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1、(10)申请公布号 CN 103330258 A (43)申请公布日 2013.10.02 CN 103330258 A *CN103330258A* (21)申请号 201310300068.7 (22)申请日 2013.07.17 A23L 2/38(2006.01) A23L 1/28(2006.01) A23L 1/29(2006.01) A01G 1/04(2006.01) (71)申请人 黄雄 地址 538000 广西壮族自治区防城港市蓝宝 石 B 栋 405 室 (72)发明人 黄雄 (74)专利代理机构 广西南宁汇博专利代理有限 公司 45114 代理人 朱萍球 (54) 发明。
2、名称 一种液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料及 其制备方法 (57) 摘要 本发明公开了一种液体深层发酵制备的蛹虫 草保健饮料及其制备方法。所述制备方法为 ： 将 蛹虫草菌依次经菌种活化、 摇瓶培养、 种子罐培 养、 发酵罐培养， 再经高温浸提有效成分、 杀死活 酶后， 得到发酵液， 最后经过过滤、 调配、 灭菌、 分 装等工序， 即得该保健饮料产品。 本发明公开的蛹 虫草保健饮料采用液体深层发酵技术制备， 其工 艺简单， 不受季节、 天气影响， 满足规模化周期性 生产要求， 生产周期短、 成本低 ； 产品品质优良、 质量稳定， 具有蛹虫草独有的浓郁香味和功效特 性， 市场前景非常广阔。 (51。
3、)Int.Cl. 权利要求书 2 页 说明书 8 页 (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书2页 说明书8页 (10)申请公布号 CN 103330258 A CN 103330258 A *CN103330258A* 1/2 页 2 1. 一种液体深层发酵制备蛹虫草保健饮料的方法， 其特征在于包括以下步骤 ： （1） 菌种活化 将蛹虫草菌种接种到试管母体培养基中， 于2325恒温培养箱中培养810天， 获 得活化的蛹虫草菌 ； 所述的蛹虫草菌种是采用生长正常、 健壮、 无病虫害的新鲜野生蛹虫草作为分离材料， 经消毒后切取得到的小菌块 ； 或是采用国内各名优食用。
4、菌研究所购进的蛹虫草菌种 ； 所述的母体培养基配制方法是 ： 称取马铃薯 200 克， 洗净、 切成小块后加蒸馏水， 沸水 煮 30 分钟， 取其煮汁以及葡萄糖 30 克、 玉米粉 20 克、 蛋白胨 3 克、 磷酸二氢钾 1.2 克、 硫酸 镁0.5克、 琼脂1820克、 维生素B125毫克， 加蒸馏水定容至1000毫升， pH自然， 121 高压灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用 ； （2） 一级摇瓶种子培养 将从活化的蛹虫草菌菌体上切取得到的菌块转接至装有一级摇瓶培养基的锥形瓶中， 静置培养 2 天， 然后置于摇床上， 于 23 25、 80 110 转 / 分钟震荡培。
5、养 4 5 天， 得到 一级摇瓶菌种液 ； 所述的一级摇瓶培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉7克、 蛋白胨 5 克、 酵母膏 5 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 维生素 B12 5 毫克， 加 蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 将配好的培养基分装于锥形瓶中， 装料量为锥形瓶容量 的1/52/5， 用棉塞和牛皮纸扎封瓶口， 于121高压灭菌2530分钟， 待温度降至30 以下后使用 ； （3） 二级摇瓶种子培养 将一级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中， 接种量为 10 20%， 接种 后置于摇床上， 于 。
