作为MGLUR5调节剂的氨基1,2,4三唑衍生物.pdf

作为 MGLUR5 调节剂的氨基 1， 2， 4- 三唑衍生物
    发明领域 本发明涉及新的化合物、 其治疗用途和包含所述新化合物的药用组合物。
     发明背景
     谷氨酸是哺乳动物中枢神经系统 (CNS) 主要的兴奋性神经递质。谷氨酸通过与细 胞表面受体结合并由此激活受体而发挥作用。根据受体蛋白的结构特征、 受体将信号转导 入细胞内的途径和药理学曲线， 将这些受体分为两大类， 离子型和代谢型谷氨酸受体。
     代谢型谷氨酸受体 (mGluR) 是 G 蛋白偶联受体， 与谷氨酸结合后激活多种细胞 内第二信使系统。激活完整哺乳动物神经元中的 mGluR 引起一种或多种下列反应 ： 磷脂 酶 C 活化 ； 磷酸肌醇 (PI) 水解增加 ； 细胞内钙释放 ； 磷脂酶 D 活化 ； 腺苷酸环化酶的活化 或抑制 ； 环磷酸腺苷 (cAMP) 的形成增加或降低 ； 鸟苷酸环化酶活化 ； 环磷酸鸟苷 (cGMP) 的形成增加 ； 磷脂酶 A2 活化 ； 花生四烯酸释放增加 ； 和电压 - 和配体 - 门控离子通道的活 性 增 加 或 降 低。Schoepp 等， TrendsPharmacol.Sci.14 ： 13(1993)， Schoepp， Neurochem. Int.24 ： 439(1994)， Pin 等， Neuropharmacology 34 ： 1(1995)， Bordi and Ugolini， Prog. Neurobiol.59 ： 55(1999)。
     分 子 克 隆 已 鉴 定 8 种 不 同 的 mGluR 同 分 异 构 体， 称 为 mGluR1 至 mGluR8。 Nakanishi， Neuron 13 ： 1031(1994)， Pin 等， Neuropharmacology 34 ： 1(1995)， Knopfel 等， J.Med.Chem.38 ： 1417(1995)。 通过某些 mGluR 同分异构体选择性剪接形式的表达出现进一 步的受体多样性。Pin 等， PNAS 89 ： 10331(1992)， Minakami 等， BBRC199 ： 1136(1994)， Joly 等， J.Neurosci.15 ： 3970(1995)。
     根据氨基酸序列同源性、 受体所用第二信使系统及其药理学特征， 可将代谢型谷 氨酸受体同分异构体再分为 3 组， 组 I、 组 II 和组 III mGluR。组 I mGluR 包括 mGluR1、 mGluR5 及其选择性剪接变体。 这些受体与激动剂结合导致磷脂酶 C 活化和后续的细胞内钙 动员。
     神经、 精神和疼痛疾病
     对组 I mGluR 生理学作用的阐述提示这些受体的活化引起神经元兴奋。各种研 究已证明组 I mGluR 激动剂应用于海马、 大脑皮质、 小脑和丘脑及其它 CNS 区域后， 可产生 突触后兴奋作用。证据表明兴奋的原因是突触后 mGluR 的直接活化， 而且还提示发生突触 前 mGluR 的活化， 导致神经递质释放增加。Baskys， Trends Pharmacol.Sci.15 ： 92(1992)， Schoepp ， Neurochem.Int.24 ： 439(1994) ， Pin 等， Neuropharmacology 34 ： 1(1995) ， Watkins 等， Trends Pharmacol.Sci.15 ： 33(1994)。
     代 谢 型谷 氨酸受体 涉及哺 乳动物 CNS 中多 种正 常过 程。已 显示 诱发 海马 长 时 程 增 强 和 小 脑 长 时 程 抑 制 需 要 mGluR 的 活 化。Bashir 等， Nature 363 ： 347(1993)， Bortolotto 等， Nature 368 ： 740(1994)， Aiba 等， Cell 79 ： 365(1994)， Aiba 等， Cell 79 ： 377(1994)。 还已证明 mGluR 活化在伤害感受和痛觉缺失中的作用， Meller 等， Neuroreport 4： 879(1993)， Bordi 和 Ugolini， Brain Res.871 ： 223(1999)。 此 外， 已 提 示 mGluR 活 化 在各种其它正常过程中具有调节作用， 包括突触传递、 神经元发育、 凋亡性神经元死亡、 突
     触可塑性、 空间学习、 嗅觉记忆、 心搏的中枢控制、 行走、 运动控制和前庭眼球反射的控制。 Nakanishi， Neuron 13 ： 1031(1994)， Pin 等， Neuropharmacology 34 ： 1， Knopfel 等， J.Med. Chem.38 ： 1417(1995)。
     而且， 已提示组 I 代谢型谷氨酸受体特别是 mGluR5 在各种累及 CNS 的病理生理 学过程和疾病中发挥作用。这些疾病包括中风、 头部创伤、 缺氧缺血性损伤、 低血糖症、 癫痫、 神经变性疾病如阿尔茨海默病和疼痛。Schoepp 等， Trends Pharmacol.Sci.14 ： 13(1993)， Cunningham 等， Life Sci.54 ： 135(1994)， Hollman 等， Ann.Rev.Neurosci.17 ： 31(1994)， Pin 等， Neuropharmacology 34 ： 1(1995)， Knopfel 等， J.Med. Chem.38 ： 1417(1995)， Spooren 等， Trends Pharmacol.Sci.22 ： 331(2001)， Gasparini 等， Curr. Opin.Pharmacol.2 ： 43(2002)， Neugebauer Pain 98 ： 1(2002)。这些疾病中的多种病变被 认为是由于谷氨酸诱发 CNS 神经元的过度兴奋。因为组 I mGluR 显示通过突触后机制和增 强突触前谷氨酸释放增加谷氨酸介导的神经元兴奋， 所以它们的活化可能促使病变。 因此， 组 I mGluR 受体的选择性拮抗剂可能有治疗效益， 特别是作为神经保护剂、 镇痛剂或抗惊厥 剂。
     关于一般代谢型谷氨酸受体特别是组 I 神经生理学作用的最新研究已确定这些 受体有希望成为治疗急性和慢性神经和精神疾病以及慢性和急性疼痛疾病的药靶。 胃肠道疾病
     下食管括约肌 (LES) 容易间歇性松弛。因此， 既然机械屏障在此时暂时丧失， 胃内 液体可进入食管内， 该事件在下文称为 “反流” 。
     胃食管反流病 (GERD) 是最常见的上胃肠道疾病。现有药物疗法针对减少胃酸分 泌， 或者中和食管内的酸。反流的主要机制被认为取决于低张力的下食管括约肌。但是， 例 如 Holloway & Dent(1990)Gastroenterol.Clin.N.Amer.19， 517-535 页， 已显示大多数反 流发生在一过性下食管括约肌松弛 (TLESR) 时， 即松弛并非由吞咽触发。也已显示在 GERD 患者中胃酸分泌通常正常。
     假定本发明的新化合物可用于抑制一过性下食管括约肌松弛 (TLESR)， 由此治疗 胃食管反流病 (GERD)。
     众所周知某些化合物可对人的心脏复极产生不良作用， 表现为心电图 (ECG) 上 QT 间期延长。在极端环境下， 这种药物诱发的 QT 间期延长可导致称为 Torsades de Pointes 的心律失常类型 (TdP ； Vandenberg 等， hERG K+channels ： friend and foe(hERG K+ 通道 ： 朋 友和敌人 ).Trends Pharmacol Sci 2001 ； 22 ： 240-246)， 最终导致心室颤动和猝死。该综 合征的主要事件是这些化合物抑制延迟整流钾电流 (IKr) 的快速部份。化合物与通道蛋白 的成孔 α 亚单位结合， 所述通道蛋白携带由人 ether-a-go-go- 相关基因 (hERG) 编码的这 种电流 - 亚单位。因为 IKr 在心脏动作电位的复极中发挥主要作用， 所以其抑制减慢复极， 表现为 QT 间期延长。虽然 QT 间期延长本身没有安全问题， 但其具有心血管不良作用的危 险， 在小部分人中它可导致 TdP 并恶化为心室颤动。
     总体而言， 本发明的化合物抗 hERG- 编码钾通道的活性低。 在这方面， 体外抗 hERG 的低活性提示体内低活性。
     为了增强药物功效， 还需要药物具备良好的代谢稳定性。体外抗人微粒体代谢的 稳定性提示体内代谢稳定性。
     因为其生理学和病理生理学的重要性， 所以需要对 mGluR 同分异构体、 特别是组 I 受体同分异构体、 最特别是 mGluR5 具有高选择性的新的强效 mGluR 激动剂和拮抗剂。
     本发明的目的是提供对代谢型谷氨酸受体 (mGluR) 特别是 mGluR5 受体具有活性 的化合物。具体来讲， 本发明的化合物主要作用于外周， 即穿过血脑屏障的能力有限。
     发明描述
     本发明涉及式 I 化合物 ：
     其中 X是
     R1 是甲基、 卤素或氰基 ； 2 R 是氢或氟 ； R3 是 C1-C3 烷基或环丙基 ； R4 是 C1-C3 烷基或环丙基 ； R5 是氢、 C1-C3 烷基或环丙基 ； Z是
