丝氨酸蛋白酶的抑制剂 优先权申明
本申请要求 2007 年 2 月 27 日提交的序号为 60/903,814 的美国临时申请的优先 权， 该申请因此以参考引用的形式全部并入本文中。 技术领域
本发明涉及抑制丝氨酸蛋白酶活性， 特别是丙型肝炎病毒 NS3-NS4A 蛋白酶活性 的化合物。 作为此类化合物， 其通过干扰丙型肝炎病毒的生命周期起作用， 也可以用来作为 抗病毒剂。本发明还涉及含有这些化合物的组合物， 用来以先体外后体内的方式使用或是 对感染 HCV 的患者施用。本发明还涉及通过施用含有本发明化合物的组合物治疗患者中的 HCV 感染的方法。 背景技术被丙型肝炎病毒 (“HCV” ) 感染是一个引人注目的人类医学问题。HCV 被认为 是大多数非甲、 非乙肝炎病例的致病因素， 估计全球血清阳性率为 3 ％ [A.Alberti 等， “Natural History of Hepatitis C” ， J.Hepatology， 31.， (suppl.1)， pp.17-24(1999)]。 仅 在 美 国， 就 有 近 四 百 万 人 可 能 被 感 染 [M.J.Alter et al.， ″ The Epidemiologyof Viral-Hepatitis-in the United-States ″， Gastroenterol.Clin.North Am.， 23， pp.437-455(1994) ； M.J.Alter ″ Hepatitis C Virus Infection in the United States，″ J.Hepatology， 31.， (Suppl.1)， pp.88-91(1999)]。
在初次接触 HCV 时， 只有约 20％被感染的个体发展成急性临床肝炎， 而其它人似 乎自发地消除了染感。然而， 在几乎 70％的情形， 这种病毒形成了坚持几十年的慢性感染 [S.Iwarson，″ The Natural Course of Chronic Hepatitis，″ FEMS Microbiology Reviews， 14， pp.201-204(1994) ； D.Lavanchy，″ Global Surveillance and Control of Hepatitis C，″ J.ViralHepatitis， 6， pp.35-47(1999)]。这通常造成肝部炎症的复发和 逐步恶化， 常常导致更严重的疾病状态， 例如肝硬化和肝细胞癌 [M.C.Kew， ″ Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma″， FEMSMicrobiology Reviews， 14， pp.211-220(1994) ； I.Saito et.al.， ″ Hepatitis C Virus Infection isAssociated with the Development 87， pp.6547-6549(1990)]。 of Hepatocellular Carcinoma，″ Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 遗憾的是， 对于慢性 HCV 的致人虚弱的发展， 还没有广泛有效的治疗方法。
HCV 基因组编码一种 3010-3033 个氨基酸的多蛋白 [Q.L.Choo， et.al.， ″ Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus. ″ Proc.Natl.Acad. Sci.USA， 88， pp.2451-2455(1991) ； N.Kato et al.， ″ Molecular Cloning of the Human HepatitisC Virus Genome From Japanese Patients with Non-A ， Non-B Hepatitis， ″ Proc.Natl.Acad.Sci.USA， 87， pp.9524-9528(1990) ； A.Takamizawa et.al.，″ Structure and Organization ofthe Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers， ″ J.Virol.， 65， pp.1105-1113(1991)]。HCV 非 结 构 (NS)
蛋 白 被 推 测 提 供 了 病 毒 复 制 必 需 的 催 化 工 具。 该 NS 蛋 白 是 由 多 蛋 白 经 蛋 白 酶 切 割 而 衍 生 形 成 的 [R.Bartenschlager et.al.， ″ Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C VirusEncodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions， ″ J.Virol.， 67， pp.3835-3844(1993) ； A.Grakoui et.al.，″ Characterization of the Hepatitis CVirus-Encoded Serine Proteinase ： Determination of Proteinase-Dependent PolyproteinCleavage Sites，″ J.Virol.， 67， pp.2832-2843(1993) ； A.Grakoui et.al.， ″ Expression andIdentification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products ， ″ J.Virol. ， 67 ， pp.1385-1395(1993) ； L.Tomei et.al.， ″ NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis Cvirus polyprotein″， J.Virol.， 67， pp.4017-4026(1993)]。
HCV NS 蛋白 3(NS3) 含有丝氨酸蛋白酶活性， 它帮助加工大多数病毒酶， 因此 被认为对于病毒复制和感染力是必不可少的。已知黄热病毒 NS3 蛋白酶中的突变会减 小 病 毒 的 感 染 力 [Chambers， T.J.et.al.， ″ Evidence that the N-terminal Domain of NonstructuralProtein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-SpecificCleavages in the Viral Polyprotein″， Proc.Natl. Acad.Sci.USA， 87， pp.8898-8902(1990)]。已经指出， NS3 的前 181 个氨基酸 ( 病毒多蛋 白的残基 1027-1207) 含有 NS3 的丝氨酸蛋白酶域， 它加工 HCV 多蛋白的所有四个下游位 点 [C.Lin et al.， ″ Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase ： Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics″， J.Virol.， 68， pp.8147-8157(1994)]。 HCV NS3 丝氨酸蛋白酶及其伴随辅因子 NS4A 帮助加工所有的病毒酶， 因此被认为 是病毒复制所必需的。这一加工似乎与人免疫缺陷病毒天冬氨酰蛋白酶进行的相似， 后者 也参与病毒酶的加工。抑制病毒蛋白加工的 HIV 蛋白酶抑制剂是人类的有强效的抗病毒 剂， 这表明打断病毒生命周期的这一阶段产生了治疗活性药物。因此 HCV NS3 丝氨酸蛋白 酶也是药物开发的吸引人的目标。
目前还没有任何令人满意的抗 HCV 药物或治疗方法。直到最近， 仅有的被确认 的治疗 HCV 疾病的方法是干扰素治疗。但是， 干扰素有明显的副作用 [M.A.Walker et al.， ″ Hepatitis C Virus ： AnOverview of Current Approaches and Progress， ″ DDT， 4， pp.518-29(1999) ； D.Moradpouret al.， ″ Current and Evolving Therapies for Hepatitis C， ″ Eur.J.Gastroenterol.Hepatol.， 11， pp.1199-1202(1999) ； H.L.A.Janssen et al. ″ Suicide Associated with Alfa-InterferonTherapy for Chronic Viral Hepatitis， ″ J.Hepatol.， 21， pp.241-243(1994) ； P.F.Renault et al.， ″ Side Effects of Alpha Interferon， ″ Seminars in Liver Disease， 9， pp.273-277.(1989)]， 而且只在部分 ( 约 25％ ) 病例中产生长期的缓解作用 [O.Weiland， ， FEMSMicrobiol. “Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”
Rev.， 14， pp 279-288(1994)]。 近 来 引 入 聚 乙 二 醇 化 的 干 扰 素 (PEG) 和利巴韦林与聚乙二醇化干扰素
和的联合疗法， 只造成缓解率的不太大的提高和副作用的部分减少。另外， 有效的抗 HCV 疫苗的前景仍不明朗。 因此， 需要更有效的抗 HCV 疗法。此类抑制剂应具有作为蛋白酶抑制剂， 特别是作 为丝氨酸蛋白酶抑制剂， 尤其是作为 HCV NS3 蛋白酶抑制剂的治疗潜力。特别是， 此类化合物可用来作为抗病毒剂， 尤其是作为抗 HCV 剂。 发明概要
本发明涉及式 I 化合物或 其 可 药 用 的 盐。
R1是 -ZAR8， 其中各 ZA 独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直链的 C1-12 脂烃链， 其中 ZA 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRA-， -C(O)NRANRA-， -C(O) A A A A A A O- ，-NR C(O)O- ，-O- ，-NR C(O)NR - ，-NR NR - ，-S- ，-SO- ，-SO 2 - ，-NR - ，-SO 2 NR A - ， 条件是， -O-、 -NRANRA、 -NRAC(O)NRA- 或 -NRASO2NRA- 不与式 I 的氮环原子 或 -NRASO2NRA- 替代， 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2 或 -OCF3。各 RA 独立地是氢， 任选取代的 直接键合。各 R8 独立地是 RA、 脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。 B B
R2 和 R3 是 -Z R9， 其中各 Z 独立地是一个键或任选取代的支化或直链 C1-6 脂烃 B 链， 其中 Z 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRB-， -C(O) B B B B B B B B B NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NR - 或 B B B B NR SO2NR - 替代。各 R9 独立地是 R 、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。 或者是， R2 和 R3 合起来形成一个氧基。
A 是 -O- 或 -CR6R7-， 其 中 各 R6 和 R7 是 -ZCR10， 其 中 的 各 ZC 独 立 地 是 一 个 键 或 是 任 选 取 代 的 支 化 或 直 链 的 C1-6 脂 烃 链， 其 中 ZC 的 最 多 3 个 碳 单 元 可 任 选 地 和 独 立 地 被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRC， -C(O)NRCNRC-， -C(O)O-， -NRCC(O)O-， -NRCC(O)NRC-， -NRCNRC-， -S-， -SO-， -SO2-， -NRC-， -SO2NRC 或 -NRCSO2NRC- 替 代。 各 R10 独 立 地 是 RC、 卤 C 素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环 基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
R4 是 -ZDR11， 其中各 ZD 独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的 C1-12 脂 烃链， 其中 ZD 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRD， -C(O) D D D D D D D D NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NRD - 或 -NRDSO2NRD- 替代， 条件是， -SO-、 -SO2- 或 -SO2NRD 不直接键合到与 R4 相邻的羰基上。各 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RD 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， R11 独立地是 RD、 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。 E E
R5 是 -Z R12， 其中各 Z 独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的 C1-12 脂烃 E 链， 其中 Z 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRE-， -C(O) E E E E E E E E NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NRE
- 或 -NRESO2NRE- 替代。各 R12 独立地是 RE、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RE 独立地 是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任 选取代的杂芳基。
在一些方面， 本发明的特征在于一种药物组合物， 其中含有能抑制丝氨酸蛋白酶 的有效数量的式 I 化合物或其可药用的盐， 以及可药用的载体、 辅剂或赋形剂。该组合物 可以包含另一种药物， 选自免疫调节剂、 抗病毒剂、 第二种 HCV 蛋白酶抑制剂、 HCV 生命周期 中其它目标的抑制剂、 细胞色素 P-450 抑制剂， 或它们的组合。免疫调节剂是 α-、 β- 或 γ- 干扰素或胸腺素， 所述抗病毒剂是利巴韦林、 金刚烷胺或替比夫定 ； 或者所述的 HCV 生 命周期中其它目标的抑制剂是 HCV 解旋酶、 聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。 细胞色素 P-450 抑制剂可以是利托那韦。
在其它方面， 一种抑制丝氨酸蛋白酶的活性的方法包括使丝氨酸蛋白酶与式 I 化 合物接触的步骤。该丝氨酸蛋白酶可以是一种 HCVNS3 蛋白酶。该方法还包括通过施用式 I 化合物治疗患者中的 HCV 感染。该方法还可以包括向所述患者施用另一种药物， 该药物选 自免疫调节剂、 抗病毒剂、 第二种 HCV 蛋白酶抑制剂、 HCV 生命周期中其它目标的抑制剂或 它们的组合， 其中该另一种药物以与丝氨酸蛋白酶抑制剂相同的剂型或以另外的剂型施用 给所述患者。免疫调节剂是 α-、 β- 或 γ- 干扰素或胸腺素 ； 所述抗病毒剂是利巴韦林或 金刚烷胺 ； 或者所述的 HCV 生命周期中其它目标的抑制剂是 HCV 解旋酶、 聚合酶或金属蛋白 酶的抑制剂。
在其它的方面， 一种消除或减少生物样品或者医学或实验室设备的 HCV 污染的方 法包括使该生物样品或者医学或实验室设备与式 I 化合物接触的步骤。所述样品或设备可 以选自血液、 其它体液、 生物组织、 手术器械、 手术服、 实验室仪器、 实验服、 血液或其它体液 收集装置、 血液或其它体液储存材料。
本文中所述的本发明化合物还显示出优越的 PK 性能和 / 或增强的效力。
本发明还涉及含有以上化合物的组合物及其应用， 制备式 I 化合物的方法， 以及 测定化合物的丝氨酸蛋白酶活性的方法。 这些组合物可以用来对打算插入到患者中的装置 进行预处理， 处理生物样品， 或直接施用给患者。在每种情形， 组合物都将被用来减小 HCV 感染的危险或严重性。
在其它方面， 本发明的特色在于以下一般地和具体地描述的某些化合物。这些具 体的描述只是说明性的， 并不意味着限制化合物或其应用的范围。 发明详述 I. 定义 对本发明而言， 化学元素是按照元素周期表 (CAS 版， Handbook of Chemistry and Physics， 第 75 版 ) 确 认 的。 另 外， 有机化学的一般原理描述在以下专著 中： ″ OrganicChemistry″， Thomas Sorrell， University Science Books， Sausalito ： 1999， and ″ March ′ sAdvanced Organic Chemistry ″， 5th Ed.， Ed. ： Smith， M.B.and March， J.， John Wiley & Sons， New York ： 2001， 这些专著的全部内容都以参考引用的方式 并入本文中。
如本文所述， 本发明的化合物可以任选地被一个或多个取代基取代， 例如以上一 般地示例说明的， 或作为本发明的特定的类、 小类和物种举例说明的。
本文中使用的术语 “脂烃基” 包括术语烷基、 烯基、 炔基， 它们均可任选地如下所述 地被取代。
本文中使用的术语 “烷基” 指含有 1-8 个 ( 例如， 1-12、 1-6 或 1-4 个 ) 碳原子的 饱和的脂烃基。烷基可以是直链或支链。烷基的实例包括， 但不限于， 甲基、 乙基、 丙基、 异 丙基、 丁基、 异丁基、 仲丁基、 叔丁基、 正戊基、 正庚基或 2- 乙基己基。烷基可以被一个或多 个取代基取代 ( 即， 任选被取代 )， 例如卤素、 磷酰基、 脂环基 [ 例如环烷基或环烯基 ]、 杂脂 环基 [ 例如杂环烷基或杂环烯基 ]、 芳基、 杂芳基、 烷氧基、 芳酰基、 杂芳酰基、 酰基 [ 例如， ( 脂烃 ) 羰基、 ( 脂环 ) 羰基或 ( 杂脂环 ) 羰基 ]、 硝基、 氰基、 酰氨基 [ 例如， ( 环烷基烷 基 ) 羰基氨基、 芳基羰基氨基、 芳烷基羰基氨基、 ( 杂环烷基 ) 羰基氨基、 ( 杂环烷基烷基 ) 羰基氨基、 杂芳基羰基氨基、 杂芳烷基羰基氨基、 烷氨基羰基、 环烷基氨基羰基、 杂环烷基氨 基羰基、 芳氨基羰基或杂芳基氨基羰基 ]、 氨基 [ 例如， 脂烃基胺基、 脂环基氨基或杂脂环基 氨基 ]、 磺酰基 [ 例如， 脂烃基 -SO2-]、 亚磺酰基、 硫烷基、 亚磺酰氧基、 脲、 硫脲、 氨磺酰、 磺 酰胺、 氧基、 羧基、 氨甲酰、 脂环烃氧基、 杂脂环烃氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳烷氧基、 杂芳基 烷氧基、 烷氧羰基、 烷基羰氧基或羟基。取代的烷基的一些实例包括， 但不限于， 羧烷基 ( 例 如 HOOC- 烷基， 烷氧羰基烷基和烷基羰氧基烷基 )， 氰烷基、 羟烷基、 烷氧基烷基、 酰基烷基、 芳烷基、 ( 烷氧基芳基 ) 烷基、 ( 磺酰氨基 ) 烷基 ( 例如 ( 烷基 -SO2- 氨基 ) 烷基 )、 氨基烷 基、 酰氨基烷基、 ( 脂环基 ) 烷基或卤代烷基。
这里使用的 “烯基” 一词是指含 2-8( 例如， 2-12、 2-6 或 2-4) 个碳原子和至少一个 双键的脂烃基。像烷基一样， 烯基可以是直链或支链。烯基的实例包括， 但不限于， 烯丙基、 异丙烯基、 2- 丁烯基和 2- 己烯基。烯基可以任选地被一个或多个取代基取代， 例如卤素、 磷酰基、 脂环基 [ 例如， 环烷基或环烯基 ]、 杂脂环基 [ 例如， 杂环烷基或杂环烯基 ]、 芳基、 杂芳基、 烷氧基、 芳酰基、 杂芳酰基、 酰基 [ 例如， ( 脂烃基 ) 羰基， ( 脂环基 ) 羰基或 ( 杂脂 环基 ) 羰基 ]、 硝基、 氰基、 酰氨基 [ 例如， ( 环烷基烷基 ) 羰基氨基、 芳基羰基氨基、 芳烷基 羰基氨基、 ( 杂环烷基 ) 羰基氨基、 ( 杂环烷基烷基 ) 羰基氨基、 杂芳基羰基氨基、 杂芳烷基 羰基氨基、 烷氨基羰基、 环烷基氨基羰基、 杂环烷基氨基羰基、 芳基氨基羰基或杂芳基氨基 羰基 ]、 氨基 [ 例如， 脂肪氨基、 脂环基氨基、 杂脂环基氨基或脂烃基磺酰氨基 ]、 磺酰基 [ 例 如， 烷基 -SO2-， 脂环基 -SO2- 或芳基 -SO2-]、 亚磺酰基、 硫烷基、 亚磺酰氧基、 脲、 硫脲、 氨磺 酰基、 磺酰胺基、 氧基、 羧基、 氨甲酰基、 脂环烃氧基、 杂脂环烃氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳烷 基氧基、 杂芳基烷氧基、 烷氧羰基、 烷基羰氧基或羟基。 取代的烯基的一些实例包括， 但不限 于， 氰基烯基、 烷氧基烯基、 酰基烯基、 羟基烯基、 芳基烯基、 ( 烷氧基芳基 ) 烯基、 ( 磺酰氨 基 ) 烯基 ( 例如 ( 烷基 -SO2- 氨基 ) 烯基 )、 氨基烯基、 酰氨基烯基、 ( 脂环基 ) 烯基或卤代 烯基。
这里使用的 “炔基” 一词指含有 2-8( 例如 2-12、 2-6 或 2-4) 个碳原子和至少一个 三键的脂烃基。炔基可以是直链或支链。炔基的实例包括， 但不限于， 炔丙基和丁炔基。炔 基可以任选地被一个或多个取代基取代， 例如芳酰基、 杂芳酰基、 烷氧基、 环烷氧基、 杂环烷 氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳基烷氧基、 硝基、 羧基、 氰基、 卤素、 羟基、 磺基、 巯基、 硫烷基 [ 例 如， 脂烃基硫烷基或脂环基硫烷基 ]、 亚磺酰基 [ 例如， 脂烃基亚磺酰基或脂环基亚磺酰基 ]、 磺酰基 [ 例如脂烃基 -SO2-， 脂族胺基 -SO2- 或脂环基 -SO2-]、 酰胺基 [ 例如， 氨基羰基、 烷氨基羰基、 烷基羰基氨基、 环烷基氨基羰基、 杂环烷基氨基羰基、 环烷基羰基氨基、 芳氨基 羰基、 芳基羰基氨基、 芳烷基羰基氨基、 ( 杂环烷基 ) 羰基氨基、 ( 环烷基烷基 ) 羰基氨基、 杂芳烷基羰基氨基、 杂芳基羰基氨基或杂芳基氨基羰基 ]、 脲、 硫脲、 氨磺酰基、 磺酰氨基、 烷 氧羰基、 烷基羰氧基、 脂环基、 杂脂环基、 芳基、 杂芳基、 酰基 [ 例如， ( 脂环基 ) 羰基或 ( 杂 脂环基 ) 羰基 ]、 氨基 [ 例如， 脂族胺基 ]、 亚磺酰氧基、 氧基、 羧基、 氨甲酰基、 ( 脂环基 ) 氧 基、 ( 杂脂环基 ) 氧基或 ( 杂芳基 ) 烷氧基。
这里使用的术语 “酰胺基” 包括 “氨基羰基” 和 “羰基氨基” 。这些名词在单独使用 X 或是与另一基团一起使用时， 当用在末端时， 是指诸如 -N(R )-C(O)-RY 或 -C(O)-N(RX)2 等酰 胺基团 ； 当用在内部时， 是指 -C(O)-N(RX)- 或 -N(RX)-C(O)- ； 其中 RX 和 RY 的定义如下。酰 胺基的实例包括烷基酰胺基 ( 例如烷基羰基氨基或烷基氨基羰基 )， ( 杂脂环基 ) 酰胺基， ( 杂芳烷基 ) 酰胺基， ( 杂芳基 ) 酰胺基， ( 杂环烷基 ) 烷基酰胺基， 芳基酰胺基， 芳烷基酰 胺基， ( 环烷基 ) 烷基酰胺基或环烷基酰胺基。
本文使用的术语 “氨基” 指 -NRXRY， 其中 RX 和 RY 均独立地是氢、 脂烃基、 脂环基、 ( 脂环基 ) 脂烃基、 芳基、 芳基脂烃基、 杂脂环基、 ( 杂脂环基 ) 脂烃基、 杂芳基、 羧基、 硫烷 基、 亚磺酰基、 磺酰基、 ( 脂烃基 ) 羰基、 ( 脂环基 ) 羰基、 (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基、 芳基羰 基、 ( 芳基脂烃基 ) 羰基、 ( 杂脂环基 ) 羰基、 (( 杂脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基、 ( 杂芳基 ) 羰基 或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基， 它们均为本文中的定义， 并可任选地被取代。氨基的实例包括烷 氨基、 二烷基氨基或芳氨基。当 “氨基” 一词不是末端基团时 ( 例如烷基羰基氨基 )， 它表 X X 示 -NR -。R 具有与以上定义的相同含义。
本文中的术语 “芳基” 当单独使用或者作为像 “芳烷基” 、 “芳烷氧基” 或 “芳氧基烷 基” 等更大基团的一部分使用时， 是指单环 ( 例如苯基 )、 双环 ( 例如茚基、 萘基、 四氢萘基、 四氢茚基 ) 和三环 ( 例如芴基、 四氢芴基或四氢蒽基、 蒽基 ) 环系， 其中单环环系是芳香环， 或者在双环或三环环系中至少一个环是芳香环。双环和三环基团包括苯并稠合的 2-3 元 碳环环系。例如， 苯并稠合基团包括与两个或更多的 C4-8 碳环部分稠合的苯基。芳基可任 选地被一个或多个取代基取代， 包括脂烃基 [ 例如， 烷基、 烯基或炔基 ]， 脂环基， ( 脂环基 ) 脂烃基， 杂脂环基， ( 杂脂环基 ) 脂烃基， 芳基， 杂芳基， 烷氧基， ( 脂环基 ) 氧基， ( 杂脂环 基 ) 氧基， 芳氧基， 杂芳氧基， ( 芳基脂烃基 ) 氧基， ( 杂芳基脂烃基 ) 氧基， 芳酰基， 杂芳酰 基， 氨基， 氧基 ( 在苯并稠合的双环或三环芳基的非芳族碳环上 )， 硝基， 羧基， 酰胺基， 酰基 [ 例如， 脂烃基羰基、 ( 脂环基 ) 羰基、 (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基、 ( 芳基脂烃基 ) 羰基、 (杂 脂环基 ) 羰基、 (( 杂脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基 ]， 磺酰基 [ 例如， 脂 烃基 -SO2- 或氨基 -SO2-]， 亚磺酰基 [ 例如， 脂烃基 -S(O)- 或脂环基 -S(O)-]， 硫烷基 [ 例 如， 脂烃基 -S-]， 氰基， 卤素， 羟基， 巯基， 亚磺酰氧基， 脲， 硫脲， 氨磺酰基， 磺酰胺基或氨甲 酰基。或者是， 芳基可以是未被取代的。
取代的芳基的非限制性实例包括卤代芳基 [ 例如一、 二 ( 如对， 间 - 二卤代芳基 ) 和三卤代烷基 ] ； ( 羧基 ) 芳基 [ 例如， ( 烷氧羰基 ) 芳基、 (( 芳烷基 ) 羰氧基 ) 芳基和 ( 烷 氧羰基 ) 芳基 ] ； ( 酰氨基 ) 芳基 [ 例如， ( 氨基羰基 ) 芳基， ((( 烷氨基 ) 烷基 ) 氨基羰基 ) 芳基， ( 烷基羰基 ) 氨基芳基， ( 芳氨基羰基 ) 芳基和 ((( 杂芳基 ) 氨基 ) 羰基 ) 芳基 ] ； 氨 基芳基 [ 例如， (( 烷磺酰基 ) 氨基 ) 芳基或 (( 二烷基 ) 氨基 ) 芳基 ] ； ( 氰基烷基 ) 芳基 ；( 烷氧基 ) 芳基 ； ( 氨磺酰基 ) 芳基 [ 例如， ( 氨基磺酰基 ) 芳基 ] ； ( 烷磺酰基 ) 芳基 ； (氰 基 ) 芳基 ； ( 羟烷基 ) 芳基 ； (( 烷氧基 ) 烷基 ) 芳基 ； ( 羟基 ) 芳基， (( 羧基 ) 烷基 ) 芳基 ； ((( 二烷基 ) 氨基 ) 烷基 ) 芳基 ； ( 硝基烷基 ) 芳基 ； ((( 烷基磺酰基 ) 氨基 ) 烷基 ) 芳基 ； (( 杂脂环基 ) 羰基 ) 芳基 ； (( 烷磺酰基 ) 烷基 ) 芳基 ； ( 氰基烷基 ) 芳基 ； ( 羟烷基 ) 芳基 ； ( 烷基羰基 ) 芳基 ； 烷基芳基 ； ( 三卤烷基 ) 芳基 ； 对 - 氨基 - 间 - 烷氧羰基芳基 ； 对-氨 基 - 间 - 氰基芳基 ； 对 - 卤代 - 间 - 氨基芳基 ； 或 ( 间 ( 杂脂环基 )- 邻 ( 烷基 ) 芳基。
本文中使用的术语 “芳基脂烃基” ， 例如 “芳烷基” ， 是指被芳基取代的脂烃基团 ( 例如 C1-4 烷基 )。 “脂烃基” 、 “烷基” 和 “芳基” 如本文中定义。芳基脂烃基 ( 如芳烷基 ) 的一个实例是苄基。
在本文中使用时， “芳烷基” 是指被芳基取代的烷基 ( 例如 C1-4 烷基 )。 “烷基” 和 “芳基” 均已定义如上。芳烷基的一个实例是苄基。芳烷基可任选地被一个或多个取代基取 代， 例如脂烃基 [ 如， 烷基、 烯基或炔基， 包括羧烷基、 羟烷基或卤烷基， 例如三氟甲基 ]， 脂 环基 [ 例如， 环烷基或环烯基 ]， ( 环烷基 ) 烷基， 杂环烷基， ( 杂环烷基 ) 烷基， 芳基， 杂芳 基， 烷氧基， 环烷氧基， 杂环烷氧基， 芳氧基， 杂芳氧基， 芳烷氧基， 杂芳基烷氧基， 芳酰基， 杂 芳酰基， 硝基， 羧基， 烷氧羰基， 烷基羰氧基， 酰胺基 [ 例如， 氨基羰基， 烷基羰基氨基， 环烷 基羰基氨基， ( 环烷基烷基 ) 羰基氨基， 芳基羰基氨基， 芳烷基羰基氨基， ( 杂环烷基 ) 羰基 氨基， ( 杂环烷基烷基 ) 羰基氨基， 杂芳基羰基氨基， 或杂芳烷基羰基氨基 ]， 氰基， 卤素， 羟 基， 酰基， 巯基， 烷基硫烷基， 亚磺酰氧基， 脲， 硫脲， 氨磺酰基， 磺酰胺基， 氧基或氨甲酰基。 本文中使用的术语 “双环环系” 包括形成两个环的 8-12( 例如 9、 10 或 11) 元的结 构， 其中两个环有至少一个共用的原子 ( 例如共用 2 个原子 )。双环环系包括双环脂烃基 ( 例如， 双环烷基或双环烯基 )、 双环杂脂烃基、 双环芳基和双环杂芳基。
当在本文中使用时， “脂环基” 包括 “环烷基” 和 “环烯基” ， 它们均可任选地如下所 述地被取代。当用于本文时， “环烷基” 指饱和的 3-10( 例如 5-10) 个碳原子的碳环单环或 双环 ( 稠合或桥接的 ) 环系。环烷基的实例包括环丙基、 环丁基、 环戊基、 环己基、 环庚基、 金刚烷基、 降冰片烷基、 五环辛基、 八氢化茚基、 十氢萘基、 双环 [3.2.1] 辛基、 双环 [2.2.2] 辛基、 双环 [3.3.1] 壬基、 双环 [3.3.2] 癸基、 双环 [2.2.2] 辛基、 或 (( 氨基羰基 ) 环烷基 ) 环烷基。本文中使用的 “环烯基” 指有一个或多个双键的非芳族的 3-10( 例如 4-8) 个碳原 子的碳环。环烯基的实例包括环戊烯基， 1， 4- 环己二烯基， 环庚烯基， 环辛烯基， 六氢化茚 基， 八氢萘基， 环己烯基， 环戊烯基， 双环 [2.2.2] 辛烯基或双环 [3.3.1] 壬烯基。环烷基 或环烯基可以任选地被一个或多个取代基取代， 例如磷酰基、 脂烃基 [ 例如， 烷基、 烯基或 炔基 ]、 脂环基、 ( 脂环基 ) 脂烃基、 杂脂环基、 ( 杂脂环基 ) 脂烃基、 芳基、 杂芳基、 烷氧基、 ( 脂环基 ) 氧基、 ( 杂脂环基 ) 氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 ( 芳基脂烃基 ) 氧基、 ( 杂芳基脂烃 基 ) 氧基、 芳酰基、 杂芳酰基、 氨基、 酰氨基 [ 例如， ( 脂烃基 ) 羰基氨基， ( 脂环基 ) 羰基氨 基， (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基氨基、 ( 芳基 ) 羰基氨基、 ( 芳基脂烃基 ) 羰基氨基、 ( 杂脂环 基 ) 羰基氨基、 (( 杂脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基氨基、 ( 杂芳基 ) 羰基氨基或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基氨基 ]、 硝基、 羧基 [ 例如， HOOC-、 烷氧羰基或烷基羰氧基 ]、 酰基 [ 例如， ( 脂环基 ) 羰 基、 (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基、 ( 芳基脂烃基 ) 羰基、 ( 杂脂环基 ) 羰基、 (( 杂脂环基 ) 脂烃 基 ) 羰基或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基 ]、 氰基、 卤素、 羟基、 巯基、 磺酰基 [ 例如， 烷基 -SO2- 和 芳基 -SO2-]、 亚磺酰基 [ 例如， 烷基 -S(O)-]、 硫烷基 [ 例如， 烷基 -S-]、 亚磺酰氧基、 脲、 硫
脲、 氨磺酰基、 磺酰胺基、 氧基或氨甲酰基。
在本文中使用时， 术语 “杂脂环基” 包括杂环烷基和杂环烯基， 它们均可任选地如 下所述地被取代。
在本文中使用时， “杂环烷基” 指 3-10 元的单或双环 ( 稠合或桥接的 )( 例如 5-10 元单环或双环 ) 饱和环结构， 其中一个或多个环原子是杂原子 ( 例如， N、 O、 S 或其组合 )。 杂环烷基的实例包括哌啶基、 哌嗪基、 四氢吡喃基、 四氢呋喃基、 1， 4- 二氧杂环戊烷基、 1， 4- 二硫杂环己烷基、 1， 3- 二氧杂环戊烷基、 噁唑烷基、 异噁唑烷基、 吗啉基、 硫代吗啉基、 八 氢苯并呋喃基、 八氢苯并吡喃基、 八氢硫代苯并吡喃基、 八氢吲哚基、 八氢吡啶基、 十氢喹啉 基、 八氢苯并 [b] 噻吩基、 2- 氧杂双环 [2.2.2] 辛基、 1- 氮杂双环 [2.2.2] 辛基、 3- 氮杂双 3.7 环 [3.2.1] 辛基和 2， 6- 二氧杂三环 [3.3.1.0 ] 壬基。单环的杂环烷基可以与一个苯基 部分稠合形成结构， 例如四氢异喹啉， 它被归入杂芳基一类。在本文中使用时， “杂环烯基” 指有一个或多个双键的单环或双环 ( 例如 5-10 元的单或双环 ) 非芳族环结构， 其中一个或 多个环原子是杂原子 ( 例如 N， O 或 S)。单环和双环杂脂环基按照标准的化学命名法编号。
