二取代吡唑并苯并二氮杂 类 本申请是中国专利申请 200580035121.9 的分案申请。 本发明涉及抑制血管生成和 / 或激酶活性的二取代吡唑并苯并二氮杂 类。 这些化合物可以用于治疗癌性肿瘤， 特别是乳腺、 结肠、 肺和前列腺癌。 血管生成为新血管在组织或器官中的生成。在正常的生理条件下， 人和动物仅在 非常特定的、 有限的情况下进行血管生成。例如， 通常在伤口愈合、 胎儿和胚胎发育以及黄 体、 子宫内膜和胎盘的形成中观察到血管生成。
毛细血管包含内皮细胞和周细胞， 它们由基膜包围。血管生成始于由内皮细胞和 白细胞分泌的酶对基膜的侵蚀。然后， 内衬在血管内腔的内皮细胞通过基膜伸出。血管源 性的刺激物诱导内皮细胞迁移通过侵蚀的基膜。 迁移细胞在母体血管内皮细胞进行有丝分 裂和增殖的地方之外形成 “芽” 。内皮芽相互合并， 生成毛细血管袢， 从而产生新血管。
不受控制的血管生成是癌症的标志。在 1971 年， Dr.Judah Folkman 提出， 肿 瘤生长取决于血管生成。参见例如， Folkman， New England Journalof Medicine， 285 ： 1182-86(1971)。根据 Dr.Folkman， 在不生长另外的血管以滋养肿瘤的情况下， 肿瘤仅能生 长到一定的尺寸。在其最简单的表述中， 该提议指出 ： “一旦发生了肿瘤 ‘成活’ ， 肿瘤细胞 群的每次增加必须由在肿瘤上会聚的新毛细管的增加来进行” 。目前理解的肿瘤 ‘成活’ 是 指肿瘤生长的血管前相， 其中占几个立方毫米体积并且不超过几百万个细胞的肿瘤细胞群 可以存活于现存的宿主微脉管上。肿瘤体积超过此相的扩大需要诱导新的毛细血管。例 如， 小鼠中的早期血管前相中的肺部微转移除了在组织切片上进行高倍显微术之外是不能 检测的。
早在 1945 年， Algire， 等， J.Nat.Cancer Inst.， 6： 73-85(1945)， 表明 ： 植入小鼠 中的皮下透明腔中的肿瘤的生长速率在新血管形成前是慢而线性的， 而在新血管形成后是 快而接近指数的。1966 年， Dr.Folkman 报道 ： 在其中血管不增殖的离体灌住器官中的肿瘤 3 生长被限制到 1-2mm ， 但当它们移植入小鼠中并且成为新血管形成时， 快速膨胀到此体积 的＞ 1000 倍。参见例如， Folkman， 等， Anals of Surgery， 164 ： 491-502(1966)。
在无血管角膜中的肿瘤生长缓慢地并且以线性速率生长， 但在新血管生长后转为 指数生长。参见例如， Gimbrone， Jr.， 等， J.Nat.Cancer Inst.， 52 ： 421-27(1974))。悬浮于 兔眼前房的水性液体中的肿瘤保持活的、 无血管的， 并且尺寸被限制到＜ 1mm3。 一旦将它们 植入虹膜血管床， 它们开始新血管生长并且快速生长， 在两周内达到其原始体积的 16,000 倍。参见例如， Gimbrone， Jr. 等， J.Exp.Med.， 136 ： 261-76。
当将肿瘤植入小鸡胚胎绒毛尿囊膜上时， 在＞ 72 小时的无血管相的过程中它们 缓慢地生长， 但是不超过 0.93+0.29mm 的平均直径。在新血管生长开始后的 24 小时内， 发生快速肿瘤膨胀， 并且到第 7 天， 血管化的肿瘤达到 8.0+2.5mm 的平均直径。参见例如， Knighton， British， J.Cancer， 35 ： 347-56(1977))。
转移灶在兔肝中的血管管型显示转移灶尺寸的不均匀性， 但对于在存在血管化时 的尺寸显示相对均匀的截止点。肿瘤通常无血管最高到 1mm 的直径， 但超过该直径被新血 管化。参见例如， Lien， 等， Surgery， 68 ： 334-40(1970)。
在胰腺小孔的 β 细胞中发育癌的转基因小鼠中， 血管前增殖性小孔被限制到尺 寸＜ 1mm。 在 6-7 周龄， 4-10％的小孔成为新血管生长， 并且从这些小孔， 达到超过血管前小 孔体积 1,000 倍的大血管化肿瘤。参见例如， Folkman， 等， Nature， 339 ： 58-61(1989)。
已经表明， 可以通过抑制血管生成而不是抑制肿瘤细胞本身的增殖， 来治疗肿瘤。 例如， Kim 等， Nature， 362 ： 841044(1993) 表明 ： 抗 VEGF ( 血管内皮生长因子 ) 的特异性抗 体降低了微血管密度并且导致依赖作为它们血管生成的单一介体 ( 在裸小鼠中 ) 的 VEGF 的三种人肿瘤生长的 “显著或惊人的” 抑制。该抗体不抑制肿瘤细胞在体外的生长。此外， Hori， 等， Cancer， Resp.51 ： 6180-84(1991) 表明 ： 抗 -bFGF 单克隆抗体导致依赖于作为其血 管生成的唯一介体的 bFGF 分泌的小鼠肿瘤生长的 70％抑制。该抗体不抑制肿瘤细胞在体 外的生长。还表明 bFGF 的腹膜内注射通过刺激毛细内皮细胞在肿瘤中的生长而增强了原 始肿瘤及其转移灶的生长。缺乏 bFGF 受体和 bFGF 的肿瘤细胞本身不是对于体外的肿瘤细 胞的分裂素。 参见例如， Gross， 等， Proc.Am.Assoc.Cancer Res.， 31 ： 79(1990)。 特异的血管 生成抑制剂 (AGM-1470) 抑制体内的肿瘤生长和转移， 但比抑制在体外的肿瘤细胞增殖的 活性低得多。与它抑制肿瘤细胞增殖相比， 它以 4logs 低浓度半最大地 (half-maximally) 抑制血管内皮细胞增殖。参见例如， Ingber， 等， Nature， 48 ： 555-57(1990)。
还有肿瘤生长与血管生成相关的间接临床证据。例如， 转移到玻璃体的人视网膜 3 母细胞瘤发育成被限制到＜ 1mm 的无血管螺旋样体， 尽管事实在于它们是能存活的并且结 3 合有 H- 胸苷 ( 在从摘除的眼中除去并且在体外分析时 )。卵巢癌转移至腹膜作为微小的 无血管白种子 (1-3mm3)。这些植入物很少长得更大， 直到它们中的一个或多个成为新血管 生成的。在乳腺癌 ( 参见例如， Weidner， 等， New Eng.J.ofMed.， 324 ： 1-8(1991) ； Weidner， 等， J.Nat.Cancer Inst.， 84 ： 1875-87(1992)) 和在前列腺癌 (Weidner， 等， Am.J.Pathol.， 143(2) ： 401-09(1993)) 中的新血管生成强度与未来的转移灶危险高度相关。
在新血管生长前， 来自人皮肤黑素瘤的转移灶稀少。新血管生长开始导致病变厚 度增大并且转移危险增加。 参见例如， Srivastava， 等， Am.J.Pathol.， 133 ： 419-23(1988))。 在膀胱癌中， 血管源性蛋白， bFGF 的尿水平是比细胞学更敏感的状态和重大疾病指标。参 见例如， Nguyen， 等， J.Nat.Cancer， Inst.， 85 ： 241-42(1993)。
血管生成已经与大量不同类型的癌症相关， 所述的癌症包括实体瘤和血液运载的 肿瘤。 与血管生成相关的实体瘤包括但不限于 ： 横纹肌肉瘤， 视网膜母细胞瘤， 尤因肉瘤， 成 神经细胞瘤和骨肉瘤。血管生成与乳腺癌、 前列腺癌、 肺癌和结肠癌相关。血管生成还与血 液运载的肿瘤相关， 所述的血液运载的肿瘤如白血病， 淋巴瘤， 多发性骨髓瘤以及各种急性 或慢性骨髓肿瘤疾病中的任何一种， 其中发生白血细胞不受限制的增殖， 通常伴随有贫血、 削弱的血液凝固以及淋巴结、 肝和脾的增大。还认为， 血管生成在骨髓异常中起一定的作 用， 所述的异常引起白血病、 淋巴瘤和多发性骨髓瘤。
童年期最常见的血管源性疾病之一是血管瘤。血管瘤是由新形成血管构成的肿 瘤。在大多数情况下， 肿瘤是良性的， 并且在没有干预的条件下退化。在更严酷的情况下， 肿瘤发展到大海绵状和浸入的形式， 并且产生临床并发症。 全身形式的血管瘤， 多发性血管 瘤， 死亡率高。抗治疗的血管瘤存在， 其不能由目前使用的疗法进行治疗。
因此， 清楚的是， 血管生成在癌症的转移中起主要作用。 如果能够抑制或消除血管 源性活性， 那么尽管肿瘤存在也将不生长。 在疾病状态下， 防止血管生成可以公开由新微血管系统的侵入而导致的损伤。 针对血管源性过程的控制的疗法可能导致这些疾病的去除或 减轻。
正在研究作为治疗药剂的抑制血管生成的几个类别的化合物。 这些是例如沙利度 胺和沙利度胺类似物 (USP 6,235,756(The Children’ s MedicalCenter Corporation) ； 6,420,414(The Children’ s Medical Center Corporation) ； 6,476,052(Celgene Corporation)) ； 喹啉酮类 (USP 6,774,237(ChironCorporation)) ； 丝氨酸蛋白酶和血管 舒缓素 (USP 6,544,947(EntreMedInc.)) ； VEGF 类似物和拮抗剂 (USP 6,783,953(Janssen Pharmaceutica N.V.) ； 6,777,534(Children’ s Medical Center Corporation)) ； 结合 TM TM Angiostatin 或 Endostatin 的肽或蛋白 (USP 6,201,104(EntreMed Inc.)) ； 组织蛋白 酶 V- 样多肽 (USP 6,783,969(Nuvelo Inc.)) ； 其它抗血管形成肽 (USP 6,774,211(Abbott Laboratories) ； 4- 苯胺基 - 喹唑啉类 (WO 2002/092578， WO2002/092577， WO 2002/016352， WO 2001/032651， WO 2000/047212(Astrazeneca)) ； 酞嗪类 (WO 2004/033042(Novartis)， WO 2003/022282(Novartis)， WO 2002/012227(Astrazeneca)， WO 2001/010859(Bayer)， WO98/35958(Novartis)) ； 异 噻 唑 类 (WO 99/62890(Pfizer)) ； 以及二氢吲哚酮类 (indolinones)(WO 2001/037820， WO 2000/008202， WO 98/50356， WO96/40116(Sugen Inc.))。 几篇评论报道了血管生成抑制剂作为治疗药剂的应用。 这些文章包括 Mazitschek 等， Current Opinion in Chemical Biology， 8(4) ： 432-441(2004) ； Underiner， 等， Current Medicinal Chemistry， 11(6) ： 731-745(2004) ； Manley， 等， Biochimica et Biophysica Acta， 1697(1-2) ： 17-27(2004) ； Alessi， 等， Biochimica et Biophysica Acta， 1654(1) ： 39-49(2004) ； Tortora， 等， Current Pharmaceutical Design， 10(1) ： 11-26(2004)。
不受控制的细胞增殖是癌症的另一个标志。 癌性肿瘤细胞典型地具有对直接或间 接调节细胞分裂周期的基因的某些形式的破坏。
细胞周期蛋白依赖性激酶 (CDKs) 是对于细胞周期控制关键的酶。参见例如， Coleman 等， Annual Reports in Medicinal Chemistry， 32 ： 171-179(1997)。 这 些 酶 调节细胞周期不同期之间的过渡， 例如 G1 期至 S 期的进程 ( 活性 DNA 合成的周期 )， 或 G2 期至 M 期的进程， 其中发生了主动的有丝分裂和细胞分裂。参见例如， Science， 274 ： 1643-1677(6December 1996) 上关于该主题的文章。
CDKs 由催化 CDK 亚基和调节细胞周期蛋白亚基组成。细胞周期蛋白亚基是 CDK 活性的关键调节物， 因为每个 CDK 与细胞周期蛋白的特定亚型相互作用 ： 如细胞周期蛋白 A(CDK1， CDK2)。不同的激酶 / 细胞周期蛋白对通过细胞周期的特定时期调节进程。参见例 如， Coleman， 见上文。
在癌性细胞不受控制的生长过程中已涉及到细胞周期控制体系的异常。参见例 如， Kamb， Trends in Genetics， 11 ： 136-140(1995) ； 以及 Coleman， 见上文。另外， 在许多 肿瘤中已观察到编码 CDK’ s 或它们的调节物的基因的改变或基因的表达的改变。参见例 如， Webster， Exp.Opin.Invest.Drugs， 7： 865-887(1998)， 以及其中引用的参考文献。 因此， 有大量的参考文献证实抑制 CDKs 的化合物用作抗增殖性治疗药剂。参见例如， 美国专利 5,621,082 ； EP 0 666 270 A2 ； WO 97/16447 ； 以及上文中 Coleman 中引用的参考文献， 特别
是第 10 篇参考文献。因此， 需要鉴别 CDK 激酶活性的化学抑制剂。
特别需要鉴定小分子化合物来治疗一种或多种类型的肿瘤， 所述小分子化合物易 于合成， 并且有效抑制一种或多种 CDK 或 CDK/ 细胞周期蛋白复合物。
已经研究或正在研究作为治疗药剂的抑制细胞周期蛋白激酶的几个 种 类 的 化 合 物。 有 例 如 Flavopiridol 的 类 似 物 (USP 5,733,920(Mitotix) ； WO 98/1344(Bristol-Myers Squibb) ； WO 97/42949(Bristol-MeyersSquibb)) ； 嘌 呤 衍 生 物 (WO 98/05335(CV Therapeutics) ； WO 97/20842(CNRS)) ； 吖啶酮类和苯并噻二嗪 类 (WO 98/49146A2(US Dept.ofHealthand Human Services)) ； 以 及 antisense(USP 5,821,234(StanfordUniversity))。此外， 在论述 CNS- 作用的化合物的文章中公开了 一些 N， N- 取代的二氢吡唑并苯并二氮杂 类。参见， M.A.Berghot， Arch.Pharm.325 ： 285-289(1992)。
仍然需要治疗一种或多种类型肿瘤、 特别是通过调节血管生成和 / 或 CDKs 来治疗 的易于合成的小分子化合物。
本发明涉及新型的 7， 8- 二取代的吡唑并苯并二氮杂 类和这些化合物的药用盐。本发明的化合物是血管生成和 / 或激酶如细胞周期依赖性激酶 (CDKs)， 特别是 CDK2 的抑 制剂。 这些化合物和它们的药用盐以及所述化合物的酯是可以用于治疗或控制细胞增殖疾 病， 特别是癌症的抗增殖药剂。本发明还涉及含有这样化合物的药物组合物以及用于治疗 和 / 或预防癌症的方法， 特别是在治疗或控制实体瘤方面。本发明的化合物可以特别用于 治疗或控制乳腺、 结肠、 肺和前列腺肿瘤。本发明还涉及可以用于制备 7， 8- 二取代的吡唑 并苯并二氮杂 类化合物如下面所述的式 IV 的那些化合物的新型中间体。
具体而言， 本发明提供式 IV 的化合物 ：
其中 R1 为烷基， 烷氧基， 卤素， COOH， COO 烷基， CN， C(O)N(R6)2 或 (OCH2CH2)nOCH3 ； R2 为烷基， 卤素， 被卤素取代的烷基， OH， 烷氧基， 被卤素取代的烷氧基， 苯基， 为任选被烷基或 C(O)OR6 取N(R6)2， (OCH2CH2)nOCH3， O(CH2)mNR7R8 或 代的 6 元杂环 ；
或者 R1 和 R2 一起形成 5 元杂环 ；
R3 为氢或烷基 ；
R4 为氢， 卤素， CN， NO2， 烷基或烷氧基 ； 6
每个 R 独立地为氢或烷基 ；R7 和 R8 各自独立地为氢， 烷基或烷氧基烷基 ； 或 R7 和 R8 与它们连接的氮原子一起 形成任选被烷基取代的 6 元杂环 ；
每个 n 独立地为 1， 2或3； 以及
m 为 2， 3或4；
或其药用盐。
本发明还涉及药物组合物， 其含有任何一种或多种上述的化合物或其药用盐， 以 及药用载体。制备这种组合物方法也是本发明的一部分。
本发明还涉及使用本发明化合物的方法。本发明的化合物是血管生成和 / 或激酶 的抑制剂。因此， 本发明涉及抑制血管生成的方法。本发明还涉及抑制激酶的方法。此外， 本发明涉及治疗癌症， 特别是乳腺、 结肠、 肺和前列腺癌的方法， 该方法包括对患有癌症的 患者给药治疗有效量的式 IV 的化合物或其药用盐。
在一个方面， 本发明提供 7， 8- 二取代 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3- 甲基 - 吡唑 并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 类化合物及含有它们的药物组合物。在第二方面， 本发明提 供用于合成本发明的化合物的方法以及在这种合成中使用的有价值中间体。
本发明的化合物是血管生成的抑制剂。 因此， 在第三方面， 本发明提供抑制血管生 成的方法， 该方法包括给药治疗有效量的本发明化合物。本发明的化合物还是激酶如 CDK2 的抑制剂。因此， 在第四方面， 本发明提供抑制激酶活性的方法， 该方法包括给药治疗有效 量的本发明化合物。 在第五方面， 本发明提供用于治疗或控制癌症的方法， 该方法包括给药 治疗有效量的本发明化合物。具体而言， 本发明提供用于治疗乳腺、 前列腺、 结肠和肺癌的 方法。
如此处中所用的， 下列术语具有下列定义。 不管所述的术语单独或组合出现， 都采 用此处使用的下列定义。必须注意， 如在说明书和后附权利要求书中所用的， 单数形式 “一 个” 、 “一种” 和 “所述的” 包括复数形式， 除非上下文另外清楚地指明。
“烷基” 是指含有 1 至 6 个， 优选 1 至 4 个碳原子的直链或支链的、 取代或未取代的 饱和脂族烃基。 典型的烷基包括甲基、 乙基、 丙基、 异丙基、 丁基、 叔丁基、 2- 丁基、 戊基、 己基 等。
“烷氧基” 是指直链或支链的烃氧基， 其中″烷基″部分为如上定义的烷基， 并且 该基团通过氧原子连接到分子上。 典型的烷氧基包括甲氧基、 乙氧基、 丙氧基、 异丙氧基、 丁 氧基、 2- 丁氧基、 叔丁氧基、 正戊氧基、 正己氧基等。 “卤素” 是指氟、 氯、 溴或碘。优选的卤素为氟和氯。
“杂原子” 是指选自 N， O 和 S 中的原子。
“6 元杂环” 是指 6 元非芳族的、 部分或全部饱和的烃基， 其含有 1 至 3 个杂原子， 杂原子中的至少一个为氮。6 元杂环的实例包括哌啶、 哌嗪、 吗啉、 硫代吗啉等。
“5 元或 6 元杂环” 是指含有 1 至 3 个杂原子的 5 或 6 元环。碳环的实例包括戊基 和己基等。杂环的实例包括 ： 二噁烷、 二氧戊环、 吡咯烷、 咪唑烷等
“IC50” 是指抑制 50％特定测量活性所需要的特定的吡唑并苯并二氮杂的浓度。[IC50 尤其可以如下面的实施例 A 中所述进行测量 ]
“IC90” 指抑制 90％特定测量活性所需要的特定吡唑并苯并二氮杂 的浓度。
“药用” ， 例如药用载体， 赋形剂等是指对给药具体化合物的受试者而言是药用的、并且基本上无毒的。
“药用盐” 是指常规酸式加成盐或碱式加成盐， 其保留了式 IV 的化合物的生物效力 和性能， 并从合适的无毒的有机或无机酸或有机或无机碱来形成。酸式加成盐的实例包括 那些衍生自无机酸如盐酸， 氢溴酸， 氢碘酸， 硫酸， 氨基磺酸， 磷酸和硝酸的酸式加成盐， 和 那些衍生自有机酸例如对甲苯磺酸， 水杨酸， 甲磺酸， 草酸， 琥珀酸， 柠檬酸， 苹果酸， 乳酸， 富马酸等的酸式加成盐。 碱式加成盐的实例包括那些衍生自铵、 钾、 钠和季铵氢氧化物的碱 式加成盐， 例如四甲基铵氢氧化物。
“苯基” 是指这样的官能团， 其为除去了一个氢的苯环。本发明的苯基可以是未取 代的或取代的， 例如被烷基， 烷氧基， 卤素， CN， N(R6)2， NO2 等所取代的。
“取代的” ， 如取代的烷基， 除非另外说明， 是指取代可以发生在一个或多个位置， 并且在每个取代位置的取代基独立地选自具体的选项。
“治疗有效量” 表示至少一个式 IV 的化合物、 或它的药用盐、 酯或代谢物的量， 其显 著抑制肿瘤细胞， 包括人肿瘤细胞系的增殖， 或显著地抑制供应肿瘤或其转移灶的血管的 血管生成。
本发明提供式 IV 的化合物
其中 R1 为烷基， 烷氧基， 卤素， COOOH， COO 烷基， CN， C(O)N(R6)2 或 (OCH2CH2)nOCH3 ； R2 为烷基， 卤素， 被卤素取代的烷基， OH， 烷氧基， 被卤素取代的烷氧基， 苯基， 为任选被烷基或 C(O)OR6 取N(R6)2， (OCH2CH2)nOCH3， O(CH2)mNR7R8 或代的 6 元杂环 ；
或者 R1 和 R2 一起形成 5 元杂环 ；
R3 为氢或烷基 ；
R4 为氢， 卤素， CN， NO2， 烷基或烷氧基 ；
每个 R6 独立地为氢或烷基 ；
R7 和 R8 各自独立地为氢， 烷基或烷氧基烷基 ； 或 R7 和 R8 与它们连接的氮原子一起 形成任选被烷基取代的 6 元杂环 ；
每个 n 独立地为 1， 2或3； 以及
m 为 2， 3或4；
或其药用盐。在一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为在此实施方案内， 优选的化合物包括那些其中 R1 为卤素或氰基的化合物。 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为 O(CH2)mNR7R8。 在这样 7 8 7 8 的化合物中， R 和 R 可以各自独立地为氢， 烷基或烷氧基烷基 ； 或者 R 和 R 可以与它们连 7 8 接的氮原子一起形成 6 元杂环。例如， NR R 可以形成吗啉或哌嗪环。在此实施方案内， 优 7 8 1 选的化合物是那些化合物， 其中 R 和 R 与它们连接的氮原子一起形成 6 元杂环， 并且 R 为 卤素或氰基。
这种化合物的实例包括