     其中 R6 是氢、 氟、 C1-C3 烷基或 C1-C3 烷氧基 ；R7 是氢、 氟、 C1-C3 烷基或 C1-C3 烷氧基 ； 及其药学上可接受的盐、 水合物、 同分异构体、 互变异构体和 / 或对映体。 1 在一个实施方案中， R 是卤素。 在又一个实施方案中， R1 是氯。 在又一个实施方案中， R1 是甲基。 在又一个实施方案中， R2 是氢。 在又一个实施方案中， R3 是甲基或环丙基。 在又一个实施方案中， R4 是甲基或乙基。 在又一个实施方案中， R5 是氢或甲基。 在又一个实施方案中， R6 是甲基且 R7 是氢。在又一个实施方案中， R6 是氢且 R7 是 在又一个实施方案中， Z是氢。
     另一个实施方案是药用组合物， 所述药用组合物包含治疗有效量的式 I 化合物作 为活性成分， 以及一种或多种药学上可接受的稀释剂、 赋形剂和 / 或惰性载体。
     如下文更详细地描述， 其它实施方案涉及用于疗法、 治疗 mGluR5 介导性疾病、 制 备用于治疗 mGluR5 介导性疾病的药物的式 I 化合物。
     还有其它实施方案涉及治疗 mGluR5 介导性疾病的方法， 包括给予哺乳动物治疗 有效量的式 I 化合物。
     在另一个实施方案中， 提供抑制 mGluR5 受体活化的方法， 包括用有效量的式 I 化 合物治疗含有所述受体的细胞。
     本发明的化合物可用于疗法， 特别是用于治疗神经、 精神、 疼痛和胃肠道疾病。
     本领域技术人员还将理解本发明的某些化合物可存在溶剂化如水合形式以及非 溶剂化形式。还将理解本发明包括式 I 化合物的所有此类溶剂化形式。
     式 I 化合物的盐也在本发明范围内。一般来讲， 用本领域众所周知的标准方法获 得本发明化合物药学上可接受的盐， 例如通过使足够碱性的化合物如烷基胺与合适的酸如 HCl、 乙酸或甲磺酸反应以得到具有生理学上可接受的阴离子的盐。 还可以在水介质中， 用1 当量碱金属或碱土金属氢氧化物或醇盐 ( 如乙醇盐或甲醇盐 ) 或合适的碱性有机胺 ( 如胆 碱或葡甲胺 ) 处理具有合适的酸性质子如羧酸或酚的本发明化合物， 接着进行常规纯化， 制备相应的碱金属 ( 如钠、 钾或锂 ) 或碱土金属 ( 如钙 ) 盐。另外， 可通过将烷化剂加入例
     如中性胺内制备季铵盐。
     在本发明的一个实施方案中， 可将式 I 化合物转化为其药学上可接受的盐或溶剂 合物， 特别是酸加成盐， 如盐酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐、 磷酸盐、 乙酸盐、 富马酸盐、 马来酸 盐、 酒石酸盐、 柠檬酸盐、 甲磺酸盐或对甲苯磺酸盐。
     用于式 I 定义中的通用术语具有下列含义 ：
     用于本文的卤素选自氯、 氟、 溴或碘。
     C1-C3 烷基是具有 1-3 个碳原子的直链或支链烷基， 如甲基、 乙基、 正丙基或异丙 基。
     C1-C3 烷氧基是具有 1-3 个碳原子的烷氧基， 如甲氧基、 乙氧基、 异丙氧基或正丙氧 基。
     用 ACDLABS v.9.04 或 10.06 产生所有化学名称。
     在上式 I 中， X 可以 2 种可能方向中的任何一种方向存在。
     药用组合物
     可将本发明化合物配制为常规药用组合物， 所述药用组合物包含式 I 化合物或其 药学上可接受的盐或溶剂合物， 以及药学上可接受的载体或赋形剂。药学上可接受的载体 可以是固体或液体。 固体形式制剂包括但不限于散剂、 片剂、 可分散粒剂、 胶囊剂、 扁囊剂和 栓剂。
     固体载体可以是一种或多种物质， 还可充当稀释剂、 调味剂、 溶解剂、 润滑剂、 悬浮 剂、 粘合剂或片剂崩解剂。固体载体还可以是包囊材料。
     在散剂中， 载体是细碎的固体， 处于与细碎的本发明化合物或活性组分的混合物 中。 在片剂中， 使活性组分与具有所需粘合特性的载体以合适比例混合， 压制成所需形状和 大小。
     为了制备栓剂组合物， 首先将低熔点蜡如脂肪酸甘油酯和可可豆脂的混合物熔 化， 通过例如搅拌使活性成分分散其中。 然后将熔化的均匀混合物倒入合适大小的模具内， 让其冷却和固化。
     合适的载体包括但不限于碳酸镁、 硬脂酸镁、 滑石、 乳糖、 糖、 果胶、 糊精、 淀粉、 黄 蓍胶、 甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠、 低熔点蜡、 可可豆脂等。
     术语组合物还意在包括活性组分与作为提供胶囊剂的载体的包囊材料的制剂， 其 中活性组分 ( 包括或不包括其它载体 ) 被由此与其缔合的载体包围。同样， 包括扁囊剂。
     片剂、 散剂、 扁囊剂和胶囊剂可用作适合口服给药的固体剂型。
     液体形式组合物包括溶液、 混悬液和乳液。 例如， 活性化合物的无菌水或水丙二醇 溶液可以是适合胃肠外给药的液体制剂。 可将液体组合物配制成在聚乙二醇水溶液中的溶 液。
     可通过使活性组分溶于水和根据需要加入的合适着色剂、 调味剂、 稳定剂和增稠 剂中制备用于口服给药的水溶液。可通过将细碎的活性组分与粘性材料如天然合成树胶、 树脂、 甲基纤维素、 羧甲基纤维素钠及药物配制领域已知的其它悬浮剂一起分散在水中， 制 备口服使用的水混悬液。 意在口服使用的例示性组合物可包含一种或多种着色剂、 增甜剂、 调味剂和 / 或防腐剂。
     根据给药方式， 药用组合物将包含约 0.05％ w( 重量百分数 ) 至 -99％ w、 或者约0.10％ w-50％ w 本发明化合物， 所有重量百分数都以组合物总重量为基础。
     实施本发明的治疗有效量可由本领域技术人员用已知标准确定， 包括个体患者的 年龄、 体重和反应， 并在待治疗或预防的疾病的背景中加以解释。
     医疗用途
     本发明化合物可用于治疗 mGluR5 兴奋性活化伴随的疾病和抑制由 mGluR5 兴奋性 活化导致的神经元损伤。化合物可用于在包括人在内的哺乳动物中产生 mGluR5 的抑制作 用。
     包括 mGluR5 在内的组 I mGluR 受体高度表达于中枢和周围神经系统及其它组织 中。因此， 预计本发明化合物非常适合治疗 mGluR5 介导性疾病如急性和慢性神经和精神疾 病、 胃肠道疾病以及慢性和疾病疼痛疾病。
     本发明涉及用于疗法的式 I 化合物， 如上文限定。
     本发明涉及用于治疗 mGluR5 介导性疾病的式 I 化合物， 如上文限定。
     本发明涉及如上文限定的式 I 化合物， 所述化合物用于治疗阿尔茨海默病老年性 痴呆、 AIDS 诱发性痴呆、 帕金森病、 肌萎缩侧索硬化、 亨廷顿舞蹈病、 偏头痛、 癫痫、 精神分裂 症、 抑郁症、 焦虑症、 急性焦虑症、 眼科疾病如视网膜病、 糖尿病性视网膜病、 青光眼、 听神经 疾病如耳鸣、 化疗诱发的神经病、 疱疹后神经痛和三叉神经痛、 耐药、 成瘾、 脆性 X 综合征、 孤独症、 精神发育迟缓、 精神分裂症和唐氏综合征。 本发明涉及如上文限定的式 I 化合物， 所述化合物用于治疗与偏头痛有关的疼 痛、 炎性痛、 神经性疼痛疾病如糖尿病性神经病、 关节炎和类风湿疾病、 腰背痛、 术后痛和各 种疾病伴随的疼痛， 所述疾病包括癌症、 心绞痛、 肾或胆绞痛、 痛经、 偏头痛和痛风。
     本发明涉及如上文限定的式 I 化合物， 所述化合物用于治疗中风、 头部创伤、 缺氧 缺血性损伤、 低血糖症、 心血管疾病和癫痫。
     本发明涉及如上文限定的式 I 化合物在制备药物中的用途， 所述药物用于 mGluR 组 I 受体介导性疾病和上文列出的任何疾病。
     本发明的一个实施方案涉及式 I 化合物治疗胃肠道疾病的用途。
     本发明的另一个实施方案涉及式 I 化合物， 所述化合物用于抑制一过性下食管括 约肌松弛， 治疗 GERD， 预防胃食管反流， 治疗反胃， 治疗哮喘， 治疗喉炎， 治疗肺病， 控制发育 停滞， 治疗肠易激综合征 (IBS) 和治疗功能性消化不良 (FD)。
     本发明的另一个实施方案涉及式 I 化合物用于制备药物的用途， 所述药物用于抑 制一过性下食管括约肌松弛， 治疗 GERD， 预防胃食管反流， 治疗反胃， 治疗哮喘， 治疗喉炎， 治疗肺病， 控制发育停滞， 治疗肠易激综合征 (IBS) 和治疗功能性消化不良 (FD)。
     本发明的另一个实施方案涉及式 I 化合物治疗膀胱过度活动或尿失禁的用途。
     用词 “TLESR” ， 一过性下食管括约肌松弛， 在本文根据 Mittal， R.K.， Holloway， R.H.， Penagini， R.， Blackshaw， L.A.， Dent， J.， 1995 ； Transient lower esophageal sphincter relaxation( 一过性下食管括约肌松弛 ).Gastroenterology 109， 601-610 页 限定。
     用词 “反流” 在本文限定为胃内液体能够进入食管内， 因为此时机械屏障暂时丧 失。
     用词 “GERD” ， 胃 食 管 反 流 病， 在 本 文 根 据 van Heerwarden， M.A.， Smout