杂环烷基或杂环烯基可以任选地被一个或多个取代基取代， 例如磷酰基、 脂烃基 [ 如， 烷基、 烯基或炔基 ]、 脂环基、 ( 脂环基 ) 脂烃基、 杂脂环基、 ( 杂脂环基 ) 脂烃基、 芳基、 杂芳基、 烷氧基、 ( 脂环基 ) 氧基、 ( 杂脂环基 ) 氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 ( 芳基脂烃基 ) 氧 基、 ( 杂芳基脂烃基 ) 氧基、 芳酰基、 杂芳酰基、 氨基、 酰胺基 [ 例如， ( 脂烃基 ) 羰基氨基、 ( 脂环基 ) 羰基氨基、 (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基氨基、 ( 芳基 ) 羰基氨基、 ( 芳基脂烃基 ) 羰 基氨基、 ( 杂脂环基 ) 羰基氨基、 (( 杂脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基氨基、 ( 杂芳基 ) 羰基氨基、 或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基氨基 ]、 硝基、 羧基 [ 例如 HOOC-、 烷氧羰基或烷基羰氧基 ]、 酰基 [ 例 如， ( 脂环基 ) 羰基、 (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基、 ( 芳基脂烃基 ) 羰基、 ( 杂脂环基 ) 羰基、 (( 杂脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基 ]、 硝基、 氰基、 卤素、 羟基、 巯基、 磺酰 基 [ 例如， 烷磺酰基或芳磺酰基 ]、 亚磺酰基 [ 例如， 烷基亚磺酰基 ]、 硫烷基 [ 例如， 烷基硫 烷基 ]、 亚磺酰氧基、 脲、 硫脲、 氨磺酰基、 磺酰胺基、 氧基或氨甲酰基。
本文中使用的 “杂芳基” 一词， 是指有 4 至 15 个环原子的单环、 双环或三环环系， 其中一个或多个环原子是杂原子 ( 例如， N、 O、 S 或其组合 )， 并且其中的单环环系是芳族环， 或者双环或三环环系中至少一个环是芳族环。杂芳基包括有 2 至 3 个环的苯并稠合的环。 例如， 苯并稠合基团包括与 1 或 2 个 4-8 元的杂脂环基苯并稠合基团 ( 例如， 吲嗪基、 吲哚 基、 异吲哚基、 3H- 吲哚基、 二氢吲哚基、 苯并 [b] 呋喃基、 苯并 [b] 噻吩基、 喹啉基或异喹啉 基 )。杂芳基团的一些实例是氮杂环丁烷基、 吡啶基、 1H- 吲唑基、 呋喃基、 吡咯基、 噻吩基、 噻唑基、 噁唑基、 咪唑基、 四唑基、 苯并呋喃基、 异喹啉基、 苯并噻唑基、 呫吨基、 噻吨基、 吩噻 嗪基、 二氢吲哚基、 苯并 [1， 3] 二氧杂环戊烯基、 苯并 [b] 呋喃基、 苯并 [b] 噻吩基、 吲唑基、 苯并咪唑基、 苯并噻唑基、 嘌呤基、 噌啉基、 喹啉基、 喹唑啉基、 酞嗪基、 喹喔啉基、 异喹啉基、 4H- 喹嗪基、 苯并 -1， 2， 5- 噻二唑基或 1， 8- 萘啶基。
单环杂芳基包括， 但不限于， 呋喃基、 噻吩基、 2H- 吡咯基、 吡咯基、 噁唑基、 噻唑基、 咪唑基、 吡唑基、 异噁唑基、 异噻唑基、 1， 3， 4- 噻二唑基、 2H- 吡喃基、 4H- 吡喃基、 吡啶基、 哒 嗪基、 嘧啶基、 吡唑基、 吡嗪基或 1， 3， 5- 三嗪基。单环杂芳基按照标准化学命名法编号。
双环杂芳基包括， 但不限于， 吲嗪基、 吲哚基、 异吲哚基、 3H- 吲哚基、 吲哚啉基、 苯 并 [b] 呋喃基、 苯并 [b] 噻吩基、 喹啉基、 异喹啉基、 吲嗪基、 异吲哚基、 吲哚基、 苯并 [b] 呋喃基、 苯并 [b] 噻吩基、 吲唑基、 苯并咪唑基、 苯并噻唑基、 嘌呤基、 4H- 喹嗪基、 喹啉基、 异喹 啉基、 噌啉基、 酞嗪基、 喹唑啉基、 喹喔啉基、 1， 8- 萘啶基或蝶啶基。双环杂芳基按照标准的 化学命名法编号。
杂芳基可任选地被一个或多个取代基取代， 例如脂烃基 [ 如， 烷基、 烯基或炔基 ]， 脂环基， ( 脂环基 ) 脂烃基， 杂脂环基， ( 杂脂环基 ) 脂烃基， 芳基， 杂芳基， 烷氧基， ( 脂环 基 ) 氧基， ( 杂脂环基 ) 氧基， 芳氧基， 杂芳氧基， ( 芳基脂烃基 ) 氧基， ( 杂芳基脂烃基 ) 氧 基， 芳酰基， 杂芳酰基， 氨基， 氧基 ( 在双环或三环杂芳基的非芳族碳环或杂环上 )， 羧基， 酰 氨基， 酰基 [ 例如， 脂烃基羰基、 ( 脂环基 ) 羰基、 (( 脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基， ( 脂烃基 ) 羰 基、 ( 杂脂环基 ) 羰基， (( 杂脂环基 ) 脂烃基 ) 羰基， 或 ( 杂芳基脂烃基 ) 羰基 ]， 磺酰基 [ 例如， 脂烃基磺酰基或氨基磺酰基 ]， 亚磺酰基 [ 例如， 脂烃基亚磺酰基 ]， 硫烷基 [ 例如， 脂烃基硫烷基 ]， 硝基， 氰基， 卤素， 羟基， 巯基， 亚磺酰氧基， 脲， 硫脲， 氨磺酰基， 磺酰胺基或 氨甲酰基。或者， 杂芳基可以是未被取代的。
取代的杂芳基的非限制性实例包括 ( 卤 ) 杂芳基 [ 例如， 一和二 ( 卤 ) 杂芳基 ]， ( 羧基 ) 杂芳基 [ 例如， ( 烷氧羰基 ) 杂芳基 ]， 氰基杂芳基， 氨基杂芳基 [ 例如， (( 烷磺酰 基 ] 氨基 ) 杂芳基和 (( 二烷基 ) 氨基 ) 杂芳基 ]， ( 酰氨基 ) 杂芳基 [ 例如， 氨基羰基杂芳 基， (( 烷基羰基 ) 氨基 ) 杂芳基， (((( 烷基 ) 氨基 ) 烷基 ) 氨基羰基 ) 杂芳基， ((( 杂芳 基 ) 氨基 ) 羰基 ) 杂芳基， (( 杂脂环基 ) 羰基 ) 杂芳基和 (( 烷基羰基 ) 氨基 ) 杂芳基 ]， ( 环烷基 ) 杂芳基， ( 烷氧基 ) 杂芳基， ( 氨磺酰 ) 杂芳基 [ 例如， ( 氨磺酰基 ) 杂芳基 ]， ( 磺酰基 ) 杂芳基 [ 例如， ( 烷磺酰基 ) 杂芳基 ]， ( 羟烷基 ) 杂芳基， ( 烷氧基烷基 ) 杂芳 基， ( 羟基 ) 杂芳基， (( 羧基 ) 烷基 ) 杂芳基， (( 二烷基 ) 氨基 ) 烷基 ) 杂芳基， ( 杂脂环 基 ) 杂芳基， ( 脂环基 ) 杂芳基， ( 硝基烷基 ) 杂芳基， ((( 烷基磺酰基 ) 氨基 ) 烷基 ) 杂芳 基， (( 烷基磺酰基 ) 烷基 ) 杂芳基， ( 氰基烷基 ) 杂芳基， ( 酰基 ) 杂芳基 [ 例如， ( 烷基羰 基 ) 杂芳基 ]， ( 烷基 ) 杂芳基， 和 ( 卤烷基 ) 杂芳基 [ 例如， 三卤烷基杂芳基 ]。
本文中使用的 “杂芳基脂烃基” ( 例如杂芳烷基 ) 一词， 是指被杂芳基取代的脂烃 基 ( 例如 C1-4 烷基 )。 “脂烃基” 、 “烷基” 和 “杂芳基” 的定义如上。
本文中使用的 “杂芳烷基” 一词， 是指被杂芳基取代的烷基 ( 例如 C1-4 烷基 )。 “烷 基” 和 “杂芳基” 均已在前面定义。杂芳基可任选地被一个或多个取代基取代， 例如烷基 ( 包 括羧基烷基、 羟烷基和卤代烷基， 如三氟甲基 )， 烯基， 炔基， 环烷基， ( 环烷基 ) 烷基， 杂环烷 基， ( 杂环烷基 ) 烷基， 芳基， 杂芳基， 烷氧基， 环烷氧基， 杂环烷氧基， 芳氧基， 杂芳氧基， 芳 基烷氧基， 杂芳基烷氧基， 芳酰基， 杂芳酰基， 硝基， 羧基， 烷氧羰基， 烷基羰氧基， 氨基羰基， 烷基羰基氨基， 环烷基羰基氨基， ( 环烷基烷基 ) 羰基氨基， 芳基羰基氨基， 芳烷基羰基氨 基， ( 杂环烷基 ) 羰基氨基， ( 杂环烷基烷基 ) 羰基氨基， 杂芳基羰基氨基， 杂芳烷基羰基氨 基， 氰基， 卤素， 羟基， 酰基， 巯基， 烷基硫烷基， 亚磺酰氧基， 脲， 硫脲， 氨磺酰基， 磺酰胺基， 氧基或氨甲酰基。
本文中使用的术语 “环形部分” 和 “环形基团” ， 是指单、 双和三环环系， 包括脂环 基、 杂脂环基、 芳基或杂芳基， 它们均已在前面定义。
本文中使用的术语 “桥接的双环环系” 是指其中的环以桥接方式结合的双环杂脂 环环系或双环脂环环系。桥接的双环环系的实例包括， 但不限于， 金刚烷基、 降冰片烷基、 双环 [3.2.1] 辛基、 双环 [2.2.2] 辛基、 双环 [3.3.1] 壬基、 双环 [3.2.3] 壬基、 2- 氧杂双环 [2.2.2] 辛基、 1- 氮杂双环 [2.2.2] 辛基、 3- 氮杂双环 [3.2.1] 辛基和 2， 6- 二氧杂三环 3.7 [3.3.1.0 ] 壬基。 桥接的双环环系可以任选地被一个或多个取代基取代， 例如烷基 ( 包括 羧基烷基、 羟烷基和卤代烷基， 如三氟甲基 )、 烯基、 炔基、 环烷基、 ( 环烷基 ) 烷基、 杂环烷 基、 ( 杂环烷基 ) 烷基、 芳基、 杂芳基、 烷氧基、 环烷氧基、 杂环烷氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 芳 基烷氧基、 杂芳烷氧基、 芳酰基、 杂芳酰基、 硝基、 羧基、 烷氧羰基、 烷基羰氧基、 氨基羰基、 烷 基羧基氨基、 环烷基羰基氨基、 ( 环烷基烷基 ) 羰基氨基、 芳基羰基氨基、 芳烷基羰基氨基、 ( 杂环烷基 ) 羰基氨基、 ( 杂环烷基烷基 ) 羰基氨基、 杂芳基羰基氨基、 杂芳烷基羰基氨基、 氰基、 卤素、 羟基、 酰基、 巯基、 烷基磺酰基、 亚磺酰氧基、 脲、 硫脲、 氨磺酰基、 磺酰胺基、 氧基 或氨甲酰基。
本文中使用的 “酰基” 一词指甲酰基或 RX-C(O)-( 例如烷基 -C(O)-， 也称作 “烷基 X 羰基” )， 其中 R 和 “烷基” 已在前面定义。乙酰基和新戊酰基是酰基的实例。
本文中使用的术语 “芳酰基” 或 “杂芳酰基” 指芳基 -C(O)- 或杂芳基 -C(O)-。该 芳酰基或杂芳酰基的芳基和杂芳基部分可任选地如先前定义地被取代。
本文中使用的 “烷氧基” 一词指烷基 -O- 基团， 其中 “烷基” 已在前面定义。 X Y
本文中使用的 “氨甲酰基” 一词是指结构为 -O-CO-NR R 或 -NRX-CO-O-RZ 的基团， 其中 RX 和 RY 已在上面定义， RZ 可以是脂烃基、 芳基、 芳基脂烃基、 亲脂环基、 杂芳基或杂芳基 脂烃基。
本文中使用的 “羧基” 一词， 当作为端基使用时， 指 -COOH、 -COORX、 -OC(O)H、 -OC(O) X R ； 当作为内部基团使用时， 指 -OC(O)- 或 -C(O)O-。
本文中使用的 “卤代脂烃基” 一词指被 1-3 个卤原子取代的脂烃基。例如， 术语卤 烷基包括基团 -CF3。
本文中使用的术语 “巯基” 指 -SH。
本文中使用的 “磺基” 一词， 当在末端使用时指 -SO3H 或 -SO3RX， 当在内部使用时 指 -S(O)3-。
本文中的 “磺酰胺基” ， 当在末端使用时指结构 -NRX-S(O)2-NRYRZ， 当在内部使用时 X Y X Y Z 指 -NR -S(O)2-NR ， 其中 R 、 R 和 R 已在上面定义。
本文中的 “氨磺酰基” ， 当在末端使用时， 指结构 -S(O)2-NRXRY 或 -NRX-S(O)2-RZ ； 当 X X X Y Z 在内部使用时， 指 -S(O)2-NR - 或 -NR -S(O)2-， 其中 R 、 R 和 R 定义如上。
在本文中使用时， “硫烷基” 用在末端时指 -S-RX， 用在内部时指 -S-， 其中 RX 已在 上面定义。硫烷基的实例包括脂烃基 -S-， 脂环基 -S-， 芳基 -S- 等。
在本文中使用时， “亚磺酰基” 用在末端时指 -S(O)-RX， 用在内部时指 -S(O)-， 其 X 中 R 已在上面定义。亚磺酰基的实例包括脂烃基 -S(O)-， 芳基 -S(O)-， ( 脂环基 ( 脂烃 基 ))-S(O)-， 环烷基 -S(O)-， 杂脂环基 -S(O)-， 杂芳基 -S(O)- 等。
在本文中使用时， “磺酰基” 用在末端时指 -S(O)2-RX， 用在内部时指 -S(O)2-， 其 X 中 R 已在上面定义。磺酰基的实例包括脂烃基 -S(O)2-、 芳基 -S(O)2-、 ( 脂环基 ( 脂烃 基 ))-S(O)2-、 脂环基 -S(O)2-、 杂脂环基 -S(O)2-、 杂芳基 -S(O)2-、 ( 脂环基 ( 酰胺基 ( 脂烃 基 )))-S(O)2- 等。
在本文中使用时， “亚磺酰氧基” 用在末端时指 -O-SO-RX 或 -SO-O-RX， 用在内部时 X 指 -O-S(O)- 或 -S(O)-O-， 其中 R 已在上面定义。在本文中使用时， “卤素” 或 “卤” 基团指氟、 氯、 溴或碘。
在本文中使用时， “烷氧羰基” 被术语羧基所涵盖， 当其单独使用或与另一基团联 合使用时， 指例如烷基 -O-C(O)- 等基团。
在本文中使用时， “烷氧烷基” 指例如一个烷基 -O- 烷基基团， 其中烷基已在上面定 义。
在本文中使用时， “羰基” 指 -C(O)-。
在本文中使用时， “氧基” 指＝ O。
在本文中使用时， 术语 “磷酰” 指次膦酸根和磷酸根。次膦酸根和膦酸根的实例包 P P 括 -P(O)(R )2， 其中 R 是脂烃基、 烷氧基、 芳氧基、 杂芳氧基、 ( 脂环基 ) 氧基、 ( 杂脂环基 ) 氧基、 芳基、 杂芳基、 脂环基或氨基。
在本文中使用时， “氨基烷基” 指结构 (RX)2N- 烷基 -。
在本文中使用时， “氰基烷基” 指结构 (NC)- 烷基 -。
在本文中使用时， 当处于末端时 “脲” 基团指结构 -NRX-CO-NRYRZ， “硫脲” 基团指结 X Y Z X Y X Y X 构 -NR -CS-NR R ； 当处于内部时， 则分别指 -NR -CO-NR - 或 -NR -CS-NR - ； 其中 R 、 RY 和 RZ 已在上面定义。
在本文中使用时， “胍” 基指结构 -N ＝ C(N(RXRY))N(RXRY) 或 -NRX-C( ＝ NRX)NRXRY， 其中 RX 和 RY 已定义如上。
在本文中使用时， 术语 “脒” 基指结构 -C ＝ (NRX)N(RXRY)， 其中 RX 和 RY 已在上面定 义。
一般来说， 术语 “连位的” 是指在一个含有两个或更多碳原子的基团上的取代基的 位置， 其中该取代基是连接在相邻的碳原子上。
通常， 术语 “偕的” 是指在一个含有两个或更多碳原子的基团上的取代基的位置， 其中取代基是连接在同一碳原子上。
术语 “末端” 和 “内部” 指取代基内的基团的位置。当该基团处在取代基的末端不 再与化学结构的其余部分键合时， 基团是端基。羧基烷基， 即， RXO(O)C- 烷基， 是用在末端 的羧基的一个实例。当基团处在化学结构的某个取代基的中间时， 它是内部基团。烷基羧 基 ( 例如烷基 -C(O)O- 或烷基 -OC(O)-) 和烷基羧基芳基 ( 例如烷基 -C(O)O- 芳基 - 或烷 基 -O(CO)- 芳基 -) 是用在内部的羧基实例。
在本文中使用时， “脂烃链” 指支化或直的脂烃基团 ( 例如， 烷基、 烯基或炔基 )。 直 的脂烃链具有结构 -[CH2]V-， 其中 V 是 1-6。支化的脂烃链是被一个或多个脂烃基取代的直 的脂烃链。支化的脂烃链具有结构 -[CHQ]V-， 其中 Q 是氢或脂烃基 ； 然而， Q 至少在一种情 形应该是脂烃基。术语脂烃链包括烷基链、 烯基链和炔基链， 其中烷基、 烯基和炔基在上面 定义。
短语 “任选被取代” 与短语 “取代的或未取代的” 可交换使用。如本文所述， 本发明 化合物可任选地被一个或多个取代基取代， 例如以上一般性示例说明的， 或者作为本发明 的特定的类、 小类和物种举例的取代基。如本文所述， 本文中所述化学式中包含的变量 R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 A 和其它变量包括特定的基团， 例如烷基和芳基。除非另外指出， 对于本文中 包含的变量 R1、 R2、 R3、 R4、 R5、 A 和其它变量， 每个特定的基团均可任选地被本文所述的一个 或多个取代基取代。 特定基团的各个取代基可以进一步任选地被一个至三个卤原子、 氰基、氧、 烷氧基、 羟基、 氨基、 硝基、 芳基、 脂环基、 杂脂环基、 杂芳基、 卤烷基和烷基取代。 例如， 烷 基可以被烷基硫烷基取代， 而该烷基硫烷基可以任选地被 1-3 个卤原子、 氰基、 氧、 烷氧基、 羟基、 氨基、 硝基、 芳基、 卤烷基和烷基取代。作为补充的实例， ( 环烷基 ) 羰基氨基的环烷 基部分可以任选地被 1-3 个卤原子、 氰基、 烷氧基、 羟基、 硝基、 卤烷基和烷基取代。当两个 烷氧基与同一原子或相邻的原子结合时， 这两个烷氧基可以与它们所结合的原子一起形成 一个环。
通常， 术语 “取代的” ， 不管其前面是否有 “任选地” 一词， 均指给定结构中的氢原 子被某个特定的取代基代替。 具体的取代基是以上在定义部分和以下在化合物及其实例的 描述中所叙述的。除非另外指出， 任选取代的基团可以在该基团的每个可取代的位置有一 个取代基， 当任何给定结构中一个以上的位置可以被选自特定基团的一个以上的取代基取 代时， 每个位置上的取代基可以相同或不同。环形取代基， 例如杂环烷基， 可以与另一个环 ( 例如环烷基 ) 结合， 形成螺 - 双环环系， 例如， 两个环共用一个共同原子。 正如本领域普通 技术人员会认识到的， 本发明预想到的取代基的组合是那些能导致形成稳定的或化学上可 实现的化合物的组合。
本文中使用的短语 “稳定的或化学上可实现的” ， 是指在经受对其进行制备、 检测 以及最好是回收、 纯化和用于本文中公开的一种或多种用途的条件时， 基本上不发生改变 的那些化合物。在一些实施方案中， 稳定的化合物或化学上可实现的化合物是在不存在湿 气或其它化学反应活性条件之下， 于 40℃或更低的温度下保持至少一周时， 基本上不改变 的化合物。 在本文中使用时， 有效量被定义为赋予受治疗的患者一定的疗效所需之数量， 通 常要根据患者的年龄、 表面积、 体重和状态而定。对于动物和人， 剂量 ( 以每平方米身体 表面的毫克数为基础 ) 的相互关系描述于 Freireich 等， Cancer Chemother.Rep.， 50 ： 219(1966)。 身体表面积可以根据患者的高度和重量近似确定。 例如见， ScientificTables， Geigy Pharmaceuticals， Ardsley， New York， 537(1970)。本文中使用的 “患者” 一词指哺 乳动物， 包括人。
除非另外说明， 本文中所述的结构还打算包括所有的异构体 ( 例如， 结构的对映 异构、 非对映异构和几何异构 ( 或构象异构 )) 形式， 例如， 各不对称中心的 R 和 S 构型， (Z) 和 (E) 双键异构体， 以及 (Z) 和 (E) 构象异构体。因此， 本发明化合物的单个立体化学异构 体以及对映异构的、 非对映异构的和几何异构 ( 或构象异构 ) 的混合物， 都属于本发明的范 围。除非另外说明， 本发明化合物的所有的互变异构形式均属于本发明的范围。另外， 除非 另外说明的 ； 本文中所述的结构还要包括差别只在于存在一种或多种同位素富集的原子的 例如， 具有本发明结构的化合物， 但是用氘或氚代替了氢原子， 或者用 13C- 或 14C- 富 化合物。 集的碳代替了碳， 属于本发明的范围。这类化合物可用于例如生物试验中的分析工具或探 针， 或作为治疗剂。
II. 化合物 A. 一般化合物
在一些方面， 本发明提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式 I 化合物和抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式 I 化合物包括 ：或其可药用的盐。R1 是 -ZAR8， 其中各 ZA 独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直链的 C1-12 脂 烃链， 其中 ZA 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRA-， -C(O) A A A A A A A A NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NR A A A A A A A A A -， 或 -NR SO2NR - 替代， 条件是， -O-、 -NR NR 、 -NR C(O)NR - 或 -NR SO2NR - 不与式 I 的氮环 A 原子直接键合。各 R8 独立地是 R 、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2 或 -OCF3。各 RA 独立地是氢， 任选取 代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基或任选取代的杂芳 基。
R2 和 R3 是 -ZBR9， 其中各 ZB 独立地是一个键或任选取代的支化或直链 C1-6 脂烃 链， 其中 ZB 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRB-， -C(O) B B B B B B B B B NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NR - 或 B B B B NR SO2NR - 替代。各 R9 独立地是 R 、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
或者是， R2 和 R3 合起来形成一个氧基。
A 是 -O- 或 -CR6R7-， 其 中 各 R6 和 R7 是 -ZCR10， 其 中 的 各 ZC 独 立 地 是 一 个 键 或 是 任 选 取 代 的 支 化 或 直 链 的 C1-6 脂 烃 链， 其 中 ZC 的 最 多 3 个 碳 单 元 可 任 选 地 和 独 立 地 被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRC， -C(O)NRCNRC-， -C(O)O-， -NRCC(O)O-， -NRCC(O)NRC-， -NRCNRC-， -S-， -SO-， -SO2-， -NRC-， -SO2NRC 或 -NRCSO2NRC- 替 代。 各 R10 独 立 地 是 RC、 卤 C 素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环 基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。 D
R4 是 -Z R11， 其中各 ZD 独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的 C1-12 脂 烃链， 其中 ZD 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRD， -C(O) D D D D D D D D NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NRD - 或 -NRDSO2NRD- 替代， 条件是， -SO-、 -SO2- 或 -SO2NRD 不直接键合到与 R4 相邻的羰基上。各 R11 独立地是 RD、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RD 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。 E E
R5 是 -Z R12， 其中各 Z 独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的 C1-12 脂烃 E 链， 其中 Z 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRE-， -C(O) E E E E E E E E NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NRE - 或 -NRESO2NRE- 替代。各 R12 独立地是 RE、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RE 独立地 是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任 选取代的杂芳基。
或者， R4 和 R5 与它们所连接的原子一起形成一个任选取代的杂脂环基。B. 具体的 化合物 1. 取代基 R1
R1 是 -ZAR8， 其中各 ZA 独立地是一个键或是一个任选取代的支化或直链的 C1-12 脂 烃链， 其中 ZA 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRA-， -C(O) A A A A A A A A NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NR A A A A A A A A A -， 或 -NR SO2NR - 替代， 条件是， -O-、 -NR NR 、 -NR C(O)NR - 或 -NR SO2NR - 不与式 I 的氮环 A 原子直接键合。各 R8 独立地是 R 、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2 或 -OCF3。各 RA 独立地是氢， 任选取 代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基或任选取代的杂芳 基。
在几个实施方案中， R1 是一个任选取代的脂烃基。 例如， R1 是烷基、 烯基或炔基， 它 们均可任选地被独立选自卤素、 芳基、 杂芳基、 脂环基和杂脂环基的 1-4 个取代基取代。或 者是， R1 是任选取代的烷基。例如， R1 是甲基、 乙基、 丙基或丁基， 它们均可任选地被独立选 自卤素、 芳基、 杂芳基、 脂环基和杂脂环基的 1-4 个取代基取代。在其它实例中， R1 是未取代 的烷基。或者是， R1 是任选取代的芳烷基。在几个实施例中， R1 是一个芳基甲基、 芳基乙基 或芳基 - 丙基， 它们均可任选地被取代。或者是， R1 是苯甲基、 苯乙基或苯丙基， 它们均可任 选地被独立选自卤素、 芳基、 羟基、 脂烃基、 脂环基、 杂脂环基、 芳基或杂芳基的 1-3 个取代 基取代。
在几个实施方案中， R1 是任选取代的芳基。例如， R1 是单环或双环的芳基， 它们均 可任选地被取代。在其它实例中， R1 是任选被 1-3 个选自卤素、 羟基、 脂烃基、 芳基、 杂芳基、 脂环基或杂脂环基的取代基取代的苯基。
在其它实施例中， R1 是选自氢、 乙基、 苯基、 对氯苯基和苯甲基的基团。2. 取代的 R2 和 R3
R2 和 R3 是 -ZBR9， 其中各 ZB 独立地是一个键或任选取代的支化或直链 C1-6 脂烃 链， 其中 ZB 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRB-， -C(O) B B B B B B B B B NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NR - 或 B B B B NR SO2NR - 替代。各 R9 独立地是 R 、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
或者是， R2 和 R3 合起来形成一个氧基。
在几个实施方案中， R2 和 R3 合起来形成一个氧基。3. 基团 A
A 是 -O- 或 -CR6R7-， 其 中 各 R6 和 R7 是 -ZCR10， 其 中 的 各 ZC 独 立 地 是 一 个 键 或 是 任 选 取 代 的 支 化 或 直 链 的 C1-6 脂 烃 链， 其 中 ZC 的 最 多 3 个 碳 单 元 可 任 选 地 和 独 立 地 被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRC， -C(O)NRCNRC-， -C(O)O-， -NRCC(O)O-， -NRCC(O)NRC-， -NRCNRC-， -S-， -SO-， -SO2-， -NRC-， -SO2NRC 或 -NRCSO2NRC- 替 代。 各 R10 独 立 地 是 RC、 卤 C 素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环 基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
在几个实施方案中， A 是 -O-。
在其它实施方案中， A 是 -CR6R7-。例如， 在一些实施方案中， A 是 -CR6R7-， R6 或 R7 中之一是氢。在其它实施例中， A 是 -CR6R7-， R6 或 R7 中之一是氢， 而 R6 或 R7 中的另一个是 任选取代的 C1-6 脂烃基。在其它实施例中， A 是 -CR6R7-， R6 或 R7 中的一个是氢， 另一个是未取代的 C1-6 脂烃基。或者是， A 是 -CR6R7-， R6 或 R7 都是氢。4. 取代基 R4 D D
R4 是 -Z R11， 其中各 Z 独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的 C1-12 脂 D 烃链， 其中 Z 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRD， -C(O) D D D D D D D D NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NRD - 或 -NRDSO2NRD- 替代， 条件是， -SO-、 -SO2- 或 -SO2NRD 不直接键合到与 R4 相邻的羰基上。各 R11 独立地是 RD、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RD 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。 D D
在 几 个 实 施 方 案 中， R4 是 -Z R11， 其中各 Z 独立地是一个键或是一个任 选 取 代 的 支 化 或 直 的 C1-12 脂 烃 基 链， 其 中 ZD 的 最 多 3 个 碳 原 子 可 任 选 地 和 独 立 地 被 -C(O)-、 -C(S)-、 -C(O)NRD-、 -C(O)NRDNRD-、 -C(O)O-、 -NRDC(O)O-、 -NRDC(O)NRD-、 -NRDNRD、 -S-、 -SO-、 -SO2-、 -NRD-、 -SO2NRD- 或 -NRDSO2NRD- 取代， 条件是 -SO-、 -SO2- 或 -SO2NRD- 不与式 I 的羰基直接键合。各 R11 独立地是 RD、 卤素、 -OH、 -CN-、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RD 独立地 是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
在另外的实施方案中， R4 是 -Z1-V1-Z2-V2-Z3-V3， V1、 V2 和 V3 均独立地是一个键， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 任选取 代 的 杂 芳 基， 或 者 当 V1、 V2 或 V3 是 R4 的 末 端 基 团 时 为 氢 ； Z 1、 Z2 和 Z3 均 独 立 地 是 一 个 键， -C(O)-， -C(O)C(O)-， -C(S)-， -C(O)N(Q6)-， -N(Q6)C(O)-， -C(O)C(O)N(Q6)-， -O-， ， SO- ，-SO 2 - ，-N(Q 6 )SO 2 - ，-N(Q 6 )C(O)N(Q 6 )- ，-N(Q 6 )C(S)N(Q 6 )- ，-N(Q 6 )- ，-N(Q 6 ) SO2-， -SO2N(Q6)-， -C(O)N(Q6)SO2-， -SO2N(Q6)C(O)-， 或者当 Z1、 Z2 或 Z3 是 R4 的末端基团时为 氢； 各 Q6 独立地是氢或任选取代的脂烃基。
在另一实施方案中， R4 是任选取代的 ( 脂烃基 ) 氨基， 其中 R4 的脂烃基部分 为 -Z2-V2-Z3-V3 或 -Z3-V3， 其中 Z2 和 Z3 均独立地是一个键， -C(O)-， -N(Q5)-， -CH(OH)-， -C(O) N(Q6)- 或 -C(O)C(O)N(Q6)- ； V2 独立地是一个键， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基 ； V3 是氢， 任选取代的脂烃基， 或任选取代的脂环基。
在 又 一 实 施 方 案 中， Z2 是 -CH(OH)-， V2 是 一 个 键， Z3 是 -C(O)N(Q6)-， 于 是 R4 是 -N(Q6)-CH(OH)-C(O)-N(V3)(Q6)。
在某些实施方案中， R4 是任选取代的 ( 脂烃基 ) 氨基， 任选取代的 ( 脂环基 ) 氨 基， 任选取代的烷氧基， 或是羟基。
在另一实施方案中， R4 是任选被 1-3 个卤原子、 羟基、 脂烃基、 脂环基或杂脂环基取 代的烷氧基。
在几个实施方案中， R4 是氨基。R4 的实例包括单取代的氨基。R4 的其它实例包括 ( 脂环基 ( 羰基 ( 羰基 ( 烷基 )))) 氨基， ( 氨基 ( 羰基 ( 羰基 ( 脂烃基 )))) 氨基， 脂烃基 ( 羰基 ( 羰基 ( 脂烃基 ))) 氨基， 或 ( 芳基 ( 氨基 ( 羰基 ( 羰基 ( 脂烃基 ))))) 氨基， 它们 均可任选地被 1-3 个取代基取代。
在几个实施方案中， R4 是 -NR4ZR’ -SR4Y 或 -NR4Y-CR4XR’ 其中 R4Y 独 4Z、 4X-L1-NR4Z-R4W， 立地是氢， 或是任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基、 任选取代的 芳基， 或任选取代的杂芳基 ； 各 R4W 均独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的芳基， 任 选取代的杂芳基， 任选取代的杂脂环基， 或任选取代的脂环基 ； 各 R4X 和 R’ 4X 均独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的杂芳基， 任选取代的苯基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基 ； 或者 R4X 和 R’ 4X 与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的 3-7 元脂环基或杂 脂环基环 ； 各 L1 是 -CH2， -C(O)-， -CF2-， -C(O)C(O)-， -C(O)O-， -S(O)- 或 -SO2- ； R4Z 或 R’ 4Z 均为氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或 任选取代的杂芳基 ； 或者 R4Z 和 R’ 可以形成一个任选取代的 4Z 与它们都连接的氮原子一起， 3-7 元杂脂环基环。