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡唑并
[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡唑 以及 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(2-(4- 甲基 -1- 哌嗪基 ) 乙氧基 )-3- 甲[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 还优选的是其中 R7 和 R8 各自独立地为氢， 烷基或烷氧基烷基并且 R1 为卤素或氰 基的化合物。这样的一种化合物的实例是
5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 2- 二 氢 -8-(2-(2- 甲 氧 基 乙 基 ) 甲 氨 基 )- 乙 氧
基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为 N(R6)2， 其中每个 R6 独立地为氢或烷基。在此实施方案内， 优选其中 R1 为卤素或氰基的化合物， 例如， 化合物 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-N， N- 二甲氨基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] 苯并二氮
杂 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为卤素， 烷基或被卤素 1 取代的烷基。 在此实施方案内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R 为卤素， 烷基或烷氧基。 这种化合物的实例包括 ：
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 氟 -7- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 三氟甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 以及 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为羟基， 烷氧基或被10并二氮杂
并二氮杂
4] 苯并二氮杂
杂
CN 101899049 A说明书8/74 页卤素取代的烷氧基。在此实施方案内的优选化合物是那些化合物， 其中 R1 为烷基， 氰基， NH2C(O) 或 O(CH2)nOCH3。这样化合物的实例包括 ：
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 以及 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 在此组内的其它优选化合物是那些化合物， 其中 R1 为卤素。这种化合物的实例包 7- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 以及 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b]苯并二氮杂
二氮杂
括：
并二氮杂
并二氮杂
并二氮杂
并二氮杂
[1， 4] 苯并二氮杂 在此组内的进一步优选化合物是那些化合物， 其中 R1 为烷氧基。这种化合物的实 例包括 ：
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并
二氮杂
1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 -8- 甲氧基 -5- 苯基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -5-(2- 甲氧基苯基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 以及 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3，
苯并二氮杂
4-b][1， 4] 苯并二氮杂
4-b][1， 4] 苯并二氮杂 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为苯基。优选的化合 物包括那些化合物， 其中 R1 为烷氧基， 例如， 化合物 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧
基 -3- 甲基 -8- 苯基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R2 为 (OCH2CH2)nOCH3。 在此 1 实施方案内的优选化合物是那些化合物， 其中 R 为卤素， 烷氧基或氰基。这种化合物的实 例包括 ：
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] 以及 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-3- 甲4-b][1， 4] 苯并二氮杂
4] 苯并二氮杂
[1， 4] 苯并二氮杂
基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 和 R2 一起形成二氧戊 环。这样一种化合物的实例为 5-(2- 氯苯基 )-8， 10- 二氢 -7- 甲基 -1， 3- 二氧戊环并 [4，5-h] 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 为卤素。在此实施方 案内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R2 为卤素 ； 羟基 ； N(R6)2 ； O(CH2)mNR7R8， 例如， 其中
NR7R8 形成吗啉环 ； 烷氧基， 例如， 甲氧基或乙氧基 ； 或
其中 n 为 1 或 2。在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 为 (OCH2CH2)nOCH3。 在此 2 实施方案内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R 为烷氧基。
在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 为 NH2C(O)。在此实施 方案内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R2 为烷氧基。
在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 为烷基。在此实施方案 内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R2 为烷氧基， 卤素， 烷基或被卤素取代的烷基。
在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 为烷氧基。在此实施 方案内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R2 为烷氧基 ； 卤素， 例如， 氯； 苯基 ； 或 (OCH2CH2) 其中 n 为 1 或 2。 nOCH3，
在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R1 为氰基。在此实施方案 内， 优选的化合物是那些化合物， 其中 R2 为羟基 ； 烷氧基 ； O(CH2)mNR7R8， 特别是其中 NR7R8 形 成吗啉环 ； (OCH2CH2)nOCH3 ； 或
其中 n 为 1 或 2， 并且 m 为 2。在另一个实施方案中， 本发明提供式 IV 的化合物， 其中 R3 为氢， 即式 XXII 的化合 物。这种化合物的实例包括
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氰基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮 在再一个实施方案中， 本发明提供如上定义的式 IV 的化合物， 其中 4 R 为邻 - 氯 ； 以及 1 2 3 R， R 和 R 具有上面给出的含义。12杂 杂以及
CN 101899049 A
说明书10/74 页在又一个实施方案中， 本发明提供如上定义的式 IV 的化合物， 其中 3 R 为甲基 ； R4 为邻 - 氯 ； 以及 1 2 R 和 R 具有上面给出的含义。 在又一个实施方案中， 本发明提供如上定义的式 IV 的化合物， 其中 1 R 为卤素或 -CN ； R3 为甲基 ； R4 为邻 - 氯 ； 以及 2 R 具有上面给出的含义。 本发明提供用于合成二取代的吡唑并苯并二氮杂 的方法。 在实施例中提供用于合成本发明化合物的适宜方法。 通常， 本发明的化合物可以根据下面提供的合成方案制备。
下面的合成方案提供用于制备本发明化合物， 即式 IV 的化合物的两种一般方法。 方法 A 中， 示于方案 1 和 2 中， 将式 I 的苯并二氮杂
转化为式 IV 的化合物。方案 1
在方案 1 的方法中， 根据本领域中已知的程序 (WO 2000/064900 ； Scheibye， S.， 等， Bulletin des Societes Chimiques Belges， 87 ： 229-38(1978) ； Jesberger， M.，等， Synthesis， 1929-1958(2003))， 将内酰胺 I 转化为相应的硫代内酰胺 II。将硫代内酰胺 II 与 N， N- 二甲基乙酰胺的二甲基缩醛反应， 优选在升高的温度如 60 至 130℃反应， 生成中间 体 III， 其通过与肼反应， 生成吡唑衍生物 IV。
方案 2在作为方案 1 的变体的方案 2 的方法中， 或者通过本领域中已知的方法 (Walser， A. ； 等， Chemistry of Heterocyclic Compounds ， Chichester ， United Kingdom ， Vol.50 ： 431-543(1991) ； Walser， A. ； 等， Chemistry ofHeterocyclic Compounds ， Chichester， United Kingdom， vol.50 ： 545-629(1991) ； Walser， A. ； 等， Chemistry of Heterocyclic Compounds ， Chichester ， United Kingdom ， vol 50 ： 631-848(1991) ； Walser， A. ； 等， Chemistry ofHeterocyclic Compounds， Chichester， United Kingdom， vol 50 ： 849-946(1991) ； Archer， G.A. ； 等， Chemical Reviews， 68 ： 747-84(1968) ； Sternbach， L.H.， 等， Journal ofOrganic Chemistry， 27 ： 3788-96(1962) ； U.S.Patent No.3,681,341)， 或者通过与磷酰氯反应， 然后与甲醇钠反应， 将内酰胺 I 转化为 O- 甲基醚 V。醚 V 与 N， N- 二甲基乙酰胺的二甲基缩醛反应， 形成中间体 VI， 其通过与肼反应， 生成吡 唑衍生物 IV。
制备式 I 化合物的方法在苯并二氮杂文献 (Walser， A. ； 等， Chemistry ofHeterocyclic Compounds ， Chichester ， United Kingdom ， vol.50 ： 431-543(1991) ； Walser， A. ； 等， Chemistry of Heterocyclic Compounds， Chichester， United Kingdom， vol.50 ： 545-629(1991) ； Walser， A. ； 等， Chemistry of Heterocyclic Compounds， Chichester， United Kingdom， vol 50 ： 631-848(1991) ； Walser， A. ； 等， Chemistry ofHeterocyclic Compounds， Chichester， United Kingdom， vol 50 ： 849-946(1991) ； Archer， G.A. ； 等， Chemical Reviews， 68 ： 747-84(1968) ； Sternbach， L.H.， 等， Journal of OrganicChemistry， 27 ： 3788-96(1962)) 中是周知的。
方案 3
对于其中取代模式预先没有描述的式 I 化合物的实例， 其制备按照方案 3 中列出 的方法， 其中根据在 Toyoda， T.， 等， Tetrahedron Letters， 21 ： 173-6(1980) 中所述的方 法， 在路易斯酸存在下， 苯胺衍生物 VII 与醛 VIII 缩合， 生成氨基醇 IX。
式 VIII 的化合物是可商购的。 式 VIII 的化合物是可商购的， 或者可以由可商购的 材料通过本领域中已知的程序制备。式 VII 的化合物， 除 VIIgg， VIIkk， VIIii 和 VIIjj 之 外， 是可商购的。 式 VIIgg 和 VIIkk 的化合物可以例如通过 FR1573745 的方法制备。 化合物 VIIii 和 VIIjj 可以通过下面的方法制备， 其按照 VIIii 进行描述。7.34g(0.0347mol) 的 1- 甲氧基 -4- 硝基 -2- 异丙氧基苯和 15g 的阮内镍在 80mL 的四氢呋喃 - 乙醇 (1 ∶ 1) 中 的混合物在 50psi 氢气气氛下强力摇动 4 小时。然后， 将混合物过滤通过硅藻土， 并且在减 压下浓缩， 得到 4.57g 的 3- 甲氧基 -4- 异丙氧基苯胺， 将其直接用于下一步骤。可以以类 似的方法， 由 2- 甲氧基 -4- 硝基 -1- 异丙氧基苯制备 VIIjj， 2- 甲氧基 -4- 硝基 -1- 异丙 氧基苯可以由可商购的材料， 使用 Castello 等， Tetrahedron Letters， 26 ： 2489-92(1985) 的程序来制备。
由本领域中已知的方法 ( 参见例如， 上述的 Walser 参考资料 ； Sugasawa， T. ； 等， Journal of Heterocyclic Chemistry， 16(3) ： 445-8(1979) ； 以及 Leroux， F.， 等， Journal ofOrganic Chemistry， 68 ： 4693-4699(2003))， 可以进行 IX 至相应的氨基酮 X 的氧化。通 接着与氨反应提供 XII 或与叠氮 过下面的方法用甘氨酸等价物衍生 X ： X 与溴乙酰溴反应， 化钠反应， 接着叠氮化物进行胺还原， 提供 XII， 然后进行环化， 成为内酰胺 I( 参见例如， 上 面所述的 Walser 参考资料 )。方案 4
备选地， 可以由方案 4 中列出的方法 B， 生成式 IV 的吡唑衍生物。中间体 X 与 氨基 - 氯 - 吡唑衍生物 XIII 反应， 生成中间体 XIV。由 Taniguchi， T.， 等， Tetrahedron Letters， 39 ： 4679-4682(1998) 中所述的一般方法， 进行烯丙基从 XIV 中的去除， 其中中间 体 XIV 在氢化二异丁铝和镍催化剂存在下反应， 生成吡唑衍生物 IV。
由方案 5 和方案 6 中列出的方法制备氨基 - 氯 - 吡唑衍生物 XIII。
方案 5方案 6
方案 5 中， 乙基 -2- 氰基 -3- 乙氧基 -2- 丁烯酸酯与 2- 丙烯基 - 肼反应， 生成吡唑 中间体 XV。可以由可商购的材料， 通过美国专利 2,824,121 中所述的方法制备乙基 -2- 氰 基 -3- 乙氧基 -2- 丁烯酸酯。氨基酯 XV 通过重氮化并且在铜盐存在下与氯化物反应而转 化为相应的氯衍生物 XVI。该酯在碱性条件下水解， 提供吡唑酸中间体 XVII。酸 XVII 与氯 甲酸甲酯反应， 接着与叠氮化物反应， 生成中间体羰基叠氮化物吡唑 XVIII， 其通过加热， 接 着后处理， 提供氨基 - 氯 - 吡唑衍生物 XIII。备选地， 氨基 - 氯 - 吡唑衍生物 XIII 可以通 过烯丙基化硝基吡唑 XIX( 生成 XX)， 接着将硝基还原为氨基来制备 ( 方案 6)。 1 2
在 R 或 R 为可以进行进一步转化的官能团时， 可以得到 R1 和 R2 的另外取代。例
如， 在 R1 和 R2 为氟的情况下， 通过在碱存在下与醇或胺反应， 可以进行单取代。这些反应示 于方案 7、 8 和 9。
方案 7
该反应可以用来将化合物如 (2- 氨基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm) 转化为化合物如 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xa) 和 (2- 氨 基 -5- 氟 -4-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xi)。
方案 8 该反应可以用来将化合物如 5-(2- 氯苯基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并 -2- 酮 (Imm) 转化为化合物如 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， -2- 酮 (Ia) 和 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯 -2- 酮 (Ib)。二氮杂 并二氮杂
4- 苯并二氮杂
方案 9 该反应可以用来将化合物如 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二氟 -2H-1， 4- 苯 -2- 硫酮 (IImm) 转 化为 化合 物如 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -7- 氟 -8- 甲 -2- 硫 酮 (IIa)， 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -7- 氟 -8- 甲 -2- 硫 酮 (IIf)， 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -8- 乙 -2- 硫 酮 (IIg)，和 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 -2- 硫酮 (IIh)。并二氮杂氧 基 -2H-1， 4- 苯 并 二 氮 杂氧 基 乙 氧 基 -2H-1， 4- 苯 并 二 氮 杂 氧 基 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯 并 二 氮 杂
氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂在其中 R2 为甲氧基的实例中， 可以将中间体脱甲基化为相应的羟基衍生物， 然后 可以将其进一步烷基化。这示于方案 10 中。
方案 10 该 反 应 可 以 用 来 例 如 将 化 合 物 如 7- 溴 -5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -8- 甲 氧 -2- 酮 (Id) 转化为化合物如 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二 -2- 酮 (Ij)， 7- 溴 -5-(2- 氯苯 -2- 酮 (Inn)， 7- 溴 -5-(2- 氯苯 -2- 酮 (Ioo)， 和 -2- 酮 -2- 酮 (Ipp)。该反应还基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂基 )-1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂可以用来将式 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂(Ib) 的化合物转化为化合物如 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧 -2- 酮 (Ik)， 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2- 甲 -2- 酮 (Iv)， 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰 -2- 酮 (Irr) 和 -2- 酮 (Iss)。 -2- 酮 (Iqq)， 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 氧基乙基 ) 甲氨基 )- 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂 基 -1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂3- 二氢 -8-(1- 叔丁氧羰基 -4- 哌啶基 ) 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 8-(2- 氯乙氧基 )-5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
