4所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其特征是所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为7095，乙醇水溶液的用量为浓缩液A3总体积的24倍。8权利要求1、2或3所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖的制备方法，其特征是包括以下步骤（1）选取党参或枸杞原料，采用沸水提取多次，合并提取液并浓缩得浓缩液A1；（2）将浓缩液A1采用透析袋进行透析得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2；（3）在浓缩液A2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液B2，将透析液B2浓缩得浓缩液A3；（4）在浓缩液A3中加入乙醇水溶液进行醇沉。
6、处理，所得沉淀物即为党参多糖或枸杞多糖；（5）将党参多糖和枸杞多糖按照上述计量比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。9权利要求8所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖的制备方法，其特征是步骤（1）中采用沸水提取时，共提取15次，每次提取时沸水的用量为党参或枸杞原料总质量的1020倍，每次提取时间为45H；步骤（3）中所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为1535，其用量与浓缩液A2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为34H；步骤（4）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为7095，乙醇水溶液的用量为浓缩液A3总体积的24倍。10权利要求1、2或3所述的具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸。
7、杞复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。权利要求书CN104119575A1/8页3一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖及其制备方法和应用技术领域0001本发明属于多糖技术领域，具体涉及一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖及其制备方法和应用。背景技术0002肿瘤复发和转移是困扰临床肿瘤治疗的具有普遍意义的难题，究其原因，在于现有治疗的目标仍然集中在肿瘤细胞本身，而忽略了其微环境的重要性。肿瘤微环境与肿瘤细胞之间是土壤与种子的关系，肿瘤恶变过程，就是肿瘤细胞与其微环境共进化的过程，其结果就是休眠肿瘤细胞的苏醒，进入快速增殖，并发生转移。因此，改善肿瘤微环境，。
8、维持肿瘤细胞的休眠状态，是目前研究的热点和重点。近年来的研究发现，多糖就具有显著地抗肿瘤活性并且对人体的毒副作用相对较小，对多糖的生物活性研究在医学领域已经成为国内外专家学者研究的热点。近年发现一些多糖及其复合物对多种疾病，如免疫紊乱、癌症、糖尿病、高血压、肝炎、血栓、肺炎、病毒等都具有显著疗效，并且参与细胞各种生命现象的调节并具有调节肿瘤微环境的作用。0003党参为中国常用的传统补益药，古代以山西上党地区出产的党参为上品，具有补中益气，健脾益肺之功效。现代研究，党参含多种糖类、酚类、甾醇、挥发油、黄芩素葡萄糖甙、皂甙及微量生物碱，具有增强免疫力、扩张血管、降压、改善微循环、增强造血功能等作用。
9、。此外对化疗放疗引起的白细胞下降有提升作用。枸杞是名贵的药材和滋补品，中医很早就有“枸杞养生”的说法。本草纲目记载“枸杞，补肾生精，养肝明目安神，令人长寿。”目前尚未有人以党参和枸杞为原料提取多糖并配制复合多糖，并用于调节肿瘤微环境及辅助抑制肿瘤保健食品方面的应用。发明内容0004本发明的第一个目的在于提供一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，该党参和枸杞复合多糖以党参和枸杞为原料提取获得，获得的党参和枸杞复合多糖纯度及活性高，具有调节肿瘤微环境的功效。0005本发明的第二个目的在于提供上述具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖的制备方法，该制备方法工艺简洁、高效稳定，适合工业化。
10、生产，成本低。0006本发明的最后一个目的在于提供上述具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。0007本发明的第一个目的是通过以下技术方案来实现的一种具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成，所述党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖10250、枸杞多糖590。0008作为本发明的一种优选的技术方案，本发明所述的党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖50150、枸杞多糖2080。说明书CN104119575A2/8页40009作为本发明的一种较佳的具体实施技术方案，本发明所述的党参多糖和枸杞多糖的质。
11、量份配比为党参多糖50、枸杞多糖50。0010本发明所述的党参多糖或枸杞多糖优选通过以下方法制备获得选取党参或枸杞为原料，采用沸水提取多次，合并提取液并浓缩得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋进行透析得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液B2，将透析液B2浓缩得浓缩液A3，在浓缩液A3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物即为党参多糖或枸杞多糖。0011在上述党参多糖或枸杞多糖的制备过程中采用沸水提取时，共提取15次，每次提取时沸水的用量为党参或枸杞原料总质量的1020倍，每次提取时间为45H。00。