在几个实施方案中， R4X 和 R’ 或是任选取代的脂烃基、 任选取 4X 均独立地是氢， 代的脂环基， 或任选取代的 ( 脂环基 ) 脂烃基。
在几个实施方案中， L1 是 -C(O) C(O)- 或 -SO2-。
在其它几个实施方案中， 各 R4W 均为氢或是任选取代的脂环基。
在几个实施方案中， R4 是 -NH-CHR4X-C(O)-C(O)-N(R4Z)R4W。
在几个实施方案中， R4 是 -NH-CHR4X-CH(OH)-C(O)-N(R4Z)R4W。
在 几 个 实 施 方 案 中， R4 是 -NH-CHR4X-C(O)-C(O)-NHR4Z， 其 中 -NHR4Z 是 NH- 环 丙 基、 -NH- 甲基、 -NH- 乙基、 -NH- 异丙基、 -NH- 正丙基。
在几个实施方案中， R4 是 -NR4ZR’ -SR4Z， 其中 R4Z 和 R’ 烷基、 环 4Z、 4Z 均独立地是氢、 烷基或芳烷基。R4Z 的非限制性实例包括甲基、 乙基、 叔丁基、 环戊基、 环己基和苄基。
在 其 它 实 施 方 案 中， R4 是 (-NH-CR4XR’ 4X-L1-C(O))i-M，其 中 各 M 独 立 地 是 -OH、 -R4X、 -NR4ZR’ 各 i 是 1 或 2， L1、 R4Z、 R4X 和 R’ 4Z 或 -OR4X， 4Z 的定义如上。
在几个实施方案中， R4 是 (-NH-CR4ZR’ 其中 L1 是 -C(O)-， i 是 1， M 4Z-L1-C(O))i-M， 独立地是 -R4X、 -N(R4XR’ -OR4X、 -NHSO2R4X 或 -SR4X。 4X)、
在一些实施方案中， R’ R4Z 是脂烃基、 ( 芳基 ) 脂烃基或脂环基。R4X 的非限 4Z 是 H，制性实例包括 H，
在一些实施方案中， R’ R4X 是任选取代的脂烃基、 任选取代的芳基、 任选取 4X 是 H， 代的芳烷基、 任选取代的杂脂烃基或任选取代的杂芳烷基。R4X 的一些非限制性实例包括 ：其中 c 是 0-3。 在 几 个 实 施 方 案 中， R4 是 ： 其 中 R4X 是
R4W是或是氢。
在一些实施方案中， R4 是其中各 R56 独立地是任选取代的 C1-6 脂烃基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 任选取代的脂环基， 或任选 取代的杂脂环基 ； 各 R57 独立地是任选取代的脂烃基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 任选取代的脂环基或任选取代的氨基 ； m是1或2； 各 R4X 和 R’ 任选取代的脂 4X 独立地是氢， 烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基 ； 或 者 R4X 和 R’ 4X 与它们都连接的原子一起形成一个任选取代的 3-7 元脂环基或杂脂环基环。
在其它一些实施方案中， R4 是其中 R58 和 R59 各自独立地选自任选取代的脂烃基， 任选取代的烷氧基， 任选取代的芳氧基， 任选取代的杂芳氧基， 任选取代的 ( 脂环基 ) 氧基， 任选取代的 ( 杂脂环基 ) 氧基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 任选 取代的脂环基或任选取代的氨基 ； 各 R4X 和 R’ 任选取代的脂烃基， 任选取代 4X 独立地是氢， 的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基 ； 或者 R4X 和 R’ 4X 与 它们都连接的原子一起形成一个任选取代的 3-7 元的脂环基或杂脂环基环。
在 几 个 实 施 方 案 中 ， R 4 是 选 自 ：
在一些具体的实施方案中 ， R4是其 中 X200是 -OX202 或 -X202， X202 是脂烃基、 脂环基、 杂脂环基、 芳基或杂芳基。
在 其 它 实 施 方 案 中，R4是R4 的其它实例示例说明于 PCT 出版物 WO 2004/103996 A1、 WO 2004/72243 A2、 WO 03/064456 A1、 WO 03/64455 A2、 WO 03/064416A1 和美国专利出版物 US 2005/0090450 以及
本文中参考引用的其它出版物中， 上述各文献均以参考引用的方式全文并入本文中。5. 取 代基 R5 ：
R5 是 -ZER12， 其中各 ZE 独立地是一个键或是任选取代的支化或支链的 C1-12 脂烃 链， 其中 ZE 的最多 3 个碳单元可任选地和独立地被 -C(O)-， -C(S)-， -C(O)NRE-， -C(O) E E E E E E E E NR NR -， -C(O)O-， -NR C(O)O-， -O-， -NR C(O)NR -， -NR NR -， -S-， -SO-， -SO2-， -NR -， -SO2NRE - 或 -NRESO2NRE- 替代。各 R12 独立地是 RE、 卤素、 -OH、 -CN、 -NO2、 -NH2 或 -OCF3。各 RE 独立地 是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任 选取代的杂芳基。
在几个实施方案中， R5 可任选地被 1-4 个取代基取代。
在某些实施方案中， R5 是 -Q4-W4-Q3-W3-Q2-W2-Q1， 其中 W2、 W3 和 W4 均独立地是一个 键， -C(O)-， -C(S)-， -C(O)N(Q5)-， -C(O)O-， -O-， -N(Q5)C(O)N(Q5)-， -SO2-， -N(Q5)SO2-， -S， -N(Q5)-， -SO-， -OC(O)-， -N(Q5)C(O)O- 或 -SO2N(Q5)- ； Q1、 Q2、 Q3 和 Q4 独立地是一个键， 任选 取代的 C1-4 脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 任选取代的 杂芳基， 或者当 Q1、 Q2、 Q3 或 Q4 是 R5 的末端基团时为氢 ； 各 Q5 独立地是氢或是任选取代的脂 烃基。在一些具体的实施方案中， Q4 是一个键。
在几个实施方案中， R5 是任选取代的酰基。 在几个实施例中， R5 是任选取代的烷基 羰基。R5 的其它实例包括 ( 氨基 ) 烷基羰基、 ( 卤 ) 烷基羰基、 ( 芳基 ) 烷基羰基、 ( 脂环基 ) 烷基羰基或 ( 杂脂环基 ) 烷基羰基。在这些实施例中包括以下实施方案， 其中 R5 是 ( 杂环 烷基 ( 氧 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， ( 杂芳基 ( 羰基 ( 氨基 ( 烷基 ( 羰基 ( 氨基 )))))) 烷基羰基， ( 双环芳基 ( 磺酰基 ( 氨基 ))) 烷基羰基， ( 芳基 ( 烷氧基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷 基羰基， ( 烷基 ( 羰基 ( 氨基 ))) 烷基羰基， ( 烯基 ( 烷氧基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， ( 脂环基 ( 烷基 ( 氨基 ( 羰基 ( 氨基 ))))) 烷基羰基， ( 杂芳基 ( 羰基 ( 氨基 ( 烷基 ( 羰基 ( 氨基 )))))) 烷基羰基， ( 烷基 ( 氨基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， 或 ( 双环芳基 ( 氨基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， 它们均可任选地被 1-3 个取代基取代。
在几个实施方案中， R5 是任选取代的羧基。在一个实施例中， R5 是任选取代的烷 氧羰基。R5 的另一实例包括 C1-4 烷氧羰基或 ( 三环芳基 ) 烷氧羰基， 它们均可任选地被 1-3 个取代基取代。其它的羧基包括 ( 脂烃 ( 氧 )) 基羰基， ( 杂芳基烷 ( 氧 ) 基羰基， ( 杂脂环 基 ( 氧 ) 基羰基， ( 芳烷 ( 氧 ) 基 ) 羰基， 它们均可任选地被 1-3 个卤素、 烷氧基、 脂烃基、 脂环基、 杂脂环基、 芳基、 杂芳基或其组合取代。
在几个实施方案中， R5 是任选取代的氨基羰基。R5 的实例包括 ( 烷氧基 ( 芳基 ( 烷基 ))) 氨基羰基， ( 烷基 ) 氨基羰基或 ( 芳基 ( 烷氧基 ( 羰基 ( 烷基 ( 氨基 ( 羰基 ( 烷 基 ))))))) 氨基羰基， 它们均可任选地被 1-3 个取代基取代。
在几个实施方案中， R5 是任选取代的杂芳基。在一个实施例中， R5 是任选的噁唑 基、 吡咯基、 呋喃基、 噻吩基、 三嗪基、 吡啶基、 吡嗪基、 嘧啶基或哒嗪基。
在几个实施方案中， R5 是烷基磺酰基、 氨基磺酰基、 芳基磺酰基、 杂芳基磺酰基、 脂 环基磺酰基或杂脂环基磺酰基， 它们均可任选地被 1-4 个取代基取代。
在几个实施方案中， R5 是任选取代的烷基磺酰基。R5 的实例包括 ( 芳基 ) 烷磺酰 基或 ( 烷基 ( 氨基 ) 烷磺酰基， 它们均可任选地被 1-3 个取代基取代 ； 烷基磺酰基， 氨基磺 酰基， 芳基磺酰基， 杂芳基磺酰基， 脂环基磺酰基或杂脂环基磺酰基， 它们均可任选地被取代。在某些实施方案中， R5 是任选取代的烷基磺酰基。
在其它一些实施方案中， R5 是 ( 芳基 ) 烷磺酰基或 ( 烷基 ( 氨基 )) 烷磺酰基， 它 们均可任选地被取代。
在一些具体的实施方案中， R5 是 ( 氨基 ) 烷基羰基， ( 卤 ) 烷基羰基， ( 芳 ) 烷基 羰基， ( 脂环基 ) 烷基羰基或 ( 杂脂环基 ) 烷基羰基， ( 杂环烷基 ( 氧 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， ( 杂芳基 ( 羰基 ( 氨基 ( 烷基 ( 羰基 ( 氨基 ))))) 烷基羰基， ( 双环芳基 ( 磺酰 基 ( 氨基 ))) 烷基羰基， ( 芳基 ( 烷氧基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， ( 烷基 ( 羰基 ( 氨 基 ))) 烷基羰基， ( 烯基 ( 烷氧基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， ( 脂环基 ( 烷基 ( 氨基 ( 羰 基 ( 氨基 ))))) 烷基羰基， ( 杂芳基 ( 羰基 ( 氨基 ( 烷基 ( 羰基 ( 氨基 )))))) 烷基羰基， ( 烷基 ( 氨基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰基， 或 ( 双环芳基 ( 氨基 ( 羰基 ( 氨基 )))) 烷基羰 基， 它们均可任选地被取代。
在其它具体的实施方安中， R5 是杂芳基羰基， ( 脂环基 ( 烷基 ( 酰氨基 ( 烷基 )))) 羰基， ( 杂脂环基 ( 氧 ( 酰氨基 ( 烷基 )))) 羰基， ( 芳基 ( 磺酰基 ( 氨基 ( 烷基 )))) 羰基， ( 芳烷基 ( 氧 ( 酰胺基 ( 烷基 )))) 羰基， ( 脂烃基 ( 氧 ( 酰胺基 ( 烷基 )))) 羰基， ( 脂环 基 ( 烷基 ( 酰胺基 ( 烷基 )))) 羰基， ( 杂脂环基 ) 羰基或 ( 杂芳基 ( 酰胺基 ( 烷基 ( 酰氨 基 ( 烷基 )))) 羰基， 它们均任选地被 1-4 个卤原子、 脂烃基、 脂环基、 酰基、 烷氧基或其组合 取代。
在另外的实施方案中， R5 是酰胺基。例如， R5 是 ( 烷氧基 ( 芳基 ( 烷基 ))) 氨基 羰基， ( 烷基 ) 氨基羰基或 ( 芳基 ( 烷氧基 ( 羰基 ( 烷基 ( 氨基 ( 羰基 ( 烷基 ))))))) 氨 基羰基， 它们均任选地被取代。
在几个实施方案中， R5 是其中 T 是一个键， -C(O)-， -OC(O)-， -NHC(O)-， -S(O)2N(H)-， -C(O)C(O)- 或 -SO2- ； 各 R 独立 地是氢， 氨基， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳 基， 任选取代的杂芳基 ； 各 R13 和 R’ 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 13 独立地是氢， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基 ； 和 R14 独立地是氢， 任选取代 的脂烃基， 任选取代的杂芳基， 任选取代的苯基 ； 或者结合在相邻原子上的 R13 和 R14 与它们 所连接的原子一起形成一个 5-7 元任选取代的单环脂环基， 或 6-12 元任选取代的双环杂脂 环基 ； 或者 R13 和 R’ 13 与它们所连接的原子一起形成一个任选取代的脂环基或任选取代的 杂脂环基。为清楚起见， 当 R5 是 QVI 时， 在每个亚单元中的 R13、 R’ 13 和 R14 均可独立地如上 所述地选择。一个亚单元中的 R13、 R’ R’ 13 和 R14 变量的设定不必与其它亚单元中 R13、 13 和 R14 变量的设定相同。
在其它实施方案中， R5 是 QI 或 QII。
在 一 些 实 施 方 案 中， QI、 QII、 QIII、 QIV、 QV 或 QVI 中 取 代 基 里 的 R 是
在其它实施方案中， R5 是 QVI， R是
在其它实施方案中， QI、 QII、 QIII、 QIV、 QV 或 QVI 中取代基里的 R 是其中各 R15 和 R’ 任选取代的脂烃基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 15 独立地是氢， 任选取代的杂脂环基， 或任选取代的脂环基 ； 或者 R15 和 R’ 15 与它们都结合的原子一起 形成一个任选取代的脂环基或任选取代的杂脂环基 ； 各个 K 独立地是一个键， C1-12 脂烃 基， -O-， -S-， -S(O)2， -NR16-， -C(O)-， 或 -C(O)NR16-， 其中 R16 是氢或任选取代的 C1-12 脂烃基 ； n 是 3。为清楚起见， 当 QI、 QII、 QIII、 QIV、 QV 或 QVI 中存在一个以上的 R15 时， 各 R15 可以 相同或不同。在几个实施方案中， R15 或 R’ 15 是 [C3-10 环烷基或 C3-10 环烯基 ]-C1-12 脂烃基， (3-10 元 ) 杂脂环基， (3-10 元 ) 杂脂环基 -C1-12 脂烃基， (5-10 元 ) 杂芳基， 或 (5-10 元 ) 杂芳基 -C1-12 脂烃基。在另外的实施方案中， QI、 QII、 QIII、 QIV、 QV 或 QVI 中取代基的 R 是
在另外的实施方案中， QI、 QII、 QIII、 QIV、 QV 或 QVI 中取代基的 R 是其中各个Z 独立地是 -O-、 -S-、 -NR50- 或 -C(R50)2-， 独立地是单键或双键， 各 R50 独立地是氢、 任 选取代的脂烃基、 任选取代的芳基、 任选取代的杂芳基、 任选取代的杂脂环基、 或任选取代 的脂环基 ； n 是 1 或 2。
在 几 个 实 施 方 案 中 ， R 是 5其中T 是一个键， -C(O)-， -OC(O)-， -NHC(O)-， -S(O)2N(H)-， -C(O)C(O)- 或 -SO2- ； 各 R 独立地是 氢， 氨基， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基 ； 各 R13 和 R’ 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 13 均独立地是氢， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基 ； 各 R13 独立地是氢， 任选取代 的脂烃基， 任选取代的杂芳基， 任选取代的苯基， 或者结合在相邻原子上的 R13 和 R14 与它们 连接的原子一起形成一个 5-7 元任选取代的单环杂脂环基， 或 6-7 元任选取代的双环杂脂 环基 ； 其中每一个杂环脂环或者 R13 和 R’ 13 与它们连接的原子一起形成一个任选取代的脂 环基或任选取代的杂脂环基 ； 各 R15 和 R’ 任选取代的脂烃基， 任选取代的杂 15 独立地是氢， 芳基， 任选取代的苯基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基 ； 或者 R15 和 R’ 15 与它们都 连接的原子一起形成一个任选取代的 3-7 元脂环基或杂脂环基环 ； 各 R16 独立地是氢或是一 个保护基团。
在一些实施方案中， R15 和 R’ 15 与它们连接的原子一起形成一个 3-7 元环。非限 限性的实例包括 ：
R1 1和R1 3的非限制性实例包括：或 者 是，R13 和 R15 与它们连接的原子一起， 可以形成一个任选取代的 5-7 元单环杂脂环基或任选取 代的 6-12 元双环杂脂环基， 其中各杂脂环基或芳基环可任选地含有另一个选自 O、 S和N的 杂原子。
另外， R15 和 R16 与它们连接的原子一起， 可以形成一个环。
在 几 个 实 施 方 案 中， R5 是 ：其 中 T 是 -C(O)-， R是
在几个实施方案中， R5 是选自以下结构的基团 ：
在一些实施方案中，R5是其中 R 的定义如上。 R5 的 其 它 实 例 示 例 说 明 在 PCT 出 版 物 WO2004/103996A1、 WO2004/72242A2、 WO03/064456A1、 WO03/64455A2、 WO03/064416A1 和美国专利出版物 US2005/0090450 以及本 文引用的其它出版物中， 上述文献均以参考引用的方式全部并入本文中。C. 亚属化合物
本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式 Ia 化合物和抑制丝
氨酸蛋白酶的方法。式 Ia 化合物包括 ：或其可药用的盐， 其中 R1、 R2、 R3 和A 已在上面式 I 中定义。 各 R4a 是 -Z1-V1-Z2-V2-Z3-V3， V1、 V2 和 V3 均独立地是一个键， 任选取代的脂烃基， 任 选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 或者当 V1、 V2、 V3 是 R2 的端基时为氢 ； 各 Z1、 Z2 和 Z3 独立地是一个键， -C(O)-， -C(O)C(O)-， -C(S)-， -C(O) N(Q 5)- ， -N(Q 5)C(O)- ， -C(O)C(O)N(Q 5)- ， -O- ， -SO- ， -SO 2- ， -N(Q 5)SO 2- ， -N(Q 5)C(O) N(Q5)-， -N(Q5)C(S)N(Q5)-， -N(Q5)-， -N(Q5)SO2-， -SO2N(Q5)-。-C(O)N(Q5)SO2-， -SO2N(Q5) Z2 或 Z3 是 R2 的端基时为氢 ； 各 Q5 独立地是氢， 或是任选取代的脂烃基。 C(O)-， 或者当 Z1、
各 R5a 是 -Q4-W4-Q3-W3-Q2-W2-Q1 ； 其 中 W2、 W3 和 W4 均 独 立 地 是 一 个 键， -C(O)- ， -C(S)- ， -C(O)N(Q 5)- ， -C(O)O- ， -O- ， -N(Q 5)C(O)N(Q 5)- ， -SO 2- ， -N(Q 5) SO2-， -S-， -N(Q5)-， -SO-， -N(Q5)C(O)-， -OC(O)-， -N(Q5)C(O)O- 或 -SO2N(Q5)- ； 各 Q1、 Q 2、 Q3 和 Q4 独立地是一个键， 任选取代的 C1-4 脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任
选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 或者当 Q1、 Q2、 Q3 或 Q4 是 R5a 的端基时为氢 ； 各 Q5 独立地 是氢或是任选取代的脂烃基。
在几个实施例中， R4a 是任选取代的 ( 脂烃基 ) 氨基， 任选取代的烷氧基， 或是羟基。
在几个实施例中， R4a 是一个 ( 脂烃基 ) 氨基， 其中氮原子可任选地被 -Z2-V2-Z3-V3 或 -Z3-V3 取代， 各 Z2 和 Z3 独立地是一个键、 -C(O)-、 -N(Q5)- 或 -C(O)C(O)N(Q5)- ； 并且各 V2 和 V3 独立地是一个键， 任选取代的脂烃基， 或任选取代的脂环基。
本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式 Ib 化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式 Ib 化合物包括 ：或其可药用的盐， 其中 R1、R2、 R3、 R14、 R、 T 和 A 已在上面式 I 中定义。
各 G 是一个 2-15 个原子的任选取代的脂烃链， 它可任选地含有 1-3 个选自 O、 S和 N 的杂原子。
式 Ib 的化合物的实例包括 ：其中 R1、 R2、 R3、 R8、 R、 T 和 A 在以上式 I 中定义。
式 I b 化 合 物的其它例是：其中R2、 R3 和 A 在以上式 I 中定义， 各 R4W 独立地是 R1、或是氢 ；各个 T 独立地是一个键， -C(O)-， -OC(O)-， -NHC(O)-， -S(O)2N(H)-， -C(O)C(O)-， 或 -SO2- ； 各 R 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳 基， 或是任选取代的杂芳基 ； 各 R14 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的杂芳基， 任 选取代的苯基。
式 I b 化 合 物 的 进 一 步 的 具 体 实 例 是72101903392 A CN 101903393
说I b 化 合 物明的书其 它 实 例42/108 页式包括
本发明的另一方面提供可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式 I 化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式 II 化合物包括 ：或其可药用的盐， 其中 R4X、 R’ R4Z、 R4W 和 A 已在上面定义。 4X、 各 R1a 是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
各 R4Y 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
各 R14 独立地是氢， 任选取代的脂烃基， 任选取代的芳基， 任选取代的杂芳基， 任选 取代的杂脂环基， 或任选取代的脂环基。
各 R4X 和 R’ 任选取代的脂烃基， 任选取代的杂芳基， 任选取代的苯 4X 独立地是氢， 基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基 ； 或者 R4X 和 R’ 4X 与它们都连接的原子一起形
成一个任选取代的 3-7 元脂环基或杂脂环基环， 或者 R4X 和 R4Y 与它们连接的原子一起形成 一个任选取代的 5-7 元杂脂环基环。
各 R5b 是 -ZFR21， 其中 ZF 是 -CH2-、 -NH-、 -CH(R22)- 或 -O-， R21 是任选取代的 6-7 元 脂环基或任选取代的叔丁基， R22 是任选取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂 环基， 任选取代的芳基， 或任选取代的杂芳基。
各 R4Z 独立地是氢， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 或任选取代的脂烃 基。
另外， 各 R4W 独立地是氢， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 或任选取代的 脂烃基 ； 或者 R4Z 和 R4W 与它们连接的氮原子一起形成一个任选取代的杂脂环基。
本发明的另一方面提供了可用于抑制丝氨酸蛋白酶活性的式 III 化合物及抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法。式 III 化合物包括 ：或其可药用的盐， 其中 A 在以上式 I 中定义， R5e 是
R4e 是 ：
R’ 4e 是 ：或氢 ； R1e 是任选取代的芳基或任选取代的杂芳基。
本 发 明 的 另 一 方 面 提 供 了 可 用 于 抑 制 丝 氨 酸 蛋 白 酶 活 性 的 式 IV 化 合 物 及 抑 制 丝 氨 酸 蛋 白 酶 活 性 的 方 法。 式 IV 化 合 物 包 括 ：或 其 可 药 用 的 盐， 其 中 R5e 是 ：
R4e 是
R’ 4e 是或氢。另外， 各 R1f 和 R’ 磺酰胺， 磺酰基， 亚磺酰基， 任选取代的酰基， 任选 1f 独立地是氢， 取代的脂烃基， 任选取代的脂环基， 任选取代的杂脂环基， 任选取代的芳基或任选取代的杂 芳基， 或者 R1f 和 R’ 饱和的、 部分不饱和 1f 与它们连接的氮原子一起形成一个任选取代的、 的或完全不饱和的 5-8 元杂脂环基或杂芳基。
本 发 明 的 另 一 方 面 提 供 了 可 用 于 抑 制 丝 氨 酸 蛋 白 酶 活 性 的 式 V 化 合 物 和 抑 制 丝 氨 酸 蛋 白 酶 活 性 的 方 法。 式 V 化 合 物 包 括 ：或其可药用的盐， 其中 R5e、 R4e 和 R’ 4e 在以上式 III 中定义。
各个 D 独立地是 -CR14-、 N、 S 或 O， 条件是， 不超过两个 D 独立地是 S 或 O ； R14 在以 上式 I 中定义。
本 发 明 的 另 一 方 面 提 供 了 可 用 于 抑 制 丝 氨 酸 蛋 白 酶 活 性 的 式 VI 化 合 物 和 抑 制 丝 氨 酸 蛋 白 酶 活 性 的 方 法。 式 VI 化 合 物 包 括 ：或其可药用的盐， 其中 R5e、 R4e 和 R’ 4e在以上式 III 中定义。
各 R1g 是取代的芳基或取代的杂芳基。在一些实施方案中， R1g 是D. 实施方案的组合
其它的实施方案包括上述取代基 R1、 R2、 R3、 R4、 R5 和 A 的任何组合。E. 示例化合物
本 发 明 打 算 包 括 其 中 R1 和 R2 含 有 丝 氨 酸 蛋 白 酶 抑 制 剂 的 结 构 元 件 的 化 合 物。具有相当于取代基 R1 和 R2 的丝氨酸蛋白酶抑制剂结构元件的化合物， 包括但不限 于， 以下出版物中的化合物 ： WO 97/43310， US 20020016294， WO01/81325， WO 01/58929， WO 01/32691， WO 02/08198， WO 01/77113， WO 02/08187， WO 02/08256， WO 02/08244， WO 03/006490， WO 01/74768， WO 99/50230， WO 98/17679， WO 02/48157， WO 02/08251， WO 02/07761， WO 02/48172， WO 02/08256， US20020177725， WO 02/060926， US 20030008828， WO 02/48116， WO 01/64678， WO01/07407， WO 98/46630， WO 00/59929， WO 99/07733， WO 00/09588， US 20020016442， WO 00/09543， WO 99/07734， US 6,018,020， US 6,265,380， US 6,608,027,US20020032175 ， US 20050080017 ， WO 98/22496 ， WO 05/028502 ， US 5,866,684， WO 02/079234， WO 00/31129， WO 99/38888， WO 99/64442， WO 2004072243， WO02/18369， US2006046956， US2005197301， WO2005058821， WO2005051980， WO2005030796， WO2005021584 ，WO2005113581 ，WO2005087731 ，WO2005087725 ，WO2005087721 ， WO2005085275 ，WO2005085242 ，US2003216325 ，WO2003062265 ，WO2003062228 ， WO2002008256， WO 2002008198， WO2002008187， WO 2002048172， WO 2001081325， WO 2001077113， US 6251583， US 5990276， US20040224900， US20040229818， WO2004037855， WO2004039833， WO200489974， WO2004103996， WO2004030670， WO2005028501， WO2006007700， WO2005070955 ，WO2006007708 ，WO2006000085 ，WO2005073195 ，WO2005073216 ， WO2004026896 ，WO2004072243 ，WO2004113365 ，WO2005010029 ，US20050153877 ， WO2004093798 ，WO2004094452 ，WO2005046712 ，WO2005051410 ，WO2005054430 ， WO2004032827 ，WO2005095403 ，WO2005077969 ，WO2005037860 ，WO2004092161 ， WO2005028502， WO2003087092， 和 WO2005037214， 它们均以参考引用的方式并入本文。
本发明的具体的示例化合物列在下面的表 1 中。表 1 ： 本发明的示例化合物III. 合成方案
式 I 化合物容易从市场上可买到的起始物利用下面提供的示例性合成路线合成。 制备式 I 化合物的示例性合成路线提供在下面的制备、 方法、 实施例和方案部分中。
一种制备其中 A 是 0 的式 I 化合物的方法示于方案 1 中。方案 1 ：双保护的脯氨酮 1a 与溴乙酸乙酯在锌和三甲基氯硅烷存在下反应， 得到酯中间 体 1b， 为 4 ∶ 1 的非对映体混合物。脂中间体 1b 与肼反应， 形成中间体酰肼 ( 未画出 )， 它 接着用例如亚硝酸钠氧化， 然后环化形成取代的螺吡咯烷中间体 1c。该取代的螺吡咯烷中 间体 1c 可以用两种方法转化成取代的中间体 1d。1c 与芳基卤化物 ( 例如取代的溴苯 ) 在 钯催化剂 ( 例如 Pd2(dba)3)、 Xantphos(4， 5- 二 ( 二苯膦基 )-9， 9- 二甲基呫吨 ) 和碳酸钾 存在下反应， 得到中间体 1d， 其中 R1 是芳基。或者是， 中间体 1c 可以用合适的烷基卤化物 ( 例如苄基溴或乙基碘 ) 在碱 ( 例如氢化钠 ) 存在下烷基化， 得到中间体 1d， 其中 R1 是任 选取代的烷基。1d 的非对映体可以用色谱法分离。
从 1d 中选择性去除 N 保护基以得到 1e， 这可以用 HCl 在乙酸乙酯中完成。中间体 1e 通过与 R12-C(O)-OH 在偶联剂 ( 如 EDC、 HOBT 和 DIEA) 存在下反应， 进一步转化成中间体 1f。使用例如 TFA 在二氯甲烷中除去 1f 的酯保护基， 得到酸中间体 1g。1g 与 R11-N(RD)NH 在偶联剂 ( 例如 EDC、 HOBT 和 DIEA) 存在下反应， 得到其中 A 为 0 的本发明化合物。在某些 实施方案中， R11 可以含有羟基部分 -CH(OH)C(O)-， 它用例如 Des-Martin 五价碘氧化剂或次 氯酸钠在 TEMPO 存在下氧化， 得到式 I 化合物， 其中 R12 包含基团 -C(O)C(O)-。
方案 2 ：参看方案 2， 双保护的脯氨酮 1a 与 ( 乙氧羰基亚甲基 ) 三苯基膦烷反应， 得到不 饱和酯 2a。2a 与硝基甲烷在四甲基胍 (TMG) 存在下反应， 得到中间体硝基化合物 2b。2b 在 10％ Pd/C 存在下氢化， 得到氨基化合物 2c。2c 在水中用氢氧化锂水解， 得到酸 2d， 它在 EDC、 HOBT 和 DIEA 存在下环化， 得到内酰胺中间体 2e。中间体 2e 像前面对方案 1 中 1c 所 述地那样， 转化成其中 A 是 CH2 的式 I 化合物。
IV. 制剂， 给药和用途
本发明的另一实施方案提供了含有式 I 化合物或其可药用盐或盐混合物的药物 组合物。根据另一实施方案， 式 I 化合物以能有效减少样品或患者中病毒承载量的数量存 在， 其中该病毒编码其生命周期所必需的丝氨酸蛋白酶， 还存在一种可药用的载体。
如果在这些组合物中使用本发明化合物的可药用盐， 这些盐优选从无机或有机酸 及碱衍生形成。这些酸式盐中包括以下的盐 ： 乙酸盐、 己二酸盐、 藻酸盐、 天冬氨酸盐、 苯 甲酸盐、 苯磺酸盐、 硫酸氢盐、 丁酸盐、 柠檬酸盐、 樟脑酸盐、 樟脑磺酸盐、 环戊烷丙酸盐、 二 葡糖酸盐、 十二烷基硫酸盐、 乙磺酸盐、 富马酸盐、 葡糖庚酸盐、 甘油磷酸盐、 半硫酸盐、 庚酸 盐、 己酸盐、 盐酸盐、 氢溴酸盐、 氢碘酸盐、 2- 羟基乙磺酸盐、 乳酸盐、 马来酸盐、 甲磺酸盐、 2- 萘磺酸盐、 烟酸盐、 草酸盐、 双羟萘酸盐、 果胶脂酸盐、 过硫酸盐、 3- 苯基丙酸盐、 苦味酸 盐、 新戊酸盐、 丙酸盐、 丁二酸盐、 酒石酸盐、 硫氰酸盐、 甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。 碱式盐包 括铵盐、 碱金属盐 ( 例如钠盐和钾盐 )、 碱土金属盐 ( 例如钙和镁盐 )， 与有机碱的盐 ( 例如 二环己胺盐， N- 甲基 -D- 葡糖胺盐 )， 以及与氨基酸 ( 例如精氨酸、 赖氨酸 ) 的盐等。
另外， 含碱性氮的基团可以用以下试剂季胺化， 例如低级烷基卤化物 ( 如甲基、 乙 基、 丙基和丁基氯、 溴及碘化物 ) ； 硫酸二烷基酯， 例如硫酸二甲酯、 二乙酯、 二丁酯和二戊 酯； 长链卤化物， 例如癸基、 十二烷基、 十四烷基和十八烷基氯化物、 溴化物和碘化物 ； 芳烷 基卤化物， 例如苄基和苯乙基溴化物及其它。由此得到水溶或油溶或者水或油可分散的产 物。