6、23 25、 80 110 转 / 分钟震荡培养 4 5 天， 得到二级摇瓶菌种液 ； 所述的二级摇瓶培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉5克、 蛋白胨 2 克、 酵母膏 2 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 维生素 B12 5 毫克， 加 蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 将配好的培养基分装于锥形瓶中， 装料量为锥形瓶容量 的1/52/5， 用棉塞和牛皮纸扎封瓶口， 于121高压灭菌2530分钟， 待温度降至30 以下后使用 ； （4） 种子罐发酵培养 将二级摇瓶菌种液接种至装有种子罐发酵培养基的种子罐中， 接种量为。
7、 10 20%， 接 种后于 23 25、 罐压 39 50 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5: 1 的条件下发酵培养 3 4 天， 得到种子罐菌种液 ； 所述的种子罐发酵培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉7克、 蛋白 胨 2 克、 酵母膏 3 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 泡敌 0.2 0.5 克、 维 生素 B12 5 毫克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 置于种子罐内 121高压原位灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用 ； （5） 发酵罐发酵培养 将种子罐菌种液接种至装有发。
8、酵罐发酵培养基的发酵罐中， 接种量为 10 20%， 接种 后于2325、 罐压3950千帕、 通气量以V/V min比为0.5: 1的条件下发酵培养3 4 天， 最后终止发酵 ； 权 利 要 求 书 CN 103330258 A 2 2/2 页 3 所述的发酵罐发酵培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉5克、 蛋白 胨 2 克、 酵母膏 3 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.7 克、 泡敌 0.2 0.5 克、 维 生素 B12 5 毫克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 置于发酵罐内 121高压原位灭菌 25 30 分钟，。
9、 待温度降至 30以下后使用 ； （6） 发酵液的后期处理 发酵终止后， 将发酵液升温至 45 55， 保持 6 8 小时， 使菌丝自溶， 接着升温至 75， 保持 30 分钟， 使活酶失效 ； 然后采用过滤机过滤最终发酵液， 得滤液， 再经调配、 灭菌 机灭菌、 分装机分装后即得到成品饮料。 2. 根据权利要求 1 所述的液体深层发酵制备蛹虫草保健饮料的方法， 其特征在于， 所 述发酵终止指标为发酵液 pH 达到 4.0 5.5 及菌丝体干重达到 0.65 0.85%。 3.根据权利要求1或2所述的液体深层发酵制备蛹虫草保健饮料的方法， 其特征在于， 所述种子罐的培养基装料系数为 60 70。
10、%， 通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净 无菌的干燥气体。 4.根据权利要求1或2所述的液体深层发酵制备蛹虫草保健饮料的方法， 其特征在于， 所述发酵罐的培养基装料系数为 60 70%， 通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净 无菌的干燥气体。 5. 一种液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料， 其特征在于， 所述的蛹虫草保健饮料是 由权利要求 1 4 任一所述的蛹虫草保健饮料制备方法制备而得。 权 利 要 求 书 CN 103330258 A 3 1/8 页 4 一种液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料及其制备方法 技术领域 0001 本发明涉及一种食用菌保健饮料及其制备方法， 特别是涉及。