     A.J.P.M.， 2000 ； Diagnosis of reflux disease( 反 流 病 的 诊 断 ).Baillière’ s Clin. Gastroenterol.14， 759-774 限定。
     上述式 I 化合物可用于治疗或预防肥胖或超重， ( 如促进体重减轻和维持体重减 轻 )， 预防或逆转体重增加 ( 如药物诱发或继发于戒烟的反弹 )， 调节食欲和 / 或饱胀感， 进 食障碍 ( 如疯狂进食、 厌食症、 食欲过盛和强迫症 ) 和成瘾 ( 对药物、 烟草、 酒精、 任何促进 食欲的大量营养剂或非必需食品 )。
     本发明还提供在患所述疾病或有患所述疾病危险的患者中治疗 mGluR5 介导性疾 病和上文所列任何疾病的方法， 包括给予患者有效量的如上文限定的式 I 化合物。
     治疗性或预防性治疗具体疾病需要的剂量将必须根据治疗宿主、 给药途径和治疗 疾病的严重度而改变。
     在本说明书的正文中， 术语 “疗法” 和 “治疗” 包括防止或预防， 除非有明确的相反 指示。应由此解释术语 “治疗的” 和 “治疗上的” 。
     在本说明书中， 除非另外说明， 术语 “拮抗剂” 和 “抑制剂” 应指通过任何方式部份 或完全阻断引起产生对配体的反应的转导途径。
     除非另外说明， 术语 “紊乱” 指与代谢型谷氨酸受体活性有关的任何病症和疾病。 本发明的一个实施方案是式 I 化合物与酸分泌抑制剂的组合。本发明的 “组合” 可 作为 “固定组合” 或作为 “部份组合药盒” 存在。 “固定组合” 限定为其中 (i) 至少一种酸分 泌抑制剂和 (ii) 至少一种式 I 化合物存在于一个单元中的组合。 “部份组合药盒” 限定为其 中 (i) 至少一种酸分泌抑制剂和 (ii) 至少一种式 I 化合物存在于不止一个单元中的组合。 可以同时、 按顺序或单独给予 “部份组合药盒” 的组分。根据本发明使用的酸分泌抑制剂与 式 I 化合物的摩尔比在 1 ∶ 100-100 ∶ 1 范围内， 如 1 ∶ 50-50 ∶ 1 或者 1 ∶ 20-20 ∶ 1 或 者 1 ∶ 10-10 ∶ 1。可单独给予相同比率的两种药物。酸分泌抑制剂的实例是 H2 阻滞剂， 如西米替丁、 雷尼替丁 ； 和质子泵抑制剂如吡啶基甲基亚磺酰基苯并咪唑如奥美拉唑、 艾索 美拉唑、 兰索拉唑、 泮托拉唑、 雷贝拉唑或相关药物如来明拉唑。
     非医疗用途
     除了医疗用途之外， 式 I 化合物以及此类化合物的盐和水合物可作为药理学工具 用于发展和标化体外和体内测试系统， 所述系统用于评估 mGluR 相关活性的抑制剂在实验 动物如猫、 狗、 兔、 猴、 大鼠和小鼠中的作用， 作为寻找新治疗剂的一部分。
     制备方法
     本发明另一方面提供制备式 I 化合物或其盐或水合物的过程。本文描述制备本发 明化合物的过程。
     在以下对此类过程的描述中， 应理解自始至终在合适的情况下， 都将以有机合成 领域技术人员很容易理解的方式将合适的保护基团加入各种反应物和中间体内， 然后从 中脱除。使用此类保护基团的常规方法以及合适保护基团的实例描述于例如 “Green’ s ProtectiveGroups in Organic Synthesis” ， 4th Edition， P.G.M.Wuts， T.W.Green， Wiley-Interscience， New York， (2006)。还应理解可在制备终产物的合成途径中的任 何中间体或终产物上， 通过化学操作将基团或取代基转换为另一种基团或取代基， 其中 可能的转换类型只受限于分子在该阶段携带的其它官能团与用于转换的条件或反应物 的固有不相容性。有机合成领域技术人员将很容易理解此类固有不相容性和通过进行合
     适转换和合适顺序的合成步骤避免此类固有不相容性的方法。下文给出转换实例， 应理 解描述的转换不只限于举例说明转换的通用基团或取代基。对其它合适转换的参考和说 明描述于 “Comprehensive Organic Transformations-A Guide to Functional Group Preparations” ， 2nd Edition R.C.Larock， VHC Publishers， Inc.(1999)。其它合适反应 的参考和说明描述于有机化学课本中， 例如 “Advanced Organic Chemistry ： Reactions， th Mechanisms， and Structure” ， 6 Edition， Michael B.Smith 和 Jerry March， McGraw nd Hill(2007) 或者， “Organic Synthesis” ， 2 Edition， Michael B. Smith， McGraw Hill， (2001)。 纯化中间体和终产物的技术包括例如在柱或旋转板上直接和反相层析、 再结晶、 蒸 馏和液 - 液或固 - 液提取， 这将很容易为本领域技术人员理解。取代基和基团的定义如式 I， 除非有不同限定。除非另外指定， 术语 “室温” 和 “环境温度” 应理解为 16-25℃温度。
     除非另外说明， 术语 “回流” 应指在所述溶剂的沸点或高于沸点的温度下使用溶 剂。
     缩写
     Boc 叔丁氧羰基
     DCM 二氯甲烷
     DEA N， N- 二异丙基乙胺
     DIBAL-H 二异丁基氢化铝
     DIC N， N’ - 二异丙基碳二亚胺
     DMAP N， N- 二甲基 -4- 氨基吡啶
     DMF N， N- 二甲基甲酰胺
     DMSO 二甲基亚砜
     EDCI N-[3-( 二甲基氨基 ) 丙基 ]-N′ - 乙基碳二亚胺盐酸盐
     EDC 1- 乙基 -3-(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳二亚胺
     Et2O 乙醚
     EtOAc 乙酸乙酯
     EtOH 乙醇
     EtI 碘乙烷
     Et 乙基
     Fmoc 9- 芴基甲氧基羰基
     h 小时
     HOBt N- 羟基苯并三唑
     HBTU O-( 苯并三唑 -1- 基 )-N， N， N′， N′ - 四甲基脲六氟磷酸盐
     HPFC 高效快速层析
     HPLC 高效液相层析
     IPA 异丙醇
     LAH 氢化铝锂
     LCMS 液相层析质谱
     LDA 二异丙基氨基锂
     LG 离去基团MeCN 乙腈
     MeOH 甲醇
     min 分钟
     MeI 碘甲烷
     MeMgCl 甲基氯化镁
     Me 甲基
     MTBE 甲基叔丁醚
     n-BuLi 1- 丁基锂
     NaOAc 乙酸钠
     NMR 核磁共振
     NMP N- 甲基吡咯烷酮
     o.n. 过夜
     PG 保护基团
     RT， rt， r.t. 室温
     TEA 三乙胺
     THF 四氢呋喃
     nBu 正丁基
     OMs 甲磺酸酯或甲烷磺酸酯
     OTs 甲苯磺酸酯、 甲苯磺酸酯或 4- 甲基苯磺酸酯
     TBAF 四丁基氟化铵
     TBDMSCl 叔丁基二甲基氯硅烷
     t-BuLi 叔丁锂
     TFA 三氟乙酸
     TMS 四甲基甲硅烷
     pTsOH 对甲苯磺酸
     RP 反相
     SPE 固相提取 ( 通常含有硅胶用于微层析 )
     sat. 饱和
     中间体的制备
     在下文给出的合成途径中提供的中间体可用于进一步制备式 I 化合物。其它原料 可市售获得或可用文献描述的方法制备。 下文描述的合成途径是可使用的制备的非限制性 实例。本领域技术人员将理解其它可使用的途径。
     式 I 的 1， 2， 4- 噁二唑化合物的通用合成
     流程 1
     可用适当活化的式 III 化合物与式 II 化合物形成式 IV 化合物， 转而可通过将其 环化制备其中 X 是 1， 2， 4- 噁二唑 (V) 的式 I 化合物。
     可用合适的腈制备式 II 化合物。可按照以下非限制性方法激活式 III 化合物 ： i) 用合适试剂如草酰氯或亚硫酰氯由酸形成酰基氯 ； ii) 用试剂如氯甲酸烷基酯处理形成 酐或混合酐 ； iii) 用传统方法在酰胺偶联反应中激活酸， 如作为 EDCI 与 HOBt 或脲鎓盐如 HBTU ； iv) 当在提高温度 (50℃ -110℃ ) 下在溶剂如 EtOH 或甲苯中用强碱如叔丁醇钠或氢 化钠将羟基脒脱质子时作为烷基酯。
     化合物 II 和 III 向 V 型化合物的转换可通过分离的 IV 型中间体分两步连续进行， 如上描述， 或者可在形成酯的过程中使原位形成的中间体自然环化。可用合适的非质子溶 剂如 DCM、 THF、 DMF 或甲苯， 与任选合适的有机碱如 TEA、 DEA 等或无机碱如碳酸氢钠或碳酸 钾形成酯 IV。 可在粗酯上通过蒸发和用更高沸点的溶剂如 DMF 置换溶剂或用水提取以得到 半纯化材料或者用通过标准层析方法纯化的材料， 使式 IV 化合物环化以形成噁二唑。可通 过常规加热或通过微波照射 (100℃ -180℃ )， 在合适溶剂如吡啶或 DMF 或者用低温法应用 试剂如 TBAF/THF 或者通过任何其它合适的已知文献方法完成环化。