本发明的组合物和方法中使用的化合物还可以通过附加合适的官能团进行修饰， 以提高选择性生物性能。这类修饰是本领域已知的， 包括增强向给定的生物系统 ( 例如， 血液、 淋巴系统、 中枢神经系统 ) 生物渗透、 提高口服利用度、 增加溶解度以便能注射给药、 改 变代谢和改变排泄速度的修饰。
可以用在这些组合物中的可药用的载体包括， 但不限于， 离子交换剂， 氧化铝， 硬 脂酸铝， 卵磷脂， 血清蛋白 ( 例如人血清蛋白 )， 缓冲物质 ( 例如磷酸盐 )， 甘氨酸， 山梨酸， 山梨酸钾， 饱和的植物脂肪酸的偏甘油酯混合物， 水， 盐或电解质 ( 例如鱼精蛋白硫酸盐， 磷酸氢二钠、 磷酸氢二钾、 氯化钠、 锌盐 )， 胶体二氧化硅， 三硅酸镁， 聚乙烯吡咯烷酮， 纤维 素基物质， 聚乙二醇， 羧甲基纤维素钠， 聚丙烯酸酯， 蜡， 聚乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物， 羊毛 脂。
按照另一实施方案， 本发明的组合物被配制成用于向哺乳动物给药。在一项实施 方案中， 该哺乳动物是人。
本发明的此类药物组合物可以口服、 肠道外， 吸入喷雾， 局部， 直肠， 经鼻， 颊含， 阴 道或经由植入的贮库给药。这里使用的术语 “肠道外” 包括皮下、 静脉内、 肌内、 关节内、 滑 膜内、 胸骨内、 鞘内、 肝内、 病灶内和颅内注射或输注技术。最好是， 本发明组合物以口服或 静脉内的形式给药。
本发明组合物的无菌可注射的形式可以是水基或油基混悬剂。 这些混悬剂可以按 照本领域已知的技术使用合适的分散或润湿剂及悬浮剂配制。 无菌的可注射制剂也可以是 在无毒的肠道外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌的可注射溶液或悬浮液， 例如在 1， 3- 丁 二醇中的溶液。在可以使用的可药用的稀释剂或溶剂中包括水、 Ringer 溶液和等渗的氯化 钠溶液。此外， 无菌的非挥发性油通常被用来作为溶剂或悬浮介质。就此而言， 可以使用任 何无刺激性的非挥发油， 包括合成的甘油单酯或二酯。 脂肪酸， 例如油酸及其甘油酯衍生物 可用于制备注射剂， 正如天然的可药用油， 例如橄榄油或苧麻油一样， 尤其是其聚氧乙烯化 的形式。这些油溶液或悬浮液还可以含有长链的醇稀释剂或分散剂， 例如羧甲基纤维素或 在可药用的剂型 ( 包括乳剂和混悬剂 ) 的配制中通常使用的类似的分散剂。其它常用的表 面活性剂， 例如 Tween、 Span 及在药用的固体、 液体或其它剂型的制造中通常使用的其它乳 化剂或生物利用度增强剂， 也可以用于配制。
在一项实施方案中， 剂量水平处在每天每 kg 体重约 0.01 至约 100mg 之间的本 文所述的蛋白酶抑制剂化合物， 适合在单药治疗中用于病毒介导的 (antiviral)、 特别是 HCV(anti-HCV) 介导的疾病的预防和治疗。在另一实施方案中， 剂量水平在每天每 kg 体 重约 0.5 至约 75mg 之间的本文所述的蛋白酶抑制剂化合物， 适合以单药疗法用于病毒 (antiviral)、 特别是 HCV(anti-HCV) 介导的疾病的预防和治疗。通常， 本发明的药物组合 物每天给药约 1-5 次， 或者是以连续输注的形式给药。这种给药可以用来作为慢性或急性 治疗。 可以与载体材料结合以形成单个剂型的活性成分的数量会随所治疗的宿主和具体的 给药方式而变。典型的制剂中含有约 5-95％的活性化合物 (w/w)。在一项实施方案中， 此 类制剂中含有约 20-80％的活性化合物。
当本发明的组合物含有式 I 化合物和一种或多种其它治疗或预防药物的组合时， 式 I 化合物和另一药物的剂量水平都应该在单药方案中正常服用剂量的约 10-100％之间。 在另一实施方案中， 另一药物的剂量水平应为单药治疗方案中正常服用剂量的约 10-80％。
本发明的药物组合物可以以任何可接受的口服剂型口服用药， 包括但不限于， 胶 囊剂、 片剂、 水基混悬剂或溶液剂。在口服使用的片剂的情形， 通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还加入润滑剂， 例如硬脂酸镁。对于以胶囊剂形式口服给药， 适用的稀释剂 包括乳糖和干的玉米淀粉。当需要口服使用水基混悬剂时， 活性成分与乳化剂或悬浮剂组 合。如果需要， 还可以加入某些甜味剂、 风味剂或着色剂。
或者是， 本发明的药物组合物可以以栓剂形式用于直肠给药。这可以通过将药物 与合适的无刺激性赋形剂混合来制备， 该赋形剂在室温下是固体， 但在直肠温度是液体， 因 此会在直肠中熔化以释放出药物。此类物质包括可可脂、 蜂蜡和聚乙二醇。
本发明的药物组合物也可以局部给药， 尤其是当治疗的目标包括局部给药容易接 近的区域或器官时， 包括眼、 皮肤或下消化道的疾病。 合适的局部用制剂容易针对这些区域 或器官制备。
对下消化道的局部施用可以以直肠栓剂 ( 见上 ) 或合适的灌肠剂的形式进行。也 可以使用局部透皮贴剂。
为局部施用， 可以将药物组合物配制成含有悬浮或溶解在一种或多种载体内的活 性组分的软膏剂。 用于局部施用本发明化合物的载体包括， 但不限于， 矿物油、 液状石蜡、 白 凡士林、 聚乙二醇、 聚氧乙烯、 聚氧丙烯化合物、 乳化蜡和水。或者是， 药物组合物可以配制 成洗剂或乳膏剂， 其中含有悬浮或溶解在一种或多种可药用载体内的活性组分。合适的载 体包括， 但不限于， 矿物油、 失水山梨醇单硬脂酸酯、 聚山梨酸酯 60、 十六烷基酯蜡、 鲸蜡硬 脂醇、 2- 辛基十二烷基醇、 苯甲醇和水。
对于眼部使用， 可以将药物组合物配制成在等渗、 pH 调节的无菌盐水内的微粒化 混悬剂， 或者最好是， 配制成在等渗、 pH 调节的无菌盐水内的溶液， 加或不加防腐剂， 例如苯 扎氯铵。或者是， 对于眼部使用， 可以将药物组合物配制成软膏， 例如凡士林。
本发明的药物组合物也可以利用鼻用气雾剂或吸入法给药。 此类组合物按照药物 制剂领域众所周知的技术制备， 可以制备成在盐水中的溶液， 使用苯甲醇或其它合适的防 腐剂， 提高生物利用度的吸收促进剂， 碳氟化合物， 以及 / 或其它常规的增溶剂或分散剂。
在一项实施方案中， 药物组合物被配制成用于口服给药。
在另一实施方案中， 本发明组合物另外含有其它的抗病毒剂， 优选抗 HCV 剂。这 些抗病毒剂包括， 但不限于， 免疫调节剂， 例如 α-、 β- 和 γ- 干扰素、 聚乙二醇化的干扰 素 -α 化合物和胸腺素 ； 其它的抗病毒剂， 例如利巴韦林、 金刚烷胺和替比夫定 ； 其它的丙 型肝炎病毒蛋白酶抑制剂 (NS2-NS3 抑制剂和 NS3-NS4A 抑制剂 ) ； HCV 生命周期中其它目 标的抑制剂， 包括解旋酶和聚合酶抑制剂 ； 内部核糖体进入位点的抑制剂 ； 宽谱病毒抑制 剂， 例如 IMPDH 抑制剂 ( 例如， 美国专利 5,807,876、 6,498,178、 6,344,465 和 6,054,472， WO 97/40028、 WO98/40381、 WO 00/56331 的化合物， 以及酶酚酸及其衍生物， 包括但不限 于， VX-497、 VX-148 和 / 或 VX-944) ； 或 以 上 任 何 试 剂 的 组 合。 还 参 见 W.Markland 等， Antimicrobial & Antiviral Chemotherapy， 44， p.859(2000) 和 美 国 专 利 6,541,496。
本文中使用以下定义 ( 商标指到本申请的提交日为止可得到的产品 )。 “Peg-Intron”指 PEG83聚 乙 二 醇 化 干 扰 素 α-2b， 可 由 Schering101903392 A CN 101903393说明书53/108 页Corporation， Kenilworth， NJ 得到。
“Intron” 指 INTRON-干扰素 α-2b， 可由 ScheringCorporation， Kenilworth，NJ 得到。
“Ribavirin” 指利巴韦林 (1-β-D- 呋喃核糖基 -1H-1， 2， 4- 三唑 -3- 甲酰胺， 可 由 ICN pharmaceuticals， Inc.， Costa Mesa， CA 得到 ； 在 Merck Index 第 8365 条 ( 第 12 版 ) 中有说明 ； 还可从 ScheringCorporation， Kenilworth， NJ 作为 从 Hoffmann-LaRoche， Nutley， NJ 作为
或者得到。 聚 乙 二 醇 化 干 扰 素 α-2a， 可 由 Hoffmann-La 重 组 干 扰 素 α-2a， 可 由 Hoffmann-La Roche， 干 扰 素 α2， 可 由 BoehringerIngelheim“Pagasys”是 指 “Roferon”是 指 “Berefor” 指Roche， Nutley， NJ 得到。
Nutley， NJ 得到。
Pharmaceutical， Inc.， Ridgefield， CT 得到。
一种纯化过的天然 α- 干扰素的掺混物， 例如可由 Sumitomo， 可 由 Glaxo Wellcome LTd， Great Britain 得 到 的 干 扰 素 由 Interferon Sciences 制造的一种天然 α- 干扰素的混合物， 可Japan 得到的 Sumiferon。
αn1。
由 Purdue Frederick Co.， CT 得到。 本文中使用的术语 “干扰素” 是指一族高度同源的物种特异性蛋白， 它们抑制病毒 复制和细胞增殖， 并调节免疫响应， 例如干扰素 α、 干扰素 β 或干扰素 γ。Merck Index， 第 5015 条， 12 版。
按照本发明的一项实施方案， 干扰素是 α- 干扰素。根据另一实施方案， 本发明的 治疗复合药使用天然 α- 干扰素 2a。 或者， 本发明的治疗复合药使用天然 α- 干扰素 2b。 在 另一实施方案中， 本发明的治疗复合药使用重组的 α- 干扰素 2a 或 2b。 在又一实施方案中，
干扰素是聚乙二醇化的干扰素 2a 或 2b。适合本发明的干扰素包括 ： (a)INTRON素 -α2b， Schering plough)， (b)PEG(e) (k)
( 干扰(c) (g)(d) (h) 重组复合 α- 干扰 (j)(f) (l)ALBUFERON 。TM素， 可由 Amgen， Inc.， Newbury Park， CA 得到， (i)正如熟练的专业人员所了解的， 蛋白酶抑制剂优选口服给药。干扰素通常不是口 服使用。但是， 并非是将本发明的方法或复合药限制成任何特定的剂型或方案。因此， 本发 明复合药中的各个组分可以分别、 一起或以其任何组合的方式施用。
在一项实施方案中， 蛋白酶抑制剂和干扰素以分别的剂型给药。在一项实施方案 中， 任何另外的药物均作为单一剂型的一部分和蛋白酶抑制剂一起给药， 或作为分别的剂 型给药。当本发明涉及化合物的复合药时， 各化合物的具体数量可以随该复合药中化合物 彼此的具体数量而变。 正如熟练的技术人员所了解的， 干扰素的剂量一般用 IU 量度 ( 例如， 约 400 万 IU 至约 1200 万 IU)。因此， 可以与本发明的化合物联合使用的药剂 ( 作为免疫调节剂或其它试剂起作 用 ) 包括， 但不限于， 可由 Human GenomeSciences 得到的 AlbuferonTM( 白蛋白 - 干扰素 α) ； ( 聚乙二醇化干扰素 α-2b， 可由 Schering Corporation， Kenilworth， NJ ( 干扰素 α-2b， 可由 Schering Corporation， Kenilworth， N 得到 ) ；PEG得到 ) ； INTRON-利巴韦林 (1-β-D- 呋喃核糖基 -1H-1， 2， 4- 三唑 -3- 甲酰胺， 可由 ICNpharmaceuticals， Inc.， Costa Mesa， CA 得到 ； 在 Merck Index( 第 12 版 )8365 条有说明 ) ； (Schering Corporation， Kenilworth， NJ)， NJ) ； 得到 )； 到)； (Hoffmann-La Roche， Nutley， ( 聚 乙 二 醇 化 干 扰 素 α-2a， 可 由 Hoffmann-La Roche， Nutley， NJ ( 重 组 干 扰 素 α-2a， 可 由 Hoffmann-La Roche， Nutley， NJ 得 ( 干 扰 素 α2， 可 由 Boehringer IngelheimPharmaceutical， Inc.， ( 一 种 纯 化 的 天 然 α- 干 扰 素 的 掺 混 物， 例 (Glaxo Wellcome Ltd.， Great (Interferon Sciences 制造的一种天然 α- 干Ridgefield， CT 得 到 ) ； 如 Sumitomo， Japan 的 Sumiferon) ； Britain 的干扰素 αn1) ；扰素的混合物， 可由 Purdue Frederick Co.， CT 得到 ) ； α- 干扰素 ； 天然 α- 干扰素 2a ； 天然 α- 干扰素 2b ； 聚乙二醇化 α- 干扰素 2a 或 2b ； 重组复合 α- 干扰素 (Amgen， Inc.， Newbury Park， CA) ； (Schering plough， 干 扰 素 -α2b+ 利 巴 韦 林 ) ； 聚 乙 二 醇 化 干 扰 素 -α(Reddy， K.R. 等 “Efficacy and Safety of Pegalated(40-kd)Interferon alpha-2a Compound with Interferon alpha-2a in NoncirrhoticPatients with Chronic Hepatitis C(Hepatology， 33， pp.433-438(2001) ； 重 组 复 合 α- 干 扰 素 (Kao， J.H. 等 .， “Efficacy of Consensus Interferon inthe Treatment of Chronic Hepatitis” J.Gastroenterol.Hepatol.15， pp.1418-1423(2000)) ； 成淋巴细胞干扰素或 “天然” 干扰素 ； 干扰素 tau(Clayette， P 等， “IFN-tau， A New Interferon Type I with Antiretroviralactivity” Pathol.Biol. (Paris)47， pp.553-559(1999)) ； 白 介 素 -2(Davis， G.L. 等， “Future Options for the Management of Hepatitis C” ， Seminarsin Liver Disease， 19， pp.103-112(1999)) ； 白 介素 -6(Davis 等， “FutureOptions for the Management of Hepatitis C” ， Seminars in Liver Disease， 19， pp.103-112(1999)) ； 白介素 -12(Davis， G.L. 等， “Future Optionsfor the Management of Hepatitis C” ， Seminars in Liver Disease， 19， pp.103-112(1999)) ； 和增强 I 型辅助性 T 细胞响应的化合物 (Davis 等， “Future Options for the Management of Hepatitis C” ， Seminar in LiverDisease， 19， pp.103-112(1999))。还包括刺激细胞 中干扰素合成的化合物 (Tazulakhova， E.B. 等， “Russian Experience in Screening， Analysis， and Clinical Application of Novel Interferon Inducers” J.Interferon Cytokine Res.， 21 pp.65-73)， 包括但不限于， 单独的或与妥布拉霉素组合的双键 RNA， 以 及咪喹莫德 (3M Pharmaceuticals ； Sauder， D.N.“Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod” J.Am.Acad.Dermatol.， 43 pp.S6-11(2000)。
刺激细胞中干扰素合成的化合物 (Tazulakhova， E.B. 等， “Russian Experience in Screening， Analysis and Clinical Application ofNovel Interferon Inducers” ， J.Interferon Cytokine Res.， 21 pp.65-73) 包括， 但不限于， 单独或与妥布拉霉素组合的 双 链 RNA， 以 及 咪 喹 莫 德 (3M pharmaceticals ； Sauder， D.N.“Immunodulatory and PharmacologicProperties of Imiquimod” ， J.Am.Acad.Dermatol.， 43 pp.S6-11(2000))。
可以与本发明化合物联合使用的其它非免疫调节或免疫调节化合物包括， 但不限 于， 在 WO 02/18369 中详细说明的化合物， 该专利以参考引用的方式并入本文中 ( 例如见第 273 页 9-22 行， 和 274 页第 4 行至第 276 页第 11 行 )。
其它药剂包括在已公布的各个美国专利申请中描述的那些。 这些出版物提供了关 于可以与 N-(3-(3-(3- 甲氧基 -4-( 噁唑 -5- 基 ) 苯基 ) 脲基 ) 苄基 ) 四氢呋喃 -3- 甲酰胺 (VX950) 联合用于本发明方法， 特别是用于治疗肝炎的化合物和方法的更多说明。任何这 类方法和组合物预期都可与本发明的方法和组合物联合使用。为简便起见， 这些出版物公 开的内容以引用公布号的方式被作为参考文献， 但是应当指出， 公开的化合物特别以引用 参考的方式专门并入本文。这些出版物的实例包括 U.S.20040058982 ； U.S.20050192212 ； U.S.20050080005 ； U.S.20050062522 ； U.S.20050020503 ； U.S.20040229818 ； U.S.20040229817 ； U.S.20040224900 ； U.S.20040186125 ； U.S.20040171626 ； U.S.20040110747 ； U.S.20040072788 ； U.S.20040067901 ； U.S.20030191067 ； U.S.20030187018 ； U.S.20030186895 ； U.S.20030181363 ； U.S.20020147160 ； U.S.20040082574 ； U . S . 2 0 05 0 1 9 2 2 1 2 ； U.S.20050187192 ； U.S.20050187165 ； U.S.20050049220 ； 和 US2005/0222236。
本发明还可以包括施用细胞色素 P450 单加氧酶抑制剂。 CYP 抑制剂可用于增加被 CYP 抑制的化合物的肝浓度和 / 或血液浓度。
如果本发明的实施方案涉及 CYP 抑制剂， 则任何改善相关的 NS3/4A 蛋白酶的药物 动力学的 CYP 抑制剂均可用在本发明的方法中。这些 CYP 抑制剂包括， 但不限于， 利托那韦 (WO 94/14436)、 酮康唑、 醋竹桃霉素、 4- 甲基吡唑、 环孢素、 氯美噻唑、 西咪替丁、 伊曲康唑、 氟康唑、 咪康唑、 氟伏沙明、 氟西汀、 奈法唑酮、 含曲林、 茚地那韦、 奈非那韦、 氨普那韦、 呋山 那韦、 沙奎那韦、 洛匹那韦、 地位韦啶、 红霉素、 VX-944 和 VS-497。优选的 CYP 抑制剂包括 利托那韦、 酮康唑、 醋竹桃霉素、 4- 甲基吡唑、 环孢素和氯美噻唑。对于优选的利托那韦剂 型， 参见美国专利 6,037,157 以及其中引用的文献 ： 美国专利 5,484,801 和美国专利申请 08/402,690、 WO 95/07696 和 WO 95/09614。
测定化合物抑制细胞色素 P450 单加氧酶活力的能力的方法是已知的。例如见， 美 国专利 6,037,157 和 Yun 等， Drug Metabolism &Disposition， 21， pp.403-407(1993)。
当患者的状况改善时， 如果需要， 可以施用维持剂量的本发明化合物、 组合物或复 合药。 随后， 视症状的情况， 可以将施用的剂量或频率， 或者二者一起， 减少到改善的状况得 以保持的水平， 当症状已经减轻至所希望的水平时， 应停止治疗。但是， 患者可能因为疾病 症状的任何复发而需要长期的间歇性治疗。
还应该清楚， 对于任何特定的患者， 具体的剂量和治疗方案会与多种因素有关， 包 括所用的具体化合物、 年龄、 体重、 一般健康状况、 性别、 饮食、 用药时间、 排泄速度、 药物联 合， 以及主治医师的判断和所治疗的具体疾病的严重程度。活性成分的量也取决于所述的 具体化合物和该组合物中是否存在另外的抗病毒剂及其性质。
根据另一实施方案， 本发明提供一种治疗受病毒感染的患者的方法， 该病毒以一 种病毒编码的丝氨酸蛋白酶为特征， 它是病毒的生命周期所必需的， 所述方法是向患者施用本发明的可药用的组合物。在一项实施方案中， 本发明的方法被用来治疗受 HCV 感染的 患者。这种治疗可以完全消除病毒感染或降低其严重性。在另一实施方案中， 患者是人。
在另一实施方案中， 本发明的方法另外包含向患者施用抗病毒剂、 优选抗 HCV 剂 的步骤。这种抗病毒剂包括， 但不限于， 免疫调节剂， 例如 α-、 β- 和 γ- 干扰素， 聚乙二醇 化干扰素 -α 化合物， 和胸腺素 ； 其它的抗病毒剂， 例如利巴韦林、 金刚烷胺和替比夫定 ； 其 它的丙型肝炎病毒蛋白酶 (NS2-NS3 抑制剂和 NS3-NS4A 抑制剂 ) ； HCV 生命周期中其它目标 的抑制剂， 包括但不限于， 解旋酶和聚合酶抑制剂 ； 内部核糖体进入抑制剂 ； 宽谱病毒抑制 剂， 例如 IMPDH 抑制剂 ( 例如 VX-497 和在美国专利 5,807,876 和 6,498,178 中公开的其它 IMPDH 抑制剂， 酶酚酸及其衍生物 ) ； 细胞色素 P-450 的抑制剂， 例如利托韦尔， 或以上任何 的组合。
这些另外的药剂可以作为含有本发明化合物和另一种抗病毒剂的单一剂型的一 部分施用。或者是， 另一种抗病毒剂可以作为多重剂型的一部分， 与本发明化合物分开施 用， 其中该另一种药剂在含本发明化合物的组合物之前、 同时或之后服用。
药物组合物也可以以 “患者包” 的形式向患者开处方， 其中在单一的包装 ( 经常是 泡罩包装 ) 里包括了整个治疗过程。患者包比传统的处方优越， 因为药剂师从大量的供料 中分出一份患者的配药， 这时患者总有机会见到患者包里装的包装插页， 而在传统的处方 里通常是见不到的。包含一份包装插页已显示出会改善患者对医生指导的顺应。
当然， 利用其中包含一个指导患者正确使用本发明的包装插页的单个患者包或各 制剂的患者包来施用本发明的复合药， 是本发明另一个吸引人的特点。
本发明的另一方面是一种包装， 其中含有至少一种式 I 化合物 ( 按照本发明的剂 量 ) 和一份包含使用本发明的复合药的指南的信息插页。本发明的任何组合物、 剂型、 治疗 方案或其它实施方案均可展示在药物包装中。在本发明的另一实施方案中， 该药物包装还 含有本文所述的一种或多种另外的药剂。 该另外的一种或多种药剂可以在同一包装或不同 的包装内提供。
本发明的另一方面涉及一种包装的试剂盒， 供患者用来治疗 HCV 感染或预防 HCV 感染 ( 或用于本发明的另一方法 )， 其中包含 ： 各药物组分的单个或多个药物制剂 ； 在储存 期间和给药前盛放该药物制剂的容器 ； 和关于以有效治疗或预防 HCV 感染的方式用药的使 用指南。
因此， 本发明提供用于同时或顺序地服用一定剂量的至少一种式 I 化合物 ( 以及 任选地另一种药剂 ) 的试剂盒。通常， 这样一种试剂盒应包含在可药用载体 ( 以及在一种 或多种药物制剂 ) 中的各化合物的组合物及任选的其它药剂， 以及用于同时或顺序给药的 书面指南。
在另一实施方案中， 提供了一种包装的试剂盒， 其中含有用于自我服药的一种或 多种剂型， 一个用来在存放期间和使用之前盛放该剂型的容器装置， 优选密封装置 ； 以及供 患者进行服药的使用指南。使用指南通常是在包装插页、 标签和 / 或试剂盒的其它组件上 的书面说明， 剂型或形式如本文中所述。各个剂型可以分别地盛放， 例如在金属箔 - 塑料层 压材料的片材中， 每种剂型在单独的小槽或泡孔中与其它剂型分开， 或者各剂型可以盛放 在单独的容器 ( 如塑料瓶 ) 中。本发明试剂盒通常还包括用来包装各个试剂盒组件 ( 即， 剂型、 容器及书面的使用指南 ) 的设备。这些包装设备通常采用硬纸板或纸盒、 塑料或箔袋等形式。 本发明的试剂盒可以包含本发明的任何方面， 例如任何组合物、 剂型、 治疗方案或 药物包。本发明的包装和试剂盒任选地含有多种组合物或剂型。因此， 本发明包括装有一 种或多种组合物的包装和试剂盒。
在另一实施方案中， 本发明提供一种对于打算向患者施用的生物物质进行预处理 的方法， 其步骤包括使该生物物质与含有本发明化合物的可药用组合物接触。这类生物物 质包括， 但不限于， 血液及其组分， 例如血浆、 血小板、 亚群血细胞等 ； 器官， 例如肾、 肝、 心、 肺等 ； 精子和卵子 ； 骨髓及其组分， 以及要输注给患者的其它流体， 例如盐水、 葡萄糖等。
根据另一实施方案， 本发明提供处理任何有可能与病毒接触的材料的方法， 所述 病毒以其生命周期必需的病毒编码的丝氨酸蛋白酶为特征。 该方法包括使所述材料与本发 明化合物接触的步骤。这些材料包括， 但不限于， 手术器械和服装 ( 例如手术服、 手套、 围 裙、 罩衣、 面罩、 眼镜、 鞋类等 ) ； 实验室仪器和服装 ( 例如实验服、 手套、 围裙、 罩衣、 面罩、 眼 镜、 鞋类等 ) ； 血液收集装置和材料 ； 以及侵入性装置， 例如分流器和支架。
在另一实施方案中， 本发明化合物可以作为实验室工具用于帮助分离病毒编码的 丝氨酸蛋白酶。此方法的步骤包括提供一种附着在固体载体上的本发明化合物， 使该固体 载体与含有病毒的丝氨酸蛋白酶的样品在引起该蛋白酶与固体载体结合的条件下接触， 和 从该固体载体上洗脱该丝氨酸蛋白酶。在一项实施方案中， 用此方法分离的病毒丝氨酸蛋 白酶是 HCV NS3-NS4A 蛋白酶。
本文件中引用的所有参考文献均以参考引用的方式并入本文中。
V. 制备例和实施例
为了可以更全面地理解本文所述的发明， 提供以下制备例和实施例。 应该理解， 这 些方法和实施例只是为了示例说明， 而不要认为是以任何方式限制本发明。A. 用于式 I 化 合物的中间体的制备
下面陈述的是用来制备能用于合成式 I 化合物的中间体的各种方法。
下面陈述的是制备能用来合成式 I 化合物的中间体的各种方法。3-( 苄氧羰基氨基 )-4- 环丁基 -2- 羟基丁酸的制备。 将按照 WO 04/113294 中所述方法制备的氰醇 (1g， 3.65mmol) 在浓盐酸 (12mL) 中的溶液加热回流 18 小时。将反应混合物减压浓缩， 得到盐酸盐形式的所要的氨基 酸 (1.7g)， 它在用于下一步骤前不作进一步纯化。将以上的盐酸盐在 THF 中的溶液用 DIPEA(2.68g) 和 Z-OSu(5.16g) 处理。室温下搅拌反应混合物 8 小时。将反应混合物用甲 苯和盐酸 (12N， 直至 pH ＝ 1) 稀释。分离后， 有机层用 NaHCO3 饱和溶液萃取 (50mL， 2 次 )。 水层用 HCl(6N) 调节至酸性， 直至 pH ＝ 1， 用乙酸乙酯 (200mL) 萃取。 将合并的有机层干燥，
减压浓缩， 得到标题化合物 (0.6g)。(M+1)308。1- 环丁基 -3- 羟基 -4-( 甲氨基 )-4- 氧丁烷 -2- 基氨基甲酸苄酯的制备
向 3-( 苄氧羰基氨基 )-4- 环丁基 -2- 羟基丁酸 (250mg， 0.81mmol) 在 DCM(20mL) 中的溶液加入 HOSu(140mg， 1.22mmol)、 EDC(234mg， 1.22mmol)。搅拌 1 小时后， 向以上混 合物加入甲胺 /THF 溶液 (2N， 0.81mL)。将反应混合物搅拌 18 小时， 然后减压浓缩。残 1 留 物 用 Gilson Prep 纯 化， 得 到 标 题 化 合 物 (135mg)。 H-NMR(CDCl3) ： δ7.54-7.28(m， 5H)， 6.67(NH， 1H)， 5.03(dd， 2H)， 3.68(m， 1H)， 2.73(m， 3H)， 2.26(m， 1H)， 1.97-1.31(m， 9H).(M+1)321.1- 环丁基 -4-( 环丙基氨基 )-3- 羟基 -4- 氧丁烷 -2- 基氨基甲酸苄酯的制备
向 3-( 苄 氧 羰 基 氨 基 )-4- 环 丁 基 -2- 羟 基 丁 酸 (600mg， 1.95mmol) 在 DCM(20mL) 中 的 溶 液 加 入 HOSu(377mg， 2.93mmol)、 EDC(562mg， 2.93mmol)。 搅 拌 1 小 时 后，向 以 上 混 合 物 中 加 入 环 丙 胺 (223mg， 3.9mmol)。 用 EtOAc 萃 取 产 物。 然 后 将 合 并 的 有 机 层 用 HCl(1N)、 水、 NaHCO3 和 盐 水 洗， 减 压 浓 缩， 得 到 1- 环 丁 基 -4-( 环 丙 基 氨 基 )-3- 羟 基 -4- 氧 丁 烷 -2- 基 氨 基 甲 酸 苄 酯 (530mg)。(M+1)347。3- 氨基 -4- 环丁基 -N- 环丙基 -2- 羟基丁酰胺的制备
向 CBz 酰胺 (530mg， 1.53mmol) 在 MeOH(30mL) 中的溶液加入 Pd(OH)2/C(106mg)。 将混合物在 H2(1atm) 下搅拌 18 小时。过滤后， 将滤液减压浓缩， 得到标题化合物 (300mg)。 1 H-NMR(CDCl3) ： δ3.29(m， 1H)， 2.74(m， 1H)， 2.37-1.66(m， 9H)， 1.40(m， 1H)， 0.78(m， 2H)， 0.51(m， 2H).(M+1)213.
以 下 化 合 物 按 照 与 制 备 3- 氨 基 -4- 环 丁 基 -N- 环 丙 基 -2- 羟 基 丁 酰 胺 相 似 的 方 式， 利 用 合 适 的 胺 制 备 ：3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基庚 -6- 炔酰胺的制备 3- 氨 基 -N- 环 丙 基 -2- 羟 基 庚 -6- 炔 酰 胺 按 照 N.Kobayashi 等 在 US 1 2003/153788 中所述制备， 该专利的全部内容以参考引用的方式并入本文。 H-NMR(500MHz， DMSO-d6) ： 8.18(s)， 6.34(s)， 4.22(s)， 3.45(s)， 3.17(s)， 2.84(s)， 2.69(d， J ＝ 3.2Hz)， 2.30(m) ， 2.24(m) ， 1.70(m) ， 1.59(m) ， 0.62(d ，J ＝ 5.0Hz) ， 0.53(s)ppm ； FIA m/
z 197.01ES+.Cbz- 保 护 的 (3S)-3- 氨 基 -4- 环 丙 基 -2- 羟 基 -N- 甲 基 丁 酰 胺 的 制 备步骤1： (2S)-1- 氰基 -3- 环丙基 -1- 羟基丙 -2- 基氨基甲酸苄酯的制备
在 10 ℃ 下 向 醛 (7.9g， 32mmol) 在 MeOH(50mL) 中 的 溶 液 加 入 Na2S2O4(6.13g， 35.2mmol)， 将形成的混合物温热至室温， 搅拌 2 小时后冷却至 10℃。向此反应混合物中加 入 KCN 在水 (50mL) 中的溶液。 室温下搅拌 18 小时后， 该混合物用 TBME 萃取 (100mL， 2 次 )。 合并的有机层用水和盐水洗， 干燥并减压浓缩， 得到标题化合物 (8g)。(M+1)275。步骤 2 ：(3S)-3-( 苄氧羰基氨基 )-4- 环丙基 -2- 羟基丁酸甲酯的制备在 -20℃向氰醇 (1g， 3.65mmol) 在 MeOH(15mL) 中的溶液鼓入干燥的 HCl 气流 30 分钟。形成的混合物在室温下搅拌 2 小时。将反应混合物用氮气吹洗 30 分， 然后浓缩。残 留物在 0℃用冰水中止反应， 然后在室温下搅拌 1 小时。产物用 EtOAc 萃取。合并的有机层 用 NaHCO3、 水、 盐水洗， 减压浓缩， 得到标题化合物 (0.5g)。1H-NMR(CDCl3)δ ： 7.31-7.30(m， 5H)， 5.09(d， 2H)， 4.44-4.14(m， 2H)， 3.78(d， 3H)， 1.58-1.42(m， 2H)， 0.70(m， 1H)， 0.47(t， 2H)， 0.11-0.01(m， 2H).(M+1)308. 步骤 3 ： (3S)-3-( 苄氧羰基氨基 )-4- 环丙基 -2- 羟基丁
酸的制备 向 步 骤 2 的 甲 酯 (400mg， 1.3mmol) 在 THF(8mL) 和 水 (6.63mL) 中 的 溶 液 加 入 LiOH(1N， 1.37mL)。将反应混合物搅拌 30 分， 然后用 1.0N HCl 酸化至 pH ＝ 3-4。该混合物 用 EtOAc 萃取 (20mL， 2 次 )。合并的有机层用水、 盐水洗， 然后减压浓缩， 得到标题化合物 (370mg)。(M+1)294。步骤 4 ： (2S)-1- 环丙基 -3- 羟基 -4-( 甲氨基 )-4- 氧丁烷 -2- 基氨
基甲酸苄酯的制备
向 (3S)-3-( 苄 氧 羰 基 氨 基 )-4- 环 丙 基 -2- 羟 基 丁 酸 (180mg， 0.26mmol) 在 DCM(20mL) 中 的 溶 液 加 入 HOSu(105mg， 0.92mmol) 和 EDC(175mg， 0.92mmol)。 搅 拌 30 分钟后， 向以上混合物中加入甲胺的 THF 溶液 (2N， 0.92mL)。将反应混合物搅拌 18 小时， 然后减压浓缩。残留物用 Gilson Prep 纯化， 得到标题化合物 (50mg)。1H-NMR(CDCl3) ： δ7.53-7.26(m， 5H)， 6.83(NH， 1H)， 5.25(NH， 1H)， 5.05(m， 2H)， 4.25-3.89(m， 3H)， 2.70(m， 3H)， 1.4(m， 1H)， 0.86(m， 1H)， 0.61(m， 1H)， 0.38(m， 2H)， 0.33(m， 2H).(M+1)307.