11、一种通过液体深层发 酵制备的蛹虫草保健饮料及其制备方法。 背景技术 0002 食用菌具有很高的营养价值。 食用菌的氨基酸组成全面， 利用率高， 在国际上被公 认是 “十分好的蛋白质来源” 。食用菌也是天然食品维生素的重要来源， 其中人体较易缺乏 的维生素 B 含量丰富， 比一般蔬菜高， 维生素 B2 含量比肉类和奶酪高， 能防止恶性贫血， 改 善神经功能并有效降低血脂。食用菌中矿物质含量是蔬菜的 2 倍， 高于牛羊肉。食用菌不 含淀粉， 脂肪含量少， 是糖尿病人和肥胖症患者的理想食品。食用菌还含有丰富的甾类、 三 萜类、 香豆精苷、 挥发油、 生物碱、 有机锗和多糖等药效成分， 对调节人体机能。
12、、 提高免疫力、 降低血压和胆固醇、 抗病抗肿瘤以及延缓衰老等具有显著的医疗保健功效。 0003 随着人们生活水平的提高、 保健意识的增强， 以食用菌为原料生产的保健产品越 来越受到人们的青睐。目前市场上的食用菌保健产品仍以子实体消费为主， 而其深加工产 品相对较少， 畅销的食用菌保健饮料更加少见。例如， 我国的银耳琼浆、 猴头露、 香菇茶、 灰 树花保健饮料， 所采用的生产方式都是以食用菌子实体干、 鲜品为原料， 经过浸汁或榨汁 后， 得到含有部分有效成分的汁液， 再经过稀释、 加入一些调味辅料， 最后制成食用菌保健 饮料。而这种传统的食用菌食品生产工艺存在工艺复杂、 生产成本高、 原料资源。
13、短缺等问 题， 无法适应规模化周期性生产。且这些饮料在市场上鲜有闻之。 0004 国内外大量文献显示， 多种食用菌菌丝体的营养物质、 功能性成分等于或高于子 实体。而实践证明， 采用液体深层发酵技术， 将获得的培养液及菌丝体进行深加工， 可生产 出蛹虫草、 灵芝、 金针菇等大多数食用菌保健饮料产品， 还可用于医药工业生产药品等， 并 适用于规模化工业大生产。 0005 例如， 中国专利 （201110291447.5） 公开了一种利用液体深层发酵技术生产杏鲍 菇、 灰树花、 蛹虫草、 茶薪菇、 灵芝、 香菇等食用菌保健功能性饮料的制备方法 ； 中国发明人 黄晓青同样公开了一系列关于食药用真菌液。
14、体深层发酵生产保健产品的方法。 但由于不同 的食用菌所需要的最佳培养发酵工艺、 条件不同， 上述方法针对性不强。 尤其是作为保健功 效不亚于冬虫夏草的蛹虫草， 若未能最大化析出主要活性成分虫草素， 便是一种浪费。 0006 蛹虫草， 又名蛹草， 民间俗称北虫草、 不老草。其含有丰富的氨基酸、 微量元素、 虫 草多糖及核苷类抗生素虫草素等， 具有滋肺补肾、 止血化痰、 扩张气管、 催眠镇静、 抗菌抗 病、 降血压等功效， 是冬虫夏草最理想的替代品。 蛹虫草的菌丝体和子实体的营养成分与份 量基本相同， 因此， 利用液体深层发酵技术， 生产出具有虫草特有风味、 营养保健型的蛹虫 草保健饮料具有广阔的。
15、市场前景。 发明内容 0007 本发明的目的在于提供一种液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料及其制备方法。 说 明 书 CN 103330258 A 4 2/8 页 5 本发明的制备方法工艺简单、 生产成本低， 能够满足规模化周期性生产的要求 ； 所制备出的 蛹虫草保健饮料营养丰富， 无需添加任何色素， 具有蛹虫草独有的浓郁香味和功效特性。 0008 为实现上述目的， 本发明所指的液体深层发酵制备蛹虫草保健饮料的方法包括以 下步骤 ： 0009 1. 菌种活化 0010 将蛹虫草菌种接种到试管母体培养基中， 于 23 25恒温培养箱中培养 8 10 天， 可长出白色的蛹虫草菌体。 0011 所述的。
16、蛹虫草菌种优选取生长正常、 健壮、 无病虫害的新鲜野生蛹虫草作为分离 材料， 经消毒后切取 1 2 块大小为 2mm3的菌块进行纯化培养 ； 也可以直接从国内各名优 食用菌研究所购进其蛹虫草菌种进行培养， 例如福建省三明真菌研究所、 中国农科院农业 菌种保藏中心、 上海农科院食用菌研究所、 桂林南方食用菌研究所等。 0012 所述的母体培养基配制方法是 ： 称取马铃薯 200 克， 洗净、 切成小块后加蒸馏水， 沸水煮 30 分钟， 取其煮汁以及葡萄糖 30 克、 玉米粉 20 克、 蛋白胨 3 克、 磷酸二氢钾 1.2 克、 硫酸镁 0.5 克、 琼脂 18 20 克、 维生素 B12 5 。