1通过本领域中已知的方法， 例如在美国专利 6,440,959 中所述的那些方法， 可以 6 1 将其中 R 为 CN 或 C(O)N(R )2 的式 IV 化合物转化为其中 R 为 COOH 或 COO 烷基的化合物。
对于其中 R3 为 H( 式 XXII 的化合物 ) 的那些式 IV 的化合物， 可以根据方案 11 中 列出的一般方法来制备所述的化合物。
方案 11在共同拥有的美国专利 6,440,959 中， 对于其中 R2 为 H 的实例， 预先描述了该方 法。硫代内酰胺 II 与二甲基甲酰胺二乙基乙缩醛反应， 制备中间体 XXI， 然后其用肼处理， 得到吡唑并苯并二氮杂
XXII。可以在下面的实施例 90 至 92 中发现此反应的具体实例。 取代表
式 XIV 的化合物是可以用作制备式 IV 的化合物中的中间体的新型化合物 ：
其中 R1 为烷基， 烷氧基， 卤素， COOH， COO 烷基， CN， C(O)N(R6)2 或 (OCH2CH2)nOCH3 ； R2 为烷基， 卤素， 被卤素取代的烷基， OH， 烷氧基， 被卤素取代的烷氧基， 苯基， 为任选被烷基或 C(O)OR6 取N(R6)2， (OCH2CH2)nOCH3， O(CH2)mNR7R8 或代的 6 元杂环 ；
或者 R1 和 R2 一起形成 5 元杂环 ；
R4 为氢， 卤素， CN， NO2， 烷基或烷氧基 ； 6
每个 R 独立地为氢或烷基 ；
R7 和 R8 各自独立地为氢， 烷基或烷氧基烷基 ； 或 R7 和 R8 与它们连接的氮原子一起形成任选被烷基取代的 6 元杂环 ；
每个 n 独立地为 1， 2或3； 以及
m 为 2， 3 或 4。在一个实施方案中， 本发明提供式 XIV 的化合物。在另一个实施方 案中， 本发明提供式 XIV 的下列具体化合物 ：
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3， 7- 二甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -5-(2- 甲氧基苯基 )-3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-8， 10- 二氢 -7- 甲基 -1， 3- 二氧戊环并 [4， 5-h] 吡唑并 [3， 4-b] 7- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 氟 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-8- 三氟甲基 - 吡 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 苯基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b] 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 -1-(2- 丙烯 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 -1-(2- 丙烯 以及 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯 本发明提供药物组合物， 其包含至少一种本发明的化合物， 例如式 IV 的化合物或23[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
4-b][1， 4] 苯并二氮杂
[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
4-b][1， 4] 苯并二氮杂
[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
[1， 4] 苯并二氮杂
[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
[1， 4] 苯并二氮杂
基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
CN 101899049 A说明书21/74 页其药用盐， 以及药用载体。
例如， 可以以片剂、 包衣片、 锭剂、 硬或软明胶胶囊、 溶液、 乳剂或混悬剂形式口服 给药本发明的药物组合物。 还可以例如以栓剂形式经直肠或例如以注射液形式非肠道给药 所述的组合物。
本发明的药物组合物包含一种或多种式 IV 的化合物和 / 或其药用盐。 可以按照本 领域中公知的方式、 例如通过常规混合、 包囊、 溶解、 制粒、 乳化、 包埋、 制锭或冻干工艺， 制 备这样的组合物。可以使用治疗上惰性的无机或有机载体配制这些药物组合物。乳糖、 玉 米淀粉或其衍生物、 滑石、 硬脂酸 (steric acid) 或其盐可以用作片剂、 包衣片、 锭剂和硬明 胶胶囊的这类载体。合适的软明胶胶囊载体包括植物油、 蜡和脂肪。根据活性物质的性质， 在软明胶胶囊的情况中一般不需要载体。 制备溶液和糖浆剂的适宜载体为水、 多元醇类、 蔗 糖、 转化糖和葡萄糖。 注射用的适宜载体为水、 醇类、 多元醇类、 甘油、 植物油、 磷脂类和表面 活性剂。用于栓剂的适宜载体为天然或硬化油、 蜡、 脂肪和半液体多元醇类。
药物组合物还可以含有防腐剂、 加溶剂、 稳定剂、 湿润剂、 乳化剂、 甜味剂、 着色剂、 调味剂、 用于改变渗透压的盐、 缓冲剂、 包衣剂或抗氧化剂。它们还可以含有其它治疗上有 价值的物质， 包括其它非通式 IV 的那些活性组分。
如上所述， 式 IV 的化合物及它们的药用盐， 以及含有这些化合物的组合物可以用 于治疗或控制细胞增殖疾病， 特别是肿瘤疾病。这些化合物和含有所述化合物的制剂可以 特别用于治疗或控制实体瘤， 诸如乳腺、 前列腺、 肺和结肠肿瘤。
式 IV 化合物的治疗有效量或剂量可以在宽限内改变， 并且将被调整在每种特定 的情况下的个体需要。一般来说， 在对体重约为 70kg 的成年人进行口服给药或非肠道给药 的情况下， 约 10mg 至约 10,000mg、 优选约 200mg 至约 1,000mg 的每日剂量应是合适的， 不 过， 必要时， 可以超过上限。可以将每日剂量作为单剂量或分剂量给药， 或对非肠道给药而 言， 可以将其作为连续输注给药。
下列实施例用来帮助理解本发明并且决不是用来限制其范围的。
实施例 ：
总则 ： 在下面的实施例中， 温度以℃表示。对于质谱数据， 给出的值是 MH+/Z 离子 形式， 其是在 Micromass Platform II 质谱仪测量的、 正模式电雾化中得到的。
在描述一个实施例是以类似于另一个实施例的方式进行的情况下， 全部条件与在 原始实施例中的规定的那些条件相同， 不同之处在于， 在一些情况下， 采用不同量的材料。 在提供不同量的原料的情况下， 以与在原始实施例中相对于该原料的相同比例的量使用在 此实施例中采用的其它成分。
制备氨基二苯甲酮中间体 X( 方案 3)
实施例 1 制备 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xa)于 -20 至 -30 ℃， 将 2.0g(0.0142 摩尔 ) 的 4- 氟 -3- 甲氧基 - 苯胺在 20mL 的二 氯甲烷中的溶液滴加至在 20mL 二氯甲烷中的 2.24g(0.0142 摩尔 ) 的二氯苯基硼烷中， 接 着加入在 10mL 二氯甲烷中的 3.59g(0.0355 摩尔 ) 的三乙胺。将混合物搅拌 30 分钟 ； 然 后， 加入在 30mL 的二氯甲烷中的 2.0g(0.0142 摩尔 ) 的 2- 氯苯甲醛。移除冷却浴， 并且将 混合物于室温搅拌 4 小时。在快速搅拌的条件下， 将 100mL 的冷水加入至反应混合物中， 接 着加入 150mL 的盐水。分离二氯甲烷层， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。将剩 余物 (4.5g， 为褐色油 ) 与 10mL 二乙醚和 30mL 的 2M 氢氧化钠一起于室温搅拌 1 小时。将 反应混合物用乙酸乙酯萃取， 并且将乙酸乙酯层用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓 1 2 4 缩， 得到 3.6g 的相应氨基醇 IXa(R ＝ F， R ＝ OCH3， R ＝ Cl)， 将其直接用于下一步骤。
将在上面反应中得到的氨基醇 (3.6g) 溶解于 60 的二氯甲烷， 并且与 6.09g(0.071 摩尔 ) 的二氧化锰一起搅拌。在 4 小时后， 将混合物过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 4.2g 粗 的酮 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xa)， 为褐色油。将粗酮由用乙 酸乙酯 - 己烷洗脱的硅胶色谱纯化， 得到 2.03g 的 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯 苯基 )- 甲酮 (Xa)。MH+/Z ＝ 280。
实施例 2
制备 (2- 氨基 -5- 溴 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xd)
(2- 氨基 -5- 溴 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xd) 是以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.086 摩尔的 4- 溴 -3- 甲氧基苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 340。
实施例 3
制备 (2- 氨基 -4， 5- 二甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xw)
(2- 氨基 -4， 5- 二甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xw) 是以类似于实施例 1 的方 式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.123 摩尔的 3， 4- 二甲基苯胺反应而制备的。
实施例 4
制备 (2- 氨基 -4， 5- 二甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xx)
(2- 氨基 -4， 5- 二甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xx) 是以类似于实施例 1 的方 式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0196 摩尔的 3， 4- 二甲氧基苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 292。
实施例 5
制备 (2- 氨基 -4- 氯 -5- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xy)
(2- 氨基 -4- 氯 -5- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xy) 是以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.019 摩尔的 3- 氯 -4- 甲氧基苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 296。
实施例 6
制备 (2- 氨基 -4- 甲氧基 -5- 甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xz)
(2- 氨基 -4- 甲氧基 -5- 甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xz) 是以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0226 摩尔的 3- 甲氧基 -4- 甲基苯胺反应而制备的。MH+/ Z ＝ 276。
实施例 7
制备 (2- 氨基 -4， 5- 二甲氧基苯基 )-(2- 甲氧基苯基 )- 甲酮 (Xaa)
(2- 氨基 -4， 5- 二甲氧基苯基 )-(2- 甲氧基苯基 )- 甲酮 (Xaa) 是以类似于实施 例 1 的方式， 通过使 2- 甲氧基苯甲醛与 0.0196 摩尔的 3， 4- 二甲氧基苯胺反应而制备的。 MH+/Z ＝ 288。
实施例 8
制备 (6- 氨基 -1， 3- 苯并二氧戊环 -5- 基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xbb)
(6- 氨基 -1， 3- 苯并二氧戊环 -5- 基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xbb) 是以类似于实施 例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.020 摩尔的 3， 4- 亚甲二氧基苯胺反应而制备的。 MH+/ Z ＝ 276。
实施例 9
制备 (2- 氨基 -5- 氯 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xcc)
(2- 氨基 -5- 氯 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xcc) 是以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.019 摩尔的 3- 甲氧基 -4- 氯苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝
296。
实施例 10 制备 (2- 氨基 -4- 氟 -5- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xdd)(2- 氨基 -4- 氟 -5- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xdd) 是以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0223 摩尔的 3- 氟 -4- 甲氧基苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 280。
实施例 11
制备 (2- 氨基 -5- 甲氧基 -4- 三氟甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xee)
(2- 氨基 -5- 甲氧基 -4- 三氟甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xee) 是以类似于实 施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0263 摩尔的 4- 甲氧基 -3- 三氟甲基苯胺反应而制 备的。MH+/Z ＝ 330。
实施例 12
制备 (2- 氨基 -5- 甲氧基 -4- 苯基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xff)
(2- 氨基 -5- 甲氧基 -4- 苯基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xff) 是以类似于实施 例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0226 摩尔的 4- 甲氧基 -3- 苯基苯胺反应而制备的。 MH+/Z ＝ 338。 实施例 13 制备 (2- 氨基 -5- 甲氧基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xgg)
(2- 氨基 -5- 甲氧基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xgg) 是 以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0296 摩尔的 4- 甲氧基 -3-(2- 甲氧基 乙氧基 ) 苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 336。
实施例 14
制备 (2- 氨基 -4- 氯 -5- 甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xhh)
(2- 氨基 -4- 氯 -5- 甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xhh) 是以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0318 摩尔的 3- 氯 -4- 甲基苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 280。
实施例 15
制备 (2- 氨基 -5- 甲氧基 -4-(1- 甲基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xii)
(2- 氨基 -5- 甲氧基 -4-(1- 甲基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xii) 是以 类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0252 摩尔的 3- 异丙氧基 -4- 甲氧基苯胺 反应而制备的。MH+/Z ＝ 320。
实施例 16
制备 (2- 氨基 -4- 甲氧基 -5-(1- 甲基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xjj)
(2- 氨基 -4- 甲氧基 -5-(1- 甲基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xjj) 是以 类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0267 摩尔的 4- 异丙氧基 -3- 甲氧基苯胺 反应而制备的。MH+/Z ＝ 320。
实施例 17
制备 (2- 氨基 -4- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xkk)
(2- 氨基 -4- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xkk) 是 以类似于实施例 1 的方式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.0242 摩尔的 3- 甲氧基 -4-(2- 甲氧基 乙氧基 ) 苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 336。
实施例 18
制备 (2- 氨基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm)
(2- 氨基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm) 是以类似于实施例 1 的方 式， 通过使 2- 氯苯甲醛与 0.30 摩尔的 3， 4- 二氟苯胺反应而制备的。MH+/Z ＝ 268。
实施例 19
由 (2- 氨基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm) 制备 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲 氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xa)
将 2.01g(0.0075 摩尔 ) 的 (2- 氨基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm)， 24mL 的甲醇和 2.08mL 的 25％甲醇钠溶液的溶液在惰性气氛下加热回流 80 分钟。 然后将混 合物冷却， 放入乙酸乙酯中， 并且用盐水洗涤两次。将乙酸乙酯萃取物用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩， 得到 2.04g 的氨基二苯甲酮 (benzopheneone)(2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲 氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xa)， 为结晶黄色固体。MH+/Z ＝ 280。
实施例 20
制备 (2- 氨基 -5- 氟 -4-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xi)
将 1.4g(0.035 摩尔 ) 的 60％氢化钠， 25mL 的二噁烷， 2.68g(0.01 摩尔 ) 的 (2- 氨 基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm) 和 2.23g(0.016 摩尔 ) 的 4- 吗啉丙醇的混 合物于室温搅拌 4 小时。将混合物通过加入 50mL 的水而猝灭。将混合物用乙酸乙酯萃取， 并且将萃取物用水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。将剩余物与己烷一起 研磨， 然后从己烷 - 乙酸乙酯中重结晶， 得到 2.55g 的 (2- 氨基 -5- 氟 -4-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xi)。MH+/Z ＝ 393。
