说明书一种具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，是一类如式(I)所示的由尿酸盐重吸收转运子1(URAT1)抑制剂和别嘌呤醇通过不同连接子拼合而成的孪药或其溶剂化物、药学上的盐或多晶型物，具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的作用。
背景技术
尿酸是黄嘌呤氧化的产物，血液尿酸水平升高可能缘于尿酸产生增加和/或尿酸的肾排泄减少。高尿酸血症的病因可能包括：肥胖/体重增加、酒精使用过量、饮食中过量摄入富含嘌呤食物、某些药物等。高尿酸血症可能无症状，但可能伴随以下病状：痛风、痛风性关节炎、尿路结石症、痛风石、尿酸肾病变、肾脏功能受损，可能导致慢性和急性肾衰竭。在过去二十年中，痛风的发病率日益增加，在美国，其侵袭多达2.7％的20岁以上的群体，总共超过510万美国成人。痛风在男性中比在女性中更为常见(3.8％或340万男性对1.6％或170万女性)，其通常侵袭40多岁和50多岁的男性。观察到在1990年至1999年期间，痛风的流行程度自每1000人2.9人增加到5.2人。痛风是关节炎的最常见形式之一，占所有关节炎病例的约5％。在大多数情况下，痛风与高尿酸血症有关。对于任一给定血浆尿酸盐浓度，患有痛风的个体比非痛风个体少排泄约40％的尿酸。痛风是最可治疗的关节炎形式之一。通过减少尿酸产生或增加尿酸排泄来治疗痛风，使血清尿酸水平降低到饱和水平以下是预防进一步痛风发作的目标。别嘌呤醇是次黄嘌呤的结构类似物，在临床已使用数十年，能抑制黄嘌呤氧化酶作用，进而抑制尿酸形成，使得血清和尿中的尿酸水平降低并在2至3个月后完全有效。排尿酸剂(例如，丙磺舒、磺吡酮和苯溴马隆)可增加尿酸排泄。丙磺舒可使肾小管的尿酸分泌增加，但长期使用可使体内的尿酸盐结石移动，据报道，25-50％的使用丙磺舒治疗的个体不能达到血清尿酸水平降低至<6mg/dL。由于药物耐受不良、伴随的水杨酸盐摄入和肾受损造成对丙磺舒不敏感；另外，排尿酸剂还导致尿路结石、胃肠阻塞、黄疸和贫血等副作用。目前，美国处于Ⅲ期临床试验的药物lesinurad能抑制OAT4及URAT1，具有促尿酸排泄的作用。在一系列药动学-药效学以及临床试验中证明，lesinuard对轻中度肾功能不全的痛风患者治疗有效，可被良好耐受，且能剂量相关性降低血浆中尿酸水平。将其与减少尿酸生成的药物如别嘌呤醇和非布索坦联用，会增加原本对上述药物应答不佳的痛风患者的应答率，可有效加速痛风患者的尿酸消除，且具有较高安全性。
本发明是在lesinuard的基础上通过不同连接子和别嘌呤醇拼合，组成系列新的化合物，当口服吸收进入血液后，在血浆蛋白酶的作用下，重新分解为等摩尔的lesinuard和别嘌呤醇，发挥抑制黄嘌呤氧化酶活性及抑制尿酸重吸收，具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的作用。该系列化合物可有效控制lesinuard和别嘌呤醇药物之间的比例，减少服药剂量和次数，单次服药可发挥联合用药的作用，同时可简化制剂工艺，节约生产成本；由于在两个化合物间有一个连接基团，因而口服吸收后，需要一定时间才能在酶的作用下水解为两个药物，这样的过程增加了化合物的体内半衰期，即通过化学偶联的方法使药物达到缓释的作用。
总之，lesinuard和别嘌呤醇联合用药对预防和治疗高尿酸血症或痛风的有效性已被临床应用和研究证实，本发明可为临床提供系列新的化合物具有重要意义。
发明内容
解决的技术问题：本发明提供一种具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的化合物及其制备方法和应用，该系列化合物可有效控制lesinuard和别嘌呤醇药物之间的比例，减少服药剂量和次数，单次服药可发挥联合用药的作用，同时可简化制剂工艺，节约生产成本；由于在两个化合物间有一个连接基团，因而口服吸收后，需要一定时间才能在酶的作用下水解为两个药物，这样的过程增加了化合物的体内半衰期，即通过化学偶联的方法使药物达到缓释的作用。
技术方案：一种具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的化合物，化合物结构通式如(I)所述：
其中：
R1基团选自：氢、卤素、腈基、硝基、羟基、羧基、取代或未取代的C1-8酰基、取代或未取代的氨基、取代或未取代的C1-8烷基、取代或未取代的C1-8烷氧基；
R2基团选自：氢、取代或未取代的C1-8烷氧基、取代或未取代的C1-8的直链或支链烷基及环烷基、芳香环、饱和杂环或芳香杂环；
R3、R4基团分别选自：氢、卤素、取代或未取代的C1-8烷基；
R5基团选自：氢、取代或未取代的C1-8的直链或支链烷基及环烷基、芳香环、饱和杂环或芳香杂环；
所述的取代是指被下列至少一个取代基所取代：C1-5烷基、C2-5烯基、C2-5炔基、C1-5烷氧基、卤素、硝基、氰基、羟基、氨基、羧基和氧。
所述具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的化合物，包括：
(1)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(2)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)-2-甲基丙酸甲酯、