17、毫克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 121高压灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用。 0013 2. 一级摇瓶种子培养 0014 从活化的蛹虫草菌菌体上切取 1 2 块大小为 2cm2的薄菌块， 转接至装有一级摇 瓶培养基的锥形瓶中， 静置培养 2 天， 然后置于摇床上， 于 23 25、 80 110 转 / 分钟震 荡培养 4 5 天， 得到一级摇瓶菌种液。 0015 所述的一级摇瓶培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉7克、 蛋 白胨 5 克、 酵母膏 5 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 。
18、维生素 B12 5 毫 克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 将配好的培养基分装于锥形瓶中， 装料量为锥形瓶 容量的 1/5 2/5， 用棉塞和牛皮纸扎封瓶口， 于 121高压灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用。 0016 3. 二级摇瓶种子培养 0017 将一级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中， 接种量为 10 20%， 接种后置于摇床上， 于 23 25、 80 110 转 / 分钟震荡培养 4 5 天， 得到二级摇瓶菌 种液。 0018 所述的二级摇瓶培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉5克、 蛋 白胨 2 克、 酵。
19、母膏 2 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 维生素 B12 5 毫 克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 将配好的培养基分装于锥形瓶中， 装料量为锥形瓶 容量的 1/5 2/5， 用棉塞和牛皮纸扎封瓶口， 于 121高压灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用。 0019 4. 种子罐发酵培养 0020 将二级摇瓶菌种液接种至装有种子罐发酵培养基的种子罐中， 接种量为 10 20%， 接种后于 23 25、 罐压 39 50 千帕、 通气量以 V/V min 比为 0.5:1 的条件下发酵 培养 3 4 天， 得种子罐菌种液。 。
20、0021 所述的种子罐发酵培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖30克、 玉米粉20克、 淀粉7克、 蛋白胨 2 克、 酵母膏 3 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 泡敌 0.2 0.5 说 明 书 CN 103330258 A 5 3/8 页 6 克、 维生素 B12 5 毫克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 置于种子罐内 121高压原 位灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用。 0022 泡敌是采用最新合成工艺研制成功的一种新型蔗糖脂肪酸酯、 完全可以替代聚醚 的新型发酵专用消泡剂， 具有无毒高效、 耐高温、 抑泡时间长、 消。
21、泡速度快等优点， 广泛应用 于各类发酵工业。 0023 5. 发酵罐发酵培养 0024 将种子罐菌种液接种至装有发酵罐发酵培养基的发酵罐中， 接种量为 10 20%， 接种后于 23 25、 罐压 39 50 千帕、 通气量以 V/V min 比为 0.5:1 的条件下发酵培养 3 4 天， 最后终止发酵。 0025 所述的发酵罐罐发酵培养基配制方法是 ： 称取葡萄糖 30 克、 玉米粉 20 克、 淀粉 5 克、 蛋白胨 2 克、 酵母膏 3 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.7 克、 泡敌 0.2 0.5 克、 维生素 B12 5 毫克， 加蒸馏水定容至 100。