由氨基二苯甲酮 X 制备内酰胺 I( 方案 3)
实施例 21 制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮(Id)
在 30 分钟内， 将 3.5mL(0.04 摩尔 ) 的溴乙酰溴在 3.5mL 的二氯甲烷中的溶液加 入至 11.8g(0.035 摩尔 ) 的 (2- 氨基 -5- 溴 -4- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xd)、
2.94mL 的吡啶和 350mL 的二氯甲烷的冷 (0℃ ) 溶液中。将混合物于室温搅拌另外 1 小时， 然后在水和二氯甲烷之间分配。 将二氯甲烷层用饱和硫酸铜溶液洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 16.5g 的 N- 溴乙酰苯胺 XId。
将上面得到的粗的 N- 溴乙酰苯胺 (XId)(16.5g， 0.0357 摩尔 ) 溶解于 250mL 的四 氢呋喃和 80mL 的甲醇中。将混合物冷却至 -78℃， 并且加入 35mL 的蒸馏氨。将混合物搅拌 1.5 小时 ； 然后， 移除冷却浴， 并且将混合物于室温搅拌另外的 2 小时， 在此期间， 使过量的 氨汽化。将混合物减压下浓缩， 并且将剩余物在乙酸乙酯和水之间分配。将乙酸乙酯层依 次用水， 然后用盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩， 提供 13.6g 粗的 N- 氨 基 - 酰苯胺 XIId。
将在上面反应中得到的粗 XIId 悬浮于 375mL 的乙醇中， 回流 24 小时， 然后冷却。 通过过滤收集产物， 得到 9.2g 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯 并二氮杂
-2- 酮 (Id)。MH+/Z ＝ 379。 实施例 22 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮(Ia)
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Ia)是以实施例 21 的方式， 通过使 0.125 摩尔的 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲氧基苯基 )(2- 氯苯 基 )- 甲酮 (Xa) 与溴乙酰溴反应而制备的。MH+/Z ＝ 319。
实施例 23 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯 -2- 酮 (Ii)并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮 杂 -2- 酮 (Ii) 是以实施例 21 的方式， 通过使 0.0062 摩尔的 (2- 氨基 -5- 氟 -4-(3-(4- 吗 啉基 ) 丙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xi) 与溴乙酰溴反应而制备的。MH+/Z ＝ 432。
实施例 24
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮(Iz)
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Iz)是以实施例 21 的方式， 通过使 0.13 摩尔的 (2- 氨基 -4- 甲氧基 -5- 甲基苯基 )-(2- 氯苯 基 )- 甲酮 (Xz) 与溴乙酰溴反应而制备的。
实施例 25
制备 5-(2- 氯苯基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Imm)
5-(2- 氯苯基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Imm) 是以实施例 21 的方式， 通过使 0.019 摩尔的 (2- 氨基 -4， 5- 二氟苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xmm) 与溴乙酰溴反应而制备的。MH+/Z ＝ 307。
内酰胺的转化 ( 方案 8)
实施例 26 5-(2- 氯苯基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Imm) 转化 -2- 酮 (Ia)为 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
采用微波加热， 在密封的反应容器中， 将 0.10g(0.00033 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯 -2- 酮 (Imm)， 2mL 的甲醇和 0.03g 的氢基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂化钠的混合物于 100℃加热 40 分钟。然后将混合物冷却， 用乙酸乙酯稀释， 并且依次用水， 然后用盐水洗涤。将混合物用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 0.103g 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 晶体。MH+/Z ＝ 319。
实施例 27
-2- 酮 (Ia)， 为白色5-(2- 氯苯基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Imm) 转化 -2- 酮 (Il)为 5-(2- 氯苯基 )-8-N， N- 二甲氨基 -1， 3- 二氢 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
采用微波加热， 将 0.9201g(0.003 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯基 )-7， 8- 二氟 -1， 3- 二 -2- 酮 (Imm) 和二甲胺在四氢呋喃中的 3mL 2.0M 溶液的混合物氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂于 150℃加热 30 分钟。将混合物冷却， 然后减压下浓缩。将剩余物与乙酸乙酯 - 己烷一起 研磨， 得到 0.63g 的 5-(2- 氯苯基 )-8-N， N- 二甲氨基 -1， 3- 二氢 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二 氮杂
-2- 酮 (Il)， 为黄色固体。MH+/Z ＝ 332。 内酰胺的转化 ( 方案 10)
实施例 28 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Id)转化为 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮 杂 -2- 酮 (Ij)
将 1.00g(0.0263 摩尔 ) 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， -2- 酮 (Id) 在 85mL 的 1， 2- 二氯乙烷中的溶液与 1.053g(0.0079 摩尔 )4- 苯并二氮杂的三氯化铝一起搅拌过夜。加入另外的 1.00g 的三氯化铝， 并且将混合物搅拌过夜， 此时间 之后， 将混合物倾倒入冰水中。将混合物用二氯甲烷 - 甲醇萃取， 并且将有机层用水洗涤两 次， 然后用无水硫酸钠干燥。 将溶液在减压下浓缩， 提供 0.700g 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ipp)(MH+/Z ＝ 465)， 其具有用于下一步 骤的足够纯度。
在氩气氛下， 来自上面步骤的 1.8281g(0.005 摩尔 ) 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ipp)、 0.636g 的碳酸钠， 0.9818g(0.006 摩 尔 ) 的 4-(3- 氯丙基 )- 吗啉和 50mL 的二甲基甲酰胺的混合物于 50℃搅拌 73 小时。然后 将混合物冷却， 并且在乙酸乙酯和饱和碳酸氢钠之间分配。 然后将水层用乙酸乙酯反萃取。 将乙酸乙酯层依次用饱和碳酸氢钠， 水， 盐水洗涤， 然后用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减 压下浓缩， 得到粗的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ij)。通过用乙酸乙酯 - 甲醇 (90 ∶ 10) 洗脱的硅胶色谱， 得到纯 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ij)(1.721g)。MH+/Z ＝ 492。
实施例 29
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ik)-2- 酮 (Ib)转化为 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二 氮杂
将 1.2g(0.0037 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， -2- 酮 (Ib， 实施例 30 中制备 ) 在 100mL 的 1， 2- 二氯乙烷中的溶液与4- 苯并二氮杂2.5g(0.0187 摩尔 ) 的三氯化铝一起于 42℃搅拌 8 小时， 之后加入另外的 2.5g 的三氯化铝。 将加热和搅拌继续另外的 48 小时， 此时间之后， 加入另外的 2.5g 的三氯化铝。 6 小时后， 将 混合物冷却， 然后倾倒在冰水上。将该水用二氯甲烷 - 甲醇 - 四氢呋喃 (80 ∶ 10 ∶ 10) 萃 取， 并且将萃取物用水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 1.6g 粗的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Iqq)。 由用乙 酸乙酯 - 甲醇 (90 ∶ 10) 洗脱的硅胶色谱纯化， 得到 1.17g 的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Iqq)(MH+/Z ＝ 312)， 其具有用于下一步 骤足够的纯度。
在 氩 气 氛 下， 将 0.322g(0.00103 摩 尔 ) 的 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Iqq)、 6mL 的二甲基甲酰胺， 0.132g(0.00124 摩尔 ) 的碳酸钠和 0.2028g(0.00124 摩尔 ) 的 4-(3- 氯丙基 )- 吗啉的混合物于 50℃搅拌 24 小时。然后将混合物冷却， 并且在乙酸乙酯和水之间分配。将水相用乙酸乙酯反萃取， 然后将乙酸乙酯萃取物用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。将剩余物由乙腈 - 甲 醇 (90 ∶ 10) 洗 脱 的 硅 胶 色 谱 纯 化， 提 供 0.199g 的 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 酮 (Ik)。MH+/Z ＝ 439。 -2- 酮 (Id) -2- 酮 (Ib)实施例 30 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂转化为 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂36-2- 酮 (Ib)CN 101899049 A说明书34/74 页是由 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Id)， 通过在钯催化剂 ( 四 ( 三苯膦 ) 钯 ) 存在下， 根据与由 Tschaen 等， Synthetic Communications， 24 ： 887-90(1994) 所述的那些条件类似的条件， 与氰化锌反应而制备的。在氩气氛下， 将 0.9491g(0.0025 摩尔 ) 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮 杂 -2- 酮 (Id)， 0.176g(0.0015 摩尔 ) 的氰化锌、 4mL 的二甲基甲酰胺和 0.289g(0.00025 摩尔 ) 的四 ( 三苯膦 ) 钯的混合物于 110℃加热 24 小时。然后将混合物冷却， 放入乙酸乙 酯中， 并且用 0.2M 碳酸钠溶液洗涤。将水相用乙酸乙酯反萃取， 并且将乙酸乙酯层用水洗 涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。 使剩余物经过用乙酸乙酯 - 己烷 (4 ∶ 1) 洗 脱的硅胶色谱， 得到 0.620g 的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯 并二氮杂
-2- 酮 (Ib)。MH+/Z ＝ 326。 实施例 31 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮(Inn) 转化为 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Im)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Inn)-2- 酮 (Im) 是以类似于实施例 30 的方式， 在四 ( 三苯膦 ) 钯存在下， 通过使 0.001 摩尔的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 与氰化锌反应而制备的。MH+/Z ＝ 370。
实施例 32
7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯 并二氮杂 -2- 酮 (Ioo) 转化为 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙 氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 酮 (In)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， -2- 酮 (In) 是以类似于实施例 30 的方式， 在四 ( 三苯膦 ) 钯存在下， -2- 酮 (Ioo) 与氰化锌反应而制备的。MH+/Z ＝ 414。374- 苯并二氮杂通过使 0.0017 摩尔的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧 基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂CN 101899049 A
说明书35/74 页实施例 33 由 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ipp) -2- 酮制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 (Inn)
向 0.300g(0.00082 摩 尔 ) 实 施 例 28 中 制 备 的 7- 溴 -5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 -2- 酮 (Ipp)、 60mL 的四氢呋喃、 0.070mL 的 2- 甲氧基氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂乙醇和 0.2586g 的三苯膦的搅拌混合物中， 加入 0.194mL(0.00099 摩尔 ) 的偶氮二羧酸二 异丙酯。将混合物搅拌过夜 ； 然后， 加入另外的 0.2586g 的三苯膦， 0.070mL 的 2- 甲氧基 乙醇和 0.194mL 的偶氮二羧酸二异丙酯。将混合物搅拌另外 1 小时， 然后减压下浓缩。使 剩余物经过二氯甲烷 - 甲醇 (98 ∶ 2) 洗脱的硅胶色谱， 得到 0.212g 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯 基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 酮 (Inn)。MH+/Z ＝ 423。 -2- 酮 (Ipp)实施例 34 由 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Ioo)制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并 二氮杂
7- 溴 -5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -8-(2-(2- 甲 氧 基 乙 氧 基 ) 乙 氧 基 )-2H-1， -2- 酮 (Ioo) 是 以 类 似 于 实 施 例 33 的 方 式， 通 过 使 0.00238 摩 尔 的 -2- 酮 (Ipp) 与 2-(2- 甲4- 苯 并 二 氮 杂7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 氧基乙氧基 ) 乙醇反应而制备的。MH+/Z ＝ 467。
实施例 35
由 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮(Iqq) 制备 8-(2- 氯乙氧基 )-5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Iss)
8-(2- 氯乙氧基 )-5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Iqq) 与 2- 氯乙醇反应而制备的。-2- 酮 (Iss) 是以类似于实施例 33 的方式， 通过使 0.0031 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二氢 -8- 羟基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 MH+/Z ＝ 374。
实施例 36
制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2- 甲氧基乙基 ) 甲氨基 )- 乙 氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 酮 (Iv)
在氩气氛下， 将 1.2g(0.0032 摩尔 ) 的 8-(2- 氯乙氧基 )-5-(2- 氯苯基 )-7- 氰 -2- 酮 (Iss， 实施例 35 中制备 )， 2.85g(0.032 摩尔 )基 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂的 2-((2- 甲氧基乙基 ) 甲氨基 ) 乙醇， 20mL 的四氢呋喃和 4.8g(0.032 摩尔 ) 的碘化钠的 混合物于 83℃的油浴中加热 20 小时。将混合物冷却， 然后在乙酸乙酯和 0.6M 碳酸氢钠溶 液之间分配。将乙酸乙酯层用盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。使剩 余物经过用乙腈 - 甲醇 (80 ∶ 20) 洗脱的硅胶色谱， 得到 0.233g 的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2- 甲氧基乙基 ) 甲氨基 )- 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂 (Iv)。MH+/Z ＝ 427。
实施例 37
-2- 酮制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2-(4- 甲基 -1- 哌嗪基 ) 乙氧 -2- 酮 (It)基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂
5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(2-((2-(4- 甲 基 -1- 哌 嗪 基 ) 乙 氧 -2- 酮 (It) 是以类似于实施例 36 的方式， 通过使 0.00414 摩39基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂CN 101899049 A说明书37/74 页尔的 8-(2- 氯乙氧基 )-5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 (Iss) 与 N- 甲基哌嗪反应而制备的。
由内酰胺 (I) 生成硫代内酰胺 (II)( 方案 1)
-2- 酮
实施例 38 制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IId)