     上文所述反应的其它实例可参阅 Poulain 等， Tetrahedron Lett.， (2001)， 42， 1495-98， Ganglott 等， Tetrahedron Lett.， (2001)， 42， 1441-43， 和 Mathvink 等， Bioorg. Med.Chem.Lett.(1999)， 9， 1869-74， 因此作为参考包括在本文中。
     用于制备式 I 化合物的芳基腈和羧酸的合成
     芳基腈可通过各种方法获得， 包括在合适溶剂如 DMF 中用合适的氰化物源如氰 化锌通过钯或镍催化剂使芳基卤或三氟甲磺酸盐氰化。通过在合适溶剂如含水醇中在酸 性或碱性条件下通过水解由腈获得相应的羧酸。芳基羧酸还可来自各种其它来源， 包括碘 代 - 或溴代 - 锂交换然后用 CO2 捕获以直接得到酸。
     可用任何相容方法激活酸将羧酸转化为伯酰胺， 包括通过酰基氯或混合酐， 然后 用任何氨源， 包括在合适碱的存在下用氯化铵、 氢氧化铵、 氨 /MeOH 或氨在非质子溶剂如二 氧六环中捕获。可用各种脱水剂如草酰氯或亚硫酰氯将这种伯酰胺转化为腈。酸转化为腈 的反应顺序还可适用于非芳族酸， 包括适当保护的氨基酸衍生物。在氨基酸或在任何其它 酸原料的远端位置中， 胺的合适保护基团可以是消除胺官能团碱性和亲核性的任何基团， 包括此类氨基甲酸酯保护基团如 Boc。
     一 些 酸 很 容 易 用 市 售 获 得 的 类 似 物 制 备。 例 如， 通 过 使 2- 氯 代 -6- 甲 基 吡 啶 -4- 甲酸脱氯制备 6- 甲基吡啶 -4- 甲酸。通过在提高温度 (80-120℃ ) 下在相容溶剂如 DMF 中在碱如碳酸钾的存在下， 用合适的亲核试剂如咪唑置换一个氟基团一段延长的时间， 可用溴代 - 二氟代 - 苯获得某些类型的取代的氟代 - 苯甲腈。然后可将溴基团加工成酸或 腈， 如上所述。
     可用很容易获得的取代的间苯二甲酸衍生物制备 1， 3- 二取代和 1， 3， 5- 三取代的 苯甲酸和苯甲腈。 二酯的单水解让酸与各种试剂选择性反应， 最常用的活化剂如亚硫酰氯、 草酰氯或氯甲酸异丁酯等。用活化酸可获得多种产物。除了如上所述用于通过脱水形成腈 的伯酰胺之外， 可用各种还原剂如硼氢化钠在相容溶剂如 THF 中在混合酐或酰基氯上还原 为羟甲基类似物。可在合适溶剂如 EtOH 中用合适的催化剂源如钯 / 碳催化氢化将羟甲基衍生物进一步还原为甲基类似物。 羟甲基还可用于适合苄醇的任何反应如酰化、 烷化、 转换 为卤素等。当不能市售获得时， 还可通过甲基衍生物的溴化获得这种类型的卤代甲基苯甲 酸。还可在合适溶剂如 THF 或醇中， 用合适的碱如碳酸钾或氢氧化钠通过与合适的醇反应， 由卤代甲基芳基苯甲酸酯衍生物获得通过羟甲基衍生物的烷化获得的醚。 当存在其它取代 基时， 这些还可用于标准转换反应中。例如， 用酸和亚硝酸钠处理苯胺可得到重氮盐， 可用 四氟硼酸将其转换为卤化物如氟化物。 酚与烷化剂在合适碱如碳酸钾的存在下反应以形成 芳族醚。
     式 I 化合物异噁唑前体的形成
     流程 2
     可在溶剂如甲苯中在合适温度 (0℃ -100℃ ) 下， 用合适碱如碳酸氢钠或 TEA 在 碱性条件下， 通过式 VI 和 VII 化合物之间的 1， 3- 偶极环加成制备式 IX 化合物， 其中 G1 和 / 或 G2 是中间体的部份或式 I 限定的基团。VI 型化合物的合成先前已描述于文献中， 如 Kim， Jae Nyoung ； Ryu， Eung K ； J.Org.Chem.(1992)， 57， 6649-50。还可在提高的温度 (50℃ -100℃ ) 在碱如 TEA 的存在下， 通过用亲电试剂如 PhNCO 活化用取代的 VIII 型硝基 甲烷完成与 VII 型乙炔的 1， 3- 偶极环加成。Li， C-S. ； Lacasse， E. ； Tetrahedron Lett.， (2002)43 ； 3565-3568。几种 VII 型化合物可市售获得， 或者可用本领域技术人员已知的标 准方法合成。
     流程 3 或者， 可用碱如氢化钠或叔丁醇钾用碱性条件 ( 见流程 3) 通过甲基酮 X 与酯的Claisen 缩合得到的式 I 化合物， 可通过缩合然后在提高温度 (60℃ -120℃ ) 下用羟胺如盐 酸盐形式环化产生式 XI 化合物以得到中间体 XII。
     应理解对于两种方法， 中间体如 IX 和 XII 可能都需要后续官能团转换。在酯基如 在 XII 中的情况下， 这些转换可包括但不限于下列三种方法中的一种 ： a) 在溶剂如 THF 中 用合适的还原剂如 LAH 完全还原。 b) 用合适的选择性还原剂如 DIBAL-H 然后加入烷基金属 试剂部份还原。c) 在溶剂如甲苯或 THF 中加入烷基金属试剂如烷基卤化镁， 接着用例如硼 氢化钠在 MeOH 中还原。
     式 I 化合物四唑前体的形成
     流程 4
     通过芳基磺酰腙 XIV 与来自苯胺 XIII 的重氮盐之间的缩合 ( 流程 4)， 制备式 I 化 合物， 其中 X 是四唑， 如在中间体 XVI 中。可用试剂如臭氧直接用一锅法或者用二羟化剂如 四氧化锇通过二醇然后用试剂如乙酸铅 (IV) 裂解， 将由 XIII 的重氮盐和肉桂醛的芳基磺 酰基腙获得的四唑中间体 XV 裂解， 以得到醛或酮 XV ； J.Med.Chem.(2000)， 43， 953-970。
     还可通过臭氧分解然后用还原剂如硼氢化钠还原， 用一锅法将烯烃转化为醇。可 在 0℃ -80℃温度下， 在溶剂如 MeOH、 THF 或 DMF 中， 用众所周知的还原剂如硼氢化钠或硼氢 化锂将醛 XVI 还原为式 XVII 的伯醇。还可在溶剂如 THF 中， 通过式 XVI 的醛与有机金属试 剂如 Grignard 试剂 ( 如 MeMgX) 的加成反应形成仲醇， 反应温度为 -78℃ -80℃， 通常在 0℃ 至室温下进行。
     氨基 [1， 2， 4] 三唑的制备
     流程 7
     参考流程 7， 通过使用例如三苯基膦与碘、 N- 溴代琥珀酰亚胺或 N- 氯代琥珀酰亚 胺， 或者通过用三溴化磷或亚硫酰氯处理， 通过对相应卤化物 ( 如 LG ＝ Cl、 Br 等 ) 的标准 方法， 用相应的醇 (LG ＝ O) 中间体获得中间体 XXIII。 同样， 可通过在非亲核碱与醇的存在 下应用合适的磺酰卤或磺酸酐以获得相应的磺酸酯， 将醇转换为其它 LG 如甲磺酸酯或甲 苯磺酸酯。 可将烷基氯或磺酸烷基酯转化为相应的溴化物。 在 0℃ -60℃的温度下在溶剂如 THF、 NMP 或 DMF 中， 通过使 XXII 与胺反应制备胺 XXIV。在 -100 至 100℃在 DCM、 THF、 NMP 或 DMF 中， 使胺与异硫氰酸烷基酯 XXV 反应以形成 XXVI。通过在 -100 至 100℃下， 在丙酮、 EtOH、 THF、 DCM 等中用烷基卤如 MeI 或 EtI 使相应的硫脲进行 S- 烷化， 获得异硫脲 XXVII。 合成式 I 化合物的最后一步涉及在 0℃ -180℃下， 在溶剂如 DMSO、 IPA、 EtOH 或 DMF 中， 使 XXVII 与酰基肼反应。
     流程 8
     在 -20 至 100℃在合适溶剂如 THF、 吡啶或 DMF 中， 通过用携带 LG 的合适酰化剂处 理甲腙二酰胺 (carbonohydrazonicdiamides)XXXI， 获得氨基 [1， 2， 4] 三唑 XXXIII( 流程 8， R 基团如式 I 限定 )。 反应最初产生开放的中间体 XXXII， 可自发形成三唑环， 或者可通过 在例如吡啶或 DMF 中在 50 至 200℃加热完成。 LG 可以是氯或者通过用如下文描述的标准活 化剂处理相应羧酸 (LG 是 OH) 原位产生的任何其它合适的 LG。可在 -20 至 180℃在溶剂如 吡啶、 MeOH、 EtOH、 IPA、 THF、 DMSO 等中， 通过用肼处理异硫脲 XXX 产生甲腙二酰胺 XXXI， 其 中 S- 烷基 ( 如流程 5 显示的 S-Me) 部份充当离去基团。还可在如与肼反应的相同条件下， 通过用酰基肼处理异硫脲， 直接产生开放的中间体 XXXII。在 -100 至 100℃在丙酮、 EtOH、 THF、 DCM 等中， 通过用例如 MeI 或 EtI 使相应硫脲发生 S- 烷化获得异硫脲。
     可通过离去基团 (LG) 的亲核置换通过形成键由 XXXIII 制备式 I 化合物， 其中氨 基甲基三唑 NH 部份充当亲核基团。在 -100 至 150℃的温度下， 在合适溶剂如 LDA 或 nBuLi 在 THF、 乙醚或甲苯中， 或者氢化钠或 NaOtBu 在例如 DMF 或 DMSO 中， 或者 K2CO3 在乙腈或酮 如 2- 丁酮中， 通过用碱处理相应的质子化中性原子， 产生阴离子形式的氨基甲基三唑的所 述氮原子。LG 优选氯、 溴、 OMs 和 OTs。
     式 XXVIII 的酰基肼可市售获得， 或者可在室温至 100℃的温度下在溶剂如 MeOH、 EtOH 或 THF 中通过用肼处理相应的烷基酯合成。