22、0 毫升， pH 自然， 置于发酵罐内 121高 压原位灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后使用。 0026 步骤 4、 5 所述的种子罐与发酵罐采用传统的食用菌发酵生产设备， 一般培养基装 料系数为 60 70%， 所通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。 0027 6. 发酵液的后期处理 0028 发酵终止后， 将发酵液升温至 45 55， 保持 6 8 小时， 使菌丝自溶， 充分释放 出菌丝细胞中的氨基酸、 虫草多糖等营养物质， 再继续将温度升至 75， 保持 30 分钟， 使活 酶失效， 保证营养液中的香味保持稳定 ； 然后采用过滤机过滤最终发酵液， 得。
23、滤液， 再经调 配、 灭菌机灭菌、 分装机分装后即得到成品饮料。 0029 所述发酵终止指标为发酵液pH达到4.05.5及菌丝体干重达到0.650.85%。 0030 在发酵培养过程中， 每隔12小时或24小时取样一次， 通过观察发酵液情况及测定 发酵液的 pH 值及菌丝体干重确定发酵终点。当发酵液 pH 达到 4.0 5.5、 菌丝体干重达到 0.65 0.85% 时， 表明发酵液的菌丝体达到最大值并趋于稳定， 确定为发酵终点， 此时的发 酵液呈深棕色且清澈透明， 还带有浓郁虫草香味， 口感微酸带甘甜味。其中， pH 值可采用甲 基红或复合指标剂通过颜色改变测定 ； 菌丝体干重可采用常规的离。
24、心法、 过滤法得到菌丝 体后， 烘干称重测定。 0031 根据上述方法可制得本发明所述的液体深层发酵制备的蛹虫草保健饮料。 0032 本发明的有益效果是 ： 0033 1. 本发明以野生的蛹虫草菌为菌种材料及采用液体深层发酵技术进行发酵培养， 从源头上保证了饮料的纯正， 所得代谢有效营养成分与原野生蛹虫草相同 ； 且整个生产工 艺简单， 不受季节、 天气影响， 能够满足规模化周期性生产要求。 0034 2. 本发明采用优化的发酵工艺与培养基配方， 蛹虫草菌的发酵更加充分与快速， 与现有技术比， 发酵生产周期更加短， 且产量大、 成本低 ； 在制备饮料的整个工艺过程中， 不 添加任何色素， 实行。
25、原味生产， 使该饮料保持有独特的浓郁虫草香味， 属天然饮料， 口感好。 0035 3. 本发明保健饮料营养丰富全面， 品质优良、 风味好。其除含有丰富的氨基酸、 微 量元素以及甾类、 萜类、 生物碱、 有机锗等功能性成分外， 还含有虫草素、 虫草酸、 虫草多糖 等蛹虫草特有营养成分， 具有提高机体免疫能力、 促进机体新陈代谢、 延缓衰老、 抗病等保 健作用， 是一种值得大力推广并拥有广阔市场前景的保健产品。 说 明 书 CN 103330258 A 6 4/8 页 7 具体实施方式 0036 以下是对本发明的进一步说明， 而不是对本发明的限制。 0037 实施例 1 ： 0038 （1） 菌种。
26、活化 0039 母体培养基的制备 ： 称取马铃薯 200 克， 洗净、 切成小块后加蒸馏水， 沸水煮 30 分 钟， 取其煮汁以及葡萄糖 30 克、 玉米粉 20 克、 蛋白胨 3 克、 磷酸二氢钾 1.2 克、 硫酸镁 0.5 克、 琼脂 18 20 克、 维生素 B12 5 毫克， 加蒸馏水定容至 1000 毫升， pH 自然， 121高压 灭菌 25 30 分钟， 取出分装于已灭菌的试管中， 斜放试管， 待温度降至 30以下后使用。 0040 选取生长正常、 健壮、 无病虫害的新鲜、 野生蛹虫草作为分离材料， 经消毒后切取 1 2 块大小为 2mm3的菌块转接到试管母体培养基中， 于 2。
27、3 25恒温培养箱中培养 10 天， 便见到白色蛹虫草菌体。 0041 （2） 一级摇瓶种子培养 0042 一级摇瓶培养基的制备 ： 分别称取葡萄糖 30 克、 玉米粉 20 克、 淀粉 7 克、 蛋白胨 5 克、 酵母膏 5 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 维生素 B12 5 毫克， 加蒸 馏水定容至1000毫升， pH自然， 将配好的培养基分装于500ml的锥形瓶中， 装料量为100 200ml， 用棉塞和牛皮纸扎封瓶口， 于 121高压灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后 使用。 0043 从活化的蛹虫草菌菌体上切取 1 2 块大小为 。