以 下 化 合 物 可 以 用 类 似 的 方 式， 通 过 使 用 合 适 的 胺 然 后 氢 化 来 制 备。以 下 化 合 物 可 以 按 照 Perni ，R 等 在 WO 01/74768 中 所 述 方 法 制 备，该 专 利 的 全 部 内 容 以 参 考 引 用 的 方 式 并 入 本 文。
(S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酸的制备在 一 只 5L 的 RB 烧 瓶 中 将 甘 氨 酸 叔 丁 酯 (74g， 0.56mol， 1.02 当 量 ) 溶 在 碳 酸 氢 钠 饱 和 溶 液 (11 倍 体 积 ) 中。 将 环 戊 基 2， 5- 二 氧 吡 咯 烷 -1- 基 碳 酸 酯 (126g， 0.55mol， 1 当量 ) 溶于丙酮 (5.5vol)， 将该溶液经由加液漏斗在室温下慢慢加到该甘 氨 酸 的 溶 液 中。 将 反 应 混 合 物 在 室 温 下 搅 拌 直 至 反 应 完 全 ( 约 4 小 时 )。 减 压 除 去 丙酮， 余下的水溶液用 30 ％的乙酸乙酯 / 己烷萃取 (3 次， 每次 5.5 体积 )。倒出有机 层。用 2N HCl 将水层的 pH 调节至 2， 然后用乙酸乙酯萃取 (3 次， 5.5 体积 )。合并的 有机层用 Na2SO4 干燥， 过滤， 减压除去溶剂， 得到透明的油状物， 其慢慢晶化。粗产物 自己烷 / 乙酸乙酯中结晶， 得到 (S)-2-( 环戊氧基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酸， 为白 色固体 (82g)。提取母液， 得到第二批晶体 ( 总产量 105.54g)。磺酰基化合物的制备
以上所示的化合物 S1、 S2、 S3 和 S4 按照 WO 2005/095403 和 PCT/US 2005/010494 中所述步骤制备， 其全部内容以参考引用的方式并入本文中。具体地说， 在 0℃向氯磺酰 异 氰 酸 酯 (10mL， 115mmol) 在 CH2Cl2(200mL) 中 的 溶 液 加 入 叔 丁 醇 (11mL， 1 当 量 )。 将 该混合物搅拌 60 分， 然后在 0 ℃下经由导管加入到环丙胺 (6.6g) 在含三乙胺 (30mL) 的 CH2Cl2(200mL) 中 的溶液里， 同时 经由加液漏 斗加 入三 乙胺 (50mL) 在 CH2Cl2(100mL) 中 的 溶 液。 内 温 保 持 低 于 8 ℃。 加 完 后 在 室 温 下 搅 拌 4 小 时。 然 后 用 CH2Cl2 稀 释
反 应 混 合 物 并 转 移 到 分 液 漏 斗 中， 用 1N HCl(2 次， 各 400mL) 和 盐 水 (300mL) 洗， 干 燥 (MgSO4)， 过 滤 和 浓 缩。 产 物 自 乙 酸 乙 酯 / 己 烷 中 重 结 晶， 得 到 16.8g(71.3mmol， 62 ％ )S3。 用 三 氟 乙 酸 在 CH2Cl2 中 将 化 合 物 S3 去 保 护， 以 定 量 产 率 得 到 化 合 物 S4。
将氨气经由气体分散管鼓入冷却至 0℃的 THF(40ml)5 分钟。在 0℃下向此溶液中 加入环丙基磺酰氯 (1g， 7.1mmol)。 室温下搅拌反应混合物过夜， 然后经硅胶塞过滤， 随后用 1 EtOAc 洗脱， 得到 750mg(6.19mmol， 87 ％ ) 环丙基磺酰胺。 H-NMR(500MHz， Methanol-d4) ： 4.79(s， 2H)， 2.59-2.54(m， 1H)， 1.06-0.96(m， 4H).在 0 ℃ 下 向 化 合 物 XX5(1.37g， 6.41mmol) 在 THF(30ml) 中 的 溶 液 逐 滴 加 入 硼 烷 - 二甲基硫醚 (3.85ml， 7.8mmol， 2.0M 甲苯溶液 )。将反应混合物搅拌 1 小时并逐渐温热 至室温， 用水 (20ml) 中止反应， 用乙酸乙酯萃取 (3 次， 每次 30ml)。将合并的有机层干燥， 减压浓缩， 得到 1.3g 无色油状物， 使用前不作进一步纯化。在 -78℃和惰性气氛下向草酰 氯 (2.24ml， 25.6mmol) 在 CH2Cl2(15ml， 无水 ) 中的溶液逐滴加入 DMSO(2.73ml， 38.5mmol) 在 CH2Cl2(8ml) 中的溶液。搅拌 10 分钟后， 逐滴加入醇 (1.3g， 6.41mmol) 的 CH2Cl2(6ml) 溶 液。再过 10 分钟后， 加入三乙胺 (7.15ml， 51.3mmol) 的 CH2Cl2 溶液， 将反应混合物再搅拌 30 分， 同时温热至 0℃。该反应混合物依次用 1M HCl(20ml) 和盐水 (20ml) 洗。有机层用 MgSO4 干燥， 减压浓缩。得到的油状物经硅胶色谱法纯化， 得到 748mg(2 步 59％ ) 醛 XX6。 1 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 9.75(s， 1H)， 3.67(s， 3H)， 2.91-2.85(m， 1H)， 2.78-2.74(m， 1H)， 2.56-2.52(m， 1H)， 1.74-1.71(m， 2H)， 1.66-1.58(m， 4H)， 1.27-0.95(m， 5H).
向 化 合 物 XX6(581mg， 2.9mmol) 和 K2CO3(811mg， 5.9mmol) 在 MeOH(15ml) 中 的 溶 液加入 1- 重氮基 -2- 氧代丙基磷酸二甲酯 (676mg， 3.5mmol， Synlett 1996， p.521)。室 温下搅拌反应混合物 1 小时， 用乙醚 (20ml) 稀释， 用 NaHCO3 饱和溶液 (10ml， 水溶液 ) 洗。有机层用 MgSO4 干燥， 减压浓缩， 得到 600mg(100 ％ ) 炔烃 XX7， 它在使用前不作进一 1 步 纯 化。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 3.69(s， 3H)， 2.48-2.37(m)， 1.95(s， H)， 1.73-1.60(m)， 1.30-0.94(m).
向 化 合 物 XX7(600mg， 2.9mmol) 在 THF/ 水 /MeOH(25ml， 2 ∶ 1 ∶ 2) 中 的 溶 液 加 入 一 水 合 LiOH(850mg， 20.3mmol)。 室 温 下 搅 拌 反 应 混 合 物 2 小 时，用 1N HCl(25ml) 酸 化，用 EtOAc 萃 取 (3 次，每 次 15ml)。 合 并 的 有 机 层 用 MgSO4 干 燥 并 浓 缩，得 到 533mg(99 ％ ) 羧 酸 XX8，它 在 使 用 前 不 再 纯 化。
向 化 合 物 XX5(100mg， 0.5mmol) 在 CH2Cl2(2.5ml) 中 的 溶 液 加 入 EDC(107mg， 0.6mmol)、 HOBt(76mg， 0.6mmol) 和三乙胺 (195μL， 1.4mmol)。向此活化的酸溶液中加入甲 胺盐酸盐 (38mg， 0.6mmol)， 室温下搅拌反应混合物 12 小时。将反应混合物用 H2O(2ml)、 1N HCl(2ml) 和 NaHCO3 饱和溶液 (2ml) 洗。 有机层用 MgSO4 干燥， 浓缩后得到 100mg 酰胺 XX9， 它 在使用前不再纯化。1H-NMR(500MHz， CDCl3)3.61(s， 3H)， 2.75-2.70(m， 4H)， 2.48-2.42(m， 1H)， 2.28-2.24(m， 1H)， 1.66-1.48(m， 6H)， 1.35-0.90(m， 5H).
向 化 合 物 XX9(100mg， 0.5mmol) 在 THF/H2O/MeOH(3ml， 2 ∶ 1 ∶ 2) 中 的 溶 液 加入一水合 LiOH(124mg， 3mmol)。将反应混合物在室温下搅拌 2 小时， 用 1N HCl(4ml) 酸 化， 用 EtOAc 萃 取 (3×5ml)。 合 并 的 有 机 相 用 MgSO4 干 燥 并 浓 缩， 得 到 87mg 羧 1 酸 XX10，它 在 使 用 前 不 再 纯 化。 H-NMR(500MHz， CDCl3)11.32(s， H)， 2.75-2.64(m， H) ， 2.52-2.46(m ， H) ， 2.37-2.33(m ， H) ， 2.25(td ， J ＝ 8.7 ， 2.9Hz ， H) ， 1.97(s ， H) ， 1.79(s ，H) ， 1.74-1.62(m ，H) ， 1.59-1.49(m ，H) ， 1.23-1.12(m ，H) ， 1.08-0.81(m ，
H).
中 间 体 XX12 按 照 上 述 制 备 中 间 体 XX10 的 步 骤 制 备， 只是使用吡咯烷代替 1 甲 胺 盐 酸 盐 作 为 反 应 试 剂。 H-NMR(500MHz， CDCl3)11.47(s， 1H)， 3.45-3.32(m， 4H)， 2.76-2.72(m， 1H)， 2.64-2.59(m， 1H)， 2.37-2.33(m， 1H)， 1.92-1.76(m， 4H)， 1.71-1.57(m)，1 . 2 2 0 . 8 4 ( m ) .在回流下向化合物 XX5(1g， 4.7mmol) 和氧化汞黄 (1.01g， 4.7mmol) 在 CCl4(23ml) 中的溶液于 30 分钟内逐滴加入溴 (264μL， 5.1mmol) 在 CCl4(5ml) 中的溶液。将反应混合 物搅拌回流 1 小时， 冷却至室温， 用 CH2Cl2(20ml) 稀释， 用 1N HCl(10ml)、 H2O(10ml) 和盐 水 (10ml) 洗。有机层用 MgSO4 干燥， 减压浓缩， 得到 1.3g 化合物 XX13， 为无色油状物， 使 1 用前不再纯化。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 3.67(s， 3H)， 3.52-3.44(m， 2H)， 2.63-2.58(m， 1H)， 1.70-1.64(m， 3H)， 1.60-1.54(m， 3H)， 1.24-0.92(m， 5H).
向化合物 XX13(578mg， 2.3mmol) 在 DMSO(12ml) 中的溶液加入硼氢化钠 (177mg， 4.7mmol)。将反应混合物在 90℃搅拌 1 小时， 用水 (10ml) 稀释， 用己烷 (3×15ml) 萃取。 合并的有机相用 MgSO4 干燥， 减压浓缩。经硅胶色谱法纯化， 用 EtOAc/ 石油醚洗脱， 得到 1 204mg 化 合 物 XX14。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 3.59(s， 3H)， 2.18(m， 1H)， 1.69-1.43(m， 6H)，
1.21-0.83(m， 8H).
中间体 XX15 按照制备中间体 XX10 的步骤 b 的程序制备， 只是用反应物 XX14 代替XX9。向 (S)-2- 氨 基 -3， 3- 二 甲 基 丁 酸 (787mg， 6.0mmol)、 溴 苯 (632μL， 6.0mmol)、 K2CO3(1.24g， 9.0mmol) 和 CuI(114mg， 0.6mmol) 的溶液加入 N， N- 二甲基乙酰胺 (7.5ml)。 将该混合物在一只密封的高压容器中于 90 ℃搅拌 16 小时。反应混合物用 H2O(15ml) 稀 释， 冷却至 0℃， 用 1N HCl 酸化至 pH 约 5。该混合物用 EtOAc(3×20ml) 萃取， 合并的有机 相用盐水 (1×15ml) 洗， 用 MgSO4 干燥， 减压浓缩。得到的残留物用硅胶色谱法纯化， 得到 1 150mg(12％ ) 化合物 XX16。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 7.11-7.09(m， 2H)， 6.69(t， J ＝ 7.3Hz，
1H)， 6.60-6.59(m， 2H)， 3.69(s， 1H)， 1.02(s， 9H).中 间 体 XX17 按 照 制 备 XX16 的 步 骤 制 备，只 是 用 1- 溴 -3- 甲 氧 基 苯 代 替 溴 苯 作 为 反 应 试 剂。1H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 6.98(t， J ＝ 8.1Hz， 1H)， 6.24-6.18(m， 2H)， 6.14(s， 1H)， 3.69(s， 1H)， 3.66(s， 3H)， 1.00(s，
9H). 向 (S)-3-( 甲氧羰基 )-4- 甲基戊酸 (200mg， 1.2mmol) 在 CH2Cl2(6ml) 中的溶液 加入 EDC(264mg， 1.4mmol)、 HOBt(186mg， 1.4mmol) 和三乙胺 (481μL， 3.5mmol)。向此活 化的酸溶液中加入环己胺 (158μL， 1.4mmol)， 将反应混合物搅拌 4 小时。用 H2O(3ml)、 1N HCl(3ml) 和 NaHCO3 饱和溶液 (3ml) 洗反应混合物。有机层用 MgSO4 干燥， 减压浓缩。得到 1 290mg 化合物 XX18， 它在使用前不再纯化。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 5.78(d， J ＝ 7.5Hz， 1H)， 3.69-3.61(m， 4H)， 2.73-2.69(m， 1H)， 2.45-2.40(m， 1H)， 2.24-2.20(m， 1H)， 1.85(m， 1H)， 1H)， 1.31-1.22(m， 2H)， 1.12-1.00(m， 1.82-1.76(m， 2H)， 1.63-1.60(m， 2H)， 1.54-1.50(m， 3H)， 0.90-0.85(m， 6H).
中间体 XX19 按照上述制备化合物 XX10 的步骤制备， 但是用 XX18 代替化合物 XX9
作为反应试剂。ES(+)MS ： m/e 256(M+H)+。
中间体 XX20 按照上述制备化合物 XX18 或 XX19 的步骤制备， 但是用异丙胺代替环己烷作为反应试剂。ES(+)MS ： m/e 216(M+H)+。中 间 体 XX21 按 照 上 述 制 备 XX18 或 XX19 的 步 骤 制 备， 但 是 用 苄 胺 代 替 环 己 胺 作 为 反 应 试 剂。ES(+)MS ： m/e 264(M+H)+。
室 温 下 将 甘 氨 酸 甲 酯 (50.0g) 悬 浮 在 MTBE(300ml) 中。 向 其 中 加 入 苯 甲 醛 (40.5ml) 和无水 Na2SO4(33.9g)。将该悬浮液在冰水浴中冷却 20 分钟， 然后于 15 分钟内逐 滴加入三乙胺 (80ml)。 5 分钟后， 从冰浴中取出反应混合物， 在室温下搅拌 24 小时。 用 200ml 冰水混合物中止反应， 分离有机层。水层用 MTBE(200ml) 萃取。将有机层合并， 用盐水和 NaHCO3 饱和水溶液的 1 ∶ 1 混合物洗， 干燥 (MgSO4)， 浓缩， 得到 62.83g N- 苄胺， 为黄色油状 1 物。H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 8.30(s， 1H)， 7.78-7.77(m， 2H)， 7.45-7.40(m， 3H)， 4.42(s， 2H)，
3.78(s， 3H).室温下将叔丁醇锂 (15.13g) 悬浮在无水甲苯 (200ml) 中。于 40 分钟内向其中逐 滴加入甘氨酸甲酯的 N- 苄胺 (16.89g) 和 1， 4- 二溴 -2- 丁烯 (19.28g) 在甲苯 (100ml) 中 的溶液。将该红色溶液搅拌 100 分钟， 然后用水 (200ml) 中止反应。将内容物转移到一只 分液漏斗中， 用 MTBE(200ml) 稀释。分离各层， 水层用 MTBE 萃取。合并的有机层与 1N HCl 水溶液 (500ml) 一起搅拌 3 小时。分离各层， 有机层用 H2O(100ml) 萃取。将水层合并， 加 入 NaCl(250g) 和 MTBE(700ml)， 用 10N NaOH 水溶液调节至约 pH 13。分离有机层， 水层用 MTBE 萃取 (2 次， 每次 300ml)。将有机层合并， 干燥 (MgSO4)， 浓缩至体积约 400ml。向此溶 液中加入二碳酸二叔丁酯 (25.0g)， 将反应混合物搅拌 3 天。加入另一份二碳酸二叔丁酯 (5.6g)， 随后将反应混合物在 60℃浴中加热 1 小时。 反应混合物用快速硅胶柱色谱法纯化， 用 EtOAc/ 己烷 (1 ∶ 9) 作洗脱剂， 得到 10.89g 外消旋的 N-Boc-(1R， 2S)/(1S， 2R)-1- 氨 基 -2- 乙 烯 基 环 丙 烷 羧 酸 甲 酯。 参 见 例 如 WO 00/09558 和 Beaulieu， P.L. 等， J.Org. 1 Chem.， 70(15)， 5869-5879， 2005。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 5.78-5.71(m， 1H)， 5.29-5.26(m，
1H)， 5.11(dd， J ＝ 1.2， 10.3Hz， 1H)， 3.71(s， 3H)， 2.14(q， J ＝ 8.8Hz， 1H)， 1.79(s， 1H)，1.53-1.45(m， 10H).将 外 消 旋 的 N-Boc-(1R， 2S)/(1S， 2R)-1- 氨 基 -2- 乙 烯 基 环 丙 烷 羧 酸 甲 酯 (4.2g) 溶 于 丙 酮 (80ml)， 然 后 用 水 (160ml) 稀 释。 用 0.2N NaOH 水 溶 液 将 pH 调 节 至 7.8。向溶液中加入枯草杆菌蛋白酶 A(Sigma， St.Louis， MO， USA 的产品 P-5380)。逐滴
加入 0.1N NaOH 水溶液使其 pH 值在 7.4-8.7 之间保持 3 天。当反应混合物的 HPLC 分 析 (Chiralpak AD， Daicel Chemical Industries， Tokyo， 4.6mm×250mm， 0.5ml/ 分， 10-85 ％ 2- 丙醇 / 己烷 10 分钟， 监测器 215.4nm) 指示只有 (1R， 2S)- 对映体存在 ((1R， 2S) 的保留时间＝ 6.2 分， (1S， 2R) ＝ 5.9 分 ) 时， 用 2N NaOH 水溶液将 pH 调节至 8.5。 将反应混合物转移到分液漏斗中， 用 MTBE(3×400ml) 萃取。萃取液用 NaHCO3 饱和水溶 液 (3×150ml)、 水 (2×200ml) 洗， 干燥 (MgSO4)。将溶液过滤， 浓缩， 用 CH2Cl2 稀释， 干燥 (MgSO4)， 过滤并浓缩， 得到 1.95g N-Boc-(1R， 2S)-1- 氨基 -2- 乙烯基环丙烷羧酸甲酯。将 N-Boc-(1R， 2S)-1- 氨 基 -2- 乙 烯 基 环 丙 烷 羧 酸 甲 酯 (125mg， 0.52mmol) 在 CH2Cl2/TFA(1 ∶ 1， 2ml) 中 于 室 温 下 搅 拌 90 分 钟。 减 压 除 去 溶 剂，得 到 (1R， 2S)-1- 氨 基 -2- 乙 烯 基 环 丙 烷 羧 酸 甲 酯 三 氟 乙 酸 盐。
将 化 合 物 XX1(2.34g， 9.71mmol) 与 LiOH·H2O(0.45g， 10.7mmol) 一 起 在 室 温 下于 THF/H2O/THF(3 ∶ 1 ∶ 0.5， 22ml) 中搅拌过夜。蒸除溶剂， 残留的固体置于 CH2Cl2/ EtOAc 和 1N 盐 酸 中。 水 层 用 CH2Cl2 萃 取， 合 并 的 有 机 萃 取 液 用 MgSO4 干 燥， 过滤并浓 缩。将此物质在室温下溶于 CH2Cl2(10ml) 中， 用三氟乙酸 (10ml) 处理。在 70 分时 HPLC 分析表明起始物不再存在。减压除去溶剂， 得到粘稠的浅色油状物。将其溶在另外的 CH2Cl2(30ml) 中， 在旋转蒸发仪上蒸发， 得到棕色固体。将此固体溶在饱和 NaHCO3 水溶 液 和 丙 酮 (1 ∶ 1， 50ml) 中， 用 Fmoc-Cl(2.65g， 10.2mmol) 处 理。4 小 时 后， 将烧瓶内 容物用 CH2Cl2 转移到分液漏斗中， 用 2N 盐酸酸化。水层用 CH2Cl2 萃取， 合并的有机层 用 MgSO4 干 燥， 过 滤 并 浓 缩， 得 到 1.86g(5.3mmol)XX2， 为 浅 黄 色 固 体。(M+1) ＝ 350.1。
PS-Wang 树 脂 (2.0g， 1.0 当 量 ) 在 DMF( 足 够 覆 盖 ) 中 溶 胀。 将 (1R， 2S)-1-(((9H- 芴 -9- 基 ) 甲氧基 ) 羰基 ) 氨基 )-2- 乙烯基环丙烷羧酸 (XX3)(922mg， 1.1当量 ) 在 DCM 中搅拌。向该 DCM 溶液中加入二异丙基碳化二亚胺 (409μL， 1.1 当量 ) 并在 4 ℃搅拌 2 小时， 然后加到树脂和 DMF 中。将二甲基氨基吡啶 (29mg， 0.1 当量 ) 在 DMF 中 的溶液加到树脂溶液中， 摇动 5 小时。排出液体， 用 DMF(3 次 ) 和 DCM(2 次 ) 洗， 得到化合 物 XX4。 2-( 二环 [4.1.0]庚 -1- 基 ) 乙酸 X2 的制备 ：
按 照 E.J.Kantorowski 等 在 J.Org.Chem.， 1999， 64， 570-580 中 所 述 方 法，将 市 售 的 化 合 物 X1(Aldrich Chemical Co.， Milwaukee， Wisconsin， USA) 转 化 1 成 X2 。 H-NMR(CDCl 3 ， 500MHz) ： 9.2(br s ， 1H) ， 2.23(m ， 2H) ， 1.92(m ， 1H) ， 1.76(m ， 2H) ， 1.58(m ， 1H) ， 1.34(m ， 1H) ， 1.18(m ， 4H) ， 0.85(m ， 1H) ， 0.52(dd ， 1H) ， 0.31(t ， 1H) ppm. X5 的制备 ： 化合物 X4 基本上使用 Bull.Chem.Soc.Jpn.， 1971， 44， 1090 中所述步骤制备。具 体地说， 在 80℃于 30 分钟内， 向环己酮 X3(4.9g) 和锌粉 (4.9g) 在甲苯中的混合物于充分 搅拌下逐滴加入溴乙酸乙酯 (8.3ml)(Aldrich Chemical Co.， Milwaukee， Wiscosin， USA) 的甲苯溶液。小心地监测加入过程， 温度保持在 80℃。加完后， 将混合物回流 90 分， 冷却， 用 1N 盐酸分解， 并用乙醚萃取。 有机相用水和 NaHCO3 水溶液洗， 干燥 (MgSO4)， 减压浓缩， 得 1 到 X4(5.9g)。H-NMR(CDCl3， 500MHz)4.16(t， 2H)， 3.0(br s， 1H)， 2.46(s， 2H)， 1.40-1.69(m， + 10H)， 1.27(t， 3H)ppm ； FIA m/z 187.1ES .
向 X4(510mg) 在 MeOH 中 的 溶 液 加 入 1N NaOH 水 溶 液。 将 反 应 混 合 物 在 60 ℃ 搅拌 1 小时， 然后减压浓缩。残留物用水稀释， 用 Et2O 洗， 水层用 1N 柠檬酸水溶液酸 化， 用 EtOAc 萃 取。 有 机 相 用 MgSO4 干 燥， 减 压 浓 缩， 重 结 晶 后 得 到 化 合 物 X5(200mg) ： 1 H-NMR(CDCl 3 ， 500MHz)3.63(s ， 1H) ， 2.45(s ， 2H) ， 1.22-1.64(m ， 10H)ppm ； FIA m/z
2-(1- 羟基环己基 ) 乙酸157.2ES-.2-(1- 甲基环己基 ) 乙酸 (X8) 的制备
市 售 的 化 合 物 X6(Aldrich Chemical Co.， Milwaukee， Wisconsin， USA) 按 照 N.Asao 等 在 Tetrahedron Lett.， 2003， 44， 4265 中 所 述 方 法 转 化 成 化 合 物 X7。 1 H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 4.12(q， 2H)， 2.22(s， 2H)， 1.30-1.48(m， 10H)， 1.25(t， 3H)， 1.01(s， 3H)ppm.
向 化 合 物 X7 在 EtOH 中 的 溶 液 加 入 1N NaOH 水 溶 液。 将 反 应 混 合 物 在 50 ℃ 搅 拌 3 小 时， 然 后 减 压 浓 缩。 残 留 物 用 水 稀 释， 用 Et2O 洗， 水 层 用 1N 柠 檬 酸 水 溶 液 酸 化， 用 CH2Cl2 萃 取。 将 有 机 相 干 燥 (MgSO4)， 减 压 浓 缩， 得 到 化 合 物 X8。 1 H-NMR(CDCl 3 ， 500MHz) ： 11.7(s ， 1H) ， 2.26(s ， 2H) ， 1.32-1.49(m ， 10H) ， 1.05(s ， 3H)ppm. 2-(4- 甲基四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酸 (X12) 的制备
向二氢 -2H- 吡喃 -4(3H)- 酮 (X9)(3.13g， Aldrich) 在甲苯中的溶液加入 ( 乙氧羰 基亚甲基 ) 三苯基磷烷 (12.0g， Aldrich)。 将该溶液在 110℃搅拌 3 天。 得到的黑色溶液减 压浓缩， 残留物直接在硅胶柱上纯化， 得到化合物 X10(4.54g)， 为透明液体。1H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 5.66(s， 1H)， 4.16(q， 2H)， 3.98(s， 4H)， 3.00(t， 2H)， 2.38(m， 2H)， 1.77(m， 4H)， 1.27(t， 3H)ppm.
化 合 物 X11 和 X12 按 照 与 对 化 合 物 X7 和 X8 相 似 的 方 式 得 到。1H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 3.64-3.73(m， 4H)， 2.35(s， 2H)， 1.65(ddd， 2H)， 1.50(ddt， 2H)， 1.17(s， 3H)ppm.2-( 顺 -2， 6- 二甲基四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酸 (X16) 的制备
中间体 X13 由市售的 2， 6- 二甲基 -g- 吡喃酮 (AldrichChemical Co.， Milwaukee， Wisconsin， USA) 制备。将 g- 吡喃酮溶于乙醇， 用 10％ Pd/C 氢化 (2atm， H2)2 小时。随后 滤出催化剂， 将溶液减压浓缩， 得到粗制的 X13， 将其用柱色谱法纯化， 得到纯化合物 X13。 1 H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 3.72(m， 2H)， 2.35(m， 2H)， 2.21(dd， 2H)， 1.32(d， 6H)ppm.
化 合 物 X14 随 后 按 照 与 对 化 合 物 X10 所 述 的 相 似 方 式 由 化 合 物 X13 得 到。 1 H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 5.65(s， 1H)， 4.15(q， 2H)， 3.80(dt， 1H)， 3.49(m， 2H)， 2.17(dt， 1H)， + 2.07(dd， 1H)， 1.79(dt， 1H)， 1.28(m， 9H)ppm.LC-MSm/z 199.126ES .
