一种生产制备奥利司他的方法 技术领域 本发明属于医药技术领域， 涉及一种生产制备奥利司他的方法， 具体涉及一种提 取纯化奥利司他的新方法。
背景技术 奥利司他是长效和强效的特异性胃肠道脂肪酶抑制剂， 通过与胃和小肠腔内胃脂 肪酶和胰脂肪酶的活性丝氨酸部位形成共价键使酶失活而发挥治疗作用， 主要用于治疗和 预防与肥胖相关的病症。其化学名为 ： (S)-2- 甲酰氨基 -4- 甲基 - 戊酸酯 (S)-1-[[(2S， 3S)-3- 己基 -4- 氧 -2- 氧杂环丁烷基 ] 甲基 ]- 十二烷基酯， 结构式如下 ：
奥利司他可以通过全合成方法以及发酵法生产。 本专利涉及的奥利司他的生产方 法为发酵法生产， 是链霉菌属毒三素链霉菌经过发酵后产生的尼泊司他汀经氢化后的衍生 物。
随着时代的发展， 公众对药品质量的要求也越来越高。发酵法生产的奥利司他中 间体尼泊司他汀属于胞外胞内均有的脂溶性次级代谢产物， 而且代谢副产物又多， 本身给 产品的分离纯化带来了不小的困难。
中国专利 《一制胰菌素的提纯方法》 ( 公开号 ： CN1266058A) 公开的提纯方法为发 酵产生的尼泊司他汀用庚烷以及含水乙酸等强极性溶剂进行双流萃取， 对尼泊司他汀的纯 度要求高， 工艺路线比较复杂。
中国专利 《一种奥利司他的提纯方法》 ( 公开号 CN1763021A) 公开的提纯方法为先 用中极性溶剂溶解过滤、 除杂、 结晶奥利司他， 后用非极性溶剂奥利司他结晶， 不能有效地 去除与奥利司他结构类似的杂质， 得到高纯度的奥利司他产品。
美国专利 US4598089 提到通过发酵液预处理， 离心得到菌丝体， 甲醇 / 乙醇浸泡菌 丝体， 硅胶柱层析 ( 己烷∶甲醇∶水 ； 己烷∶乙酸乙酯体系 ) 其工艺繁琐， 柱层析条件不能 有效地去除杂质， 得到高品质的产品。
发明内容 本发明克服了现有技术工艺步骤复杂、 较难获得高纯度的奥利司他的缺陷， 通过 大孔吸附树脂去除极性大的杂质， 通过硅胶柱层析去除奥利司他结构类似的杂质， 提供了 可以将奥利司他制备成高纯度的医药产品并适用于工业化生产的方法。
本发明公开了一种纯化奥利司他的方法， 具体步骤包括 ：
1) 吸附树脂纯化 ： 奥利司他中间体尼泊司他汀发酵液， 用丙酮浸提， 浸提后过滤 菌体， 丙酮浸提液用 0.1um 钛棒过滤器过滤后， 用草酸调节 PH 至 3.0 ～ 4.5， 上大孔吸附树 脂吸附， 吸附量为 30 ～ 50 克 / 升树脂。吸附速率为 0.5 ～ 0.8 柱体积 / 小时， 吸附完后用 80％的丙酮溶液解析洗脱。洗脱速度 ： 0.8 ～ 1 柱体积 / 小时， 洗脱体积 ： 3 ～ 4 个柱体积， 直到 TLC 检测无尼泊司他汀析出为止。
2) 洗脱液的萃取、 氢化 ： 含有尼泊司他汀的洗脱液加水调节丙酮浓度至 50 ～ 65％， 后用庚烷萃取， 得到含有尼泊司他汀的庚烷萃取相。 尼泊司他汀庚烷萃取相浓缩后氢 化合成奥利司他 ；
3) 氢化后奥利司他的硅胶柱层析 ： 尼泊司他汀氢化得到奥利司他后， 过滤去除 钯碳催化剂， 后浓缩氢化液至奥利司他浓度到 10 ％左右， 上硅胶柱。硅胶柱高径比 ： 8～ 10 ∶ 1， 硅胶目数为 80 ～ 100 目， 上样量为 80 ～ 100 克 / 升， 流动相为庚烷∶乙酸乙酯＝ 4 ∶ 1。洗脱速度为 0.5 ～ 0.8 柱体积 / 小时。TLC 检测收集， 直到无奥利司他出现为止。
4) 浓缩、 结晶 ： 奥利司他收集硅胶柱层析液浓缩后庚烷溶解， 结晶， 30℃真空干燥 后， 得到单一杂质小于 0.1％， 含量在 99％以上的奥利司他产品。 步骤 1) 中用草酸调节发酵浸提液的 PH 至 3.0 ～ 4.5， 目的是更容易去除极性大的 部分杂质， PH 太大太小均达不到去杂的目的。
步骤 1) 中所用丙酮量为 1 ～ 2 倍发酵液体积， 太少给过滤带来困难， 同时收率变 低， 太大则容易带来更多的杂质， 优选丙酮量为 1.5 倍发酵液体积。