28、2cm2的薄菌块， 转接至装有一级摇 瓶培养基的锥形瓶中， 静置培养 2 天， 然后置于摇床上， 于 23 25、 80 转 / 分钟震荡培养 5 天， 得到含有大量菌丝体的一级摇瓶菌种液。 0044 （3） 二级摇瓶种子培养 0045 二级摇瓶培养基的制备 ： 分别称取葡萄糖 30 克、 玉米粉 20 克、 淀粉 5 克、 蛋白胨 2 克、 酵母膏 2 克、 磷酸二氢钾 1 克、 硫酸镁 0.5 克、 碳酸钙 0.5 克、 维生素 B12 5 毫克， 加蒸 馏水定容至1000毫升， pH自然， 将配好的培养基分装于500ml的锥形瓶中， 装料量为100 200ml， 用棉塞和牛皮纸扎封瓶口，。
29、 于 121高压灭菌 25 30 分钟， 待温度降至 30以下后 使用。 0046 将一级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中， 接种量为 14%， 接种后 置于摇床上， 于 23 25、 90 转 / 分钟震荡培养 5 天， 得到含有大量菌丝体的二级摇瓶菌 种液。 0047 （4） 种子罐发酵培养 0048 种子罐发酵培养基的制备 ： 分别称取葡萄糖 30 重量份、 玉米粉 20 重量份、 淀粉 7 重量份、 蛋白胨 2 重量份、 酵母膏 3 重量份、 磷酸二氢钾 1 重量份、 硫酸镁 0.5 重量份、 碳酸 钙 0.5 重量份、 泡敌 0.2 0.5 重量份、 维生素 B10.00。
30、2 0.005 重量份， 加蒸馏水定容至 1000 重量份， pH 自然， 置于种子罐内 121高压原位灭菌 25 30 分钟， 培养基装料系数为 65%， 待温度降至 30以下后使用。 0049 将二级摇瓶菌种液接种至装有种子罐发酵培养基的种子罐中， 接种量为 10%， 接种 后于 23 25、 罐压 45 千帕、 通气量以 V/V min 比为 0.5:1 的条件下发酵培养 4 天， 得到 含有大量菌丝体的种子罐菌种液。所通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净无菌的 说 明 书 CN 103330258 A 7 5/8 页 8 干燥气体。 0050 （5） 发酵罐发酵培养 0051 发。
31、酵罐罐发酵培养基的制备 ： 分别称取葡萄糖 30 重量份、 玉米粉 20 重量份、 淀粉 5重量份、 蛋白胨2重量份、 酵母膏3重量份、 磷酸二氢钾1重量份、 硫酸镁0.5重量份、 碳酸 钙 0.7 重量份、 泡敌 0.2 0.5 重量份、 维生素 B10.002 0.005 重量份， 加蒸馏水定容至 1000 重量份， pH 自然， 置于发酵罐内 121高压原位灭菌 25 30 分钟， 培养基装料系数为 65%， 待温度降至 30以下后使用。 0052 将种子罐菌种液接种至装有发酵罐发酵培养基的发酵罐中， 接种量为 15%， 接种后 于 23 25、 罐压 40 千帕、 通气量以 V/V m。
32、in 比为 0.5:1 的条件下发酵培养 3 天， 终止发 酵。所通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。 0053 （6） 发酵液的后期处理 0054 经发酵罐发酵培养 3 天后， 发酵液的 pH 值达 4.6 及菌丝体干重达 0.83%， 终止发 酵。接着将发酵液升温至 45， 保持 8 小时， 使菌丝自溶， 充分释放出菌丝细胞中的氨基酸 等营养物质， 再继续将温度升至 75， 保持 30 分钟， 使活酶失效， 保证营养液中的香味保持 稳定。 最后采用过滤机过滤最终发酵液， 得滤液， 再经调配、 灭菌机灭菌、 分装机分装后即得 到成品饮料。 0055 以下实施例的所有培养。
33、基配方、 制备方法与实施例 1 一致， 区别在于发酵工艺参 数的不同， 因此， 培养基配方、 制备方法不再累述。 0056 实施例 2 ： 0057 （1） 菌种活化 0058 选取生长正常、 健壮、 无病虫害的新鲜、 野生蛹虫草作为分离材料， 经消毒后切取 1 2 块大小为 2mm3的菌块转接到试管母体培养基中， 于 23 25恒温培养箱中培养 9 天， 便见到白色蛹虫草菌体。 0059 （2） 一级摇瓶种子培养 0060 从活化的蛹虫草菌菌体上切取 1 2 块大小为 2cm2的薄菌块， 转接至装有一级摇 瓶培养基的锥形瓶中， 静置培养 2 天， 然后置于摇床上， 于 23 25、 100 。