将 2.0g(0.0053 摩尔 ) 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯 -2- 酮 (Id)， 200mL 的 1， 2- 二甲氧基乙烷和 2.13g(0.0053 摩尔 ) 的 Lawesson 试并二氮杂剂 (2， 4- 双 (4- 甲氧基苯基 )-2， 4- 二硫 -1， 3， 2， 4- 二噻二磷庚烷 (dithiadiphosphetane)) 的混合物于 85℃加热 1 小时， 然后冷却， 并且倾倒在冰冷却的碳酸氢钠溶液上。将混合物 用乙酸乙酯 - 甲醇 (9 ∶ 1) 萃取两次， 并且将有机层依次用水和盐水洗涤。将合并的萃取 物用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。剩余物与乙酸乙酯一起研磨， 提供 1.7g 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 Z ＝ 395。
实施例 39
-2- 硫酮 (IId)。MH+/制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIa)
5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -7- 氟 -8- 甲 氧 基 -2H-1， 4- 苯 并 二 氮 杂-2- 硫酮 (IIa) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.0284 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 MH+/Z ＝ 335。
实施例 40
-2- 酮 (Ia) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIb)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮(IIb) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.0019 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二 氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 ＝ 342。
-2- 酮 (Ib) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z实施例 41 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯 -2- 硫酮 (IIi)并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并 -2- 硫酮 (IIi) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.0053 摩尔的 5-(2- 氯苯 -2- 酮 ( 内酰二氮杂基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂胺 Ii) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 448。
实施例 42
制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯 并二氮杂
-2- 硫酮 (IIj)
7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIj) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.0011 摩尔的 7- 溴 -5-(2- 氯 -2- 酮 (Ij) 与苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 508。
实施例 43 制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， -2- 硫酮 (IIk)4- 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并 -2- 硫酮 (Ik) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.00057 摩尔的 5-(2- 氯苯 -2- 酮 (Ik)二氮杂基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 455。
实施例 44
制备 5-(2- 氯苯基 )-8-N， N- 二甲氨基 -1， 3- 二氢 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIl)
5-(2- 氯苯基 )-8-N， N- 二甲氨基 -1， 3- 二氢 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIl) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.006 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-8-N， N- 二甲 氨基 -1， 3- 二氢 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Il) 与 Lawesson 试剂反应而制备 的。MH+/Z ＝ 348。
实施例 45
制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIm)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Im) 与 Lawesson 试剂反-2- 硫酮 (IIm) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.00081 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 应而制备的。MH+/Z ＝ 386。
实施例 46
制 备 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(2-(2- 甲 氧 基 乙 氧 基 ) 乙 氧 基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 硫酮 (IIn)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， -2- 硫酮 (IIn) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.00089 摩尔的4- 苯并二氮杂 杂5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮 -2- 酮 ( 内酰胺 In) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 430。 实施例 47 制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2-(4- 甲基 -1- 哌嗪基 ) 乙氧 -2- 硫酮 (IIt)
基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂
5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(2-((2-(4- 甲 基 -1- 哌 嗪 基 ) 乙 氧 -2- 硫 酮 (IIt) 是 以 类 似 于 实 施 例 38 的 方 式， 通过使 -2- 酮 (It) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。基 ))-2H-1， 4- 苯 并 二 氮 杂 基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂
0.00069 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2-(4- 甲基 -1- 哌嗪基 ) 乙氧 实施例 48 制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2- 甲氧基乙基 ) 甲氨基 )- 乙 -2- 硫酮 (IIv)氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂
5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(2-((2- 甲 氧 基 乙 基 ) 甲 氨 基 )- 乙 氧 -2- 硫酮 (IIv) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.00052基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂摩 尔 的 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(2-((2- 甲 氧 基 乙 基 ) 甲 氨 基 )- 乙 氧 基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 酮 (Iv) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 443。
实施例 49
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮(IIw)
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIw)是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.0006 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二甲 基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 酮 (Iw) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 315。 -2- 硫实施例 50 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂酮 (IIz)
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮(IIz) 是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.0064 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲 氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 ＝ 331。
-2- 酮 (Iz) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z实施例 51 制 备 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -7， 8- 二 氟 -2H-1， 4- 苯 并 二 氮 杂 -2- 硫 酮(IImm)
5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IImm)是以类似于实施例 38 的方式， 通过使 0.003 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
-2- 酮 (Imm) 与 Lawesson 试剂反应而制备的。MH+/Z ＝ 332。硫代内酰胺的转化 ( 方案 9)
实施例 52 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIf)
将 1.0g(0.0031 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二氟 -2H-1， 4- 苯并二 -2- 硫酮 (IImm)， 0.372g 的氢化钠和 20mL 的 2- 甲氧基乙醇的混合物在微波容器中氮杂于 120℃加热 30 分钟， 冷却， 然后用乙酸乙酯稀释。将混合物依次用水和盐水洗涤， 用无水 硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。 将剩余物与乙酸乙酯一起研磨， 得到 0.74g 的 5-(2- 氯 苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 379。
-2- 硫酮 (IIf)， 为白色固体， 然后将其根据实施例 58 用来制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙 (IVf)， 而没有进一步纯化。MH+/Z ＝实施例 53 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 乙氧基 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIg)
将 0.5g(0.00155 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二氟 -2H-1， 4- 苯并 -2- 硫酮 (IImm)、 10mL 的乙醇和 0.62g 的 60％氢化钠的混合物加热回流 24 小时。二氮杂将混合物冷却， 用乙酸乙酯稀释， 并且依次用水， 然后用盐水洗涤。将乙酸乙酯萃取物用无 水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 0.52g 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 乙氧 基 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIg)， 为黄色固体。MH+/Z ＝ 349。
实施例 54
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIh)
将 1.0g(0.0031 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二氟 -2H-1， 4- 苯并二 -2- 硫酮 (IImm)， 10mL 的异丙醇和 0.62g 的 60％氢化钠的混合物加热回流 5 小时。氮杂将混合物冷却， 用乙酸乙酯稀释， 并且依次用水， 然后用盐水洗涤。将乙酸乙酯萃取物用无 水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 1.2g 的剩余物， 其与己烷和乙酸乙酯一起研 磨， 得到 0.76g 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二 氮杂
-2- 硫酮 (IIh)， 为白色固体。MH+/Z ＝ 363。 由硫代内酰胺 II 制备吡唑并苯并二氮杂 IV( 方案 2)
实施例 55 制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， (IVd)4] 苯并二氮杂
将 1.8g(0.00455 摩尔 ) 的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， -2- 硫酮 (IId)、 2.26mL 的 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺和 20mL 的二4- 苯并二氮杂甲基甲酰胺的混合物于室温搅拌 1.5 小时， 然后于 110℃搅拌 5 小时。 将混合物冷却， 并且减 压下浓缩。粗中间体 IIId 与 0.713mL 的无水肼， 9mL 的甲醇和 24mL 的二氯甲烷的溶液一起 搅拌 26 小时， 然后在乙酸乙酯和水之间分配。将乙酸乙酯层用水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。经过用乙酸乙酯洗脱的硅胶色谱， 得到 0.690g 的 7- 溴 -5-(2- 氯 苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVd)。从二氯甲烷中重结晶， 提供晶体 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 (IVd)， mp 210-211℃。MH+/Z ＝ 417。 实施例 56 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， (IVa)4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 (IVa) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0224 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， -2- 硫酮 (IIa) 与 1， 1- 二甲氧基 -N，并二氮杂3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 357。
实施例 57
制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] [1， 4] 苯并二氮杂
(IVb)5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 2- 二 氢 -8- 甲 氧 基 -3- 甲 基 - 吡 唑 并 [3， 4-b][1， (IVb) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0016 摩尔的 5-(2- 氯苯 -2- 硫酮 (IIb) 与 1， 1- 二甲4] 苯并二氮杂基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 364。
实施例 58
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVf)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVf) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0026 摩尔的 5-(2- 氯[1， 4] 苯并二氮杂苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIf) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 401。
实施例 59
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVg)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 (IVg) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0016 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， -2- 硫酮 (IIg) 与 1， 1- 二甲氧基 -N，并二氮杂3- 二氢 -8- 乙氧基 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 371。
实施例 60
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVh)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVh) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.00198 摩尔的 5-(2- 氯 -2- 硫酮 (IIh) 与 1，[1， 4] 苯并二氮杂苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(1- 甲基乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 385。
实施例 61
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡 唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVi)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡唑 (IVi) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0045 摩尔并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 ( 硫代内酰胺 IIi) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而 制备的。MH+/Z ＝ 470。
实施例 62
制备 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡 唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVj)