12、12在上述党参多糖或枸杞多糖的制备过程中所述三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为1535，其用量与浓缩液A2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为34H。0013在上述党参多糖或枸杞多糖的制备过程中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为7095，乙醇水溶液的用量为浓缩液A3总体积的24倍。0014优选将透析液B1浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液A2，将透析液B2浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液A3。0015透析袋的截留分子量优选为3500DA。0016本发明的第二个目的是通过以下技术方案来实现的上述具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖的制备方法，包括以下步骤（1）选取党参或枸杞原料，采用沸。
13、水提取多次，合并提取液并浓缩得浓缩液A1；（2）将浓缩液A1采用透析袋进行透析得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2；（3）在浓缩液A2中加入三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，取上清液进行中和、透析处理得透析液B2，将透析液B2浓缩得浓缩液A3；（4）在浓缩液A3中加入乙醇水溶液进行醇沉处理，所得沉淀物即为党参多糖或枸杞多糖；（5）将党参多糖和枸杞多糖按照上述计量比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0017在该党参和枸杞复合多糖的制备方法中步骤（1）中采用沸水提取时，共提取15次，每次提取时沸水的用量为党参或枸杞原料总质量的1020倍，每次提取时间为45H；步骤（3）中所述三氯乙酸水溶。
14、液中三氯乙酸的体积百分含量为1535，其用量与浓缩液A2的体积相同，进行蛋白沉淀时间为34H；步骤（4）中所述乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为7095，乙醇水溶液的用量为浓缩液A3总体积的24倍。0018步骤（2）优选将透析液B1浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液A2，步骤（3）中优选将透析液B2浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液A3。0019步骤（2）和步骤（3）中透析袋的截留分子量优选为3500DA。0020本发明的最后一个目的是通过以下技术方案来实现的上述具有调节肿瘤微环境功效的党参和枸杞复合多糖在制备具有调节肿瘤微环境功效的保健食品中的应用。0021本发明所述保健食品的剂型可以为胶囊型。
15、、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等。0022与现有技术相比，本发明具有如下优点（1）本发明中的党参和枸杞复合多糖，可以通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫抑制及免说明书CN104119575A3/8页5疫负调控等多途径调节肿瘤微环境，其具有良好的抗肿瘤活性，其可以直接口服，也可以制成药剂学上所说的多种剂型，如胶囊型、片剂、粉剂、颗粒剂或口服液等，食用后具有调节肿瘤微环境以及辅助抑制肿瘤的功效；（2）本发明中的党参和枸杞复合多糖以富含活性多糖的中草药为主料，利用各种多糖成分合理组合、配合共用，通过多种途径调节肿瘤微环境以及辅助抑制肿瘤，对亚健康保健具有良好的效果；（3）本发明中的党参和枸杞复合多糖的制备方。
16、法，其工艺简单稳定高效，适合工业化生产，成本低。具体实施方式0023下面结合实施例对本发明做进一步说明，但不以任何形式限制本发明。0024以下实施例中采用的各原料，如无特殊说明，均为市售产品。0025第一部分党参和枸杞复合多糖及其制备方法实施例1本实施例中的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成，其中党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖10、枸杞多糖90。0026上述党参和枸杞复合多糖通过以下方法制备获得（1）制备党参多糖选取党参药材3KG，加入水30L，加热煮沸提取，共提取3次，每次提取5小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋（截留分子量为。
17、3500DA，同下）和对流水进行透析大约2天后得透析液B1，将透析液B1浓缩至原体积的1/10左右得浓缩液A2，下同，在浓缩液A2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为30，温度为4，去蛋白时间约为34H，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液B2（截留分子量为3500DA，同下），将透析液B2浓缩至大约3L得浓缩液A3，在浓缩液A3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为85，用量约为浓缩液A3的3倍，静置。
18、过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40真空干燥，所得沉淀物即为党参多糖；（2）制备枸杞多糖，枸杞多糖的制备方法同党参多糖；（3）将党参多糖和枸杞多糖按照党参多糖10、枸杞多糖90的质量份配比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0027实施例2本实施例中的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成，其中党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖250、枸杞多糖5。0028上述党参和枸杞复合多糖通过以下方法制备获得（1）制备党参多糖选取党参药材3KG，加入水60L，加热煮沸提取，共提取3次，每次提取4小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液A1，将浓缩液A1。