(3)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(4)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(5)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-氨基-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(6)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-5-三氟甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(7)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-萘基-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(8)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-甲基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(9)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-乙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(10)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-甲氧基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯、
(11)1-(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸酯，或
(12)1-((2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酰氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酚钠盐。
所述具有治疗及预防高尿酸血症或痛风的化合物包含其共振式的化合物。
所述(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯的制备方法，步骤为：
a)1-(羟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮的制备：取250mL单颈瓶烘干，向其中加入原料别嘌呤醇5.0g，加入已经配制好的pH为7的2M的甲醛溶液250mL，室温过夜搅拌24小时，可见析出白色固体，过滤得到1-(羟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮；
b)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯的制备:取50mL圆底烧瓶烘干，向其中加入如式(1)所示化合物原料1.37g，溶解于15mL的DMF中，并向其中加入EDCI 0.84g及DMAP 0.46g搅拌反应半小时后，向混合体系中加入如式(3)所示结构中间体0.62g；室温过夜反应20小时，所得混合物萃取并干燥浓缩得到粗产品，柱层析得到白色固体产物即为目标产物。
所述化合物在制备治疗及预防高尿酸血症或痛风药物中的应用。
治疗及预防高尿酸血症或痛风药物，有效成分为上述化合物。
所述治疗及预防高尿酸血症或痛风药物，包括上述化合物的无机碱盐、有机碱盐、无机酸盐或有机酸盐。
所述治疗及预防高尿酸血症或痛风药物，包括上述化合物的钠盐、钾盐、钙盐、镁盐、碱性氨基酸盐、碱性含氮杂环盐、盐酸盐、硫酸盐、磷酸盐、硝酸盐、乙酸盐、富马酸盐、马来酸盐、苯甲酸盐、苯甲酸盐、枸橼酸盐、甲磺酸盐、对甲基苯磺酸盐、酒石酸盐、乳酸盐或酸性氨基酸盐。
表1 部分化合物的化学结构和质谱数据
本发明还涉及一种化合物及药学上可接受的载体。可以是固体形式或是液体形式，所述的药物剂型可以是片剂、胶囊、粉末剂、颗粒剂、混悬剂、或注射剂。当本发明化合物用于上述用途时，可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以用如下形式口服给药：片剂、丸剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5％悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50％糖)、和酏剂(含有约20-50％乙醇)，或以外用方式给药：软膏剂、凝胶、含药胶布等，或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5％悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约0.01-99％，更佳地约为0.1％-90％(重量)的活性成分。
这些活性化合物可通过口服以及瘤内、静脉内、肌内或皮下等途径给药。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。
这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。
适应于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、它们的适当混合物和植物油。