34、转 / 分钟震荡培 养 4 天， 得到含有大量菌丝体的一级摇瓶菌种液。 0061 （3） 二级摇瓶种子培养 0062 将一级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中， 接种量为 10%， 接种后 置于摇床上， 于 23 25、 100 转 / 分钟震荡培养 5 天， 得到含有大量菌丝体的二级摇瓶菌 种液。 0063 （4） 种子罐发酵培养 0064 将二级摇瓶菌种液接种至装有种子罐发酵培养基 （培养基装料系数为 70%） 的种子 罐中， 接种量为 20%， 接种后于 23 25、 罐压 39 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5:1 的 条件下发酵培养 3 天， 得到含有大量菌丝体。
35、的种子罐菌种液。所通入的气体为经过灭菌、 除 尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。 0065 （5） 发酵罐发酵培养 0066 将种子罐菌种液接种至装有发酵罐发酵培养基 （培养基装料系数为 70%） 的发酵罐 中， 接种量为 10%， 接种后于 23 25、 罐压 42 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5:1 的条 说 明 书 CN 103330258 A 8 6/8 页 9 件下发酵培养 4 天， 终止发酵。所通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净无菌的干燥 气体。 0067 （6） 发酵液的后期处理 0068 经发酵罐发酵培养 4 天后， 发酵液的 pH 值达 4.0 及菌丝体干。
36、重达 0.65%， 终止发 酵。接着将发酵罐升温至 50， 保持 7 小时， 使菌丝自溶， 充分释放出菌丝细胞中的氨基酸 等营养物质， 再继续将温度升至 75， 保持 30 分钟， 使活酶失效， 保证营养液中的香味保持 稳定。 最后采用过滤机过滤最终发酵液， 得滤液， 再经调配、 灭菌机灭菌、 分装机分装后即得 到成品饮料。 0069 实施例 3 ： 0070 （1） 菌种活化 0071 选取生长正常、 健壮、 无病虫害的新鲜、 野生蛹虫草作为分离材料， 经消毒后切取 1 2 块大小为 2mm3的菌块转接到试管母体培养基中， 于 23 25恒温培养箱中培养 8 天， 便见到白色蛹虫草菌体。 0。
37、072 （2） 一级摇瓶种子培养 0073 从活化的蛹虫草菌菌体上切取 1 2 块大小为 2cm2的薄菌块， 转接至装有一级摇 瓶培养基的锥形瓶中， 静置培养 2 天， 然后置于摇床上， 于 23 25、 110 转 / 分钟震荡培 养 4 天， 得到含有大量菌丝体的一级摇瓶菌种液。 0074 （3） 二级摇瓶种子培养 0075 将一级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中， 接种量为 17%， 接种后 置于摇床上， 于 23 25、 80 转 / 分钟震荡培养 5 天， 得到含有大量菌丝体的二级摇瓶菌 种液。 0076 （4） 种子罐发酵培养 0077 将二级摇瓶菌种液接种至装有种子罐。
38、发酵培养基 （培养基装料系数为 60%） 的种子 罐中， 接种量为 12%， 接种后于 23 25、 罐压 50 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5:1 的 条件下发酵培养 4 天， 得到含有大量菌丝体的种子罐菌种液。所通入的气体为经过灭菌、 除 尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。 0078 （5） 发酵罐发酵培养 0079 将种子罐菌种液接种至装有发酵罐发酵培养基 （培养基装料系数为 65%） 的发酵罐 中， 接种量为 20%， 接种后于 23 25、 罐压 50 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5:1 的条 件下发酵培养 3 天， 终止发酵。所通入的气体为经过灭菌、 除尘。