步骤 1) 中所用大孔吸附树脂型号为 HZ818 或 HZ820 型， 吸附树脂的尼泊司他汀的 吸附量为 30 ～ 50 克 / 升树脂。吸附尼泊司他汀的速率为 0.5 ～ 0.8 柱体积 / 小时， 太快 导致容易穿柱， 太慢则影响吸附量。 吸附完以后洗脱用的洗脱剂为 80％丙酮， 洗脱剂的流速 为 0.8 ～ 1 柱体积 / 小时， 洗脱相的用量为约 3 ～ 4 个柱体积。
步骤 2) 中树脂吸附洗脱液加水调节丙酮浓度优选 60％， 奥利司他硅胶柱层析所 用的硅胶目数为 80 ～ 100 目， 太细容易导致产品脱尾， 分离效果变差。上样量为 80 ～ 100 克奥利司他 / 升硅胶， 上样量太小溶剂使用量太大， 上样量太大则影响分离效果。
步骤 2) 中硅胶柱层析的流动相为庚烷∶乙酸乙酯＝ 4 ∶ 1， 洗脱速度为 0.5 ～ 0.8 柱体积 / 小时。洗脱速度控制太快导致分离困难， 太慢导致产品拖尾严重， 影响分离效率。
步骤 1)、 步骤 3) 中所述的 TLC 展开剂为庚烷∶乙酸乙酯＝ 6 ∶ 1。
本发明的有益效果在于通过大孔吸附树脂去除了奥利司他中间体中部分极性较 大的杂质， 通过硅胶柱层析， 去除与奥利司他结构类似的杂质， 本方法公开的奥利司他的纯 化方法比较容易得到高品质的奥利司他， 获得的产品含量高于 99％， 单一杂质低于 0.1％， 适合于工业化生产。
具体实施方式
下面通过一些实施例对本发明作一些说明。应理解这些实施例仅用于例证的目 的， 并不限制本发明的范围， 同时， 本领域技术人员对本发明作出的显而易见的改变和修饰 也包含在本发明范围之内。
实施例 1奥利司他中间体尼泊司他汀发酵液 100 升 ( 发酵单位 7 克 / 升 ) 加入 100 升丙酮， 搅拌浸提 1 小时后， 板框压滤， 得到 190 升丙酮浸提液， 用 0.1um 钛棒过滤器过滤， 过滤后用 草酸调节 PH 至 3.0， 20 升 HZ820 型大孔吸附树脂装柱经过预处理后吸附丙酮浸提液， 吸附 速度为 10 升 / 小时。吸附完毕后用 60 升 80％的丙酮溶液洗脱， 洗脱速度为 16 升 / 小时， TLC 检测收集含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。 洗脱完毕后得到 60 升含尼泊司他汀的丙酮洗脱 液。
60 升丙酮洗脱液加入 20 升水， 调节丙酮浓度约 60％， 加入 20 升庚烷萃取， 萃取 1 小时后， 静止分层， 含有尼泊司他汀的庚烷萃取相浓缩， 得到 1 公斤尼泊司他汀粗品， 其中 尼泊司他汀浓度为 60％。
1 公斤尼泊司他汀粗品加入 15 升庚烷和 40 克 5％钯碳， 25℃、 0.3MPa 氢化 10 小时 以后， 得到奥利司他。奥利司他氢化液过滤去除钯碳， 用旋转蒸发器浓缩氢化液至 6 升， 准 备上硅胶柱。
7 升 80 ～ 100 目硅胶经活化后湿法装柱， 柱高径比为 10 ∶ 1。装柱用庚烷平衡好 以后开始上柱。控制上柱速度为 3.5 升 / 小时。上柱结束以后用庚烷∶乙酸乙酯＝ 4 ∶ 1 流动相洗脱。控制洗脱速度为 4 升 / 小时， TLC 检测， 收集含有奥利司他的组分， 直至检测 不到奥利司他为止。结束后得到洗脱相 22 升。浓缩后得到 560 克奥利司他浓缩物， 奥利司 他含量为 89％， 最大杂质为 0.25％。
560 克奥利司他浓缩物加入庚烷 11 升， 结晶后抽滤， 得到类白色结晶， 最大杂质为 0.15％。再加入 11 升庚烷溶解后结晶， 抽滤后得到类白色结晶， 最大杂质为 0.09％。结晶 30℃真空干燥 30 小时后， 得到 420 克类白色产品。最大杂质为 0.09％， 产品含量为 99％。
实施例 2