将 化 合 物 X14 在 EtOAc 中 的 溶 液 用 10 ％ 湿 Pd/C 氢 化 (1atm， H2)1 小 时。 滤 除 催 化 剂， 将 溶 液 减 压 浓 缩， 得 到 粗 制 的 化 合 物 X15， 将其用于下一步 骤， 不 作 进 一 步 纯 化。 随 后 按 照 对 化 合 物 X8 所 述 的 类 似 方 式， 从 化 合 物 X15 制 1 备 化 合 物 X16。 H-NMR(CDCl3， 500MHz) 主 要 非 对 映 体 ： 3.50(m， 2H)， 2.27(d， 2H)， 2.07(m， 1H)， 1.71(m， 2H)， 1.19(d， 6H)0.92(m， 2H)ppm ； 次 要 非 对 映 体 ： 3.64(m ， 2H) ， 2.56(d ， 2H) ， 2.47(m ， 1H) ， 1.49(m ， 2H) ， 1.15(d ， 6H) ， 0.86(m ， 2H) ppm. 2-(1， 4- 二氧杂螺 [4， 5] 癸 -8- 基 ) 乙酸 (X20) 的制备
化合物 X20 按照以上对制备化合物 X16 所述的步骤由化合物 X17( 得自 Aldrich) 制备。 1
化 合 物 X18 ： H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 5.66(s， 1H)， 4.15(q， 2H)， 3.98(s， 4H)， 3.00(m， 2H)， 2.38(m， 2H)， 1.77(m， 4H)， 1.27(t， 3H)ppm. 1
化 合 物 X19 ： H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 4.12(q， 2H)， 3.93(s， 4H)， (d， 2H)， 1.83(m， 1H)， 1.72(m， 4H)， 1.56(dt， 2H)， 1.33(m， 2H)， 1.30(m， 3H)ppm.1 化合物 X20 ： H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 3.93(s， 4H)， 2.28(d， 2H)， 1.73-1.86(m， 4H)， 1.57(dt， 2H)， 1.35(m， 2H)ppm.2-( 反 -2， 6- 二甲基四氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酸 (X25) 的制备 ：
化合物 X21 和 X22 分别按照 S.Danishefsky 等在 J.Org.Chem.1982， 47， 1597-1598 和 D.S.Reddy 等在 J.Org.Chem.2004， 69， 1716-1719 中所述方法制备。化合物 X25 由化合 物 X22 按照以上对制备 X16 所述方法制备。 1
化 合 物 X23 ： H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 5.72(s， 1H)， 4.16(q， 2H)， 4.08(q， 2H)， 3.06(dd， 1H)， 2.75(dd， 1H)， 2.39(dd， 1H)， 2.05(dd， 1H)， 1.28(t， 3H)， 1.19(m， 6H)ppm. 1
化 合 物 X25 ： H-NMR(CDCl 3 ， 500MHz)4.24(m ， 1H) ， 3.78(m ， 1H) ， 2.25(m ， 3H) ， 1.71(m ， 1H) ， 1.53(m ， 1H) ， 1.46(m ， 1H) ， 1.29(d ， 3H) ， 1.13(d ， 3H) ， 0.90(m ， 1H) ppm. 2-(4- 羟基 -4- 甲基环己基 ) 乙酸 (X27) 的制备 ：
将 化 合 物 X20 在 二 氧 六 环 中 的 溶 液 用 4N 的 HCl/ 二 氧 六 环 处 理。 将 反 应 溶 液 在 室 温 下 搅 拌 4 小 时， 减 压 浓 缩， 得 到 粗 制 的 化 合 物 X26， 它不经进一步纯化直接 用 于 下 一 步 骤。 在 搅 拌 下 向 化 合 物 X26 在 THF 中 的 溶 液 慢 慢 加 入 MeMgBr(3N THF 溶 液 )。 形 成 的 混 合 物 在 40 ℃ 搅 拌 3 小 时， 用 1N 柠 檬 酸 水 溶 液 中 止 反 应， 用 EtOAc 稀 释。 分 离 各 相， 有 机 相 用 MgSO4 干 燥， 减 压 浓 缩， 在 硅 胶 上 用 色 谱 法 纯 化， 得到化合物 1 X27， 为两种非对映体的混合物 ： 异构体 1 ： H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 4.50(br s)， 2.27(m， 1 2H)， 1.75(m， 1H)， 1.65(m， 4H)， 1.39(m， 4H)， 1.22(s， 3H)ppm ； 异 构 体 2 ： H-NMR(CDCl3， 500MHz) ： 2.12(m， 2H)， 1.69(m， 3H)， 1.56(m， 2H) ， 1.39(m， 2H)， 1.12(s， 3H)， 1.05(m， 2H) ppm. 2-(2， 2- 二 甲 基 四 氢 -2H- 吡喃 -4- 基 ) 乙酸的制备
向 上 述 甲 酯 (500mg ， 2.69mmol) 在 THF(21.5ml) 、 MeOH(21.5ml) 和 水 (10.75ml) 中 的 溶 液 加 入 LiOH(1N， 10.75ml)。 将 反 应 混 合 物 搅 拌 3 小 时，用 HCl(1N) 酸 化 至 pH 5。 产 物 用 EtOAc 萃 取 (2 次， 每 次 20ml)。 合 并 的 有 机 层 随 后 用 水、 盐 水 洗， 减 压 浓 缩， 得 到 420mg 2-(2， 2- 二 甲 基 四 氢 -2H- 吡 喃 -4- 基 ) 乙 酸。 1 H-NMR(CDCl3) ： δ3.76-3.67(m， 2H)， 2.56-2.19(m， 3H)， 1.63(m， 2H)， 1.26-1.10(m， 8H).( M + 1 ) 1 7 3 .向化合物 X30(64g， 237mmol) 和 EDC(226g， 1.19mmol) 在 EtOAc(1.5L) 中的溶液加 入 DMSO(400ml)， 将形成的悬浮液冷却到 0℃。向此混合物中加入二氯乙酸在 EtOAc 中的溶 液 (1 ∶ 1， v/v， 130ml)， 并保持内部反应温度低于 25℃。 将反应混合物温热至室温， 搅拌 15 分， 冷却至 0℃， 用 1N HCl(1L) 中止反应。分离出有机层， 用水 (2×500ml) 洗， 用 MgSO4 干 燥， 减压浓缩。得到的油状物经硅胶塞过滤， 用 EtOAc/ 己烷洗脱， 得到 48g(76％ ) 化合物 X31， 为白色固体。
向 树 脂 X32( 按 照 WO 00/23421 中 所 述 步 骤 制 备 )(100g， 0.88mmol/g) 中 加 入 X31(48g， 179mmol) 在 THF(650ml) 中的溶液， 随后加入 AcOH(30ml)。 将混合物摇动 16 小时， 滤出树脂， 用 THF(4 次， 每次 400ml) 和 CH2Cl2(4 次， 每次 400ml) 洗， 真空干燥。滤液和洗液 合并后浓缩， 重复以上的步骤， 得到负载为约 0.4mmol/g 的树脂 X33。醛化合物的制备
按照 D.L.Comins 等在 Hetereocycles， 1987， 26(8)， pp.2159-2164 中所述方法制 备 5- 氯烟碱醛。
一 些 其 它 的 醛， 例 如 2- 氟 -5- 氯 苯 甲 醛、 2- 甲 氧 基 -3- 甲 基 苯 甲 醛、 2- 甲 氧 基 烟 碱 醛、 2， 3- 二 氢 苯 并 呋 喃 -7- 甲 醛 可 以 按 照 以 下 步 骤 从 相 应 的 酸 制 备 ：
2， 3- 二氢苯并呋喃 -7- 甲醛的制备
将 2， 3- 二氢苯并呋喃 -7- 羧酸 (820mg， 5mmol) 溶于 THF(10ml)。向该溶液中加入 TEA(0.7ml， 5mmol) 和氯甲酸甲酯 (0.43ml， 5mmol)。将溶液搅拌 0.5 小时。过滤除去白色 沉淀， 将滤液加到 NaBH4(437mg， 12.5mmol) 的水 (5ml) 溶液中。将形成的溶液搅拌过夜。反 应混合物用 2M 盐酸中和， 然后用 EtOAc 萃取。有机层用盐水洗， 用无水 Na2SO4 干燥， 减压浓 缩。将粗制的醇溶于 DCM， 向该溶液中加 PCC(1.83g， 7.5mmol)。室温下搅拌该混合物 2 小 时， 用乙醚稀释， 然后倒出醚层。合并的有机层经硅藻土层过滤。将滤液浓缩得到粗产物。 粗产物用柱纯化， 使用 10％ EtOAc/ 己烷洗脱， 得到 450mg 2， 3- 二氢苯并呋喃 -7- 甲醛， 为浅黄色固体。HPLC 4.3 分。4- 氯吡啶甲醛的制备
将 MnO2(7.3g， 84mmol) 和 (4- 氯 吡 啶 -2- 基 ) 甲 醇 (1g， 7mmol) 在 CHCl3 中 的 悬 浮 液 加 热 回 流 90 分。 混 合 物 经 一 层 硅 藻 土 过 滤， 减 压 浓 缩， 得 到 520mg 4- 氯 吡 啶 甲 醛，为 白 色 固 体。HPLC 1.8 分， MS 142 为 M ＝ 1 峰。 3- 氯 -5- 甲氧基苯甲醛的制备将 3- 氯 -5- 甲氧基苯甲醇 (5.0g， 28.9mmol) 和氯铬酸吡啶鎓盐 (20％， 氧化铝上， 40g， 37.8mmol) 的混合物搅拌 1.25 小时。接着加入乙醚 (200ml)， 滤出沉淀。将滤液减压 浓缩， 得到的残留物用硅胶色谱法纯化， 使用 40％二氯甲烷、 60％石油醚作为洗脱剂， 得到 1 3.8g 3- 氯 -5- 甲氧基苯甲醛 (78 ％ )。 H-NMR(CDCl3) ： 3.84(s， 3H)7.13(s， 1H)， 7.28(s，
1H) ， 7.41(s ， 1H) ， 9.89(s ， 1H). 1-( 溴甲基 )-3- 氯 -5- 甲基苯的制备
在 回 流 下 向 间 氯 二 甲 苯 (0.96g， 6.8mmol) 在 四 氯 化 碳 中 的 溶 液 依 次 加 入 N- 溴 丁 二 酰 亚 胺 (1.4g， 7.5mmol) 和 过 氧 化 苯 甲 酰 (1.6g， 6.8mmol)。 将 反 应 混 合 物 搅 拌 20 分 钟， 冷 却 至 室 温， 滤 除 沉 淀， 将 滤 液 减 压 浓 缩， 得到的残留物经硅 胶 色 谱 法 纯 化， 使 用 石 油 醚 作 为 洗 脱 剂， 得 到 0.89g 1-( 溴 甲 基 )-3- 氯 -5- 甲 基 苯 (60 ％ ) 。 NMR(CDCl 3) ： 2.31(s ， 3H)4.37(s ， 2H)7.09(s ， 1H)7.12(s ， 1H)7.20(s ，1H).3- 氯 -5- 甲基苯甲醛的制备向金属钠 (52mg， 2.3mmol) 的乙醇溶液依次加入 2- 硝基丙烷 (0.23g， 2.4mmol) 和 3- 氯 -5- 甲基苄基溴 (0.5g， 2.3mmol)。 将反应混合物搅拌 3 小时， 滤除形成的沉淀。 将滤液 减压浓缩， 重新溶在乙醚中， 用 1N 氢氧化钠 (2 次 ) 和水洗， 用硫酸钠干燥， 过滤， 滤液减压 浓缩。 得到的残留物经硅胶色谱法纯化， 使用 10％二氯甲烷和 90％石油醚洗脱， 得到 0.15g 1 3- 氯 -5- 甲基苯甲醛 (42％ )。 H-NMR(CDCl3) ： 2.46(s， 3H)7.43(s， 1H)7.56(s， 1H)7.68(s，
1H)， 9.92(s， 1H).将 3- 氯 -5- 氟 -4- 羟 基 苯 甲 醛 (1.0g， 5.7mmol) 在 THF(40ml) 中 的 溶 液 与 KOH(534mg， 9.5mmol， 1.7 当量 ) 的水 (5ml) 溶液和碘乙烷 (1ml， 2.2 当量 ) 一起加热回流 17 小时。然后将反应混合物用水转移至分液漏斗中， 用二氯甲烷萃取 (3 次， 每次 150ml)。合 并的有机层用 10％盐酸 (40ml) 洗， 干燥 (MgSO4)， 浓缩后形成粘稠的橙色液体， 得到 1.13g 1 3- 氯 -4- 乙氧基 -5- 氟苯甲醛 (98％ )。 H-NMR(500MHz， CDCl3) ： 9.84(d， J ＝ 1.9Hz， 1H)， 7.71(t， J ＝ 1.6Hz， 1H)， 7.53(dd， J ＝ 1.9， 10.7Hz， 1H)， 4.37-4.32(m， 2H)， 1.47-1.40(m，3H).
4- 乙氧基 -3， 5- 二甲基苯甲醛按照与 3- 氯 -4- 乙氧基 -5- 氟苯甲醛相似的方 1 式 制 备。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： 9.89(s， 1H)， 7.56(s， 2H)， 3.91(q， 7Hz， 1H)， 2.34(s， 6H)，1.44(t， J ＝ 7Hz， 6H).4- 异 丙 氧 基 -3， 5- 二 甲 基 苯 甲 醛 按 照 与 4- 乙 氧 基 -3， 5- 二 1 甲 基 苯 甲 醛 相 似 的 方 式 制 备。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： 9.88(s， 1H)， 7.55(s， 2H)， 4 . 3 1 ( q ，J ＝ 6 H z ， 1H)， 2.32(s， 6H)， 1 . 3 2 ( d ，J ＝ 6 H z ，
6H).4-( 环丙基甲氧基 )-3， 5- 二甲基苯甲醛按照与 4- 乙氧基 -3， 5- 二甲基苯甲醛相 1 似的方式制备。 H-NMR(300MHz， CDCl3) ： 9.87(s， 1H)， 7.55(s， 2H)， 3.69(d， J ＝ 7Hz， 2H)， 2.35(s， 6H)， 1.35-1.23(m， 1H)， 0.67-.060(m， 2H)， 0.35-0.30(m， 2H).(S)-1-( 叔 丁 氧 羰
基 )-4- 氧代吡咯烷 -2- 羧酸的制备 将 (2S， 4R)-1-( 叔丁氧羰基 )-4- 羟基吡咯烷 -2- 羧酸 (1.0 当量 ) 在乙酸异丙酯 (5 倍体积 ) 中的溶液冷却至 0℃， 加入 TEMPO(0.05 当量 )。然后在 1 小时内慢慢加入漂白 剂溶液 (12.5wt％， 1.2 当量， 2.6 体积 )， 同时维持温度在 0-5℃。搅拌该混合物并用 HPLC 监测反应的完成， 然后加入 10％ KHSO4(2.5 体积 )， 搅拌 10 分钟， 分离各相。有机相用 5％ Na2SO3 水溶液 (2 倍体积 ) 和盐水 (1 倍体积 ) 洗， 然后共沸干燥， 浓缩， 得到标题化合物固
体。将该固体用乙腈 (1.0 体积 ) 湿磨， 除去残留的颜色和杂质。1H-NMR(400MHz， DMSO) ： δ4.54(m， 1H)， 3.82(m， 1H)， 3.67(m， 1H) ； 3.15(m， 1H) ； ≈ 2.50(m， 1H， 与 DMSO 重合 ) ； 1.42 和 1.39(2s 旋转异构体， 9H)。(S)-1-( 叔丁氧羰基 )-4- 亚甲基吡咯烷 -2- 羧酸的制备向溴化甲基三苯膦鎓盐 (2.2 当量 ) 在 2- 甲基四氢呋喃 (3 体积 ) 中的悬浮液快 速加入固体叔丁醇钾 (2.3 当量 )， 并保持温度在 0℃左右。将温度在 +20℃保持 2 小时 ( 保 持悬浮液 )， 重新冷却到 0℃。在保持温度低于 6℃的条件下， 于 40 分钟内加入 (S)-1-( 叔 丁氧羰基 )-4- 氧代吡咯烷 -2- 羧酸 (1 当量 )。将反应混合物温热至室温并搅拌 16 小时， 然后冷却至 0℃。用 NaHCO3 饱和溶液 (5 体积 ) 和水 (2 体积 ) 中止反应， 分离水层。有机 层用饱和 NaHCO3 溶液 / 水 (1.8 体积 /1.8 体积 ) 萃取， 合并的水层经硅藻土过滤。将水层 在环境温度下用 6N HCl(2.6 体积 ) 酸化， 用乙酸异丙酯 (16 体积， 然后 8 体积 ) 萃取 2 次。 将有机相干燥 (MgSO4)， 除去溶剂。粗产物溶在乙酸异丙酯 (10 体积 ) 中， 用 0.5M NaOH(10 体积， 然后 1 体积 ) 萃取。合并的水层在环境温度下用 6N HCl 酸化至 pH ＝ 3， 用乙酸乙酯 萃取 2 次 (10 体积， 然后 8 体积 )。将合并的萃取液干燥 (Na2SO4)， 除去溶剂， 粗产物自环 1 己烷 (5 体积 ) 中重结晶， 得到标题化合物。 H-NMR(400MHz， DMSO) ： δ12.9， (broad， 1H) ； 5.00(m， 2H) ； 4.24(dt， J ＝ 1.9H， J ＝ 7.3Hz， 1H)， 3.91(m， 2H) ； 2.98(m， 1H) ； ≈ 2.50(m， 1H， 与 DMSO 重合 ) ； 1.41 和 1.36(2s 旋转异构体， 9H)。
B. 示例性式 I 化合物的合成
一些示例性的式 I 化合物可以如以下说明地用方法 1 制备。
所有以下的反应， 除非另外指出， 均在氮气下进行并使用无水溶剂。实施例 1 ： (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-N-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰 胺 ( 化合物 No.8)
步骤 A ： (2S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 )-4- 羟基吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯
(A1)将锌粉 (1.05g， 16mmol， 1.6 当量 ) 在烧瓶中用空气加热枪加热 2 次。向该烧瓶中 加入无水 THF(10ml) 和三甲基氯硅烷 (0.405ml， 3.2mmol， 0.32 当量 )。 室温下搅拌该悬浮液 15 分钟， 加热至回流， 然后撤除热源。 将 (S)-4- 氧代吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (2.85g， 10mmol， 1 当量 ) 和 2- 溴乙酸乙酯 (1.77ml， 16mmol， 1.6 当量 ) 与无水 THF(10ml) 混合， 以 观察到温和回流的速度慢慢加到锌悬浮液中。将反应混合物回流 2 小时并用 TLC 监测。反
应完成后将反应混合物浓缩。使用己烷和乙酸乙酯进行色谱分离， 得到 2.64g(7.3mmol) (2S)-4-(2- 乙 氧 基 -2- 氧 代 乙 基 )-4- 羟 基 吡 咯 烷 -1， 2- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (A1)， 是 1 4 ∶ 1(2S， 4S ： 2S， 4R) 的非对映体混合物。 H NMR(300MHz， DMSO)4.97(m， 1H)， 4.14-4.01(m， 3H)， 3.48-3.33(m， 2H)， 2.56(m， 2H)， 2.35-2.19(m， 1H)， 2.03(dd， 1H)， 1.40-1.35(m， 18H)， 1.18(t， 3H).
步骤 B ： (8S)-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯(B1)将 (2S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 )-4- 羟基吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (A1) (1.58g， 4.42mmol， 1 当量 ) 在甲醇 (6ml) 中稀释。 向此混合物中加肼 (0.417ml， 13.26mmol， 3 当量 )。室温下搅拌反应混合物过夜， 然后浓缩。向残留物中加入 0.5N HCl(22.1ml， 11.05mmol， 2.5 当量 )， 将混合物超声直至残留物溶于酸中。将溶液在冰水浴中冷却， 慢慢 5.3mmol， 1.2 当量 ) 并搅拌 15 分钟。 加入 1 ∶ 1 的苯∶氯仿混 加入 1.0M NaNO2 溶液 (5.3ml， 合物， 分离出有机层， 慢慢加到回流的苯 (2X) 中。 将反应混合物回流 1 小时， 然后浓缩。 使用 DCM 和 20％的甲醇 /DCM 进行色谱分离， 得到 0.978g(2.86mmol)(8S)-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (B1)， 为 4 ∶ 1(5S， 8S ： 5S， 8R) 的非对映体混 合物。1H NMR(300MHz， DMSO)7.63(m， 1H)， 4.29-4.09(m， 1H)， 3.65-3.39(m， 4H)， 2.5-2.0(m， 2H)， 1.43-1.18(m， 18H).
步骤 C ： (5S， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二
羧酸二叔丁酯 (C1)(8S)-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (B1) (0.189g， 0.55mmol， 1 当量 )， Xantphos(4， 5- 二 ( 二苯膦基 )-9， 9- 二甲基呫吨 )(17.4mg， 0.03mmol， 0.06 当 量 )， K3PO4(148.6mg， 0.7mmol， 1.4 当 量 ) 在 密 封 的 管 中 混 合， 抽真 空， 用氮气吹洗 3 次。加入无水 1， 4- 二氧六环 (20ml)， 将该悬浮液脱气 0.5 小时。加 入 Pd(dba)3(9.1mg， 0.01mmol， 0.02 当量 )， 将密封管再脱气 15 分钟。加入溴苯 (53μL， 0.5mmol， 1 当量 )， 将反应混合物密封并在 95℃加热 72 小时 ( 随后的最优化显示 24 小时已 足够， 并且更多当量的溴苯 ( 最多达 3 当量 ) 会得到更高的产率 )。将反应物冷却， 过滤， 用 DCM 冲洗。使用恒定梯度的己烷和乙酸乙酯对有机层进行层析， 分离出非对映体， 得到 50mg(0.12mmol)(5S， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二
羧 酸 二 叔 丁 酯 (C1)。1H NMR(300MHz， DMSO)7.52(d， 2H)， 7.43-7.37(m， 2H)， 7.14(t， 1H)， 4.22-4.07(m， 3H)， 3.85(d， 1H)， 3.60-3.46(m， 1H)， 2.8-2.65(m， 1H)， 2.27-2.19(m， 1H)， 1.42(m， 18H).
步骤 D ： (5S， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (D1)将 (5S， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二 叔丁酯 (C1)(0.262g， 0.626mmol， 1 当量 ) 加到烧瓶中于冰水浴内冷却。将 1.0M 的 HCl/ 无 水乙酸乙酯 (6.26ml， 6.26mmol， 10 当量 ) 加到该冷却的中间体中， 室温下搅拌该混合物过 夜。 在混合物还冷时蒸发溶剂。 利用 DCM 和 20％甲醇 /DCM 色谱分离， 得到 148mg(466μmol) (5S， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (D1)。 LCMS+ ： 在 1.76 分为 319.17(10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 E ： (5S， 8S)-7-((S)-2-( 苄氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯
基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (E1)将 L-cbz-t-leu-OH(284mg， 0.642mmol， 1.4 当量 )、 EDC(123mg， 0.642mmol， 1.4 当 量 ) 和 HOBt(98mg， 0.642mmol， 1.4 当量 ) 在 DMF(0.9ml) 中混合并于室温下搅拌半小时。 向 该室温混合物加入 (5S， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧 酸叔丁酯 (D1)(146mg， 0.459mmol， 1 当量 ) 和 DIEA(240μL， 1.377mmol， 3 当量 )， 将形成的 混合物在室温下搅拌 24 小时。向该混合物中加 1.0M 组胺 ( 水溶液， 230μL， 0.5 当量 )， 将 形成的混合物搅拌半小时。加入乙酸乙酯， 该混合物依次用 1N HCl 和 1M K2CO3 洗。使用乙
酸乙酯进行萃取， 重复此萃取过程一次。合并的有机层用 Na2SO4 干燥并浓缩。使用己烷和 乙酸乙酯色谱分离， 得到 (5S， 8S)-7-((S)-2-( 苄氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧 代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (E1)。LCMS+ ： 在 3.61 分， 566.44(10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 F ： (5S， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (F1)将碳 (100mg) 载钯 (10 ％ ) 用 MeOH(2.5ml) 湿润并加到 (5S， 8S)-7-((S)-2-( 苄 氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧酸叔丁酯 (E1)(323mg， 411μmol， 1 当量 ) 中。反应混合物在室温和 50psi 下氢 化过夜， 然后过滤并浓缩， 以定量产率得到 (5S， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (F1)。LCMS+ ： 在 1.94 分为 432.39(10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步 骤 G： (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯
(G1)将 环 己 基 乙 酸 (48mg， 337mmol， 1.4 当 量 )、 EDC(65mg， 337μmol， 1.4 当 量 ) 和 HOBt(52mg， 337μmol， 1.4 当量 ) 在 DMF(0.3ml) 中混合并在室温下搅拌 0.5 小时。向此混 合物中加入 (5S， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (F1)(105mg， 243μmol， 1 当量 ) 和 DIEA(118μL， 675μmol， 2.8 当量 )， 将形成 的混合物在室温下 搅拌 24 小 时。加 入 1.0M 组胺 水溶 液 (120μL， 0.5 当 量 )， 搅 拌 0.5 小 时。 加 入 乙 酸 乙 酯， 依 次 用 1N HCl 和 1M K2CO3 洗， 用 乙酸乙酯萃取 2 次。将合并的有机层浓缩， 用己烷和乙酸乙酯色谱分离， 得到 50mg(5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3，
7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (G1)1H NMR(300MHz， DMSO)7.90(d， 1H)， 7.53(d， 2H)， 7.44-7.37(m， 2H)， 7.14(m， 1H)， 4.47(d， 1H)， 4.30-3.99(m， 3H)， 3.89-3.83(m， 1H)， 3.18(d， 1H)， 2.79-2.67(m， 1H)， 2.27-2.00(m， 3H)， 1.7-1.55(m， 5H)， 1.45-1.39(m， 11H)， 1.2-1.1(m， 4H)， 0.98-0.91(m， 9H)。随后的最优化表明， 步骤 E 至 G 可以用在 E1 上进行与 (S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酸的单个偶合反应代替。NMR 证实未发生差向 立体异构化。
步骤 H ： (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (H1)(5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (G1)(70mg， 126μmol， 1当 量 ) 在 1 ∶ 1 的 DCM ∶ TFA(2ml) 中 稀 释 并 在 室 温 下 搅 拌 过 夜， 然 后 浓 缩， 得 到 (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 (H1)，定 量 产 率。LCMS+/- ： 在 3.09 分 为 500.41/498.55(10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步 骤 I： (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3，
7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (I1)将 (3S)-3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺 (20mg， 87μmol， 1.4 当量 )、 EDC(17mg， 87μmol， 1.4 当量 ) 和 HOBt(13mg， 87μmol， 1.4 当量 ) 在 DMF(0.3ml) 中混合并在室温下 搅拌 0.5 小时。向此混合物中加入 (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲 基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (H1)(31mg， 62μmol， 1 当量 ) 和 DIEA(33μL， 186μmol， 3 当量 )， 在室温下搅拌过夜。加入 1.0M 组胺 ( 水溶液， 31μL， 0.5 当量 )， 将形成的混合物搅拌 0.5 小时。 加入乙酸乙酯， 该混合物依次用 1N HCl 和 1M K2CO3 洗， 然后用乙酸乙酯萃取。 合并的有机层浓缩后用 DCM 和 20％ MeOH/DCM
色谱分离， 得到 20mg(30μmol)(5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (I1)。LCMS+/- ： 在 3.24 分， 668.56/666.64(10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步 骤 J： (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己基 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3，7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.3)化合物 No.3 将 (5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (I1)(20mg， 30mmol， 1 当量 ) 在 DCM 中稀释。加入 Dess Martin 试剂 (38mg， 90μmol， 3 当量 )， 将混合物在室温下搅拌 3 小时。加入 Na2S2O3( 水溶 液， 5 当量 )， 将混合物再搅拌 0.5 小时。产物用 DCM 萃取。合并的有机层用己烷和乙酸乙 酯进行色谱分离， 得到 15.9mg(24μmol)(5S， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二 甲基丁酰基 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧 1 HNMR(300MHz， CDCl3)7.5(d， 2H)， 杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.3)。 7.4-7.32(m， 2H)， 7.2-7.12(m， 2H)， 6.9(m， 1H)， 6.17(d， 1H)， 5.4-5.3(m， 1H)， 4.77(t， 1H)， 4.65(d， 1H)， 4.42(d， 1H)， 4.15-3.98(m， 2H)， 3.76(d， 1H)， 2.83-2.75(m， 1H)， 2.6(m， 2H)， 2.2-0.8(m， 31H)， 0.6(m， 2H). 实施例 2 ： (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二 甲基丁酰基 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.5)
步骤 A ： (5R， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二
羧酸二叔丁酯 (A2)按 照 与 实 施 例 1 步 骤 C 相 同 的 步 骤， 使 用 (8S)-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -7， 8- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (B1)(1.044g， 3.05mmol)， 得 到 475mg(5R， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (A2)。 1 H NMR(300MHz ， DMSO)7.52(d ， 2H) ， 7.43-7.37(m ， 2H) ， 7.14(t ， 1H) ， 4.37-4.3(m ， 1H) ， 4.18-4.07(m， 2H)， 3.77-3.6(m， 2H)， 2.6-2.55(m， 1H)， 2.45-2.35(m， 1H)， 1.42(m， 18H).
步骤 B ： (5R， 8S)-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸
叔丁酯 (B2)按 照 与 实 施 例 1 步 骤 D 相 同 的 步 骤， 使 用 (5R， 8S)-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -7， 8- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (A2)(145mg， 0.346mmol)， 得到 92mg(0.289mmol)(5R， 8S)-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 1 酸叔丁酯 (B2)。 H NMR(300MHz， DMSO)7.54(d， 2H)， 7.41-7.36(m， 2H)， 7.15-7.10(m， 1H)， 4.08(dd， 2H)， 3.75-3.70(m， 1H)， 2.90(m， 1H)， 2.31-2.26(m， 1H)， 1.44-1.39(m， 9H).
步 骤 C： (5R， 8S)-7-((S)-2-( 苄 氧 羰 基 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯
(C2)按 照 与 实 施 例 1 步 骤 E 相 同 的 步 骤， 使 用 (5R， 8S)-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (B2)(130mg， 411μmol)，得 到 (5R， 8S)-7-((S)-2-( 苄氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (C2)。LCMS+ ： 3.61 分 566.44(10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 D ： (5R， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氮
杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (D2)按照实施例 1 步骤 F 的相同步骤， 使用 (5R， 8S)-7-((S)-2-( 苄氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (C2) 得到 (5R， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (D2)。LCMS+ ： 1.94 分， 432.39(10-90％， 3-5 分， 甲 酸 )。
步 骤 E： (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯
(E2)按照与实施例 1 步骤 G 相同的步骤， 使用 (5R， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基 丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (94mg， 218μmol) 得到 70mg(126μmol)(5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基 丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (E2)1H NMR(300MHz ， DMSO)7.85(d ， 1H) ， 7.55(d ， 2H) ， 7.44-7.37(m ， 2H) ， 7.13(m ， 1H) ， 4.52(m ， 1H)， 4.38(d， 1H)， 4.2-3.99(m， 2H)， 3.18(d， 1H)， 2.6(m， 1H)， 2.4(m， 1H)， 2.2-1.94(m， 3H)， 1.7-0.8(m， 29H).
步骤 F ： (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧
代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (F2)按照与实施例 1 步骤 H 相同的步骤， 使用 (5R， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基 丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (70mg， 126μmol) 得 到 (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-2- 氧 代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (F2)。LCMS+/- ： 500.41/498.55， 在 3.09 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步 骤 G： (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3，7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (G2)按照与实施例 1 步骤 9 相同的步骤， 使用 (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨 基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧 酸 (49mg， 98μmol) 和 (3S)-3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺 (31mg， 137μmol， 1.4 当 量 ) 得到 20mg(30μmol) 的 (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (G2)。LCMS+/- ： 668.56/666.64， 3.24 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步 骤 H： (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰
基 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.5)化合物No.5 按照与实施例 1 步骤 10 相同的步骤， 使用 (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨 基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (20mg， 30μmol) 得到 14.4mg(22μmol) 的 (5R， 8S)-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 )-2- 氧 代 -3- 苯 基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 甲 酰 胺 ( 化 合 物 No.5)。1H NMR(300MHz， CDCl3)7.6-7.37(m， 4H)， 7.2-7.12(m， 2H)， 6.95(m， 1H)， 6.17(d， 1H)， 5.45-5.35(m， 1H)， 4.75(m， 1H)， 4.45(d， 1H)， 4.35(d， 1H)， 4.25(d， 1H)， 4.15-3.98(m， 2H)， 3.05-2.97(m， 1H)， 2.85-2.73(m， 1H)， 2.3(m， 1H)， 2.15-0.8(m， 31H)， 0.6(m， 2H). 实 施 例 3 ： (S)-1-((5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-8-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基氨甲酰基 )-2- 氧 代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -7- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨基甲酸环 戊酯 ( 化合物 No.7)
步骤 A ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7，
8- 二羧酸二叔丁酯 (A3)
按照与实施例 1 步骤 3 相同的步骤， 使用 (8S)-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂 螺 [4.4] 壬 烷 -7， 8- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (B1)(224mg， 0.654mmol) 和 3- 氯 溴 苯 (230μL， 1.962mmol， 3 当量 ) 得到 107mg(0.236mmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3，7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (A3)。1HNMR(300MHz， DMSO)7.68(m， 1H)， 7.55-7.38(m， 2H)， 7.2(m， 1H)， 4.23-4.05(m， 3H)， 3.8-3.7(m， 1H)， 3.5(m， 1H)， 2.7-2.6(m， 1H)， 2.25-2.1(m， 1H)， 1.4(m， 18H).
步骤 B： (5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸甲酯 (B3)向 (5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (107mg， 0.236mmol) 中加入饱和的 HCl/MeOH 溶液 (5ml)， 并在室温下 搅拌过夜。将溶液浓缩， 用 DCM 和 20 ％ MeOH/DCM 色谱分离， 得到 60mg(0.193mmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 甲 酯 (B3)。 1 HNMR(300MHz， DMSO)7.68(s， 1H)， 7.6-7.4(m， 2H)， 7.23(m， 1H)， 4.62(m， 1H)， 4.22(m， 2H)， 3.85-3.68(m， 4H)， 3.6-3.5(m， 1H)， 2.9-2.7(m， 2H)。LCMS+ ： 311.14， 1.65 分 (10-90 ％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 C ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-( 环戊氧基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁
酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸甲酯 (C3)。按照与实施例 1 步骤 G 相同的步骤， 使用 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸甲酯 (30mg， 97μmol) 和 (S)-2-( 环戊氧基羰基氨 基 )-3， 3- 二甲基丁酸 (28mg， 116μmol， 1.2 当量 )， 得到 22mg(41mmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯 基 )-7-((S)-2-( 环戊氧基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂
螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸甲酯 (C3)。1H NMR(300MHz， CDCl3)7.35-6.8(m， 4H)， 5.21-5.06(m， 1H) ， 4.86(m ， 1H) ， 4.55-3.56(m ， 8H) ， 2.65-2.48(m ， 1H) ， 2.0(m ， 1H) ， 1.7-1.1(m ， 9H) ， 0.9-0.7(m， 9H).
步骤 D ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-( 环戊氧基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D3)。将 (5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-( 环 戊 氧 基 羰 基 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸甲酯 (C3)(22mg， 41mmol， 1当 量 ) 用无水 THF(0.5ml) 稀释， 然后加入 1M LiOH(82μL， 82μmol， 2 当量 ) 和 MeOH(20μL)。 将 反 应 混 合 物 于 室 温 下 搅 拌 过 夜， 浓 缩， 得 到 10mg(19μmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-( 环戊氧基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮 杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D3)。LCMS+ ： 522.35， 3.14 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 E ： 2-((5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-8-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代 己 -3- 基氨基甲酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -7- 基 )-2- 氧代乙基氨基
甲酸环戊酯 (D4)
按照与实施例 1 步骤 1 相同的步骤， 使用 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-( 环 戊氧基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧 酸 (D3)(10mg， 20μmol) 和 (3S)-3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺 (7mg， 28μmol)， 得 到 5mg(7.2μmol) 的 (2S)-1-((5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-8-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基氨基甲酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -7- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨基甲酸环戊酯 (E3)。LCMS+ ： 690.38， 3.31 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 F： 2-((5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-8-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基氨甲酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -7- 基 )-2- 氧代乙基氨基甲酸环戊酯 ( 化合物 No.7)。化合物 No.7按 照 与 实 施 例 1 步 骤 10 的 相 同 步 骤，使 用 2-((5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-8-((3S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-2- 羟 基 -1- 氧 代 己 -3- 基 氨 基 甲 酰 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -7- 基 )-2- 氧代乙基氨基甲酸环戊酯 (D4)(5mg， 7.2μmol) 得 到 6.9mg(1.3μmol) 的 2-((5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-8-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧 代己 -3- 基氨甲酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -7- 基 )-2- 氧代乙基氨 基甲酸环戊酯 ( 化合物 No.7)。LCMS+/- ： 688.4/686.6， 3.6 分 (10-90 ％， 3-5 分， 甲酸 )。 实施例 4 ： (5R， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.9)
步骤 A ： (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7，
8- 二羧酸二叔丁酯 (A4)按照实施例 1 步骤 C 的步骤， 使用 (8S)-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (2)(189mg， 0.55mmol， 1 当量 ) 和 3- 氯溴苯 (60μL， 0.55mmol， 1 当量 )， 得到 54mg(119mmol)(5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 1 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (A4)。 H NMR(300MHz， DMSO)7.68(m， 1H)， 7.55-7.38(m， 2H)， 7.2(m， 1H)， 4.38-4.28(m， 1H)， 4.2-4.05(m， 2H)， 3.75-3.6(m， 2H)， 2.7-2.4(m， 2H)，
1.4(m， 18H).