7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡唑 (IVj) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0011 摩尔并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂的 7- 溴 -5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIj) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/ Z ＝ 530。
实施例 63
制 备 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 2- 二 氢 -8-(3-(4- 吗 啉 基 ) 丙 氧 基 ))-3- 甲 基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVk)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-3- 甲基 - 吡唑 (IVk) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.00054 摩尔51并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(3-(4- 吗啉基 ) 丙氧基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂CN 101899049 A说明书49/74 页-2- 硫酮 ( 硫代内酰胺 IIk) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应 而制备的。MH+/Z ＝ 477。
实施例 64
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-N， N- 二甲氨基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVl)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8-N， N- 二甲氨基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVl) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.00187 摩尔的 5-(2- 氯 -2- 硫酮 (IIl) 与 1，[1， 4] 苯并二氮杂苯基 )-8-N， N- 二甲氨基 -1， 3- 二氢 -7- 氟 -2H-1， 4- 苯并二氮杂1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 370。
实施例 65
制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVm)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVm) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.00048 摩尔的 5-(2- 氯 -2- 硫酮 (IIm) 与 1，[1， 4] 苯并二氮杂苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基乙氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 408。
实施例 66
制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-3- 甲 基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVn)
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(2-(2- 甲氧基乙氧基 ) 乙氧基 )-3- 甲 (IVn) 是 以 类 似 于 实 施 例 55 的 方 式， 通过使基 - 吡 唑 并 [3， 4-b][1， 4] 苯 并 二 氮 杂 基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂0.00067 摩 尔 的 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二 氢 -8-(2-(2- 甲 氧 基 乙 氧 基 ) 乙 氧 -2- 硫酮 (IIn) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然 后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 452。
实施例 6753CN 101899049 A
说明书(IVt)51/74 页制 备 5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 2- 二 氢 -8-(2-(4- 甲 基 -1- 哌 嗪 基 ) 乙 氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(2-(4- 甲基 -1- 哌嗪基 ) 乙氧基 )-3- 甲 (IVt) 是 以 类 似 于 实 施 例 55 的 方 式， 通过使基 - 吡 唑 并 [3， 4-b][1， 4] 苯 并 二 氮 杂 基 ))-2H-1， 4- 苯并二氮杂0.00062 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2-(4- 甲基 -1- 哌嗪基 ) 乙氧 -2- 硫酮 (IIt) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 476。
实施例 68
制备 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 2- 二氢 -8-(2-((2- 甲氧基乙基 ) 甲氨基 )- 乙 氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVv)5-(2- 氯 苯 基 )-7- 氰 基 -1， 2- 二 氢 -8-(2-((2- 甲 氧 基 乙 基 ) 甲 氨 基 )- 乙 氧 基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (IVv) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0005 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰基 -1， 3- 二氢 -8-(2-((2- 甲氧基乙基 ) 甲氨
基 )- 乙氧基 )-2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 硫酮 (IIv) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 465。
实施例 69
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮 杂 (IVw)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIw) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二甲基 - 乙胺(IVw) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0005 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 337。
实施例 70
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVz)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二 (IVz) 是以类似于实施例 55 的方式， 通过使 0.0005 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二 -2- 硫酮 (IIz) 与 1， 1- 二甲氧基 -N， N- 二 IV( 方案 2)氮杂氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂
甲基 - 乙胺反应， 然后与肼反应而制备的。MH+/Z ＝ 353。 由内酰胺 I 制备吡唑并苯并二氮杂
实施例 71 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， (IVa)4] 苯并二氮杂
向 0 ℃ 的 3.0g(0.0094 摩 尔 ) 的 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 3- 二 氢 -7- 氟 -8- 甲 氧 -2- 酮 (Ia)， 11.8mL 的乙基二异丙胺、 4.62g 的 1， 2， 4- 三唑和基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂45mL 的四氢呋喃的混合物中， 加入 1.575mL 的磷酰氯。20 分钟之后， 移除冷却浴， 并且将混 合物于室温搅拌另外 60 分钟。 然后， 将 17mL4.37M 甲醇钠的甲醇溶液加入至反应混合物中。 搅拌 2 小时后， 加入另外的 5mL 甲醇钠溶液， 并且搅拌混合物过夜。然后将混合物在乙酸乙 酯和水之间分配。将乙酸乙酯层依次用水和盐水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压 下浓缩， 得到 3.2g 的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氟 -2， 8- 二甲氧基 -3H-1， 4- 苯并二氮杂 ( 中间 体 Va)， 其具有用于下一步骤中的足够纯度。
将 3.0g 上面制备的中间体 Va、 30mL 的二甲基甲酰胺和 13.2mL 的 1， 1- 二甲氧 基 -N， N- 二甲基 - 乙胺的混合物于 110℃加热 24 小时， 然后冷却。将混合物在减压下浓缩， 得到粗的中间体 VIa， 将其直接用于下一步骤。 将剩余物溶解于 48mL 的二氯甲烷和 15mL 的 甲醇中， 并且与 1.41mL 的无水肼反应 30 小时。将混合物在水和乙酸乙酯之间分配。将水 相用乙酸乙酯反萃取， 并且将乙酸乙酯层用水洗涤， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下 浓缩。使剩余物经过用乙酸乙酯 - 己烷 (8 ∶ 1) 洗脱的硅胶色谱， 得到 2.05g 的 5-(2- 氯 苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVa)。将该材料从己烷 - 二氯甲烷中结晶， 得到 IVa， 为黄色固体， mp 217-218℃。MH+/Z ＝ 357。 由氨基二苯甲酮 X 与吡唑 XIII 制备吡唑并苯并二氮杂 IV( 方案 4)。实施例 72 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂(IVw)
将 3.0g(0.0116 摩 尔 ) 的 (2- 氨 基 -4， 5- 二 甲 基 苯 基 )-(2- 氯 苯 基 )- 甲 酮 (Xw)、 2.0g(0.0116 摩尔 ) 的 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)， 2.21g(0.0116 摩尔 ) 的对甲苯磺酸一水合物和 40mL 的异丙醇的混合物在密封管中于 170℃加热 90 分钟。将混合物减压下浓缩， 并且将剩余物用乙酸乙酯稀释， 然后用饱和碳酸 氢钠溶液洗涤两次。将水相洗涤物用乙酸乙酯反萃取， 并且将合并的乙酸乙酯层用无水硫 酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。剩余物与己烷一起研磨， 得到中间体 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVw)， 为黄色固体。滤液由用乙酸乙酯 - 二氯甲烷 (1 ∶ 1) 洗脱的硅胶色谱纯化， 提供另外的 XIVw， 并且与上面得到的材料合并， 总产量为 2.7g 的 XIVw， 为黄色固体， 将其直接用于下一步骤。
向 -40 ℃ 的 2.7g(0.00716 摩 尔 ) 的 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 2- 二 氢 -3， 7， 8- 三 甲 (XIVw)、 0.155g(0.00029 摩尔 )基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂的 1， 3- 双 ( 二苯基膦基 ) 丙烷氯化镍 (II) 和 140mL 的无水四氢呋喃的溶液中加入 43mL 1M 的氢化二异丁基铝的甲苯溶液。将混合物于 0℃搅拌 6 小时， 然后通过小心地加入冰水 而猝灭。将混合物用乙酸乙酯萃取两次。将合并的乙酸乙酯萃取物用无水硫酸钠干燥， 过 滤， 并且减压下浓缩。剩余物由用乙酸乙酯 - 二氯甲烷 (1 ∶ 1) 洗脱的硅胶色谱纯化， 得到 1.5g 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7， 8- 三甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (IVw)， 为橙色固体。MH+/Z ＝ 337。
实施例 73
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVa)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 (IVa) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0014 摩尔的 (2- 氨基 -5- 氟 -4- 甲58二氮杂CN 101899049 A说明书56/74 页氧基苯基 )(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xa) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧 基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVa) 进行脱烷基化而 制备的。MH+/Z ＝ 357。
实施例 74
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVx)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 (IVx) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.00093 摩尔的 (2- 氨基 -4， 5- 二二氮杂甲氧基苯基 )(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xx) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡 唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧 基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVx) 进行脱烷基化而 制备的。MH+/Z ＝ 369。
实施例 75
制备 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVy)
8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 (IVy) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0012 摩尔的 (2- 氨基 -4- 氯 -5- 甲二氮杂氧基苯基 )(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xy) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧 基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVy) 进行脱烷基化而 制备的。MH+/Z ＝ 373。
实施例 76
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3， 7- 二甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (IVz)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3， 7- 二甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯 (IVz) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0012 摩尔的 (2- 氨基 -4- 甲并二氮杂氧 基 -5- 甲 基 苯 基 )-(2- 氯 苯 基 )- 甲 酮 (Xz) 与 4- 氨 基 -5- 氯 -3- 甲 基 -1-(2- 丙 烯 基 )-1H- 吡 唑 (XIII) 反 应， 随 后 用 氢 化 二 异 丁 基 铝 对 中 间 体 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 2- 二 氢 -8- 甲氧基 -3， 7- 二甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVz) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 353。
此外， 还从脱烷基化反应中分离出 0.4 ％的 1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 -8- 甲氧 基 -5- 苯基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVe)。MH+/Z ＝ 319。实施例 77 制备 1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -5-(2- 甲氧基苯基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVaa)[1， 4] 苯并二氮杂
1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧基 -5-(2- 甲氧基苯基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] (IVaa) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨基 -4，苯并二氮杂5- 二甲氧基苯基 )-(2- 甲氧基苯基 )- 甲酮 (Xaa) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙 烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 1， 2- 二氢 -7， 8- 二甲氧 基 -5-(2- 甲氧基苯基 )-3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVaa) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 365。
实施例 78
制备 5-(2- 氯苯基 )-8， 10- 二氢 -7- 甲基 -1， 3- 二氧戊环并 [4， 5-h] 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVbb)5-(2- 氯苯基 )-8， 10- 二氢 -7- 甲基 -1， 3- 二氧戊环并 [4， 5-h] 吡唑并 [3， 4-b] [1， 4] 苯并二氮杂 (IVbb) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (6- 氨 基 -1， 3- 苯 并 二 氧 戊 环 -5- 基 )-(2- 氯 苯 基 )- 甲 酮 (Xbb) 与 4- 氨 基 -5- 氯 -3- 甲 基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯 基 )-8， 10- 二氢 -7- 甲基 -1， 3- 二氧戊环 (dioxolo)-1-(2- 丙烯基 )-[4， 5-h] 吡唑并 [3，
4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(XIVbb) 进行脱烷基化制备的。MH+/Z ＝ 353。实施例 79 制备 7- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， (IVcc)4] 苯并二氮杂
7- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 (IVcc) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨基 -5- 氯 -4- 甲二氮杂氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xcc) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡 唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 7- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲 氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 化而制备的。MH+/Z ＝ 373。
实施例 80
(XIVcc) 进行脱烷基制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 氟 -7- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， (IVdd)4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 氟 -7- 甲氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂(IVdd) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨基 -4- 氟 -5- 甲氧基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xdd) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡 唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 氟 -7- 甲 氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVdd) 进行脱烷基 化而制备的。MH+/Z ＝ 357。
实施例 81
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 三氟甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVee)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 三氟甲基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVee) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨[1， 4] 苯并二氮杂基 -5- 甲 氧 基 -4- 三 氟 甲 基 苯 基 )-(2- 氯 苯 基 )- 甲 酮 (Xee) 与 4- 氨 基 -5- 氯 -3- 甲 基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯 基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-8- 三氟甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(XIVee) 进行脱烷基化制备的。MH+/Z ＝ 407。实施例 82 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 苯基 - 吡唑并 [3， 4-b] (IVff)[1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 苯基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] (IVff) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨基 -5- 甲苯并二氮杂氧基 -4- 苯基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xff) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯 基 )-1H- 吡 唑 (XIII) 反 应， 随 后 用 氢 化 二 异 丁 基 铝 对 中 间 体 5-(2- 氯 苯 基 )-1， 2- 二 氢 -7- 甲氧基 -3- 甲基 -8- 苯基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVff) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 415。
实施例 8362CN 101899049 A
说(IVgg)明书60/74 页制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3， (IVgg) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的4-b][1， 4] 苯并二氮杂(2- 氨基 -5- 甲氧基 -4-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xgg) 与 4- 氨 基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间 体 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡 唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(XIVgg) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 413。实施例 84 制备 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 (IVhh)二氮杂
8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂(IVhh) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨基 -4- 氯 -5- 甲基苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xhh) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 8- 氯 -5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -3， 7- 二甲 基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XIVhh) 进行脱烷基化而制备的。 MH+/Z ＝ 357。
实施例 85
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑 并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(IVii)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， (IVii) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨4-b][1， 4] 苯并二氮杂基 -5- 甲氧基 -4-(1- 甲基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xii) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲 基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯 基 )-1， 2- 二氢 -7- 甲氧基 -8-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b] [1， 4] 苯并二氮杂
(XIVii) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 397。实施例 86 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑 (IVjj)并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 - 吡唑并 [3， (IVjj) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0023 摩尔的 (2- 氨4-b][1， 4] 苯并二氮杂基 -4- 甲氧基 -5-(1- 甲基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xjj) 与 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲 基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间体 5-(2- 氯苯 基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7-(1- 甲基乙氧基 )-3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡唑并 [3， 4-b] [1， 4] 苯并二氮杂
(XIVjj) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 397。实施例 87 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 (IVkk)[3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 - 吡唑并 [3，4-b][1， 4] 苯并二氮杂(IVkk) 是以类似于实施例 72 的方式， 通过使 0.0014 摩尔的(2- 氨基 -4- 甲氧基 -5-(2- 甲氧基乙氧基 ) 苯基 )-(2- 氯苯基 )- 甲酮 (Xkk) 与 4- 氨 基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII) 反应， 随后用氢化二异丁基铝对中间 体 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲氧基乙氧基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )- 吡 唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂
(XIVkk) 进行脱烷基化而制备的。MH+/Z ＝ 413。实施例 88 制备 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)， 方法 1 ( 方案 5)步骤 1 ： 制备 5- 氨基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸乙酯 (XV)
向 10.3g(0.056 摩尔 ) 的 2- 氰基 -3- 乙氧基 -2- 丁烯酸乙酯在 250mL 甲醇中的 溶液中， 加入 8.9g(0.0616 摩尔 ) 的烯丙基肼二盐酸盐和 39mL 的三乙胺。将反应混合物于 80℃回流 3 小时， 然后减压下浓缩。将剩余物由用乙酸乙酯 - 己烷 (1 ∶ 1) 洗脱的硅胶色 谱纯化， 得到 6.7g 的 5- 氨基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸乙酯 (XV)， 为黄 色油。
步骤 2 ： 制备 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸乙酯 (XVI)
向 6.7g(0.032 摩尔 ) 的 5- 氨基 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸乙酯 (XV) 在 30mL 浓盐酸中的溶液中， 加入 8.6g(0.064 摩尔 ) 的氯化铜 (II)。将混合物冷却至 0℃， 并且在 20 分钟内， 分批地加入 2.65g(0.038 摩尔 ) 的亚硝酸钠。将混合物于室温搅拌 1 小时， 然后于 40℃搅拌 2 小时。将混合物用 50mL 水稀释， 并且用氯仿萃取两次。将氯仿 萃取物用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。将剩余物由用乙酸乙酯 - 己烷 (1 ∶ 4) 洗脱的硅胶色谱纯化， 得到 5.0g 的 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸乙酯 (XVI)， 为淡黄色油。
步骤 3 ： 制备 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸 (XVII)
向 5.0g(0.0249 摩尔 ) 的 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸乙酯 (XVI) 在 40mL 的四氢呋喃 - 水 - 甲醇 (3 ∶ 1 ∶ 1) 中的溶液中， 加入 5mL 10M 氢氧化钠溶 液。 将混合物于 65℃加热 4 小时， 然后在减压下浓缩至更小的体积。 通过加入盐酸， 将 pH 调 节至 1-2。 将产物通过过滤收集， 用水洗涤， 并且干燥， 得到 4.7g 的 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙 烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧酸 (XVII)， 为茶色固体。
步骤 4 ： 制备 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羰基叠氮化物 (XVIII)
向 -10℃的 6.0g(0.030 摩尔 ) 的 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羧 酸 (XVII)、 4.2mL(0.030 摩尔 ) 的三乙胺和 100mL 的丙酮的溶液中， 加入 2.9mL(0.030 摩尔 ) 的氯甲酸乙酯。30 分钟后， 加入在 50mL 水中的 5.8g(0.090 摩尔 ) 的叠氮化钠。将混合物 于室温搅拌 1 小时， 然后减压下浓缩至约原始体积的一半。将混合物用氯仿萃取两次， 并且 将萃取物用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且在减压下浓缩， 得到 4.7g5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙 烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羰基叠氮化物 (XVIII)， 为白色固体。
步骤 5 ： 制备 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)
将 12.3g(0.0545 摩尔 ) 的 5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 -4- 羰基叠 氮化物 (XVIII) 在 120mL 甲苯中的溶液于 100℃加热 1 小时。加入 20mL 的盐酸， 并且将混 合物于 110℃加热 2 小时， 然后冷却。 将混合物减压下浓缩， 然后与 50mL 的二氯甲烷和 10mL 的三乙胺一起于室温搅拌。将混合物过滤， 并且将滤液在减压下浓缩。将剩余物由用乙酸 乙酯 - 己烷 (1 ∶ 1) 洗脱的硅胶色谱纯化， 得到 6.0g 的 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙 烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)， 为橙色油。MS MH+/Z 172
该材料具有用于随后反应的足够的纯度。
实施例 89
制备 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)， 方法 2( 方案 6)
步骤 1 ： 制备 5- 氯 -3- 甲基 -4- 硝基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XX)
在氩气下， 向 5.0g(0.031 摩尔 ) 的 5- 氯 -3- 甲基 -4- 硝基 -1H- 吡唑在 100mL 的 无水四氢呋喃中的溶液中， 加入 0.37g(0.0464 摩尔 ) 的氢化锂。将混合物于室温搅拌 15 分钟。然后， 加入 5.6g(0.0464 摩尔 ) 的烯丙基溴， 并且将混合物于 80℃加热 10 小时。将 混合物冷却， 倾倒在冰上， 并且用乙酸乙酯萃取两次。 将合并的乙酸乙酯层用无水硫酸钠干 燥， 过滤， 并且减压下浓缩。 将剩余物由用乙酸乙酯 - 己烷 (1 ∶ 2) 洗脱的硅胶色谱纯化， 得 到作为高极性成分的 1.36g3- 氯 -5- 甲基 -4- 硝基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑， 为无色油， 和作为低极性成分的 0.5g5- 氯 -3- 甲基 -4- 硝基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XX)， 为无色 油。
步骤 2 ： 还原 XX， 生成 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)
将 0.5g(0.00248 摩 尔 ) 的 5- 氯 -3- 甲 基 -4- 硝 基 -1-(2- 丙 烯 基 )-1H- 吡 唑 (XX)、 1.6g(0.0198 摩尔 ) 的氯化铵、 1.6g 的锌粉、 20mL 的甲醇和 20mL 的水的混合物于室温 搅拌 1 小时。将混合物过滤， 并且将滤液用乙酸乙酯萃取。将乙酸乙酯层用无水硫酸钠干 燥， 过滤， 并且减压下浓缩。剩余物由用乙酸乙酯 - 己烷 (1 ∶ 1) 洗脱的硅胶色谱纯化， 得 到 0.10g 的 4- 氨基 -5- 氯 -3- 甲基 -1-(2- 丙烯基 )-1H- 吡唑 (XIII)， 其与在上面实施例 88( 方法 1) 中制备的材料相同。
实施例 90
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二 氮杂
(XXIIa)
向 0.64g(0.0019 摩尔 ) 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 -2H-1， -2- 硫酮 (IIa) 在 5mL 的二氯甲烷中的溶液中， 加入 5mL(0.029 摩尔 ) 的4- 苯并二氮杂1， 1- 二乙氧基 -N， N- 二甲基 - 甲胺。将混合物于室温搅拌过夜， 然后减压下浓缩。将含有 中间体 XXIa 的剩余物与 18mL 的二氯甲烷、 5.5mL 的甲醇和 0.3mL 的肼的混合物一起搅拌 6 小时， 然后在二氯甲烷和水之间分配。将二氯甲烷层用水洗涤两次， 用无水硫酸钠干燥， 过滤， 并且减压下浓缩。将产物由用乙酸乙酯 - 己烷 (4 ∶ 1) 洗脱的硅胶色谱纯化， 提供 0.500g 的 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氟 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 (XXIIa)。从二氯甲烷 - 乙酸乙酯中重结晶， 得到 XXIIa， 为淡红色固体， mp 242-243℃。
实施例 91 制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 (XXIIz)二氮杂
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮 -2- 硫酮 (IIz) 与 1， 1- 二乙氧基 -N， N- 二 为淡红色固体，杂(XXIIz) 是以类似于实施例 90 的方式， 通过使 0.003 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂甲基 - 甲胺反应， 然后与肼反应而制备的。从乙酸乙酯 - 甲醇中重结晶， 提供 5-(2- 氯苯 基 )-1， 2- 二氢 -8- 甲氧基 -7- 甲基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 mp 275-276℃。
实施例 92
制备 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氰基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并 二氮杂
(XXIIb)
5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氰基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂(XXIIb) 是以类似于上面的实施例的方式， 通过使 0.00096 摩尔的 5-(2- 氯苯基 )-7- 氰 基 -1， 3- 二氢 -8- 甲氧基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 -2- 硫酮 (IIb) 与 1， 1- 二乙氧基 -N， N- 二 (XXIIb)， 为淡红色固体， 甲基 - 甲胺反应， 然后与肼反应而制备的。从乙酸乙酯中重结晶， 提供 5-(2- 氯苯基 )-1， 2- 二氢 -7- 氰基 -8- 甲氧基 - 吡唑并 [3， 4-b][1， 4] 苯并二氮杂 mp 288-290℃。