“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指代是组合物中各组份能和本发明的化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的疗效。药学上可接受的载体部分例子有糖(如葡萄糖、蔗糖、乳糖等)，淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉等)，纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)，明胶，滑石粉，固体润滑剂(如硬脂酸钠、硬脂酸镁)，硫酸钙，植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)，多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)，乳化剂(如吐温类)、润湿剂(如十二烷基磺酸钠)，着色剂，调味剂，稳定剂，抗氧化剂，防腐剂，无热原水等。
有益效果：该系列化合物可有效控制lesinuard和别嘌呤醇药物之间的比例，减少服药剂量和次数，单次服药可发挥联合用药的作用，同时可简化制剂工艺，节约生产成本；由于在两个化合物间有一个连接基团，因而口服吸收后，需要一定时间才能在酶的作用下水解为两个药物，这样的过程增加了化合物的体内半衰期，即通过化学偶联的方法使药物达到缓释的作用。
附图说明
图1是本发明的化合物的结构示意图。属于一类由尿酸盐重吸收转运子1抑制剂(URAT1)和别嘌呤醇(及共振式)通过不同连接子拼合而成的孪药或其溶剂化物、药学上的盐或多晶型物。
具体实施方式
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。实验所用的试剂均来自市场销售的分析纯试剂。
实施例1：表1中编号1的化合物的制备
(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯(4，表1中的化合物编号1)的制备：
a)1-(羟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮(3)的制备：
取250mL单颈瓶烘干，向其中加入原料别嘌呤醇(5.0g,36.7mmol)，加入已经配制好的pH为7的2M的甲醛溶液250mL。室温过夜搅拌24小时，可见析出白色固体，过滤得到1-(羟甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮3，6.0g，收率98％，MS(ESI)m/z:166.03(M+H+)，直接用于下一步反应。
b)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯(4)的制备:
取50mL圆底烧瓶烘干，向其中加入原料(1)(1.37g,3.38mmol)(参见美国专利公开案2009/0197825)，溶解于15mL的DMF中，并向其中加入EDCI(0.84g,3.74mmol)及DMAP(0.46g,3.74mmol)搅拌反应半小时后。向混合体系中加入中间体(3)(0.62g,3.74mmol)。室温过夜反应20小时。所得混合物萃取并干燥浓缩得到粗产品，柱层析得到白色固体产物(4)1.21g,收率65％。MS(ESI)m/z:552.01(M+H+,79Br)，554.04(M+H+,81Br)。
实施例2：表1中编号2的化合物的制备
(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)-2-甲基丙酸甲酯(5，表1中的化合物编号2)的制备：
a)2-(5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基硫基)-2-甲基丙酸乙酯(2)的制备：
取25mL圆底烧瓶烘干，将原料5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-l,2,4-三唑-3-硫醇(0.200g,0.578mmol)、2-溴-2-甲基丙酸乙酯(0.112g,0.578mmol)和二异丙基乙胺(0.224g，1.734mmol)溶解于DMF(5mL)中，加热至60℃并搅拌反应一天。反应结束，减压蒸干溶剂，并用乙醚溶解，用1M盐酸溶液洗涤萃取，水层用乙醚萃取三次，合并有机层，食盐水洗涤并用硫酸镁干燥，过滤，浓缩得到油状产物2-(5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基硫基)-2-甲基丙酸乙酯(2)251mg，收率94％，MS(ESI)m/z:460.01(M+H+,79Br)，462.04(M+H+,81Br)。该化合物将直接用于下一步的合成。
b)2-(5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基硫基)-2-甲基丙酸(3)的制备：
取25mL圆底烧瓶烘干，将氢氧化锂溶液(1M水溶液，1.64mL，1.64mmol)添加至2-(5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基硫基)-2-甲基丙酸乙酯(251mg，0.543mmol)的THF(5mL)和甲醇(2.5mL)的溶液中，室温搅拌反应5小时。浓缩反应混合物，并用(1M)HCl酸化并进行超声波处理以破碎固体。过滤得到白色固体2-(5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基硫基)-2-甲基丙酸189mg，收率80％。