     1， 2， 3- 三唑的合成
     可以例如在 20 ℃ -100 ℃在溶剂混合物如 DMSO/H2O 中， 用叠氮钠和铜催化剂处 理式 XXXV 卤代取代的苯基 ( 流程 5 其中 LG ＝ I)， 将炔烃 XXXIV， PG ＝保护基团， 转换为 XXXVI( 见 J.Org.Chem.2002， 67， 3057)。
     流程 5
     可在 DMSO 中用无机碱如 K2CO3 由取代的三唑 XXXVII 与卤代苯基如 XXXV 亲核加 成 ( 流程 6， LG ＝ F)， 或者可在例如氯化铜的存在下和加热， 由 α- 羟基酮 XXXIX 与芳基肼 XL 反应 (Synth.Commun.， (2006)， 36， 2461-2468)， 合成备选区域异构体如 XXXVIII， 流程 6(Tetrahedron， (2001)， 57(22)， 4781-4785)。
     流程 6实施例 现在将通过以下非限制性实施例解释本发明。
     通用方法
     所有原料都市售获得或者先前描述于文献中。
     除非另外说明， 在作为溶剂的氘化氯仿中， 用 TMS 或残留溶剂信号作为参考， 分别 在 300、 400 和 600MHz 操作 1H NMR， 在 Varian Mercery Plus 或 Varian INOVA 分光仪上记 1 13 录 H 和 C NMR 谱。所有报道的化学位移都以 δ- 级别 (delta-scale) 上的 ppm 表示， 信 号的精细分裂如记录所显示 (s ： 单峰， br s ： 宽单峰， d： 双峰， t： 三峰， q： 四峰， m： 多峰 )。
     分析线性液相层析分离然后检测质谱， 记录在由 Alliance 2795(LC) 和 ZQ 单四 极质谱仪组成的 Waters LCMS 上。质谱仪配备以正和 / 或负离子模式运行的电喷射离子 源。离子喷射电压是 ±3kV， 以 0.8s 扫描时间从 m/z 100-700 扫描质谱仪。向柱 SunFire C182.5μ3×20mm 内施加在 pH 3 ： 甲酸盐缓冲液或 pH 7 ： 乙酸盐缓冲液中 5％至 100％的 MeCN 线性梯度。
     在使用 Kromasil C8， 10μm 柱、 具有二极管阵列检测器的 Waters Delta Prep Systems 上进行制备反相层析。还在硅胶填充玻璃柱中通过快速层析纯化产物。微波加热 在产生 2450MHz 连续辐射的 Smith Synthesizer Single-mode 微波腔中进行 (Personal Chemistry AB， Uppsala，Sweden)。
     实施例 1.1 ： N-{[5-(3- 氯苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基 } 环丙胺
     使氯苯基甲磺酸 [5-(3- 氯苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基酯 (WO2004/014881)(1.45g， 5.04mmol) 溶于 THF(30mL) 中， 加入环丙胺 (2.0mL， 25mmol)。在室温下将反应混合物搅拌 过夜。第二天， 加入更多环丙胺 (2.0mL， 25mmol)， 将反应混合物在 40℃用回流冷凝器加热 3 小时。蒸发溶剂， 使残留物溶于 DCM(80mL) 中， 用饱和 NaHCO3 溶液 (50mL) 洗涤并干燥 (MgSO4)。粗标题化合物 ( 收率 90％ ) 不再纯化即用于下一步。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.75(d， 1H)， 7.65(m， 1H)， 7.40(m， 2H)， 6.56(s， 1H)， 4.76(br s， 1H)， 3.97(s， 3H)， 2.26(m， 1H)， 0.50(m， 2H)， 0.44(m， 2H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 2.1 ： 1-{[5-(3- 氯苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基 }-1- 环丙基 -3- 甲基硫脲使实施例 1.1 的标题化合物 (1.1g， 4.43mmol) 溶于 (DCM， 25mL) 中， 加入异硫氰 酸甲酯 (0.5g， 6.8mmol)。在室温下将反应混合物搅拌过夜， 用水 (2×20mL) 洗涤并干燥 (MgSO4)。产物从 MeCN/ 水中沉淀， 将其过滤和减压干燥以得到标题化合物 (0.80g， 56％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.72(s， 1H)， 7.62(m， 1H)， 7.36(m， 2H)， 6.75(s， 1H)， 6.68(br s， 1H)， 5.30(s， 2H)， 3.21(d， 3H)， 2.53(m， 1H)， 0.96(m， 2H)， 0.90(m， 2H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 3.1 ： N-{[5-(3- 氯苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基 }-N- 环丙基 -N′ - 甲基亚 氨基硫代氨基甲酸甲酯使实施例 2.1 的标题化合物 (0.80g， 2.47mmol) 溶于 THF(20mL) 中， 用冰浴冷却溶 液。加入 NaOtBu(0.30g， 3.12mmol) 和 MeI(0.28mL， 4.5mmol)， 将反应混合物在 0 ℃搅拌 4 小时。真空蒸发溶剂， 使残留物分配在 DCM(50mL) 与水 (50mL) 之间， 真空除去溶剂后， 干燥 (MgSO4) 有机层以得到粗标题化合物 (0.76g， 92％ )。分离的物质不再纯化即用于下一步。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.71(m， 1H)， 7.62(m， 1H)， 7.37(m， 2H)， 6.45(s， 1H)， 4.63(s， 2H)， 3.27(s， 3H)， 2.56(m， 1H)， 2.30(s， 3H)， 0.75(m， 2H)， 0.55(m， 2H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 4.1 ： 5-{5-[{[5-(3- 氯苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基 {( 环丙基 ) 氨基 ]-4- 甲 基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 } 哒嗪 -3(2H)- 酮
     将 实 施 例 3.1 的 标 题 化 合 物 (0.25g， 0.74mmol) 和 实 施 例 10 的 标 题 化 合 物 (0.14g， 0.89mmol) 加入 DMSO(3.0mL) 内， 将反应混合物加热至 120 ℃ 1.5 小时， 在 0.2 ％ AcOH/ 水∶ MeCN 95 ∶ 5 缓冲液中用 MeCN 梯度 (10-50％ ) 通过 RP-HPLC 纯化以得到标题 化合物 (0.20g， 63％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ11.6(br s， 1H)， 8.49(d， 1H)， 7.71(m， 1H)， 7.60(m， 1H)， 7.37(m， 2H)， 7.07(d， 1H)， 6.59(s， 1H)， 4.63(s， 2H)， 3.71(s， 3H)， 3.00(m， 1H)， 0.80(m， 2H)， 0.64(m， 2H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实 施 例 5.1 ： (-)-4-{5-[{1-[5-(3- 氯 苯 基 ) 异 噁 唑 -3- 基 ] 乙 基 }( 甲 基 ) 氨 基 ]-4- 甲基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 }-1- 甲基吡啶 -2(1H)- 酮
     按照实施例 4.1 标题化合物的方法合成标题化合物 (132mg， 53 ％ )。通过手性 HPLC(ChiralcelOD-MeCN/TEA 100/0.1) 分离外消旋混合物， 评估为单对映体， 但不指定绝 对构型。 1
     H NMR(600MHz， DMSO-d6) ： δ7.95(s， 1H)， 7.81(m， 2H)， 7.54(m， 2H)， 7.28(s， 1H)， 6.67(d， 1H)， 6.57(dd， 1H)， 4.81(q， 1H)， 3.62(s， 3H)， 3.44(s， 3H)， 2.71(s， 3H)， 1.55(d， 3H). 旋光度 -163.3° (589nm， MeCN， 1.0g/100mL， T 20℃ ).