19、采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为说明书CN104119575A4/8页615，温度为4，去蛋白时间约为34H，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液B2，将透析液B2浓缩至大约3L得浓缩液A3，在浓缩液A3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为70，用量约为浓缩液A3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用。
20、无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40真空干燥，所得沉淀物即为党参多糖；（2）制备枸杞多糖，枸杞多糖的制备方法同党参多糖；（3）将党参多糖和枸杞多糖按照党参多糖250、枸杞多糖5的质量份配比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0029实施例3本实施例中的党参和枸杞复合多糖，由党参多糖和枸杞多糖复配而成，其中党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖50、枸杞多糖80。0030上述党参和枸杞复合多糖通过以下方法制备获得（1）制备党参多糖选取党参药材3KG，加入水30L，加热煮沸提取，共提取3次，每次提取5小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透。
21、析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为35，温度为4，去蛋白时间约为34H，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液B2，将透析液B2浓缩至大约3L得浓缩液A3，在浓缩液A3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为80，用量约为浓缩液A3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40真空干燥，所得沉淀物即为党参多糖；（2）制备。
22、枸杞多糖，枸杞多糖的制备方法同党参多糖；（3）将党参多糖和枸杞多糖按照党参多糖50、枸杞多糖80的质量份配比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0031实施例4本实施例中的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成，其中党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖150、枸杞多糖20。0032上述党参和枸杞复合多糖通过以下方法制备获得（1）制备党参多糖选取党参药材3KG，加入水60L，加热煮沸提取，共提取5次，每次提取4小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋）和对流水进行透析大约2天后得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入等体积。
23、的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为20，温度为4，去蛋白时间约为34H，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液B2，将透析液B2浓缩至大约3L得浓缩液A3，在浓缩液A3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为80，用量约为浓缩液A3的4倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40说明书CN104119575A5/8页7真空干燥，所得沉淀物即为党参多糖；（2）制备枸杞多糖，枸杞多糖的制备方。
24、法同党参多糖；（3）将党参多糖和枸杞多糖按照党参多糖150、枸杞多糖20的质量份配比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0033实施例5本实施例中的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成，其中党参多糖和枸杞多糖的质量份比为党参多糖50、枸杞多糖25。0034上述党参和枸杞复合多糖通过以下方法制备获得（1）制备党参多糖选取党参药材3KG，加入水40L，加热煮沸提取，共提取5次，每次提取5小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后。
25、离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为35，温度为4，去蛋白时间约为34H，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液B2，将透析液B2浓缩至大约3L得浓缩液A3，在浓缩液A3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为95，用量约为浓缩液A3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40真空干燥，所得沉淀物即为党参多糖；（2）制备枸杞多糖，枸杞多糖的制备方法同党参多糖；（3）将党参多糖和枸杞多糖按照党参多糖50、枸杞多糖25。
26、的质量份配比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0035实施例6本实施例中的党参和枸杞复合多糖，其活性成分由党参多糖和枸杞多糖复配而成，其中党参多糖和枸杞多糖的质量份配比为党参多糖100、枸杞多糖50；上述党参和枸杞复合多糖通过以下方法制备获得（1）制备党参多糖选取党参药材3KG，加入水50L，加热煮沸提取，共提取5次，每次提取4小时，合并提取液并浓缩至约5L得浓缩液A1，将浓缩液A1采用透析袋和对流水进行透析大约2天后得透析液B1，将透析液B1浓缩后得浓缩液A2，在浓缩液A2中加入等体积的三氯乙酸水溶液进行蛋白沉淀后离心，其中三氯乙酸水溶液中三氯乙酸的体积百分含量为20，温度为4，去蛋白时间。