c)(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)-2-甲基丙酸甲酯(5，表1中的化合物编号2)的制备：
参照实施例1化合物的制备方法，制得表1中编号2的化合物0.54g,收率63％。MS(ESI)m/z:580.07(M+H+,79Br)，582.11(M+H+,81Br)。
实施例3：表1中编号3的化合物的制备
表1中编号3的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯可以相应的原料2-((4-(4-环丙基萘-1- 基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率78％，MS(ESI)m/z:474.13(M+H+)。
实施例4：表1中编号4的化合物的制备
表1中编号4的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率75％，MS(ESI)m/z:488.16(M+H+)。
实施例5：表1中编号5的化合物的制备
表1中编号5的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-氨基-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((5-氨基-4-(4-环丙基萘-1-基)-5-甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率66％，MS(ESI)m/z:489.14(M+H+)。
实施例6：表1中编号6的化合物的制备
表1中编号6的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-5-三氟甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((4-(4-环丙基萘-1-基)-5-三氟甲基-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率72％，MS(ESI)m/z:542.13(M+H+)。
实施例7：表1中编号7的化合物的制备
表1中编号7的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-萘基-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((5-溴-4-(4-萘基-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率66％，MS(ESI)m/z:512.02(M+H+,79Br)，514.03(M+H+,81Br)。
实施例8：表1中编号8的化合物的制备
表1中编号8的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-甲基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((5-溴-4-(4-甲基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率83％，MS(ESI)m/z:526.11(M+H+,79Br)，528.07(M+H+,81Br)。
实施例9：表1中编号9的化合物的制备
表1中编号9的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-乙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((5-溴-4-(4-乙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率67％，MS(ESI)m/z:540.04(M+H+,79Br)，542.07(M+H+,81Br)。
实施例10：表1中编号10的化合物的制备
表1中编号10的化合物(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-甲氧基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯，可以相应的原料2-((5-溴-4-(4-甲氧基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸，参照实施例1化合物的一般方法制备得到。收率78％，MS(ESI)m/z:542.01(M+H+,79Br)，544.04(M+H+,81Br)。
实施例11：表1中编号11的化合物的制备
1-(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸酯(4，表1中的化合物编号11)的制备：
a)1-(1-羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮(3)的制备：
取250mL单颈瓶，向其中加入原料别嘌呤醇5g，加入已经配制好的pH为7的2M的乙醛溶液250mL。室温过夜搅拌24小时，可见析出白色固体，过滤得到1-(1-羟乙基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4(5H)-酮(3)，直接用于下一步反应。