     按照类似方式合成下列化合物。通过手性 HPLC(ChiralcelOJ-Heptane/EtOH/TEA 60/40/0.1) 分离这种外消旋混合物， 评估为单对映体， 但不指定绝对构型 ：
     实施例 6.1 ： 甲磺酸 [5-(3- 甲基苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基酯使 [5-(3- 甲 基 苯 基 ) 异 噁 唑 -3- 基 ] 甲 醇 (1.92g， 10.1mmol) 溶 于 DCM(50mL) 中， 将反应混合物冷却至 0 ℃， 加入三乙胺 (3.5mL， 25.3mmol)。滴加甲磺酰氯 (0.94mL， 12.2mmol)， 将反应混合物在 0℃搅拌 1 小时， 在室温下搅拌 1 小时。将反应混合物用饱和 KHSO4 溶液 (50mL) 洗涤并干燥 (MgSO4)， 真空除去溶剂以得到标题化合物 (2.55g， 94％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.57(m， 2H)， 7.34(t， 1H)， 7.25(m， 1H)， 6.63(s， 1H)， 5.32(s， 2H)， 3.07(s， 3H)， 2.40(s， 3H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 7.1 ： N， 4- 二甲基 -5- 嘧啶 -5- 基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 胺使 2- 氨基 -1， 3- 二甲基 - 胍氢碘酸盐 (1.1g， 4.8mmol) 溶于吡啶 (30mL) 中， 冷却 至 -15℃。加入嘧啶 -5- 羰基氯盐酸盐 (0.86g， 4.8mmol)， 将反应混合物在 -15℃搅拌 1 小 时， 在室温下搅拌 20 小时， 在 125℃搅拌 6 小时。加入 EtOH(100mL)， 将反应混合物在室温 下搅拌 30 分钟。真空蒸发溶剂， 在水∶ MeCN 95 ∶ 5 中用 MeCN 在 0.1M NH4OAc- 缓冲液中 通过 RP-HPLC 纯化残留物以得到标题化合物 (0.18g， 20％ )。 1
     H NMR(400MHz， D2O) ： δ9.13(s， 1H)， 8.92(s， 2H)， 3.33(s， 3H)， 2.82(s， 3H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实 施 例 8.1 ： N-{[5-(3- 氯 苯 基 ) 异 噁 唑 -3- 基 ] 甲 基 }-N， 4- 二 甲 基 -5- 哒 嗪 -4- 基 -4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 胺
     使实施例 7.2 的标题化合物 (46mg， 0.24mmol) 溶于 DMF 中， 加入 NaH(19mg， 60 ％ 油分散体， 0.48mmol)。加入氯苯基甲磺酸 [5-(3- 氯苯基 ) 异噁唑 -3- 基 ] 甲基酯 (WO 2004/014881)(70mg， 0.24mmol)， 将反应混合物在室温下搅拌 3 小时。在水∶ MeCN 95 ∶ 5 中用 5-100 ％ MeCN/0.1M NH4OAc- 缓冲液梯度通过 RP-HPLC 纯化得到标题化合物 (73mg， 79％ )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ9.58(s， 1H)， 9.34(d， 1H)， 7.88(dd， 1H)， 7.74(m， 1H)，
     7.64(m， 1H)， 7.39(m， 2H)， 6.77(s， 1H)， 4.60(s， 2H)， 3.75(s， 3H)， 3.03(s， 3H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 9 ： 6- 氧代 -1， 6- 二氢嘧啶 -4- 甲酰肼将步骤 9A 的副标题化合物在无水甲醇中搅拌为浆料， 加入一水合肼 (3eq.)。 固体 首先溶解， 但在 5 分钟内产物开始沉淀。加入更多甲醇， 将浆料在室温下搅拌过夜， 过滤， 用 甲醇洗涤， 真空干燥以得到标题产物 (91％ )。
     H NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ12.36( 宽 s， 1H)， 9.88(s， 1H)， 8.23(s， 1H)， 6.67(s， 1H)， 4.67(s， 2H).
     步骤 9A ： 6- 氧代 -1， 6- 二氢嘧啶 -4- 甲酸甲酯
     1
     向 MeOH(360mL) 中的 6- 氧代 -1， 6- 二氢嘧啶 -4- 甲酸 (36.0g， 257mmol) 内滴加 三甲基氯硅烷 (56g， 554mmol)， 然后在室温下搅拌 8 小时。蒸发溶剂， 使固体与 200mL MeOH回流 30 分钟。冷却反应混合物， 滤出沉淀的固体， 用小量 MeOH 洗涤， 在 35℃真空干燥以得 到 27.9g(70％ ) 标题化合物。 1
     H NMR(300MHz， DMSO-d6) ： δ(ppm)12.50( 宽 s， 1H)， 8.23(s， 1H)， 6.83(s， 1H)， 3.80(s， 3H).
     实施例 10 ： 6- 氧代 -1， 6- 二氢哒嗪 -4- 甲酰肼
     将步骤 10C 的化合物与水合肼 (1.2eq.) 在 78℃加热过夜。 将反应混合物冷却， 真 空浓缩。将残留物用 EtOAc 研磨、 过滤并干燥以得到标题产物 (99％ )。 1
     H NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ8.05(d， 1H)， 7.09(d， 1H)， 6.40( 宽 s， 4H).
     步骤 10A ： 5- 甲基哒嗪 -3(2H)- 酮
     在室温下将 4， 4- 二甲氧基 -3- 甲基 - 丁 -2- 烯酸乙酯 (Qi-Ying Hu， Pankaj D.Rege， and E.J.Corey， J.Am.Chem.Soc.， 2004， 126， 5984)(82g， 440mmol) 与水合肼 (50g， 999mmol) 混合。将混合物在 60℃加热 4 小时。蒸发溶剂后， 将油残留物进一步真空干燥。 向所得残留物内加入 6M aq.HCl。将混合物在 60℃加热 5 小时。真空除去溶剂。向残留物 内加入 MeOH 3 次， 接着真空浓缩。将所得残留物用无水 EtOH 处理， 然后过滤以除去固体。 真空浓缩滤液。向所得残留物内加入无水 IPA 和 20g 无水 K2CO3。将混合物在 60℃加热 20 分钟。过滤之后， 真空除去溶剂， 将残留物用 DCM ∶ MeOH ∶ Et3N(10 ∶ 1 ∶ 0.3) 快速层析 纯化以得到副标题化合物 (13.4g， 28％ )。 1
     H NMR(400MHz， MeOH-d4) ： d 2.24(s， 3H)， 6.73(s， 1H)， 7.82(s， 1H).
     步骤 10B ： 6- 氧代 -1， 6- 二氢哒嗪 -4- 甲酸
     在 50-60℃向步骤 10A 的副标题化合物 (4.4g， 40mmol) 在浓硫酸 (80mL) 中的搅 拌溶液内， 加入小量呈精细研磨粉状物的重铬酸钾 (18g， 61mmol)。20 分钟内将原料加入混 合物中。在 60℃继续搅拌 10 分钟， 将粘稠绿色混合物倒在碎冰上。将固体滤出， 用冷水洗 涤。真空干燥后， 分离副标题化合物 (4.5g， 77％ )。 1
     H NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ7.22(s， 3H)， 8.13(s， 1H)， 13.38(s， 宽， 1H).