尼泊司他汀发酵液 500 升 ( 发酵单位 7.2 克 / 升 ) 用 750 升丙酮搅拌浸提 1 小时 后， 板框压滤， 得到 1200 升丙酮浸提液， 之后用 0.1um 钛棒过滤器过滤， 过滤后用草酸调节 PH 至 4.0， 90 升 HZ820 型大孔吸附树脂装柱经过预处理后吸附丙酮浸提液， 吸附速度为 50 升 / 小时。吸附完后用 350 升 80％的丙酮溶液洗脱， 洗脱速度为 90 升 / 小时， TLC 检测收 集含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。洗脱后得到 350 升含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。
340 升丙酮洗脱液加入 118 升水， 调节丙酮浓度约 65 ％左右， 加入 120 升庚烷萃 取 1 小时， 静止分层， 庚烷萃取相浓缩得到 4.25 公斤尼泊司他汀粗品， 尼泊司他汀浓度为 65％。
4.25 公斤尼泊司他汀粗品加入 200 克 5％钯碳和 60 升庚烷， 25℃、 0.3MPa 氢化 10 小时以后， 过滤去除钯碳。旋转蒸发器浓缩氢化液至 30 升， 准备上硅胶柱。
30 升 80 ～ 100 目硅胶经活化后湿法装柱， 柱高径比为 9 ∶ 1。用庚烷平衡好以后 开始上柱， 上柱速度为 15 升 / 小时。上柱结束以后用庚烷∶乙酸乙酯 4 ∶ 1 流动相洗脱。 控制洗脱速度为 20 升 / 小时， TLC 检测， 收集含有奥利司他的组分， 直至检测不到奥利司 他为止。结束后得到洗脱相 95 升， 浓缩得到 2.5 公斤奥利司他粗品， 其中奥利司他含量为 88％， 最大杂质为 0.22％。
2.5 公斤奥利司他粗品加入庚烷 50 升， 结晶后抽滤， 得到类白色结晶， 最大杂质为 0.13％。再加入 50 升庚烷结晶， 抽滤后得白色结晶， 最大杂质为 0.07％。结晶 30℃真空干 燥 30 小时， 得到 1.76 公斤白色产品。最大杂质为 0.07％， 产品含量为 99.1％。实施例 3
尼泊司他汀发酵液 1000 升 ( 发酵单位 6.6 克 / 升 ) 加入 1400 升丙酮搅拌浸提 1 小时后， 压滤得到 2200 升丙酮浸提液， 用 0.1um 钛棒过滤器过滤， 过滤后用草酸调节 PH 至 4.5， 160 升 HZ818 型大孔吸附树脂装柱经过预处理后吸附丙酮浸提液， 速度为 80 升 / 小时， 吸附后用 640 升 80％的丙酮溶液洗脱， 洗脱速度为 160 升 / 小时， TLC 检测收集含尼泊司他 汀的丙酮洗脱液。洗脱完毕后得到 640 升含尼泊司他汀的丙酮洗脱液。
640 升丙酮洗脱液加入 210 升水， 调节丙酮浓度约 60％， 加入 220 升庚烷萃取 1 小 时后， 静止分层， 庚烷萃取相浓缩， 得到 8.95 公斤尼泊司他汀粗品， 其中尼泊司他汀浓度为 58％。
8.95 公斤尼泊司他汀粗品加入 130 升庚烷和 350 克 5％钯碳， 25℃、 0.3MPa 氢化 10 小时以后， 过滤去除钯碳。旋转蒸发器浓缩氢化液至 50 升， 准备上硅胶柱。
70 升 80 ～ 100 目硅胶经活化后湿法装柱， 柱高径比为 8 ∶ 1。用庚烷平衡好以后 开始上柱， 控制速度为 35 升 / 小时， 上柱结束以后用庚烷∶乙酸乙酯＝ 4 ∶ 1 流动相洗脱， 控制洗脱速度为 56 升 / 小时， TLC 检测， 收集含有奥利司他的组分， 直至检测不到奥利司他 为止。结束后得到洗脱相 220 升， 浓缩后得到 4.97 公斤奥利司他浓缩物， 奥利司他含量为 85％， 最大杂质为 0.28％。
4.97 公斤奥利司他浓缩物加入庚烷 90 升， 结晶后抽滤， 得到类白色结晶， 最大杂 质为 0.16％。 再加入 90 升庚烷结晶， 抽滤后得到类白色结晶， 最大杂质为 0.06％， 结晶 30℃ 真空干燥 30 小时， 得到 3.48 公斤类白色产品。最大杂质为 0.06％， 产品含量为 99.2％。6