步骤 B： (5R， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (B4)按照实施例 1 步骤 D 的程序， 使用 (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (A4)(54mg， 120μmol) 得到 20mg(57μmol) (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (B4)。
步 骤 C： (5R， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯
(C4)按照实施例 1 步骤 G 的程序， 使用 (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (B4)(20mg， 54μmol， 1 当 量 ) 和 (S)-2-(2- 环 己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酸 (16mg， 63μmol， 1.2 当量 )， 得到 16mg(27μmol)(5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (C4)。LCMS+/- ： 590.31/589.47， 3.95 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 D ： (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁
酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D4)按照实施例 1 步骤 H 的程序， 使用 (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基 乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁 酯 (C4)(16mg， 27μmol) 得到 (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D4)。LCMS+/- ： 534.32/532.53， 3.35 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 E ： (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二
氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (E4)按照实施例 1 步骤 1 的程序， 用 (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基 乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D4)(12mg， 22μmol) 和 (3S)-3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺 (7.3mg， 33μmol) 得到 10mg(14μmol)(5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 基 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮 杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (E4)。LCMS+/- ： 702.54/700， 3.68 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 F ： (5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺
[4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (F4)化合物 No.9按 照 实 施 例 1 步 骤 J 的 程 序， 使 用 (5R， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 基 )-N-((3S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-2- 羟 基 -1- 氧 代 己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (E4)(10mg， 14μmol) 得到 2mg(2.9μmol)(5R， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲 基丁酰 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂 1 螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.9)。H NMR(300MHz， CDCl3)7.62(m， 1H)， 7.55-7.35(m， 2H) ， 7.14(m ， 1H) ， 6.9(m ， 1H) ， 5.98(m ， 1H) ， 5.4(m ， 1H) ， 4.75(m ， 1H) ， 4.5-4.25(m ， 3H) ， 4.0-3.8(m， 2H)， 3.05(m， 1H)， 2.8(m， 1H)， 2.3(m， 1H)， 2.15-1.9(m， 2H)1.7-0.8(m， 30H)， 0.6(m， 2H). 实施例 5 ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二 甲基丁酰 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.8)
步骤 A ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7，
8- 二羧酸二叔丁酯 (A5)按 照 实 施 例 1 步 骤 C 的 程 序， 使 用 (8S)-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (B2)(189mg， 0.55mmol， 1 当量 ) 和 3- 氯溴苯 (60μL， 0.55mmol， 1 当量 ) 得到 48mg(0.106mmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (A5)。1HNMR(300MHz， DMSO)7.68(m， 1H)， 7.55-7.38(m， 2H)， 7.2(m， 1H)， 4.23-4.05(m， 3H)， 3.8-3.7(m， 1H)， 3.5(m， 1H)， 2.7-2.6(m， 1H)， 2.25-2.1(m， 1H)， 1.4(m， 18H).
步骤 B： (5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬
烷 -8- 羧酸叔丁酯 (32)。按照实施例 1 步骤 4 的程序， 由 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -7， 8- 二羧酸二叔丁酯 (A5)(48mg， 106μmol) 得到 34mg(96μmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁酯 (B5)。
步 骤 C： (5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯
(33)按照实施例 1 步骤 G 的程序， 使用 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (B5)(32mg， 91μmol， 1 当 量 ) 和 (S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酸 (25mg， 100μmol， 1.2 当 量 ) 得 到 25mg(42mmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (C5)。LCMS+/- ： 590.31/589.47， 3.95 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 D ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁
酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D5)。按照实施例 1 步骤 H 的程序， 使用 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基 乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸叔丁 酯 (C5)(25mg， 42μmol) 得到 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D5)。LCMS+/- ： 534.32/532.53， 3.39 分 (10-90％， 3-5 分， 甲酸 )。
步骤 E ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮
杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (E5)按照实施例 1 步骤 1 的程序， 使用 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己 基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 (D5)(23mg， 43μmol) 和 (3S)-3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺 (15mg， 65μmol) 得到 10mg(14μmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰 )-N-((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮 杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (E5)。LCMS+/- ： 702.54/700.62， 3.63 分 (10-90％， 3-5 分， 甲
酸 )。
步骤 F ： (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺[4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.8)化合物 No.8按 照 实 施 例 1 步 骤 J 的 程 序， 使 用 (5S， 8S)-3-(3- 氯 苯 基 )-7-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-N-((3S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-2- 羟 基 -1- 氧 代 己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 (E5)(10mg， 14μmol) 得 到 1.3mg(1.9μmol)(5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲 基丁酰 )-N-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂 1 螺 [4.4] 壬烷 -8- 甲酰胺 ( 化合物 No.8)。 H NMR(300MHz， CDCl3)7.6-7.28(m， 3H)， 7.13(m，
2H)， 6.9(m， 1H)， 6.03(m， 1H)， 5.33(m， 1H)， 4.8-4.75(m， 1H)， 4.61(m， 1H)， 4.46-4.4(m， 1H)， 4.25-3.7(m， 3H)， 2.8(m， 1H)， 2.68-2.52(m， 1H)， 2.2-1.9(m， 2H)， 1.9-0.8(m， 30H)， 0.6(m， 2H). 实 施 例 6 ： (S)-1-((3S， 5R)-3-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 氨 甲 酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨 基甲酸环戊酯 ( 化合物 No.1) 和 (S)-1-((3S， 5S)-3-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代 己 -3- 基氨甲酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧 代丁 -2- 基氨基甲酸环戊酯 ( 化合物 No.4)
步骤 A ： (S)-4-(2- 乙 氧 基 -2- 氧 代 亚 乙 基 ) 吡 咯 烷 -1， 2- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯(A6)向 (S)-4- 氧 代 吡 咯 烷 -1， 2- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (A1)(2.43g， 8.5mmol) 在 甲 苯 (20ml) 中的溶液加入 ( 乙氧羰基亚甲基 ) 三苯膦烷 (4.52g， 1.3mmol， 1.5 当量 )。将反应 混合物回流过夜， 浓缩成油状物。将其在硅胶 (120g， 己烷 / 乙酸乙酯梯度 ) 上纯化， 得到 (S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代亚乙基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (A6)(1.00g， 2.8mmol)， 1 为 无 色 油 状 物。 H NMR(DMSO) 1.20(t， 3H)， 1.40(m， 18H)， 2.54(m， 2H)， 3.30(m， 2H)， 4.10(m， 3H)， 4.71(m， 0.5H)， 5.62(m， 0.5H).
步骤 B ： (2S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 )-4-( 硝基甲基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸
二叔丁酯 (B6)将 (S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代亚乙基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (A6)(1.00g， 2.8mmol) 在硝基甲烷 (5ml) 中的溶液用四甲基胍 (TMG， 0.35g， 3.0mmol， 1.1 当量 ) 处理。 将 反应混合物回流 3 小时， 浓缩成黄色油状物。将该油在硅胶上纯化 ( 己烷 / 乙醚梯度 )， 得 到 (2S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 )-4-( 硝基甲基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (B6) 1 (0.46g， 1.1mmol)， 为非对映体混合物。 H NMR(DMSO) 1.15(t， 3H)， 1.35(m， 18H)， 1.95(m， 1H)， 2.40(m， 1H)， 2.54(m， 8H)， 2.70(s， 1.5H)， 3.30(s， 8.6H)， 3.5-3.6(m， 1H)， 4.0-4.2(m， 3H)， 4.7-4.85(m， 2H).
步骤 C ： (2S)-4-( 氨基甲基 )-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸
二叔丁酯 (C6)将硝基甲烷加成物 (2S)-4-(2- 乙氧基 -2- 氧代乙基 )-4-( 硝基甲基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (B6)(1.24g， 3.0mmol) 溶于乙酸乙酯 (20ml)， 向其中加入 10 ％ Pd/ C(75mg， 催化剂 )。将反应混合物在氢气氛下搅拌 2 天， 经硅藻土过滤， 浓缩成油状物。该 粗产物在硅胶上纯化 (1-20 ％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到 (2S)-4-( 氨基甲基 )-4-(2- 乙氧 基 -2- 氧代乙基 ) 吡咯烷 -1， 2- 二羧酸二叔丁酯 (C6)(566mg， 1.5mmol)， 为白色泡沫体。1H NMR(DMSO) 1.20(t， 1H)， 1.4(m， 18H)， 1.8-1.9(m， 1H)， 2.1-2.6(m， 11H)， 3.0-3.5(m， 5H)， 3.9-4.2(m， 2H)， 7.61(m， 0.5H).
步骤 D ： 2-((5S)-3-( 氨基甲基 )-1， 5- 二 ( 叔丁氧羰基 ) 吡咯烷 -3- 基 ) 乙酸
(D6)将 (2S)-4-( 氨 基 甲 基 )-4-(2- 乙 氧 基 -2- 氧 代 乙 基 ) 吡 咯 烷 -1， 2- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (C6)(560mg， 1.45mmol) 溶 于 THF(12ml)。 向 其 中 加 入 1N 氢 氧 化 锂 水 溶 液 (2.9ml， 2.9mmol， 2.0 当 量 )。 室 温 下 搅 拌 混 合 物 过 夜。 将 反 应 混 合 物 冷 却 至 0 ℃， 用 1N 盐酸中止反应。用 N2 气将混合物吹干， 用乙腈提取几次， 得到 2-((5S)-3-( 氨基甲 基 )-1， 5- 二 ( 叔 丁 氧 羰 基 ) 吡 咯 烷 -3- 基 ) 乙 酸 (D6)(1.45mmol)， 为 玻 璃 状 固 体。1H NMR(DMSO) 1.35(m， 18H)， 2.00(m， 2H)， 2.35(m， 2H)， 2.80(m， 1H)， 3.65(m， 1H)， 4.00(m，
1H) ； LCMS(C17H30N2O6)358.21[M]， 实验值 ES+359.21[M+H]+， ES-357.21[M-H]-， 1.8 分保留时 间， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲液 ) 梯度， 5 分钟。
步骤E： (3S)-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -2， 3- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯(E6)向氨基酸 2-((5S)-3-( 氨基甲基 )-1， 5-( 叔丁氧羰基 ) 吡咯烷 -3- 基 ) 乙酸 (D6) (1.45mmol) 在 CH2Cl2(32ml) 中的溶液加入 1- 羟基苯并三唑 (HOBT， 196mg， 1.45mmol， 1当 量 )、 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳化二亚胺盐酸盐 (EDC， 418mg， 2.2mmol， 1.5 当量 ) 和 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA， 756μL， 4.4mmol， 3.0 当量 )。将反应混合物在室温下老化过夜， 然后用 CH2Cl2(100ml) 稀释， 用水 (100ml)、 1N NaOH 水溶液 (100ml) 和盐水 (100ml) 洗。 有机 相用硫酸钠干燥， 过滤， 与第二份萃取液一起浓缩， 得到粗产物。 将其在硅胶上纯化 (1-20％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到螺内酰胺 (3S)-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸 1 二叔丁酯 (E6)(295mg， 868μmol)。 H NMR(CDCl3) 1.35(m， 18H)， 1.91(m， 2H)， 2.3(m， 3H)， 3.2(m， 2H)， 3.3-3.5(m， 2H)， 4.10(m， 1H)， 6.21(m， 1H) ； LCMS(C17H28N2O5)340.20[M]， 实验值 + + + + ES 341.2[M+H] ， 285.2[M+H， 减叔丁基 ] ， 285.2[M+H， 减叔丁基， 减 BOC] ， 保留时间 2.6 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲液 ) 梯度， 5 分钟。
步骤 F ： (3S， 5S)-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔
丁酯 (F6)将螺内酰胺 (3S)-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (E6) (34mg， 100μmol) 与 CsCO3(56mg， 172μmol， 1.7 当量 )、 Pd2dba3(3.0mg， 3.2μmol， 3.2％ ) 及 Xanthphos 配体 (5.7mg， 9.8μmol， 9.8％ ) 一起置于管中。 经注射器加入二氧六环 (1.0ml)， 随后加入溴苯 (21mg， 134μmol， 1.3 当量 )。 将密封的反应混合物在有效的磁搅拌下加热至 100℃并保持 16 小时。反应混合物用 CH2Cl2(10ml) 稀释， 经硅藻土过滤并浓缩。粗产物在 硅胶上纯化 (1-6％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到苯基化的内酰胺 (3S， 5S)-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (F6)(32mg， 77μmol)， 为白色泡沫体。1H NMR(CDCl3) 1.45(m， 18H)， 2.10(m， 1H)， 2.45(m， 1H)， 2.6-2.8(m， 2H)， 3.55(m， 1H)， 3.75(m， 2H)， 4.25(m， 1H)， 7.15(m， 1H)， 7.35(m， 2H)， 7.55(m， 2H) ； LCMS(C23H32N2O5)416.23[M]，实 验 值 ES+417.23[M+H]+， 保留时间 3.5 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲液 ) 梯度 5 分钟。
步骤G： (3S， 5R)-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 叔 丁 酯 (Gla) 和 (3S， 5R)-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 叔 丁 酯(Glb)将苯基化的内酰胺 (3S， 5S)-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (F6)(29mg， 70μmol) 溶于无水乙酸乙酯 (1.0ml) 中， 用 1M HCl/ 乙酸 乙酯 (1.0ml， 1000μmol， 14 当量 ) 处理。将反应混合物在室温下老化 24 小时， 向其中鼓入 N2 气， 直至干燥。该产物用乙酸乙酯和饱和的碳酸氢钠水溶液萃取。有机相用盐水洗， 用 Na2SO4 干燥， 过滤， 与第二份萃取液一起浓缩， 得到粗产物。 该粗产物在硅胶上纯化 (1-20％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到 (3S， 5R)-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔 1 丁酯 (G6a)(6.1mg， 19μmol， 27％ )。 HNMR(CDCl3) 1.45(s， 9H)， 2.00(m， 1H)， 2.40(m， 1H)， 2.5-2.8(m， 4H)， 3.0-3.2(m， 2H)， 3.88(m， 3H)， 7.20(m， 1H)， 7.38(m， -2H)， 7.6(m， -2H)。 从柱 中还得到次要的非对映体 (3S， 5R)-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔 1 丁酯 (G6b)(0.5mg， 1.6μmol， 2.2％ )。 H NMR(CDCl3) 1.45(s， 9H)， 2.25(m， 1H)， 2.45(m， 1H)， 2.6-2.9(m， 2H)， 3.37(m， 1H)， 3.5-3.8(m， 2H)， 3.91(m， 1H)， 4.25(m， 1H)， 7.15(m， 1H)， 7.32(m， 2H)， 7.55(m， 2H).
步骤 H ： (3S， 5R)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -7- 苯 基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔丁酯 (H6a) 和 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基 氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔丁酯
(H6b)将 胺 (3S， 5R)-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 叔 丁 酯 (6.1mg， 19μmol) 在 DMF(200μL) 中用 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-( 环戊氧羰基氨 基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸甲酯 (C3)
(40μmol， 2 当量 )、 1- 羟基苯并三唑 (HOBT， 25μmol， 1 当量 )、 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙 基 ) 碳化二亚胺盐酸盐 (EDC， 40μmol， 2 当量 ) 和 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA， 80μmol， 4当 量 ) 处理。 将反应混合物在室温下老化过夜， 用 1M 的组胺水溶液 (40μL， 2 当量 ) 中止反应， 鼓入 N2 气吹干。 残留物用乙酸乙酯 (2×5ml) 和 0.5N 盐酸 (2×2ml) 萃取， 用硫酸钠干燥， 过 滤并浓缩， 得到 (3S， 5R)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -7- 苯 基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔丁酯 (H6a)(9.2mg， 17μmol)。1H NMR(CDCl3) 1.08(s， 9H)， 1.4-1.9(m， 20H)， 2.09(m， 1H)， 2.40(m， 1H)， 2.70(s， 2H)， 3.61(m， 2H)， 3.91(m， 1H)， 4.20(m， 2H)， 4.45(m， 1H)， 5.00(m， 1H)， 5.20(m， 1H)， 7.15(m， 1H)， 7.35(m， 2H)， 7.60(m， + + + 2H) ； LCMS(C30H43N3O6)541.32[M]， 实 验 值 ES 564.3[M+Na] ， 542.32[M+H] ， 保 留 时 间 3.7 分， 使用 10-90 ％乙腈 / 水 ( 含 0.1 ％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。次要的非对映体 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔丁酯 (H6b)(5μmol) 以类似的方式得到。 LCMS(C30H43N3O6)541.32[M]， + 实验值 542.32[M+H] ， 保留时间 3.7 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯 度 5 分钟。
步骤I： (3S， 5R)-2-((S)-2-( 环 戊 氧 羰 基 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 (16a) 和 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 环 戊 氧 羰 基 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸(16b)将 被 保 护 的 脯 氨 酸 (3S， 5R)-2-((S)-2-( 环 戊 氧 羰 基 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸叔丁酯 (H6a)(9.2mg， 17μmol) 溶在 CH2Cl2(1.0ml) 中， 用三氟乙酸 (0.3ml) 在室温下处理 4 小时。将反应混合物在高
真空下浓缩至干， 得到 (3S， 5R)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧 代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 (16a)(17μmol)。次要的对映体 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 (16b)(5μmol) 以类似的方式得到。
步 骤 J： (S)-1-((3S， 5R)-3-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-2- 羟 基 -1- 氧 代 己 -3- 基 氨 基 甲 酰 )-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二 甲 基 -1- 氧 代 丁 -2- 基 氨 基 甲 酸 环 戊 酯 (J6a) 和 (S)-1-((3S， 5S)-3-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-2- 羟 基 -1- 氧 代 己 -3- 基 氨 基 甲 酰 )-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -2- 基 )-3， 3- 二 甲 基 -1- 氧 代 丁 -2- 基 氨 基 甲 酸 环 戊 酯(J6b)将羧酸 (3S， 5R)-2-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 (I6a)(17μmol) 和 (2R， 3S)-3- 氨 基 -N- 环 丙 基 -2- 羟基己酰胺盐酸盐 ( 弹头 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-( 环戊氧羰基氨基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-2- 氧 代 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 (D3)， (7.6mg， 34μmol， 2 当量 ) 溶于 DMF(1.0ml) 中。 向其中加入 1- 羟基苯并三唑 (HOBT， 4.6mg， 34μmol， 2 当量 )、 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳化二亚胺盐酸盐 (EDC， 6.5mg， 34μmol， 2 当量 ) 和 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA， 12μL， 68μmol， 4 当量 )。将反应混合物在室温下老化过夜， 浓缩至干， 用 CH2Cl2(2×5ml) 和水 (2ml) 萃取。有机相用硫酸钠干燥， 过滤并浓缩成粗产 物。 该粗产物在硅胶上纯化 (1％ MeOH/CH2Cl2 至 20％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到 (S)-1-((3S， 5R)-3-((S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基氨甲酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨基甲酸环戊酯 (J6a)(4.1mg， 6.3μmol)。LCMS(C35H51N5O7)653.38[M]， 实 验 值 ES+654.5[M+H]+ 和 ES-652.6[M-H]-， 保留 时间 3.0 分， 使用 10-90 ％乙腈 / 水 ( 含 0.1 ％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。次要的非对映 体 (S)-1-((3S， 5S)-3-((S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基氨甲酰 )-8- 氧 代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨基甲酸环戊 酯 (J6b)(3μmol) 以类似的方法得到。LCMS(C35H51N5O7)653.38[M]， 实验值 ES+654.5[M+H]+ 和 ES-652.6[M-H]-， 保留时间 3.0 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。
步 骤 K： (S)-1-((3S， 5R)-3-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 氨 甲 酰 )-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二 甲 基 -1- 氧 代 丁 -2- 基 氨 基 甲 酸 环 戊 酯 ( 化 合 物 No.1) 和 (S)-1-((3S， 5S)-3-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 氨 甲 酰 )-8- 氧 代 -7- 苯 基 -2， 7二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二 甲 基 -1- 氧 代 丁 -2- 基 氨 基 甲 酸 环 戊 酯 ( 化 合 物
No.4)化合物 No.1化合物 No.4
将羟基酰胺 (S)-1-((3S， 5R)-3-((S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 氨甲酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基 氨 基 甲 酸 环 戊 酯 (J6a)(4.1mg， 6.3μmol) 溶 于 CH2Cl2(1.0ml) 并 用 Dess-Martin 五 价 碘 氧化剂 (DMP， 8.0mg， 18.9μmol， 3 当量 ) 于室温下处理 3 小时。用 1M 硫代硫酸钠水溶液 (32μL， 5 当量 ) 中止反应。 将反应混合物加到硅胶上 ( 用乙酸乙酯 / 己烷梯度洗脱 )， 得到 (S)-1-((3S， 5R)-3-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基氨甲酰 )-8- 氧代 -7- 苯 基 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨基甲酸环戊酯 ( 化 合 物 No.1)(3.1mg， 4.8μmol)， 为 白 色 固 体。1H NMR(CDCl3) 46H)， 1.96(m， 1H)， 2.25(m， 1H)， 2.61(m， 2H)， 2.80(s， 2H)， 3.60(dd， 2H)， 4.00(d， 1H)， 4.22(m， 2H)， 4.70(m， 1H)， 4.90(m， 1H)， 5.20(d， 1H)， 5.35(m， 1H)， 6.90(s， 1H)， 7.19(m， 1H)， 7.38(m， 2H)， 7.65(d， + + 1H)。LCMS(C35H49N5O7)651.36[M]， 实验值 ES 652.5[M+H] 和 ES 650.6[M-H] ， 保留时间 3.2 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲液 ) 梯度 5 分钟。 次要非对映体 (S)-1-((3S， 5S)-3-((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基氨甲酰 )-8- 氧代 -7- 苯基 -2， 7- 二 氮杂螺 [4.4] 壬 -2- 基 )-3， 3- 二甲基 -1- 氧代丁 -2- 基氨基甲酸环戊酯 ( 化合物 No.4) (1.4mg， 2μmol) 以类似的方式得到。1H NMR(CDCl3) 0.52(m， 2H) 14H)， 1.0-2.0(m， 22H)， 2.10(m， 1H)， 2.45-2.75(m， 4H)， 3.64(t， 2H)， 3.90(d， 2H)， 4.15(d， 1H)， 4.60(m， 1H)， 5.00(m， 1H)， 5.13(d， 1H)， 5.25(m， 1H)， 6.80(m， 1H)， 7.10(m， 2H)， 7.30(m， 4H)， 7.50(m， 2H)， + + 7.90(m， 1H) ； LCMS(C35H49N5O7)651.36[M]， 实 验 值 ES 652.5[M+H] 和 ES 650.6[M-H] ， 保留 时间 3.2 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。实施例 7 ： (3S， 5R)-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 )7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 酯 ( 化 合 物 No.2) 和 (3S， 5S)-((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 )7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸酯 ( 化合物 No.6)
步骤 A ： (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧 酸二叔丁酯 (A7a) 和 (3S， 5R)7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (A7b)将螺内酰胺 (5S， 8S)-7-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -3- 苯基 -1- 氧 杂 -3， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -8- 羧 酸 叔 丁 酯 (F1)(51mg， 150μmol) 与 CsCO3(70mg， 215μmol， 1.4 当 量 )、 Pd2dba3(6.6mg， 7.2μmol， 4.8 ％ ) 和 Xanthphos 配 体 (13.5mg，
23.3μmol， 15.5％ ) 一起置于管中。 经注射器加入二氧六环 (1.5ml)， 随后加入 1- 溴 -3- 氯 苯 (46mg， 240μmol， 1.6 当量 )。将密封的反应混合物在 100 ℃加热 17 小时， 并施加有效 的磁搅拌。将反应混合物用 CH2Cl2(10ml) 稀释， 经硅藻土过滤后浓缩。粗产物在硅胶上 纯化 (1-6 ％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到作为非对映体混合物的产物。将该非对映体在硅 胶上分离 (10-50 ％乙醚 / 己烷 )， 得到 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 1 [4.4] 壬 烷 -2， 3- 二 羧 酸 二 叔 丁 酯 (A7a)(45.7mg， 101μmol)。 H NMR(CDCl3) 1.48(m， 18H) ， 2.09(m ， 1H) ， 2.45(m ， 1H) ， 2.70(q ， 2H) ， 3.50(m ， 1H) ， 3.70(m ， 3H) ， 4.28(m ， 1H) ， 7.15(d， 1H)， 7.30(m， 1H)， 7.50(d， 1H)， 7.65(d， 1H) ； LCMS(C23H31N2O5Cl)450.19[M]， 实验值 + + ES 451.19[M+H] ， 保留时间 3.7 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。还得到了次要非对映体 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 1 烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (A7b)(15.2mg， 34μmol)。H NMR(CDCl3) 1.48(m， 18H)， 2.09(m， 1H)， 2.45(m， 1H)， 2.65(s， 2H)， 3.4-3.95(m， 4H)， 4.25(m， 1H)， 7.15(d， 1H)， 7.1-7.7(m， 4H) ； + + LCMS(C23H31N2O5Cl)450.19[M]， 实验值 ES 451.19[M+H] ， 保留时间 3.8 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。
步骤 B ： (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (B7a) 和 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (B7b)。将芳基化内酰胺 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (A7a)(45.7mg， 101μmol) 溶于 1M HCl/ 乙酸乙酯 (1.0ml， 10 当量 ) 中。在室温下老化反应混合物过夜， 向其中鼓入 N2 气吹洗直至干燥。将产物溶在 HCl 的饱 和甲醇溶液 (2ml) 中， 室温下老化过夜。用氮气将反应混合物吹干并在真空下干燥， 得到 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (B7a)(35.2mg， 102μmol)。 LCMS(C15H17N2O3Cl)308.09[M]， 实验值 ES+309.2[M+H]+ 和 311.1[M+H]+( 对于氯同 位素 )， 保留时间 2.0 分， 使用 5-45％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 7 分钟。 次要的非 对映体 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -2， 3- 二羧酸二叔丁酯 (A7b)(15.2mg， 34μmol) 类似地进行处理， 得到 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二 氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (B7b)(12.4mg， 36μmol)。LCMS(C15H17N2O3Cl)308.09[M]， + + + 实验值 ES 309.2[M+H] 和 311.1[M+H] ( 对于氯同位素 )， 保留时间 2.2 分， 使用 5-45％乙 腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 7 分钟。
步骤 C ： (3S， 5R)-2-((S)-2-( 叔丁氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-7-(3- 氯苯 基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (C7a) 和 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 叔丁氧 羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧
酸甲酯 (C7b)将脯氨酸 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 甲酯 (B7a)(35.2mg， 102μmol) 在 DMF(0.7ml) 中用 (S)-2-( 叔丁氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲 基丁酸 (33.3mg， 144μmol， 1.2 当量 )、 1- 羟基苯并三唑 (HOBT， 16.5mg， 122μmol， 1.2 当 量 )、 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳化二亚胺盐酸盐 (EDC， 63.3mg， 330μmol， 3.2 当 量 ) 和 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA， 86μL， 68mmol， 4 当量 ) 于室温下处理 3 天。用 1M 组胺 水溶液 (381μL， 3.7 当量 ) 中止反应， 并用 N2 气吹至干燥。残留物用乙酸乙酯 (2×10ml) 和 0.5N 盐酸 (2×5ml) 萃取。有机相用 1M 碳酸钾水溶液 (2×2ml) 洗， 用硫酸钠干燥， 过滤并浓缩。产物在硅胶上纯化 ( 乙酸乙酯 / 己烷梯度 )， 得到 (3S， 5R)-2-((S)-2-( 叔 丁氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬 1 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (C7a)(36.9mg， 70.6μmol)。 H NMR(CDCl3) 1.07(s， 9H)， 1.39(s， 9H)， 1.60(s， 1H)， 2.10(m， 1H)， 2.45(m， 1H)， 2.71(s， 2H)， 3.60(m， 2H)， 3.75(s， 3H)， 3.99(d， 1H)， 4.13(d ， 1H) ， 4.30(d ， 1H) ， 4.60(t ， 1H) ， 5.08(d ， 1H) ， 7.15(m ， 1H) ， 7.29(m ， 2H) ， 7.60(m ， + + 2H) ； LCMS(C26H36N3O6Cl)521.23[M]，实 验 值 ES 522.23[M+H] 和 422.23[M+H-Boc]+，保 留 时间 3.5 分， 使用 10-90 ％乙腈 / 水 ( 含 0.1 ％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。次要非对映 体 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (B7b) (12.4mg， 36μmol) 类 似 地 进 行 反 应， 得 到 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 叔 丁 氧 羰 基 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-7-(3- 氯 苯 基 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (C7b)(9.4mg， 18μmol， 50 ％ )。LCMS(C26H36N3O6Cl)521.23[M]， 实 验 值 ES+522.23[M+H]+ 和 422.23[M+H-Boc]+， 保留时间 3.5 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。