实施例 93
片剂制剂
项 组分
1 化合物 1*
2 无水乳糖
3 交联羧甲基
纤维素钠
4 聚乙烯吡咯
烷酮 K30
5 103 6 525 83 6 5Mg/ 片 100 250 500 750 35 19 38 57 8 16 32 48 6 12 24 365硬脂酸镁 1 1 1 3 6 9 总重 120 120 150 300 600 900 * 化合物 1 表示本发明的一种化合物。 制备步骤 ： 在适宜的混合器中将第 1、 2 和 3 项混合 15 分钟。 用 20％聚乙烯吡咯烷酮 K30 溶液 ( 第 4 项 ) 对来自步骤 1 的粉末混合物制粒。 在 50℃下干燥来自步骤 2 的颗粒。 使来自步骤 3 的颗粒通过适宜的研磨设备。 将第 5 项加入到研磨的制粒步骤 4 中并混合 3 分钟。 在适宜的压片机上压制来自步骤 5 的颗粒。 实施例 94 胶囊剂 项组分 mg/ 胶囊 * 1 化合物 1 5 25 100 250 500 2 无水乳糖 159 123 148 --3 米淀粉 25 35 40 35 70 4 滑石 10 15 10 12 24 5 硬脂酸镁 1 2 2 3 6 总填充重量 200 200 300 300 600 * 化合物 1 表示本发明的化合物。 制备步骤 ： 在适宜的混合器中将第 1、 2 和 3 项混合 15 分钟。 加入第 4 和 5 项并混合 3 分钟。 填充入适宜的胶囊。 实施例 95注射液 / 乳剂制剂
项 组分 mg/mL *
1 化合物 1 1mg
2 FEG 400 10-50mg
3 卵磷脂 20-50mg
4 大豆油 1-5mg
5 甘油 8-12mg
6 水适量 1mL *
化合物 1 表示本发明的化合物。
制备步骤 ：
溶解第 1 项于第 2 项中。
将第 3、 4 和 5 项加入到第 6 项中并混合至分散， 然后匀化。
将来自步骤 1 的溶液加入到来自步骤 2 的混合物中， 并匀化至分散液变为半透明。
无菌过滤通过 0.2μm 滤膜并装入小瓶。
实施例 96
注射液 / 乳剂制剂
项 组分 mg/mL *
1 化合物 1 1mg
2 四氢呋喃聚乙二醇醚 10-50mg
3 卵磷脂 20-50mg
4 大豆油 1-5mg
5 甘油 8-12mg
6 水 适量至 1mL *
化合物 1 表示本发明的化合物。
制备步骤 ：
溶解第 1 项于第 2 项中。
将第 3、 4 和 5 项加入到第 6 项中并混合至分散， 然后匀化。
将来自步骤 1 的溶液加入到来自步骤 2 的混合物中， 并匀化至分散液变为半透明。
无菌过滤通过 0.2μm 滤膜并装入小瓶。
如下证明本发明化合物的抗血管源性活性和抗增殖活性。 这些效果表明感兴趣的 化合物在抑制血管生成并且在治疗癌症， 特别是实体瘤如乳腺和结肠癌方面是有用的。
实施例 97
CDK2Flash Plate 测定
为确定 CDK2 活性的抑制， 将纯化的重组成视网膜细胞瘤 (Rb) 蛋涂布在 96 孔 FlashPlate 培养板 (New England Nuclear， Boston， MA) 上。Rb 是由 CDK2 介导的磷酸化的 天然底物 (Herwig 和 Strauss Eur.Biochem.， 246 卷 (1997)581-601 页， 和该文引用的参考 文献 )。从昆虫细胞提取物中部分纯化重组活性人细胞周期蛋白 E/CDK2 复合物。将活性 细胞周期蛋白 E/CDK2 与 33P-ATP 和测试化合物的稀释物一起加入到 Rb 涂布的 FlashPlate 中。 室温摇动孵育该板 25 分钟， 然后洗涤， 并在 Topcount 闪烁计数器 (Packard InstrumentCo.， Downers Grove， IL) 中计数。测试化合物的稀释物在每个测定中一式两份进行检测。 依照下式， 确定 Rb 磷酸化的抑制百分比， 其为 CDK2 活性抑制的衡量标准 ：
其中， “实验化合物” 指的是重复实验的平均数 / 分钟， “非特异性数” 指的是当不 加入细胞周期蛋白 E/CDK2 时的平均数 / 分钟， “总数” 指的是当不加入化合物时的平均数 / 分钟。
本发明化合物的 CDK2IC50 值低于 10μM， 优选低于 1μM。 代表性化合物的 KDR IC50 值列于下面的表 I 中。
表I
CDK2 的抑制
化合物号R1R2R3R4IC50 (μM) 1.330 0.184 0.395 0.247IVa IVb IVf IVh
F CN F FOCH3 OCH3 OCH2CH2OCH3 OCH(CH3)2CH3 CH3 CH3 CH3Cl Cl Cl Cl实施例 98
KDR&FGFr
为 了 测 定 对 KDR 和 FGFR 的 抑 制 作 用， 使 用 HTRF(Homogeneous TimeResolved Fluorescence) 测定 法进行 激酶试验。该测定法 描 述在 A.J.Kolb 等， Drug Discovery Today， 1998， 3(7)， p 333 中。
在激酶反应前， 在活化缓冲液 (50mM HEPES， pH 7.4、 1mM DTT、 10 ％甘油、 150mM NaCl、 0.1mM EDTA、 26mM MgCl2 和 4mM ATP) 存在下活化重组 EEE- 标记的 KDR。 将该酶在 4℃ 温育 1 小时。
在 96- 孔聚丙烯平板 (Falcon) 中进行激酶活性试验， 其中各孔中总体积为 90μL。 各 孔 中 含 有 1μM KDR 底 物 ( 生 物 素 -EEEEYFELVAKKKK)、 1nM 活 化 的 KDR 和 100μM 至 128pM(1 ∶ 5 连续稀释 ) 范围内的 8 个试验浓度之一的测试化合物。在 100mM HEPES， pH 7.4、 1mM DTT、 0.1mMNa2VO4、 25mM MgCl2、 50mM NaCl( 来自 KDR 储备溶液 )、 1％ DMSO( 来自化 合物 )、 0.3mM ATP( 在 Km 浓度下 ) 和 0.02％ BSA 存在下， 进行激酶活性试验。将该反应体 系在 37℃下温育 30 分钟。为了终止 KDR 反应， 将 72μL 反应混合物转入含有 18μL 展开 缓冲液 (20mM EDTA、 50mMHEPES， pH 7.4、 0.02％ BSA、 10nM Eu- 标记的抗 -pY 抗体 ( 终浓度 2nM) 和 100nM 链霉抗生物素 ( 终浓度 20nM)) 的 STOP 平板中。混合后， 将 35μL 的溶液转入 384- 孔黑平板 (Costar) 的两个孔中， 并用 Wallac Victor 5 读出器在 615/665nm 处读 数。
如上述对 KDR 活性试验所述进行 FGFR 活性试验， 但有如下区别。 在室温， 于下列活 化缓冲液中将 GST- 标记的 FGFR 酶活化 1 小时 ： 100mMHEPES， pH 7.4、 50mM NaCl、 20mM MgCl2 和 4mM ATP。 在 100mMHEPES、 1mM DTT、 0.4mM MgCl2、 0.4mM MnCl2、 50mM NaCl、 1％ DMSO、 10μM ATP( 对 FGFR 而言 Km ＝ 8.5μM)、 0.1mM Na2VO4 和 0.02％ BSA 存在下， 使用 1μM 底物 ( 生物 素 -EEEEYFELV)、 1.5nM 活化的 FGFR 和测试化合物进行激酶活性试验， 总体积为 90μL。按 照与 KDR 试验相同的方式进行试验的其余部分。
根据一式两份的数据组确定化合物的 IC50 值， 并通过使用 Excel 和与等式 Y ＝ d [(a-b)/{1+(X/c) ]+b 的拟合数据进行计算， 其中 a 和 b 分别为在没有测试抑制剂化合物存 在和有极大量测试抑制剂化合物存在下的酶活性， c 为 IC50 且 d 为化合物响应的希尔常数。 IC50 值是在所述测试条件下将酶的活性降低 50％的测试化合物浓度。
本发明化合物的 KDR IC50 值低于 10μM， 优选低于 1μM， 最优选低于 0.5μM， 或 FGFR IC50 值低于 10μM， 优选低于 1μM。最优选地， 本发明化合物的 KDR IC50 值低于 1μM 和 FGFR IC50 值低于 1μM。代表化合物的 KDR IC50 值列于下面的表 II 中， 并且代表化合物 的 FGFR IC50 值列于下面的表 III 中。
表 II
KDR 的抑制
化合物号R1R2R3R4IC50 (μM) 0.010 0.022 0.031IVa IVc IViF C(O)NH2 FOCH3 OCH3 OCH2CH2 N(CH2CH2)2OCH3 CH3 CH3Cl Cl ClIVkk
OCH2CH2OCH3CH3Cl0.024表 III FGFR 的抑制化合物号 R1 R2 R3 R4 IC50 (μM) 0.028 0.032IVa IVcF C(O)NH2OCH3 OCH3CH3 CH3Cl Cl72CN 101899049 A说CN明书CH3 Cl 0.03370/74 页IVkOCH2CH2 N(CH2CH2)2OIVw
CH3CH3CH3Cl0.038实施例 99
MDA-MB-435， SW480 和 HCT-116
从 American Type Cell Culture Collection(ATOC ； Rockvilie， MD) 购买雌激素 受体阴性上皮乳腺癌系 (MDA-MB-435)， 并且在 ATCC 推荐的培养基中培养。 为了分析测试化 合物对这些细胞生长的影响， 将该细胞在 96 孔组织培养板上以每孔 2000 个细胞进行铺板， 然后在 37℃、 5％ CO2 下温育过夜。 第二天， 将测试化合物溶解于 100％二甲亚砜 (DMSO) 中， 制成 10mM 储备液。 将每种化合物用足够量的无菌培养基稀释至 1mM， 得到最终浓度 120μM。 然后将该化合物用 1.2％ DMSO 在培养基中连续稀释。将四分之一最终体积的稀释化合物 转移至 96 孔板上。重复检测该测试化合物。将 DMSO 加入到一排 “对照细胞” 中， 使每孔中 DMSO 的终浓度达到 0.3％。将没有加入细胞的孔作为 “空白” 。将没有加入抑制剂的孔作为 “无抑制剂对照” 。将该板再重新置于培养箱中， 加入测试化合物后 5 天， 如下进行分析。
将 3-(4， 5- 二甲基噻唑 -2- 基 )-2， 5- 二苯基 -2H- 四唑溴鎓 ( 噻唑兰 ； MTT) 加入 到每孔上， 得到最终浓度 1mg/mL。然后将该板在 37℃温育 3 小时。在将含 MTT 培养基吸 出前， 将该板在 1000rpm 下离心 5 分钟。然后取出含 MTT 培养基， 将 100μL 100％乙醇加 入到每孔中， 以溶解最终的甲 代谢物。为了保证完全溶解， 将该板在室温摇动 15 分钟。 570nm 下在微量滴定板读数器 (Molecular Dynamics) 上读出吸光度读数， 650nm 下读数作 为对照。通过所有孔的值减去空白孔 ( 没有细胞 ) 的吸光度， 然后用 1.00 减去每个测试化 合物重复测定的平均值与对照平均值的比值， 计算抑制百分比。对浓度的对数值 / 抑制百 分比曲线进行线性回归， 确定抑制浓度 (IC50)。
本发明化合物的 MDA-MB-435IC50 值低于 20μM， 优选低于 2μM。对于 5-(2- 氯苯 基 )-1， 3- 二氢 -7， 8- 二甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂 验中抑制的 IC50 值为 0.950μM。 还 从 ATCC 获 得 结 肠 腺 癌 系 SW480 和 结 肠 癌 系 HCT-116， 并且按照上述与 MDA-MB-435 细胞基检测相同的方案进行检测， 只是进行以下修改。细胞系 SW480 以每孔 1000 细胞进行铺板， 在加入测试化合物后第 6 天进行检测。细胞系 HCT-116 以每孔 1000 细 胞进行铺板， 在加入测试化合物后第 4 天进行分析。
本发明化合物的 SW480IC50 值低于 20μM， 优选低于 2μM。 对于 5-(2- 氯苯基 )-1，
-2- 酮 (Iw)， 在 MDA-MB-435 细胞基试3- 二氢 -7， 8- 二甲基 -2H-1， 4- 苯并二氮杂-2- 酮 (Iw)， 在 SW480( 结肠 ) 基试验中抑制的 IC50 值为 0.950μM。
本发明化合物的 HCT-116IC50 值低于 20μM， 优选低于 2μM。对于代表性化合物， 在 HCT-116( 结肠 ) 基试验中抑制的 IC50 值列于下面的表 IV 中。
表 IV
抗增殖活性 HCT 116( 结肠 ) 试验
73CN 101899049 A说R1 R2明书R3 R4 IC50 (μM)71/74 页化合物号IVgg IVkkOCH3 OCH2CH2OCH 3OCH2CH2OCH3 OCH3CH3 CH3Cl Cl0.197 0.509IVa IVf
F FOCH3 OCH2CH2OCH3CH3 CH3Cl Cl1.040 0.498实施例 100
VEGF 和 FGF- 刺激的 HUVBC 增殖试验
通过 BrdU 试验、 使用 BrdU 试剂盒 (Roche Biochemicals 1-647-229) 评价本发 明测试化合物在细胞基试验中的抗增殖活性。将人脐静脉内皮细胞 (HUVEC， Clonetics CC-2519) 在 EGM-2(Clonetics CC-3162) 培养基中培养， 并以 10000 个细胞 / 孔在 96- 孔平 底平板 (Costar 3595) 中体积为 200μL 的 EGM-2(Clonetics CC-3162) 培养基中接种过夜。 在 37℃和 5％ CO2 下培养 24 小时后， 通过抽吸缓慢除去温育培养基， 并用含有 50μg/mL 庆 大霉素和 50ng/mL 两性霉素 -B(Clonetics CC-4083) 的 300μL 预温热的 EBM-2(Clonetics CC-3156) 洗涤各孔中的内含物。随后再次抽吸剩余的培养基， 并用 160μL/ 孔缺血清的培 养基 ( 补充了 1 ％加热失活的 FBS(CloneticsCC-4102)、 50μg/mL 庆大霉素和 50ng/mL 两 性霉素 -B(Clonetics CC-4083)、 10 个单位 /mL Wyeth-Ayerst 肝素 (NDC0641-0391-25) 和 2mM L- 谷氨酰胺 (GIBCO 25030-081) 的 EBM-2) 替代。在对细胞进行缺血清 24 小时后， 将 20μL 在含有 2.5％ DMSO 的缺血清培养基中 10X 测试浓度的测试化合物加入到适宜的孔 中。对照孔含有 20μL 含有 2.5％ DMSO 的缺血清培养基。将平板放回培养箱内 2 小时。在 将细胞与测试化合物一起预温育 2 小时后， 加入在缺血清培养基中 10X 稀释的测试浓度的 20μL 生长因子、 50ng/mL 的 FGF 或 200ng/mL 的 VEGF(R&D systems 293-VE)。 本试验中 FGF 的终浓度为 5ng/mL， 且本试验中 VEGF 的终浓度为 20ng/mL。不含生长因子的对照孔中含有 20μL/ 孔的缺血清培养基和与含有生长因子的孔中相同量的 BSA。将平板再放回培养箱内 22 小时。
BrdU ELISA
在接触测试化合物 24 小时后， 通过加入已经在缺血清培养基中稀释 (1 ∶ 100) 的 20μL/ 孔的 BrdU 标记试剂而用 BrdU(Roche Biochemicals1-647-229) 标记细胞。然后将 平板放回到培养箱内 4 小时。通过在纸巾上吸干培养基除去标记培养基。通过将 200μL 固定 / 变性溶液加入到各孔中并在室温下温育 45 分钟而固定细胞并使 DNA 变性。在纸巾 上吸干固定 / 变性溶液并向各孔中加入 100μL 抗 -BrdU-POD， 并在室温下将各孔温育 2 小 时。除去抗体溶液并用 300μL PBS 将孔各自洗涤 3-4 次。向各孔中加入 100μLTMB 底物 溶液， 并将各孔在室温下温育 5-8 分钟。然后通过加入 100μL/ 孔的 1M 磷酸终止反应。在 450nm 处与 650nm 对照波长处读取平板。通过下列步骤计算各测试化合物的抑制百分比 ： 从所有孔中扣除空白 ( 不含细胞 ) 孔的吸光度， 然后用 1 减去一式两份的每次测试的平均吸光度与对照平均值的比值。随后将终产物乘以 100( 抑制％＝ (1- 一式两份测试的平均 吸光度 / 对照平均值 )100)。IC50 值为抑制 50％ BrdU 标记的测试化合物浓度且为抑制细 胞增殖的测定值。根据对浓度的对数与抑制百分比的曲线进行线性回归来确定 IC50。
本发明化合物的 VEGF- 刺激的 HUVEC 试验 IC50 值低于 10μM， 优选低于 1μM， 或 FGF- 刺激的 HUVEC 试验 IC50 值低于 10μM， 优选低于 1μM。更优选地， 本发明化合物的 VEGF- 刺激的 HUVEC 试验 IC50 值低于 1μM， 并且 FGF- 刺激的 HUVEC 试验 IC50 值低于 1μM。 代表性化合物在 VEGF- 刺激的 HUVEC 试验中的 IC50 值提供于表 V 中， 并且代表性化合物在 FGF- 刺激的 HUVEC 试验中的 IC50 值提供于下面的表 VI 中。
表V
抗增殖活性 VEGF- 刺激的 HUVEC 试验
化合物号R1R2R3R4IC50 (μM)IVa IVw IVyF CH3 OCH3OCH3 CH3 ClCH3 CH3 CH3Cl Cl Cl0.023 0.022 0.174IVz
CH3OCH3CH3Cl0.012表 VI 抗增殖活性 FGF- 刺激的 HUVEC 试验R1 R2 R3 R4 IC50 (μM) 0.100 0.005 ＜ 0.001 0.036化合物号IVa IVb IVc IVw
F CN C(O)NH2 CH3OCH3 OCH3 OCH3 CH3CH3 CH3 CH3 CH3Cl Cl Cl Cl实施例 101
H460a
从 (ATOC ； Rockvilie， MD) 购买 H460a 细胞系， 并且在 ATCC 推荐的培养基中培养。 为了分析测试化合物对这些细胞生长的影响， 将该细胞在 96 孔组织培养板上以每孔 150 个 细胞进行铺板， 然后在 37℃、 5％ CO2 下温育过夜。第二天， 将测试化合物溶解于 100％二甲 亚砜 (DMSO) 中， 制成 10mM 储备液。将每种化合物用足够量的无菌培养基稀释至 1mM， 得到最终浓度 120μM。然后将该化合物用 1.2％ DMSO 在培养基中连续稀释。将四分之一最终 体积的稀释化合物转移至 96 孔板上。重复检测该测试化合物。将 DMSO 加入到一排 “对照 细胞” 中， 使每孔中 DMSO 的终浓度达到 0.3％。将没有加入细胞的孔作为 “空白” 。将没有 加入抑制剂的孔作为 “无抑制剂对照” 。将该板再重新置于培养箱中， 加入测试化合物后第 5 天， 如下进行分析。
将 3-(4， 5- 二甲基噻唑 -2- 基 )-2， 5- 二苯基 -2H- 四唑鎓溴化物 ( 噻唑兰 ； MTT) 加入到每孔上， 得到最终浓度 1mg/mL。然后将该板在 37℃温育 3 小时。在将含 MTT 培养基 吸出前， 将该板在 1000rpm 下离心 5 分钟。然后取出含 MTT 培养基， 将 100μL 100％乙醇加 入到每孔中， 以溶解最终的甲 代谢物。为了保证完全溶解， 将该板在室温摇动 15 分钟。 在微量滴定板读数器 (Molecular Dynamics) 上读出 570nm 波长处的吸光度， 在 650nm 波长 处读数作为对照。通过从所有孔的值减去空白孔 ( 没有细胞 ) 的吸光度， 然后用 1.00 减去 每个测试化合物重复测定的平均值与对照平均值的比值， 得到抑制百分比。通过对浓度的 对数值 / 抑制百分比的曲线进行线性回归， 确定抑制浓度 (IC50)。
本发明化合物的 H460a IC50 值低于 20μM， 优选低于 2μM。对于代表性化合物， 在 H460a 基试验中抑制的 IC50 值列于表 VII 中。 在 H460a 试验中， 对于代表性化合物的 IC90 值 列于下面的表 VII 中。
表 VII
抗增殖活性 H460a 试验
化合物号R1R2R3R4IC90 (μM) 1.570 0.118IVa IVb
F CNOCH3 OCH3CH3 CH3Cl Cl如上所述， 本发明化合物具有抗血管源性活性， 因而可以用于抑制个体中的血管 生成。 血管生成与癌症相关。 具体而言， 肿瘤在没有新血管生长以供给和滋养它们的情况下 仅可以生长到一定的尺寸。 因此， 通过抑制这种新血管的生长， 本发明的化合物可以用于治 疗癌症。因此， 本发明提供一种抑制患者中血管生成的方法， 该方法包括给药治疗有效量， 即血管生成 - 抑制量的式 IV 的化合物。
除了它们的抗血管源性活性外， 本发明的化合物还是各种激酶如 CDK2、 KDR 和 FGFr 的抑制剂。这些激酶的抑制影响肿瘤细胞的增殖。因此， 本发明还提供通过直接抑制 激酶而抑制肿瘤生长的方法。
本发明提供用于治疗癌症的方法， 该方法包括给患有癌症的患者给药治疗有效量 的本发明化合物或其药用盐。 具体而言， 本发明提供用于治疗乳腺癌的方法， 该方法包括给 患有乳腺癌的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药用盐。 本发明还提供用于治疗前 列腺癌的方法， 该方法包括给患有前列腺癌的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药 用盐。本发明进一步提供用于治疗结肠癌的方法， 该方法包括给患有结肠癌的患者给药治 疗有效量的本发明化合物或其药用盐。本发明提供用于治疗肺癌的方法， 该方法包括给患有肺癌的患者给药治疗有效量的本发明化合物或其药用盐。
尽管参照具体和优选实施方案解释了本发明， 但是本领域技术人员应理解可以通 过常规实验和实施本发明进行改变和修改。 因此， 本发明并不限于上述描述， 而由后附权利 要求及其等同技术方案定义。77