     步骤 10C ： 6- 氧代 -1， 6- 二氢哒嗪 -4- 甲酸乙酯使步骤 10B 的副标题化合物溶于 EtOH(10mL) 中， 加入浓 H2SO4(4.2mL)， 然后回流 加热 5 小时。将反应混合物冷却， 真空浓缩， 用饱和 Na2CO3 碱化。过滤之后， 将水相用乙酸 乙酯提取， 用无水 Na2SO4 干燥， 过滤和浓缩以得到副标题化合物 (83％ )。 1
     H NMR(400MHz， MeOH-d4) ： δ8.27(d， 1H)， 7.42(d， 1H)， 4.40(q， 2H)， 1.39(t， 3H).
     实施例 11.1 ： N， N’ - 二甲基亚氨基硫代氨基甲酸甲酯
     使 N， N′ - 二甲基硫脲 (29g.0.27mol) 溶于丙酮 (300mL) 中， 在冰浴上冷却。缓 慢加入甲基碘 (27mL， 0.44mol)。5 分钟后撤走冰浴。在室温下 1 小时后滤出沉淀的固体。 使固体溶于 1M NaOH(300mL) 中。用 DCM(500mL) 提取。使有机相通过相分离器， 真空浓缩 以得到不再纯化即可使用的标题化合物 (26g， 80％ )。
     1H NMR(600MHz， MeOH-d4) ： δ2.85(s， 6H)， 2.37(s， 3H) 按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 12.1 ： 1- 甲基 -4-[4- 甲基 -5-( 甲基氨基 )-4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 ] 吡 啶 -2(1H)- 酮使实施例 11.1 的标题化合物 (1.5g， 13mmol) 在 DMSO(5mL) 中浆化， 加入 1- 甲 基 -2- 氧代 -1， 2- 二氢 - 吡啶 -4- 甲酰肼 (WO 2008/041075， 实施例 31.1)(2.3g， 14mmol)。 加热至 80℃后， 让混合物静置过夜， 获得透明溶液。再过 1 小时后停止加热， 在冰上冷却反 应混合物。滤出白色固体， 用 Et2O 洗涤。冷冻干燥得到呈白色固体的标题化合物 (1.6g， 59％ )。 1
     H NMR(400MHz ， D 2O) ： δ 7.68(d ， 1H) ， 6.68(s ， 1H) ， 6.61(d ， 1H) ， 3.51(s ， 3H) ，
     3.34(s， 3H)， 2.81(s， 3H).
     按照类似方式合成下列化合物 ：
     实施例 13 ： [5-(3- 甲基苯基 )-1， 2， 4- 噁二唑 -3- 基 ] 甲醇使步骤 13D 获得的材料溶于 DMSO(100mL) 中。 用 10 秒加入硫酸 (11.2g， 114mmol)。 将混合物在 80 ℃加热 1 天直至 LCMS 显示没有 M+18 中间体峰。向混合物内加入正庚烷 (200mL)。使 DMSO 层分配在 DCM 与饱和 NaHCO3 水溶液之间。将有机层用水和盐酸洗涤， 干 燥 (MgSO4)， 接着真空除去溶剂以得到干燥残留物， 将其用 HPFC(Biotage40+ 硅胶柱 ) 纯化， 用线性梯度 EtOAC 在庚烷中以洗脱标题产物 (7g， 14％分 5 步 )。 1
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ7.96(s， 1H)， 7.94(m， 1H)， 7.42(m， 2H)， 4.87(s， 2H)，
     2.45(s， 3H).
     步骤 13A ： 2-{[ 叔丁基 ( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 } 乙酰胺
     在 25 ℃和氮气气氛下， 在配备顶式搅拌的 1L 反应器中加入 2- 羟基 - 乙酰胺 (20.5g， 273mmol) 和吡啶 (80.9mL， 1002mmol) 在 DMF(60mL) 中的溶液。将混合物在 25 ℃ 搅拌 30 分钟。在 25℃用 70 分钟向混合物内加入 50％ TBDMSCl 溶液 / 甲苯 (100g， 50％， 333mmol) 在 MTBE(200mL) 中的溶液。3.5 小时后， 将反应混合物冷却至 10℃。
     步骤 13B ： {[ 叔丁基 ( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 } 乙腈
     用 35 分钟向步骤 13A 获得的混合物内加入三氟乙酸酐 (45mL， 323mmol)。将反应 混合物在 10℃搅拌 1 小时。用 5 分钟向混合物内加入水 (200mL)。温度升高至 25℃。向有 机相层内加入 NaHCO3(10g， 120mmol) 在水 (110mL) 中的溶液。将混合物搅拌 10 分钟， 让各 层分离。其中含有产物的有机层不需任何进一步作用即用于下一步。
     步 骤 13C ： (1Z)-2-{[ 叔 丁 基 ( 二 甲 基 ) 甲 硅 烷 基 ] 氧 基 }-N ′ - 羟 基 乙 脒 (ethanimidamide)
     将 步 骤 13B 所 得 溶 液 加 热 至 55 ℃， 用 80 分 钟 加 入 50 ％ 羟 胺 水 溶 液 (40g， 606mmol)。向混合物内加入 MTBE(200mL)。用水洗涤有机层 3 次。将小量溶液浓缩至干用 于 NMR 测定。向有机层内加入丙酮 (50mL)。混合物不需任何进一步作用即用于下一步。 1 13
     H NMR(400MHz， CDCl3) ： δ4.86(bs， 2H)， 4.14(s， 2H)， 0.88(s， 9H)， 0.07(s， 6H) ； C
     NMR(400MHz， CDCl3) ： 153.5， 60.8， 25.9， 18.4， -5.3.
     步骤 13D ： (1Z)-2-{[ 叔丁基 ( 二甲基 ) 甲硅烷基 ] 氧基 }-N ′ -{[(3- 甲基苯 基 )- 羰基 ] 氧基 } 乙脒
     在 0℃将三乙胺加入步骤 13C 所得溶液内， 接着在 2.5 小时内加入在 MTBE(20mL)中 的 间 甲 苯 酰 氯 (44.8g， 290mmol)。 将 反 应 混 合 物 温 热 至 20 ℃。 向 混 合 物 内 加 入 水 (100mL)。分配混合物。将有机层先后用 NaHCO3 水溶液和盐水洗涤。将有机层在 40℃真空 浓缩成油性残留物， 不需进一步处理即用于最后一步。
     实 施 例 14 ： 2- 甲 基 -5-[4- 甲 基 -5-( 甲 基 {(1S)-1-[5-(3- 甲 基 苯 基 ) 异 噁 唑 -3- 基 ] 乙基 } 氨基 )-4H-1， 2， 4- 三唑 -3- 基 ] 哒嗪 -3(2H)- 酮
     使实施例 6.2 的标题化合物 (0.63g， 2.2mmol) 溶于 DMSO(11mL) 中， 加入实施例 12.4 的标题化合物 (0.54g， 2.5mmol)， 加入 2- 甲基丙 -2- 醇化物 (0.30g， 3.1mmol)， 在室温 下将混合物搅拌过夜。用反相 HPLC， Kromasil C8， 50.8×300mm， 50mL/min 纯化粗材料， 线 性梯度为 20 分钟内从 20％乙腈 / 水 (0.2％甲酸 ) 达到 80％乙腈， 冷冻干燥以得到标题化 合物 (0.25g， 27％ )。 1
     H NMR(400MHz， DMSO-d6) ： δ8.31(d， 1H)， 7.68(m， 2H)， 7.43(m， 1H)， 7.32(m， 1H)， 7.21(d， 1H)， 7.13(s， 1H)， 4.84(q， 1H)， 3.71(s， 3H)， 3.70(s， 3H)， 2.76(s， 3H)， 2.39(s， 3H)， 1.60(d， 3H).