步骤 D： (3S， 5R)-2-((S)-2- 氨 基 -3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-7-(3- 氯 苯 基 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (D7a) 和 (3S， 5S)-2-((S)-2- 氨 基 -3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-7-(3- 氯 苯 基 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯(D7b)将化合物 (3S， 5R)-2-((S)-2-( 叔丁氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-7-(3- 氯 苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (C7a)(36.9mg， 70.6μmol) 溶于 CH2Cl2(1.0ml) 中并在室温下用三氟乙酸 (0.3ml) 处理 6 小时。将反应混合物浓缩至干， 得 到 (3S， 5R)-2-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基苯甲酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (D7a)(70.6μmol)。次要非对映体 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 叔丁氧 羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧 酸甲酯 (C7b)(9.4mg， 18μmol) 类似地处理， 得到 (3S， 5S)-2-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (D7b)(18μmol， 丁酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 100％ )。
步 骤 E： (3S， 5R)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (E7a) 和 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯
(E7b)
将胺 (3S， 5R)-2-((S)-2- 氨基 -3， 3- 二甲基丁酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (D7a)(70.6μmol) 溶于 CH2Cl2(2.0ml) 中并在室温下 用 2- 环己基乙酸 (20.0mg， 141μmol， 2.0 当量 )、 1- 羟基苯并三唑 (HOBT， 9.5mg， 70μmol， 1.0 当量 )、 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳化二亚胺盐酸盐 (EDC， 27.1mg， 141μmol， 2.0 当量 ) 和 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA， 74μL， 424μmol， 6 当量 ) 处理过夜。反应混合 物用 CH2Cl2(2×10ml) 和水 (5ml) 萃取。有机相用盐水洗， 用硫酸钠干燥， 过滤并浓缩， 得 到粗产物。该产物在二氧化硅上纯化 ( 乙酸乙酯 / 己烷梯度 )， 得到 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (E7a)(12.8mg， 23μmol)。1H NMR(CDCl3) 0.85-1.4(m， 17H)， 1.67(m，8H)， 2.10(m， 4H)， 2.45(m， 1H)， 2.70(d， 2H)， 3.65dd， 2H)， 3.79(s， 3H)， 3.92(d， 1H)， 4.30(d， 1H)， 4.50(d， 1H)， 4.60(t， 1H)， 6.00(d， 1H)， 7.15(d， 1H)， 7.30(m， 2H)， 7.50(m， 1H)， 7.70(s， + + + 1H) ； LCMS(C29H40N3O5Cl)545.26[M]， 实 验 值 ES 546.3[M+H] 和 548.4[M+H] ( 对 于 氯 同 位 素 ) 和 ES 544.3[M-H] ， 保 留 时 间 3.6 分， 使 用 10-90 ％ 乙 腈 / 水 ( 含 0.1 ％ 甲 酸 缓 冲 剂 ) 梯度 5 分钟。次要非对映体 (3S， 5S)-2-((S)-2-( 叔丁氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰 )-7-(3- 氯苯基 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸甲酯 (C7b)(18μmol) 类 似 地 处 理， 得 到 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 -8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (E7b)(6.6mg， 12μmol)。 + + LCMS(C29H40N3O5Cl)545.26[M]， 实验值 ES 546.3[M+H] ， 保留时间 3.6 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。
步骤 F ： (3S， 5R)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 (F7a) 和 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4]壬烷 -3- 羧酸 (F7b)将 (3S， 5R)- 甲 基 -7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (E7a)(12.8mg， 23μmol) 溶 于 THF(1.0ml) 中， 加 入 MeOH(50μL)。 向 其 中 加 入 1N LiOH 水 溶 液 (46μL， 2.0 当 量 )。将反应混合物于室温下搅拌过夜， 在 0 ℃下用 1N 盐酸 (46μL， 2.0 当量 ) 中止反 应。将反应混合物浓缩至干， 得到 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨 基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 (F7a)(23μmol)。 LCMS(C28H38N3O5Cl)531.25[M]， 实 验 值 ES+532.3[M+H]+ 和 ES-530.5[M-H]-， 保 留 时 间 3.2 分， 使用 10-90 ％乙腈 / 水 ( 含 0.1 ％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。次要的非对映体 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 甲 酯 (E7b)(6.6mg， 12μmol) 类 似 地 处 理， 得 到 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 (F7b)(12μmol)。LCMS(C28H38N3O5Cl)531.25[M]， 实验值
ES+532.25[M+H]+ 和 ES-530.25[M-H]-， 3.3 分保留时间， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲 酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。
步骤 G ： (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁 酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧 代己 -3- 基 ) 酯 (G7a) 和 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二 甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 ) 酯 (G7b)将羧酸 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 (F7a)(23μmol) 和 (2R， 3S)-3- 氨 基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺盐酸盐 ( 弹头 (5S， 8S)-3-(3- 氯苯基 )-7-((S)-2-( 环戊氧 基羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-2- 氧代 -1- 氧杂 -3， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -8- 羧酸 向其中加入 1- 羟基苯并三唑 (HOBT， (D3)， 20.6mg， 92μmol， 4 当量 ) 溶在 CH2Cl2(2.0ml) 中。 12.2mg， 46μmol， 2 当量 )、 1- 乙基 -(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳化二亚胺盐酸盐 (EDC， 17.6mg， 92μmol， 4 当量 ) 和 N， N- 二异丙基乙胺 (DIEA， 50μL， 288μmol， 12.5 当量 )。将反应混合 物在室温下老化过夜， 用 CH2Cl2(2×10ml) 和水 (2ml) 萃取。 将有机相用硫酸钠干燥， 过滤并 浓缩成粗产物。将粗产物在硅胶上纯化 (1％ MeOH/CH2Cl2 至 20％ MeOH/CH2Cl2 梯度 )， 得到 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 ) 酯 (G7a)(12.2mg， 17.4μmol)。LCMS(C37H54ClN5O6)699.38[M]，实 验 值 ES+700.5[M+H]+ 和 ES-698.7[M-H]-， 保留时间 3.3 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分 钟。次要的非对映体 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲 基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 (F7b)(12μmol) 经类似处理， 得到 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 ) 酯 (G7b)(8.5mg， 12μmol)。LCMS(C37H54ClN5O6)699.38[M]， 实 验 值 ES+700.5[M+H]+ 和 ES-698.7[M-H]-， 保留时间 3.3 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分 钟。
步 骤 H： (3S， 5R)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 -((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 ) 酯 ( 化 合 物 No.2) 和 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二 氮 杂 螺 [4.4] 壬 烷 -3- 羧 酸 -((S)-1-( 环 丙 基 氨 基 )-1， 2- 二 氧 代 己 -3- 基 ) 酯 ( 化 合 物
No.6)化合物 No.2
化合物 No.6将羟基酰胺 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二 甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((3S)-1-( 环丙基氨基 )-2- 羟 基 -1- 氧 代 己 -3- 基 ) 酯 (G7a)(12.2mg， 17.4μmol) 溶 在 CH2Cl2(2.0ml) 中， 室温下用 Dess-Martin 五价碘氧化剂 (DMP， 22.0mg， 52μmol， 3 当量 ) 处理 3 小时。用 1M 硫代硫酸钠 水溶液 (87μL， 5 当量 ) 中止反应。 将反应混合物加到硅胶上， 用乙酸乙酯 / 己烷梯度洗脱， 得到 (3S， 5R)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧 2- 二氧代己 -3- 基 ) 代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 酯 ( 化合物 No.2)(12.1mg， 17.3μmol)， 为白色固体。1H NMR(CDCl3) 44H)， 3.51(d， 2H)， 3.91(d， 1H)， 4.21(d， 1H)， 4.44(d， 1H)， 4.59(m， 1H)， 5.22(m， 1H)， 5.92(d， 1H)， 6.81(s， 1H)， 7.09(m， 1H)， 7.20(m， 4H)， 7.50(d， 1H)， 7.60(s， 1H) ； LCMS(C37H52ClN5O6)697.36[M]， 实 + + 验值 ES 698.5[M+H] 和 ES 696.6[M-H] ， 保留时间 3.6 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％ 甲酸 ) 梯度 5 分钟。次要非对映体 (3S， 5S)-7-(3- 氯苯基 )-2-((S)-2-(2- 环己基乙酰氨 基 )-3， 3- 二甲基丁酰 )-8- 氧代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((3S)-1-( 环丙 基氨基 )-2- 羟基 -1- 氧代己 -3- 基 ) 酯 (G7b)(8.5mg， 12μmol) 类似地处理， 得到 (3S， 5S)-7-(3- 氯 苯 基 )-2-((S)-2-(2- 环 己 基 乙 酰 氨 基 )-3， 3- 二 甲 基 丁 酰 )-8- 氧 代 -2， 7- 二氮杂螺 [4.4] 壬烷 -3- 羧酸 -((S)-1-( 环丙基氨基 )-1， 2- 二氧代己 -3- 基 ) 酯 ( 化 合 物 No.6)(7.6mg， 11μmol， 93 ％ )。1H NMR(CDCl3) 45H)， 3.65(m， 2H)， 3.90(m， 2H)， 4.49(m， 2H)， 4.60(m， 1H)， 5.28(m， 1H)， 5.95(m， 1H)， 6.81(s， 1H)， 7.0-7.8(m， 10H) ； + + LCMS(C37H52ClN5O6)697.36[M]， 实验值 ES 698.5[M+H] 和 ES 696.6[M-H] ， 保留时间 3.6 分， 使用 10-90％乙腈 / 水 ( 含 0.1％甲酸缓冲剂 ) 梯度 5 分钟。
试剂和条件 ： (l)1- 溴 -3- 氯苯， Pd2dba3/Xanthphos/CsCO3， 二氧六环， 100 ℃， 16 小时， 90％ (3 ∶ 1 混合物 ) ； (m)HCl 气， EtOAc， 18 小时， 然后 HCl 气， MeOH， 24 小时， 100％ ； (n)(S)-2-( 叔丁氧羰基氨基 )-3， 3- 二甲基丁酸， HOBT/EDC/DIEA， DMF， 3 天， 69％ ； (O)TFA， CH2Cl2， 6 小时， 100％ ； (p)2- 环己基乙酸， HOBT/EDC/DIEA， CH2Cl2， 18 小时， 67％ ； (q)LiOH， THF， MeOH， 18 小时， 100％ ； (r)(2R， 3S)-3- 氨基 -N- 环丙基 -2- 羟基己酰胺盐酸盐， HOBT/ EDC/DIEA， CH2Cl2， 18 小时， 76％； (S)Dess-Martin 五价碘氧化剂， CH2Cl2， 3 小时， 99％。 VI. 检 验和测定化合物的抑制性能的试验 A.HCV 酶试验 1.HCV NS3 丝氨酸蛋白酶域的构建和表达
利用 PCR 由 HCV Con 1 复制子质粒 I377neo/NS3-3′ /wt( 在此研究中重新命名为 pBR322-HCV-Neo)[V.Lohmann 等， Science， 285， pp.110-113(1999)] 得到编码 HCV NS3 蛋 1 181 白酶 (GenBank CAB 46913) 的残基 Ala -Ser 的 DNA 片段， 并将其插入 pBEV11(S.Chamber等， 私人通信 ) 以便表达大肠杆菌中具有 C 端六组氨酸标签的 HCV 蛋白质。所有构建物均 通过测序来证实。
将用于 HCV NS3 丝氨酸蛋白酶域的表达构建物转移到 BL21/DE3 pLys S 大肠肝菌 细胞 (Stratagene) 中。刚转移的细胞在补充了 100μg/ml 羧苄青霉素和 35μg/ml 氯霉素 的 BHI 培养基 (DifcoLaboratories) 中于 37℃生长至光密度 (600nm) 为 0.75。 用 1mM IPTG 在 24℃进行诱导 4 小时。 利用离心收取细胞浆， 并在蛋白质纯化前于 -80℃急骤冷冻。 所有 的纯化步骤均在 4℃进行。然后， 将 100g 细胞浆在 1.5L 的缓冲液 A(50mM HEPES(pH 8.0)， 300mM NaCl， 0.1％正辛基 -β-D- 吡喃葡糖苷， 5mM β- 巯基乙醇， 10％ (v/v) 甘油 ) 中裂 解并搅拌 30 分钟。将裂解物用 Microfluidizer(Microfluidics， Newton， Mass.) 均化， 随 后在 54000×g 下超离心 45 分。向上清液中加入咪唑至最终浓度为 5mM， 同时加入 2mL 用 含 5mM 咪唑的缓冲液 A 预平衡的 Ni-NTA 树脂。将该混合物摇动 3 小时， 并用 20 倍柱体积 的缓冲液 A 加 5mM 咪唑洗。将 HCV NS3 蛋白在含 300mM 咪唑的缓冲液 A 中洗脱。将洗脱物 浓缩， 加在一只预先用缓冲液 A 预平衡的 Hi-Load 16/60Superdex 200 柱上。收集合适的 纯化过的 HCV 蛋白级分并在 -80℃储存。2.HCV NS3 蛋白酶域肽切割试验
此试验是 Landro 等所述试验 (Landro JA， Raybuck SA， Luong YC， O’ Malley ET， Harbeson SL， Morgenstern KA， Rao G 和 Livingston DL.， Biochemistry 1997， 36， 9340-9348) 的改良， 在对于基因型 1a HCV 的 NS5A/NS5B 切割位点的基础上使用肽底物 (NS5AB)。底物的储备溶液 (25mM) 在含 0.2M DTT 的 DMSO 中制备并在 -20℃储存。使用一 种合成的肽辅因子 (KK4A) 作为 NS4A 的中央核心区的替代物。肽序列示于下面的表中。反 应以 96 孔微量滴板格式在含 50mMHEPES pH 7.8、 100mM NaCl、 20％甘油、 5mM DTT 和 25μM KK4A 的缓冲液中使用 25-50ηM HCV NS3 蛋白酶域进行。最终的 DMSO 浓度不超过 2％ v/ v。加入三氟乙酸 (TFA) 使反应中止， 最终浓度为 2.5％。和 HCV NS3 蛋白酶域一起使用的肽序列利用微内径柱分离法将 SMSY 产物与底物和 KK4A 分离。使用的仪器是 Agilent 1100， 带有 G1322A 脱气装置， G1312A 二元泵或 G1311A 四元泵， G1313A 自动进样器， G1316A 柱恒温箱和 G1315A 二极管阵列检测器。柱子是一只 Phenomenex Jupiter， 5μm C18，
150×2mm， P/O 00F-4053-B0， 流速 0.2mL/ 分。柱恒温浴为 40℃。流动相是 HPLC 级的 H2O/0.1％ TFA( 溶剂 A) 和 HPLC 级 CH3CN/0.1％ TFA( 溶剂 B)。利用在 210ηM 收集的 数据定量表示 SMSY 产物峰。NS3·4A 蛋白酶的构建和表达
利 用 标 准 重 组 DNA 技 术， 将 编 码 NS3 和 NS4A 的 序 列 的 包 含 一 个 N 端 六 组 氨 酸 序 列 的 cDNA 片 段 - 得 自 HCV 亚 型 系 1a 的 残 基 Ala1027 至 Cys1711， 克隆到杆状病毒 转 移 载 体 pVL1392(Webb NR 和 Summers MD(1990)Expression of Proteins using recombinantbaculoviruses， Techniques 2 ： 173-188)。含 NS3·4A 的重组杆状病毒通过 pVL1392-His-NS3·4A 与线型化的苜蓿银纹夜娥多核型多角体病毒 (AcMNPV)DNA 共转染到 草地夜娥 (Sf9) 昆虫细胞中来制备。被转染的含重组杆状病毒克隆的细胞随后利用蚀斑纯 化法分离。 高效价的克隆杆状病毒通常用于感染 Sf9 昆虫细胞供制备蛋白质用。 在制备时，使 Sf9 细胞在 27℃生长， 直至密度达到 2.0×106 细胞 /ml。此时用病毒感染该昆虫细胞。 72 小时后或者当细胞生存力处于 70-80％时， 收取培养物， 备好细胞用于纯化。3.NS3·4A 蛋白质的纯化
NS3·4A 蛋白 (SEQ ID NO ： 1) 纯化如下。将细胞浆在每 g 细胞至少 5 体积的裂 解缓冲液 (50mM Na2PO4 pH 8.0， 10％甘油， 300mM NaCl， 5mM β- 巯基乙醇， 0.2mM PMSF， 2.5μg/ml 亮抑蛋白酶肽， 1.0μg/ml E64， 2.0μg/ml 抑胃酶肽 ) 中解冻。然后将细胞浆在 冰上用 Dounce 均化器均化， 再使细胞通过一台 Microfluidizer(MicrofluidicsCorporati on， Newton， MA) 进行机械破碎， 将细胞裂解物收集在冰上， 于 4℃在 100,000×g 下离心 30 分 钟， 倒走上清液。 任选地， 可以将粒状沉淀再悬浮于洗涤缓冲液 ( 裂解缓冲液 +0.1％ β- 辛 基吡喃葡糖苷 ) 中， 用 Dounce 均化器均化， 在 4℃于 100000×g 下离心 30 分钟。不溶性的 NS3· 4A 通过重新悬浮在萃取缓冲液 ( 裂解缓冲液 +0.5％十二烷基麦芽糖苷 ) 中从粒状沉 淀中提取， 每 g 细胞浆用 2.5ml。将混合物用一台 Dounce 均化器均化， 并在 4℃混合 3 小时 或更长。将该混合物在 4℃于 100,000g 下离心 30 分钟。倒出和收集上清液。
利用 Ni-NTA 金属亲和层析法将 NS3·4A 蛋白进一步纯化。向收集的上清液中加 入取自 2M 储备液 (pH 8.0) 的咪唑， 使得咪唑的最终浓度为 10mM。将上清液分批在 4℃与 Ni-NTA 亲和树脂 ( 己用裂解缓冲液 +10mM 咪唑预平衡 ) 温育过夜。每 5μg 预期的 NS3· 4A 用 1ml 树脂。随后利用重力或在 500g 下离心 5 分钟使树脂沉降。将树脂倒入重力流动柱 中， 用 10 倍或更多柱体积的 Ni 洗涤缓冲液 ( 裂解缓冲液 +0.1％十二烷基麦芽糖苷 +10mM 咪唑 ) 洗涤。随后用 3-4 倍柱体积的 Ni 洗脱缓冲液 (Ni 洗涤缓冲液 +300mM 咪唑 ) 洗脱。 将洗脱的级分收集在冰上， 用 SDS-PAGE 鉴定。为防止 NS3·4A 蛋白酶解， 在加入 SDS 样品 缓冲液和沸腾之前， 先向凝胶样品中加入 100μM DFP 蛋白酶抑制剂。收集峰值级分， 通过 测定在 280nm 处的吸光度并除以 NS3·4A 的消光系数 (e)1.01， 确定蛋白质浓度。
NS3· 4A 用凝胶过滤色谱法进一步纯化。一只 Superdex 20026/60 柱与 Superdex 缓冲液 (20nM HEPES pH 8.0， 10％甘油， 300mMNaCl， 10mM β- 巯基乙醇， 0.05％十二烷基 麦芽糖苷 ) 以 3ml/ 分的速度平衡。如果需要， 将 Ni 纯化的 NS3·4A 在一台 Centriprep 30 中浓缩至高于 2mg/ml， 经过 0.2μm 的注射过滤器过滤， 在 Superdex 200 柱上加上最 多达 10ml。在通过 0.3 柱体积后， 收集 4-5ml 级分。各级分用 SDS-PAGE 鉴定。NS3·4A 蛋白以两个峰洗脱。峰 1 含聚结的 NS3·4A， 峰 2 含有活性蛋白质。收集峰 2 的级分， 分 成小份并在 -70℃冷冻。NS3·4A 蛋白质的分析分析 全蛋白长度 695 个氨基酸分子量 74,347.781 微克 13.450 皮摩尔摩尔消光系数 734301A280 相当于 1.01mg/ml 等电点 6.50pH 7 时的电荷 -3.584.NS3 肽切割试验
此试验跟踪肽底物被全长丙型肝炎病毒蛋白 NS3· 4A 的切割。使用基于基因型 1a HCV 的 HS5A/HS5B 切割位点的三种肽底物之一测定酶活性。 所有的底物储备溶液 (25mM) 均 在含 0.2M DTT 的 DMSO 中配制并在 -20℃下储存。用一种合成的肽辅因子 (NS4A 肽 ) 补充 NS4A。肽序列列在下面。水解反应按照 96 孔微量滴定板格式， 用 100-125ηMHCV NS3·4A 在含 50mM HEPES pH 7.8、 100mM NaCl、 20％甘油、 5mMDTT 和 25μM NS4A 肽的缓冲液中进 行。最终的 DMSO 浓度不超过 2％ v/v。使用 NS5AB 或 NS5AB-EDANS 作为底物的反应通过加 入 10％三氟乙酸 (TFA) 达到最终 TFA 浓度为 2.5％使其中止。使用 FITC-NS5AB-1 作为底物的反应则通过加入 0.4M 甲酸达到 0.08M 的最终酸浓度使反应中止。
酶活性通过用反相 HPLC 法分离底物和产物来鉴定。 使用的仪器是 Agilent 1100， 带有 G1322A 脱气装置， G1312A 二元泵或 G1311A 四元泵， G1313A 自动进样器， G1316A 柱恒温 室， G1321A 荧光检测器和 G1315A 二极管阵列检测器。柱恒温浴为 40℃。对于底物 NS5AB， 柱子是 Phenomenex Jupiter， 5μm C18， 150×2mm， P/O 00F-4053-B0， 流速 2.0mL/ 分， 使用 HPLC 级 H2O/0.1 ％ TFA( 溶剂 A) 和 HPLC 级 CH3CN/0.1 ％ TFA( 溶剂 B) 作为流动 相。C- 端产物峰 (NH2-SMSY-COOH) 利用在 210nm 收集的吸光度数据定量表示。对于底物 NS5AB-EDANS， 柱子是 Phenomenex Aqua， 5μm C18， 50×4.6mm， P/O 00B-4299-E0， 流速 1.0ml/ 分， 使用 HPLC 级 H2O/0.1％ TFA( 溶剂 A) 和 HPLC 级 CH3CN/0.1％ TFA( 溶剂 B) 作为流动相。C- 端产物峰 (NH2-SMSYT-Asp(EDANS)-KKK-COOH) 使用收集的 350nm 处的激 发 /490nm 处的发射数据定量表示。对于底物 FITC-NS5AB-1， 柱子是 Phenomenex Prodigy， 5μm ODS(2)， 50×4.6mm， P/O00B-3300-E0， 流速 1.0ml/ 分， 使用 10mM 磷酸钠 pH 7.0 在 HPLC 级 H2O 中 ( 溶剂 A) 和 65％ HPLC 级 CH3CN/35％ 10mM 磷酸钠 pH 7.0 在 HPLC 级 水中 ( 溶剂 B) 作为流动相。N- 端产物峰 (FITC-Ahx-EDVV-(α)Abu-C-COOH) 使用收集的 440nm 激发 /520nm 发射荧光数据定量表征。或者是， N- 端产物与未反应的 FITC-NS5AB-1 底物之比使用一只 Caliper Lab Chip 3000 测定， 检测 488nm 激发 /530nm 发射， 使用的芯 片缓冲液含 100nM Tris pH 7.0， 10mM EDTA， 0.01％ (v/v)Brij-35 和 0.1％ (v/v)CR-3。 和 HCV NS3 一起使用的肽序列5.Km 和 Vmax 的测定
为测定动力学参数 Km 和 Vmax， 使 HCV NS3 蛋白酶域或 HCV NS3·4A 与肽 底物在上述试验条件下反应。肽底物浓度在 3μM 和 200μM 之间变化， 在所有 的底物浓度下， 转化均小于 20％。产物峰面积 ( 由反相 HPLC 测定 ) 与反应时间 之比得到酶催化的水解速率。这些速率与底物浓度数据点利用非线性回归法与 Michaelis-Menten 公式拟合。使用标称的蛋白酶浓度和全切割的底物肽作为仪器校 正标准， 由 Vmax 得到 kcat 值。具有 HCV NS3 或 NS3 蛋白酶域的肽底物的动力学参数6. 化合物效力的测定
为评价表观 Ki 值， 将除试验化合物和底物之外的所有组分在室温下预培养 5-10 分钟。然后向该混合物中加入溶在 DMSO 内的试验化合物并在 30℃培养 15 或 60 分钟。培 养纯净的 DMSO 作为无抑制剂的对照样。 加入浓度等于 Km 或 1/2Km 的肽底物引发切割反应， 并令其在 30℃进行 20 分钟。反应结束时使混合物骤停反应， 如上所述地测定反应程序。使 用 11 个化合物浓度来滴定酶抑制活性。将活性和对应的抑制剂浓度数据点利用非线性回 归法与描述竞争性紧密结合酶抑制作用的 Morrison 公式 (Sculley MJ 和 Morrison JF.， Biochim.Biophys.Acta.1986， 874， 44-53) 拟合。
试验的式 I 化合物一般显示出 Ki 值从约 0.100 至约 5μM。在某些实施方案中， 式 I 化合物的 Ki 值为约 0.170-3.7μM。在另一些实施方案中， 式 I 化合物的 Ki 值为约 0.150-3.50μM。在其它一些实施方案中， 式 I 化合物的 Ki 值为 0.140 至约 3.200μM。
式 (I、 Ia 或 Ib) 化合物抑制丝氨酸蛋白酶受体的活性的实例示于下面的表 3 中。对 于用 HCV 酶试验法测得的化合物对丝氨酸蛋白酶的活性， 如果测得的活性低于 0.41μM， 则 丝氨酸蛋白酶活性用 “+++” 表示 ； 如果测得的活性为 0.41μM 至 0.7μM， 则用 “++” 表示 ； 如果测得的活性大于 0.7μM， 则用 “+” 表示 ； 如果无数据可以得到， 则表示成 “-” 。应当注 意， 效力 0％是只用 DMSO 对照样得到的最小响应。酶试验 1 指 HCV NS3 蛋白酶域肽切割 试验， 酶试验 2 指 HCV NS3 肽切割试验。表 3 ： HCV 酶试验活性和示例性式 I 化合物的效力B.HCV 细胞试验
Huh-7 细胞在补充了 10％热失活的 FBS( 胎牛血清 )、 2mML- 谷氨酰胺和非必需氨 基酸 (JRH) 的 Dulbecco 改良的 Eagle 培养基 (DMEM， JRH Biosciences， Lenexa， Kansas) 中增殖。将细胞用体外转录的 HCV 复制子 RNA 转染， 其如 Lohmann 等 (1999) 所述与复制 子 I377neo/NS3-3 ′ /wt 相同。选择稳定的细胞克隆并在 250μg/mL G418(Invitrogen，Carlsbad， California) 存在下保存。 在随后的 HCV 复制子试验中使用该克隆之一 24-2。 使 复制子细胞在补充了 10％ FBS、 2mML- 谷氨酰胺、 非必需氨基酸和 250μg/mL G418 的 DMEM 培养基中增殖。将细胞在新鲜的培养基中每周分裂 2 次， 直至达到融合。每个复制子细胞 中有大约 200-300 个 HCV RNA 拷贝。
细胞中的 HCV 复制子 RNA 用 Quantigene Discover XL 试剂盒 (Panomics Inc.， Fremont California) 按照制造商的说明测定。 简言之， 将化合物处理过的复制子细胞裂解 并使用 HCV 特异性寡核苷酸固定在捕捉板上过夜， 按照制造商的说明使用寡核苷酸探针测 定捕捉的 RNA 的相对数量。1.2 天 HCV 复制子 IC50 试验
在试验的前一天， 在 96 孔板的每个孔中植入 104 个复制子细胞并令其在补充了 10％热失活 FBS(JRH Biosciences， Lenexa， Kansas)、 2mM L- 谷氨酰胺 (Invitrogen)、 非必 需氨基酸 (Invitrogen) 和 250μg/mL G418(Invitrogen) 的 DMEM(Invitrogen， Carlsbad， California) 中附着和生长过夜。将化合物在加有 2 ％ FBS 和 0.5 ％ DMSO， 但不含 G418 的 DMEM(Sigma Chemical Co.， St.Louis， MO) 中系列稀释。细胞中的 HCV 复制子 RNA 用 Quantigene Discover XL 试剂盒 (Panomics Inc.， Fremont California) 按照制造商的说 明测定。简言之， 将化合物处理过的复制子细胞裂解并利用 HCV 特异性寡核苷酸固定在捕 捉板上过夜， 并用寡核苷酸探针装置按照制造商的说明测定捕捉的 RNA 的相对数量。除非 另外指明， 各数据点均代表 3 个重复样的平均值。 IC50 是细胞中 HCV 复制子 RNA 浓度与未经 处理的复制子细胞对照样相比减少 50％时的化合物浓度。 为监测化合物对细胞增殖或细胞 生存力的影响， 将复制子细胞用系列稀释的化合物处理 48 小时， 然后利用 CellTiter Glo 试验 (Promega， Madison， Wisconsin) 测定细胞的生存力。各 CC50 均由三个重复样得出， 代 表生存的细胞数目与未处理的细胞对照样相比减少 50％时的化合物浓度。 IC50 和 CC50 利用 按 Soft Max Pro 程序 (Molecular Derices， Sunnyvale， California) 拟合的四参数曲线测 定。2.5 天 HCV 复制子 IC99 试验
在试验的前一天， 在 96 孔板中以每孔 2500 个细胞的低密度植入 HCV 复制子细胞， 使得细胞在 5 天的培养期间达不到融合。将化合物在含 10 ％ FBS 和 0.5 ％ DMSO、 但不含 G418 的 DMEM 中系列稀释。 在第 1 天和第 3 天向细胞中加入新鲜培养基和化合物。 在细胞用 抗病毒化合物处理 5 天后， 使用 Quantigene Discover XL 试剂盒 (PanomicsInc.， Fremont California) 按照制造商的说明测定细胞中的 HCV 复制子 RNA。简言之， 将化合物处理过 的复制子细胞裂解并用 HCV 特异性寡核苷酸固定在捕捉板上过夜， 使用寡核苷酸探针装置 (Panomics) 按照制造商的说明测定被捕捉的复制子 RNA 的相对数量。 各数据点代表 2 个重 复样的平均值。IC99 是细胞中 HCV 复制子 RNA 浓度与未处理的细胞对照样比较减少 2 个对 数值时的化合物浓度。为监测化合物对细胞增殖或细胞生存力的影响， 将复制子细胞用系 列稀释的化合物处理 5 天， 然后利用 CellTiter Glo 试验 (Promega， Madison， Wisconsin) 测定细胞生存力。各 CC50 值均得自 2 个重复样， 是生存的细胞与未处理的细胞对照样相比 减少 50％时的化合物浓度。IC99 和 CC50 利用 Prism 软件 (Graphpad Software Inc.， San Diego， California) 和 Excel 程序 (MicrosoftCorporation， Radmand， Washington)， 通过 4 参数拟合法确定。
利用以上的试验， 确定了本发明化合物可作为丝氨酸蛋白酶抑制剂使用。其它实施方案
应当清楚， 虽然已结合详细的说明对本发明作了描述， 但以上描述目的在于示例 说明而不是限制发明的范围， 后者由所附权利要求的范围限定。 其它的方法、 优点和修改都 属于以下权利要求的范围。139101903392 A CN 101903393序列表1/6 页序列表 <110>Vertex Pharmaceuticals， Inc. <120> 丝氨酸蛋白酶抑制剂 <130>125805/00463 <160>6 <170>PatentIn 版本 3.3 <210>1 <211>695 <212>PRT <213> 丙型肝炎病毒 <220> <221>MISC 特点 <222>(1)..(10) <223> 丝氨酸标记 <400>1 Met Ser His His 1 Ala Gln Gln Thr 20 Gly Arg Asp Lys 35 Ala Thr Gln Thr 50 Val Tyr His Gly 65 Val Ile Gln MetHis His His His Ala Met 5 10 Arg Gly Leu Leu Gly Cys 25 Asn Gln Val Glu Gly Glu 40 Phe Leu Ala Thr Cys Ile 55 Ala Gly Thr Arg Thr Ile 70 Tyr Thr Asn Val Asp Gln 85 90 Ala Pro Gln Gly Ser Arg Ser Leu Thr Pro 100 105 Asp Leu Tyr Leu Val Thr Arg His Ala Asp140Ala Pro Ile Thr Ala Tyr 15 Ile Ile Thr Ser Leu Thr 30 Val Gln Ile Val Ser Thr 45 Asn Gly Val Cys Trp Thr 60 Ala Ser Pro Lys Gly Pro 75 80 Asp Leu Val Gly Trp Pro 95 Cys Thr Cys Gly Ser Ser 110 Val Ile Pro Val Arg Arg101903392 A CN 101903393序列表2/6 页115 120 125 Arg Gly Asp Ser Arg Gly Ser Leu Leu Ser Pro Arg Pro Ile Ser Tyr 130 135 140 Leu Lys Gly Ser Ser Gly Gly Pro Leu Leu Cys Pro Ala Gly His Ala 145 150 155 160 Val Gly Leu Phe Arg Ala Ala Val Cys Thr Arg Gly Val Thr Lys Ala 165 170 175 Val Asp Phe Ile Pro Val Glu Asn Leu Glu Thr Thr Met Arg Ser Pro 180 185 190 Val Phe Thr Asp Asn Ser Ser Pro Pro Ala Val Pro Gln Ser Phe Gln 195 200 205 Val Ala His Leu His Ala Pro Thr Gly Ser Gly Lys Ser Thr Lys Val 210 215 220 Pro Ala Ala Tyr Ala Ala Gln Gly Tyr Lys Val Leu Val Leu Asn Pro 225 230 235 240 Ser Val Ala Ala Thr Leu Gly Phe Gly Ala Tyr Met Ser Lys Ala His 245 250 255 Gly Val Asp Pro Asn Ile Arg Thr Gly Val Arg Thr Ile Thr Thr Gly 260 265 270 Ser Pro Ile Thr Tyr Ser Thr Tyr Gly Lys Phe Leu Ala Asp Gly Gly 275 280 285 Cys Ser Gly Gly Ala Tyr Asp Ile Ile Ile Cys Asp Glu Cys His Ser 290 295 300 Thr Asp Ala Thr Ser Ile Leu Gly Ile Gly Thr Val Leu Asp Gln Ala 305 310 315 320 Glu Thr Ala Gly Ala Arg Leu Val Val Leu Ala Thr Ala Thr Pro Pro 325 330 335 Gly Ser Val Thr Val Ser His Pro Asn Ile Glu Glu Val Ala Leu Ser 340 345 350 Thr Thr Gly Glu Ile Pro Phe Tyr Gly Lys Ala Ile Pro Leu Glu Val 355 360 365 Ile Lys Gly Gly Arg His Leu Ile Phe Cys His Ser Lys Lys Lys Cys 370 375 380 Asp Glu Leu Ala Ala Lys Leu Val Ala Leu Gly Ile Asn Ala Val Ala 385 390 395 400 Tyr Tyr Arg Gly Leu Asp Val Ser Val Ile Pro Thr Asn Gly Asp Val 405 410 415 Val Val Val Ser Thr Asp Ala Leu Met Thr Gly Phe Thr Gly Asp Phe 420 425 430141101903392 A CN 101903393序列表3/6 页Asp Ser Val 435 Ser Leu Asp 450 Ala Val Ser 465 Gly Ile Tyr Asp Ser Ser Glu Leu Met 515 Thr Pro Gly 530 Val Phe Thr 545 Lys Gln Ser Val Cys Ala Lys Cys Leu 595 Leu Tyr Arg 610 Ile Thr Lys 625 Thr Ser Thr Tyr Cys Leu Ser Gly Lys 675 Phe Asp Glu 690 <210>2 <211>10 <212>PRT <213> 人造的Ile Asp Cys Asn Thr Cys Val Thr Gln Thr Val Asp Phe 440 445 Pro Thr Phe Thr Ile Glu Thr Thr Thr Leu Pro Gln Asp 455 460 Arg Thr Gln Arg Arg Gly Arg Thr Gly Arg Gly Lys Pro 470 475 480 Arg Phe Val Ala Pro Gly Glu Arg Pro Ser Gly Met Phe 485 490 495 Val Leu Cys Glu Cys Tyr Asp Ala Gly Cys Ala Trp Tyr 500 505 510 Pro Ala Glu Thr Thr Val Arg Leu Arg Ala Tyr Met Asn 520 525 Leu Pro Val Cys Gln Asp His Leu Glu Phe Trp Glu Gly 535 540 Gly Leu Thr His Ile Asp Ala His Phe Leu Ser Gln Thr 550 555 560 Gly Glu Asn Phe Pro Tyr Leu Val Ala Tyr Gln Ala Thr 565 570 575 Arg Ala Gln Ala Pro Pro Pro Ser Trp Asp Gln Met Trp 590 580 585 Ile Arg Leu Lys Pro Thr Leu His Gly Pro Thr Pro Leu 600 605 Leu Gly Ala Val Gln Asn Glu Val Thr Leu Thr His Pro 615 620 Tyr Ile Met Thr Cys Met Ser Ala Asp Leu Glu Val Val 630 635 640 Trp Val Leu Val Gly Gly Val Leu Ala Ala Leu Ala Ala 645 650 655 Ser Thr Gly Cys Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu 660 665 670 Pro Ala Ile Ile Pro Asp Arg Glu Val Leu Tyr Gln Glu 680 685 Met Glu Glu Cys 695142101903392 A CN 101903393序列表4/6 页<220> <223> 合成产生的肽 <220> <221>MOD RES <222>(5)..(5) <223>α- 氨基丁酸 <400>2 Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr 1 5 10 <210>3 <211>16 <212>PRT <213> 人造的 <220> <223> 合成产生的肽 <400>3 Lys Lys Gly Ser Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu Ser Gly Lys 1 5 10 15 <210>4 <211>23 <212>PRT <213> 人造的 <220> <223> 合成产生的肽 <400>4 Lys Lys Gly Ser Val Val Ile Val Gly Arg Ile Val Leu Ser Gly Lys 1 5 10 15 Pro Ala Ile Ile Pro Lys Lys 20143101903392 A CN 101903393序列表5/6 页<210>5 <211>15 <212>PRT <213> 人造的 <220> <223> 合成产生的肽 <220> <221>MOD RES <222>(5)..(5) <223>α- 氨基丁酸 <220> <221>MOD_RES <222>(12)..(12) <223>Asp(EDANS) <400>5 Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr Thr Asp Lys Lys Lys 1 5 10 15 <210>6 <211>14 <212>PRT <213> 人造的 <220> <223> 合成产生的肽 <220> <221>MOD_RES <222>(1)..(1) <223>FITC-2- 氨基己酸 <220> <221>MOD_RES <222>(6)..(6) <223>α- 氨基丁酸144101903392 A CN 101903393序列表6/6 页<400>6 Xaa Glu Asp Val Val Xaa Cys Ser Met Ser Tyr Thr Lys Lys 1 5 10145