b)1-(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)乙基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯(4)的制备:
取50mL圆底烧瓶烘干，向其中加入原料(1)(1.367g,3.38mmol)，溶解于15mL的DMF中，并向其中加入EDCI(0.84g,3.74mmol)及DMAP(0.46g,3.74mmol)搅拌反应半小时后。向混合体系中加入中间体(3)(0.67g,3.74mmol)。室温过夜反应20小时。所得混合物萃取并干燥浓缩得到出产品，柱层析得到产物(4)，收率67％，MS(ESI)m/z:566.03(M+H+,79Br)，568.01(M+H+,81Br)。
实施例12：表1中编号12的化合物的制备
1-((2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酰氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酚钠盐(2，表1中的化合物编号12)的制备：
在10摄氏度下，将氢氧化钠水溶液(1M,2.0mL,2.0mmol)滴加到10mL的(4-氧代-4,5-二氢-1-氢-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基)甲基-2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酸甲酯(1,1.1g,2.0mmol)，滴加完毕搅拌10分钟，浓缩得到1-((2-((5-溴-4-(4-环丙基萘-1-基)-4H-1,2,4-三唑-3-基)硫基)乙酰氧基)甲基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-4-酚钠盐(2),1.1g,收率98％，MS(ESI)m/z:550.01(M+H+,79Br)，552.02(M+H+,81Br)。
实施例13：胶囊组合物
用于给药本发明的口服剂型，通过使用下表I中所示的成分以所示比例填充到空胶囊中而制备得到。
表I
实施例14：可注射肠胃外组合物
用于给药本发明的注射液是通过将1.5％(重量百分比)的实施例1的化合物在10％(体积百分比)的丙二醇的水溶液中搅拌制备的。
实施例15：片剂组合物
将下表II中所示的蔗糖、硫酸钙二水合物和实施例1的化合物以所示比例混合并使用10％凝胶溶液制粒。将湿颗粒过筛，干燥，与淀粉、滑石和硬脂酸混合，过筛并压制成片剂。
表II
实施例16:对尿酸转运蛋白(URAT)1和有机离子转运蛋白(OAT)4的抑制
全基因合成全长人类URATl基因(SLC22A12)及OAT4基因(SLC22A9)并亚克隆至真核表达质粒pCMV6/Neo(英骏生物)中，用Lipo2000转染试剂将pCMV6/Neo/URATl及pCMV6/Neo/OAT4质粒转染人胚肾HEK293细胞，24h后，将经转染细胞分至10cm组织培养板中并生长1天后，用含有G418(Gibco公司，终浓度为0.5mg/mL)的新鲜生长培养基替换DMEM培养基进行筛选。约8天后挑选抗性克隆，以每孔75，000个细胞的密度铺板于涂覆聚-D-赖氨酸的96孔板。过夜培养后，用pH 7.3的洗涤缓冲液(125mM葡萄糖酸钠，10mM HEPES)冲洗，加入分析缓冲液(40μM 6-carboxylfluorescein，0～60μM尿酸，125mM葡萄糖酸钠，4.8mM葡萄糖酸钾，1.2mM磷酸二氢钾，1.2mM硫酸镁，1.3mM葡萄糖酸钙，5.6mM葡萄糖，25mM HEPES,pH 7.3)，室温孵育10分钟，细胞洗涤3次后破壁，离心取上清，测定荧光值。结果显示，化合物1抑制HEK293/hURAT1细胞对尿酸吸收的IC50值为1.2mM；抑制HEK293/hOAT4细胞对尿酸吸收的IC50值为7.3mM.
实施例17：动物实验
动物实验操作符合《实验动物管理条例》的要求。雄性SD大鼠，体重220±20克，适应性喂养7天后，予复制高尿酸血症模型，具体操作如下：次黄嘌呤灌胃，500mg/kg，2次/天；氧嗪酸钾皮下注射，200mg/kg，1次/天。6天后大鼠尾静脉取血，测尿酸值，将血尿酸升高的大鼠随机分为6组，每组6只，其中①组为化合物1低剂量组，予化合物4mg/kg，②组为化合物1中剂量组，予化合物12mg/kg，③组为化合物1高剂量组，予化合物24mg/kg，④组为别嘌醇组，予别嘌呤醇12mg/kg，⑤组为lesinurad组，予lesinurad 12mg/kg，⑥组为模型组，予等量生理盐水，以上各组均予灌胃给药1次。然后在给药后0、1、4、16、24小时，分别从大鼠尾静脉取血，测定尿酸、lesinurad、别嘌呤醇浓度；数据分析使用SPSS18.0统计软件包，p<0.05有统计学意义。结果显示，在给药8小时时，所有给药组(①～⑤组)尿酸水平与0小时比较差异显著(P<0.05)；①～⑤组与⑥组比较差异显著(P<0.05)；①组与④组比较无显著差异(P>0.05)，与⑤组比较差异显著(P<0.05)；②、③组与④、⑤组比较差异显著(P<0.05)。50％化合物分解为lesinurad和别嘌呤醇所需时间为2.5小时；lesinurad清除半衰期为14.2小时。
尽管前面示例性地说明了本发明的优选实施方案，但是应该理解本发明并不局限于本文所公开的明确说明，在此保留对其进行落入所附权利要求书范围内的各种改变的权利。