     生物学评估
     在表达 mGluR5D 的细胞系中 mGluR5 拮抗的功能评定
     可用药理学活性的标准测定分析本发明化合物的特性。本领域众所周知谷氨 酸受体测定的实例， 如描述于 Aramori 等， Neuron 8 ： 757(1992)， Tanabe 等， Neuron 8 ： 169(1992)， Miller 等， J.Neuroscience 15 ： 6103(1995)， Balazs 等， J.Neurochemistry 69 ： 151(1997)。描述于这些公开的方法通过引用结合到本文中。方便地， 可通过测量表达 2+ mGluR5 的细胞中细胞内钙 [Ca ]i 动员的测定方法 (FLIPR)， 或者测量磷酸肌醇转换的另一 种测定法 (IP3) 研究本发明的化合物。
     FLIPR 测定
     将 如 WO97/05252 描 述 的 表 达 人 mGluR5d 的 细 胞 以 每 孔 100,000 个 细 胞 的 密 度 接 种 在 具 有 黑 色 侧 壁 的 胶 原 涂 覆 的 透 明 底 96 孔 板 上， 所述细胞培养在高糖 DMEM 与 Glutamax(31966-021)(500mL)、 10 ％ 透 析 的 胎 牛 血 清 (Hyclone#SH30079.03) (56mL)、 200μg/mL 潮 霉 素 B(Invitrogen 45-0430， 50mg/mL)(2.2mL)、 200μg/mL Zeocin(Invitrogen#R250-01 ； 100mg/mL)(1.1mL) 的混合物中， 在实验之前让细胞粘附过 夜。所有测定都在含有 146mM NaCl、 5mM KCl、 1mM MgCl2、 1mMCaCl2、 20mM HEPES、 1mg/mL 葡萄糖和 1mg/mL BSA Fraction IV(pH 7.4) 的缓冲液中进行。将 96 孔板中的细胞培养 物在上述缓冲液中负载 60 分钟， 该缓冲液包含 6μM 乙酰氧基甲酯形式的荧光钙显示剂 fluo-3(Molecular Probes， Eugene， Oregon) 在 0.025％聚氧丙烯酸 ( 一种专利的非离子型 表面活性剂多元醇 -CAS Number 9003-11-6) 中。在负载期之后， 除去 fluo-3 缓冲液， 用新 鲜测定缓冲液代替。用激发和发射波长分别为 488nm 和 562nm 的 0.700W 激光装置和 0.4 秒 CCD 照相机快门速度进行 FLIPR 实验。用存在于细胞板各孔中的 160μl 缓冲液开始各
     实验。来自拮抗剂板的 40μl 添加后是来自激动剂板的 50μL 添加。在 25℃下在黑暗中， 间隔 30 分钟分开加入拮抗剂和激动剂。两次添加后每次都立即以 1 秒间隔对荧光信号取 样 50 次， 接着以 5 秒间隔取样 3 次。测量对激动剂反应的峰高与取样期内背景荧光之间的 差异作为反应。用线性最小二乘拟合程序确定 IC50。
     IP3 测定
     另一种对 mGluR5d 的功能测定描述于 WO97/05252， 以磷脂酰肌醇转换为基础。受 体活化刺激磷脂酶 C 活性， 引起 1， 4， 5， 三磷酸肌醇 (IP3) 的形成增加。将在含 1μCi/ 孔 [3H] 肌 - 肌醇的培养基中稳定表达人 mGluR5d 的 GHEK 以 40×104 个细胞 / 孔接种在 24 孔 多聚赖氨酸涂层板上。将细胞培养过夜 (16 小时 )， 然后洗涤 3 次， 在 37℃在补充 1 单位 / mL 谷氨酸丙酮酸转氨酶和 2mM 丙酮酸盐的 HEPES 缓冲盐水 (146mM NaCl， 4.2mM KCl， 0.5mM MgCl2， 0.1％葡萄糖， 20mMHEPES， pH 7.4) 中培养 1 小时。将细胞在 HEPES 缓冲盐水中洗涤 1 次， 在含 10mM LiCl 的 HEPES 缓冲盐水中预培养 10 分钟。将一式两份化合物在 37℃培养 15 分钟， 然后加入谷氨酸 (80μM) 或 DHPG(30μM)， 再培养 30 分钟。通过在冰上加入 0.5mL 高氯酸 (5％ ) 终止反应， 在 4℃培养至少 30 分钟。将样品收集在 15mL 聚丙烯试管内， 用离 子交换树脂 (Dowex AG1-X8 甲酸盐形式， 200-400 目， BIORAD) 柱分离磷酸肌醇。首先通过 用 8mL 30mM 甲酸铵洗脱甘油磷脂酰肌醇分离磷酸肌醇。接着， 将总磷酸肌醇用 8mL700mM 甲酸铵 /100mM 甲酸洗脱， 收集在闪烁瓶中。然后将该洗脱物与 8mL 闪烁剂和 [3H] 肌醇掺 入混合， 用闪烁计数确定。将一式两份样品的 dpm 计数绘图， 用线性最小二乘拟合程序确定 IC50。 缩写
     BSA 牛血清白蛋白
     CCD 电荷耦合器件
     CRC 浓缩反应曲线
     DHPG 3， 5- 二羟基苯基甘氨酸
     DPM 每分衰变数
     EDTA 乙二胺四乙酸
     FLIPR 荧光成像读板仪
     GHEK GLAST- 含有人胚肾
     GLAST 谷氨酸 / 天冬氨酸转运体
     HEPES 4-(2- 羟基乙基 )-1- 哌嗪乙磺酸 ( 缓冲液 )
     IP3 三磷酸肌醇
     通常， 在以上测定中化合物活化的 IC50 值小于 10000nM。在本发明一方面， IC50 值 小于 1000nM。在本发明又一方面， IC50 值小于 100nM。
     确定在大鼠中的脑∶血浆比值
     在雌性 Sprague Dawley 大鼠中估计脑∶血浆比值。使化合物溶于水或另一种合 适溶媒中。为了确定脑∶血浆比值， 将化合物皮下或静脉内推注， 或者静脉内输注， 或者口 服给药。给药之后， 在预定时间点用心脏穿刺取血样。通过切开心脏处死大鼠， 立即保留大 脑。将血样收集在肝素化试管内， 在 30 分钟内离心， 以分离血细胞与血浆。将血浆转移至 96 孔板内， -20℃贮存待分析。将大脑分为两半， 各一半置于预涂焦油的管内， -20℃贮存待
     分析。 在分析之前， 解冻脑样品， 将 3mL/g 脑组织蒸馏水加入管内。 在冰浴中声处理脑样品， 直至样品均匀。用乙腈使脑和血浆样品沉淀。离心之后， 用 0.2％甲酸稀释上清液。在具有 快速梯度洗脱的短反相 HPLC 柱上进行分析， 用具有电喷射离子化和选择性反应监测 (SRM) 获取的三重四极杆仪器检测 MSMS。液 - 液提取可用作备选的样品净化方法。在加入合适缓 冲液之后， 通过振荡， 将样品提取至有机溶剂中。将等份试样的有机层转移至新的瓶内， 在 氮气流下蒸发至干。残留物复溶之后， 可将样品注射在 HPLC 柱上。
     通常， 本发明化合物受限于外周， 在大鼠中药物在脑内与在血浆中的比值＜ 0.5。 在一个实施方案中， 比值小于 0.15。
     体外稳定性的确定
     用 Sprague-Dawley 大鼠肝样品制备大鼠肝微粒体。人肝微粒体用人肝样品制备 或购自 BD Gentest。在辅因子 NADPH(1.0mmol/L) 的存在下， 在 37 ℃将化合物以 0.5mg/ mL 总微粒体蛋白浓度培养在 pH 7.4 的 0.1mol/L 磷酸钾缓冲液中。化合物的起始浓度是 1.0μmol/L。在开始培养之后 0、 7、 15、 20 和 30 分钟 5 个时间点取样分析。通过加入 3.5 倍体积乙腈立即停止收集样品中的酶活性。用 LC-MS 确定保留在各收集样品中的化合物浓 度。计算 In[mGluR5 抑制剂 ] 对培养时间 ( 分钟 ) 曲线的斜率作为 mGluR5 抑制剂的消除 速率常数 (k)。然后用消除速率常数计算 mGluR5 抑制剂的半衰期 (T 1/2)， 接着用其计算 mGluR5 抑制剂在肝微粒体中的固有清除率 (CLint) ：
     CLint. ＝ (ln2× 培养体积 )/(T 1/2× 蛋白浓度 ) ＝ μl/min/mg
     筛选抗 TLESR 的化合物活性
     使用经训练可站在 Pavlov 吊索中的两种性别成年 Labrador 犬。形成粘膜 - 皮肤 食管造瘘， 在实验之前让狗完全康复。
     动力测量
     简 言 之， 在 禁 食 但 自 由 供 应 水 约 17 小 时 之 后， 将多腔套管 / 侧孔装置 (Dentsleeve， Adelaide， South Australia) 引入食管造瘘处以测量胃、 下食管括约肌 (LES) 和食管压力。用低顺应性测压输注泵 (Dentsleeve，Adelaide， South Australia) 将水灌 入装置内。将充满空气的导管向口的方向传送以测量吞咽， 监测 pH 的锑电极位于 LES 上方 3cm。扩大所有信号并以 10Hz 获取在个人电脑上。
     当已获得禁食胃 /LES 相 III 运动活性的基线测量值时， 将安慰剂 (0.9％ NaCl) 或 测试化合物静脉内注射 (i.v.， 0.5mL/kg) 在前腿静脉中。i.v. 给药后 10 分钟， 将营养餐 (10％蛋白胨， 5％ D- 葡萄糖， 5％英脱利匹特， pH 3.0) 以 100mL/min 通过装置的中心腔注 入胃内， 总体积为 30mL/kg。注入营养餐后， 以 500mL/min 速率注入空气， 直至达到胃内压 为 10±1mmHg。然后用输注泵进一步注入空气或排出胃内空气将压力在整个实验过程都保 持在该水平。从开始注入营养素至结束充气的实验时间是 45 分钟。已证明该操作是触发 TLESR 的可靠方法。
     TLESR 的定义是下食管括约肌压力 ( 参照胃内压 ) 以＞ 1mmHg/s 的速率下降。松 弛开始之前的咽信号不应≤ 2s， 在这种情况下松弛被归为是由吞咽诱发的。LES 与胃的压 力差应小于 2mmHg， 完全松弛的持续时间长于 1 秒。
     下表显示样品结果 ：
     45