39、除水处理的洁净无菌的干燥 气体。 0080 （6） 发酵液的后期处理 0081 经发酵罐发酵培养 3 天后， 发酵液的 pH 值达 3.5 及菌丝体干重达 0.77%， 终止发 酵。接着将发酵罐升温至 55， 保持 6 小时， 使菌丝自溶， 充分释放出菌丝细胞中的氨基酸 等营养物质， 再继续将温度升至 75， 保持 30 分钟， 使活酶失效， 保证营养液中的香味保持 稳定。 最后采用过滤机过滤最终发酵液， 得滤液， 再经调配、 灭菌机灭菌、 分装机分装后即得 到成品饮料。 0082 实施例 4 ： 0083 （1） 菌种活化 说 明 书 CN 103330258 A 9 7/8 页 10 00。
40、84 将购于桂林南方食用菌研究所的野生蛹虫草菌种转接到试管母体培养基中， 于 23 25恒温培养箱中培养 9 天， 便见到白色蛹虫草菌体。 0085 （2） 一级摇瓶种子培养 0086 从活化的蛹虫草菌菌体上切取 1 2 块大小为 2cm2的薄菌块， 转接至装有一级摇 瓶培养基的锥形瓶中， 静置培养 2 天， 然后置于摇床上， 于 23 25、 90 转 / 分钟震荡培养 5 天， 得到含有大量菌丝体的一级摇瓶菌种液。 0087 （3） 二级摇瓶种子培养 0088 将一级摇瓶菌种液接种至装有二级摇瓶培养基的锥形瓶中， 接种量为 20%， 接种后 置于摇床上， 于 23 25、 110 转 / 。
41、分钟震荡培养 4 天， 得到含有大量菌丝体的二级摇瓶菌 种液。 0089 （4） 种子罐发酵培养 0090 将二级摇瓶菌种液接种至装有种子罐发酵培养基 （培养基装料系数为 65%） 的种子 罐中， 接种量为 15%， 接种后于 23 25、 罐压 45 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5:1 的 条件下发酵培养 3 天， 得到含有大量菌丝体的种子罐菌种液。所通入的气体为经过灭菌、 除 尘除水处理的洁净无菌的干燥气体。 0091 （5） 发酵罐发酵培养 0092 将种子罐菌种液接种至装有发酵罐发酵培养基 （培养基装料系数为 60%） 的发酵罐 中， 接种量为 12%， 接种后于 23 。
42、25、 罐压 39 千帕、 通气量以 V/Vmin 比为 0.5:1 的条 件下发酵培养 4 天， 终止发酵。所通入的气体为经过灭菌、 除尘除水处理的洁净无菌的干燥 气体。 0093 （6） 发酵液的后期处理 0094 经发酵罐发酵培养 4 天后， 发酵液的 pH 达 5.0 及菌丝体干重达到 0.85%， 终止发 酵。接着将发酵罐升温至 50， 保持 7 小时， 使菌丝自溶， 充分释放出菌丝细胞中的氨基酸 等营养物质， 再继续将温度升至 75， 保持 30 分钟， 使活酶失效， 保证营养液中的香味保持 稳定。 最后采用过滤机过滤最终发酵液， 得滤液， 再经调配、 灭菌机灭菌、 分装机分装后即。
43、得 到成品饮料。 0095 实施例 5 ： 本发明最终发酵滤液有效成分的测定 0096 对发酵中止后、 经高温浸提有效成分和杀死活酶后得到的最终发酵滤液进行检验 测定， 主要测定成分有主要起保健作用的虫草多糖、 腺苷、 氨基酸。 0097 虫草多糖按 中国药典 2010 年版一部的方法测定。 0098 腺苷按卫生部 保健食品检测与评价技术规定 2003 年版的方法测定。 0099 氨基酸按 GB/T5009.124-2003食品中氨基酸的测定 的方法测定。 0100 检测结果如下 ： 0101 表 1 蛹虫草保健饮料中虫草多糖、 腺苷、 氨基酸总量含量表 0102 检测项目虫草多糖 （g/10。
44、0ml）腺苷 （mg/100ml）氨基酸 （mg/100ml） 含量1.580.13191.2 说 明 书 CN 103330258 A 10 8/8 页 11 0103 其中氨基酸详细结果为 ： 0104 表 2 氨基酸含量表 0105 0106 本发明人通过大量实验， 优化出蛹虫草菌丝体发酵培养的最佳培养基配方和培养 条件， 整个生产工艺简单， 能够满足规模化工业生产 ； 所生产出的蛹虫草保健饮料含有丰富 的营养成分， 具有提高机体免疫能力、 促进机体新陈代谢、 延缓衰老、 抗病等保健作用， 还具 有独特的浓郁虫草香味， 属天然饮料， 口感好， 市场前景非常广阔。 说 明 书 CN 103330258 A 11 。