27、约为34H，除去蛋白沉淀取上清液采用氢氧化钠水溶液（其中氢氧化钠的质量百分含量约为10）中和至中性得中性上清液，将中性上清液进行透析大约2天后得透析液B2，将透析液B2浓缩至大约3L得浓缩液A3，在浓缩液A3中边搅拌边加入乙醇水溶液进行醇沉处理，其中乙醇水溶液中乙醇的体积百分含量为80，用量约为浓缩液A3的3倍，静置过夜，离心收集沉淀，沉淀分别用无水乙醇脱水1次，丙酮脱水2次，40真空干燥，所得沉淀物即为党参多糖。0036（2）制备枸杞多糖，枸杞多糖的制备方法同党参多糖；（3）将党参多糖和枸杞多糖按照党参多糖100、枸杞多糖50的质量份配比混匀，即制备获得党参和枸杞复合多糖。0037实施例7说。
28、明书CN104119575A6/8页8党参多糖和枸杞多糖的制备方法同实施例1，分别取党参多糖5G、枸杞多糖5G，以（11）比例混合均匀，得复合多糖组分P1。0038实施例8党参多糖和枸杞多糖的制备方法同实施例1，分别取党参多糖1G、枸杞多糖5G，以（15）比例混合均匀，得复合多糖组分P2。0039实施例9党参多糖和枸杞多糖的制备方法同实施例1，分别取党参多糖10G、枸杞多糖5G，以（21）比例混合均匀，得复合多糖组分P3。0040实施例10以上述实施例19中提供的复合多糖为主要功效成分制备保健食品，通过常规工艺，可以制成药剂学上所说的多种剂型，如胶囊剂、片剂、粉剂、颗粒或口服液等。0041第二。
29、部分多糖及复合多糖辅助抑制肿瘤活性实验实施例11复合多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性C2C12细胞株购自中科院细胞库，C2C12PGF1BRE细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。C2C12PGF1BRE细胞用含10GIBCO胎牛血清DMEM培养基培养，置于37饱和湿度、含5CO2的恒温箱中培养，以1104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔100L。贴壁24H后吸去60L培养基，加配置好相应浓度的多糖样品（P1、P2、P3）50L，终浓度分别为05MG/ML、01MG/ML、002MG/ML，10LBMP2调整至终浓度200NG/ML。同时设。
30、空白组和BMP2组对照。给药16H后吸去培养基，加20LREPORTERLYSIS1XBUFFER，将溶解的细胞裂解液20L转移至白板，加入40LLUCIFERASE底物，于3分钟内读板，读取RLU值。采用SPSS统计软件进行统计学处理。数据均以均数标准差XS表示，两组间比较采用独立样本T检验，多组间比较采用单因素方差分析。0042实施例12复合多糖对NFB报告基因的荧光素酶的活性THP1细胞株购自中科院细胞库，THP1/PGF1NFB细胞株由中国科学院上海药物研究所丁侃实验室构建，保存于液氮中。THP1/PGF1NFB细胞用含10胎牛血清RPMI1640培养基培养。置于37饱和湿度、含5CO。
31、2的恒温箱中培养，以5104细胞/孔的密度接种于96孔板内，每孔50L容积。加入受试样品（P1、P2、P3）50L，终浓度分别为05MG/ML、01MG/ML、002MG/ML，同时设立空白组和LPS对照组。加入LPS溶液10L，终浓度为1G/ML，置于37饱和湿度、含5CO2的恒温箱中培养过夜。培养过夜后，每空加入100LBRIGHTGLOTMLUCIFERASEASSAYSYSTEM底物，于酶标仪读板，读取RLU值。0043采用SPSS统计软件进行统计学处理。数据均以均数标准差XS表示，两组间比较采用独立样本T检验，多组间比较采用单因素方差分析。0044实施例13复合多糖可抑制前列腺癌成纤。
32、维细胞的生长前列腺癌相关成纤维细胞（CAF）由南开大学生命科学院惠赠。细胞接种于96孔板，细胞密度为1104/孔。将多糖复合物（P1、P2、P3）溶于DMEM/培养基中，使其浓度为10说明书CN104119575A7/8页9MG/ML。培养8天，采用CCK检测试剂盒（北京庄盟生物公司）测定细胞生长状态。每种多糖样本量为3。0045统计学分析计量数据多组间比较采用方差分析，首先对数据进行方差齐性检验，计算LEVENE统计值，若方差齐，则进行组间多重比较，方法为LSD和DENNETT，若方差不齐，则采用校正方法DENNETT。统计软件为SPSS170，显著性水平为005。0046实施例14复合多糖。
33、可抑制结肠癌成纤维细胞的生长结肠癌相关成纤维细胞（CAF）由南开大学生命科学院惠赠。细胞接种于96孔板，细胞密度为1104/孔。将多糖复合物（P1、P2、P3）溶于DMEM/培养基中，使其浓度为10MG/ML。培养8天，采用CCK检测试剂盒（北京庄盟生物公司）测定细胞生长状态。每种多糖样本量为3。0047统计学分析计量数据多组间比较采用方差分析，首先对数据进行方差齐性检验，计算LEVENE统计值，若方差齐，则进行组间多重比较，方法为LSD和DENNETT，若方差不齐，则采用校正方法DENNETT。统计软件为SPSS170，显著性水平为005。0048将党参多糖及枸杞多糖按照不同比例配制成复合多。
34、糖，该复合多糖调节肿瘤微环境生物活性测定结果见表1、表2和表3。结果表明，将党参多糖与枸杞多糖按照3种不同比例配制成的复合多糖同时具有抑制血管生成、免疫抑制及免疫负调节生物活性。党参多糖及枸杞多糖单用虽有一定生物活性，但两种多糖合用，进行有效优化，从而得出最佳比例并进行组合搭配，当党参多糖及枸杞多糖的质量比为11，抗前列腺癌及抗结肠癌肿瘤活性效果相对较好，通过配伍发挥了药物间的相辅相成作用，可明显提高疗效。0049综上实验证明该多糖复合物可通过抑制肿瘤新生血管生成、免疫抑制及免疫负调控等多途径发挥潜在的抗肿瘤活性。0050表13种不同配比复合多糖可抑制BMP2诱导的带有BRE报告基因的荧光素酶的活性表23种不同配比复合多糖能抑制带有NFB报告基因的荧光素酶的活性表33种不同配比复合多糖能抑制前列腺癌成纤维细胞的生长表43种不同配比复合多糖能抑制结肠癌成纤维细胞的生长说明书CN104119575A8/8页10上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围。说明书CN104119575A10。