含有硫醚结构的四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶类化合物及其应用技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及含有硫醚结构的四氢苯并
[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶类化合物及其制备方法,还涉及其作为表
皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂应用。
背景技术
根据癌细胞的分化程度和形态特征，肺癌可分为非小细胞肺癌和
小细胞肺癌。研究发现，肺癌患者中存在着大量的表皮生长因子信号
转导的失调和表皮生长因子受体酪氨酸激酶的过度表达。
表皮生长因子受体(EGFR)是具有膜外配体受体结合域和细胞
内酪氨酸激酶活性域的一种跨膜蛋白。EGFR有4种类型HER-1、
HER-2、HER-3和HER-4，当小分子配体与EGFR结合，使EGFR活
化，进而EGFR的酪氨酸激酶区激活，识别蛋白的底物酶,就会将信
号传入细胞内，同时EGFR活化后还可激活许多下游信号分子的磷酸
化，启动信号转导通路，最终影响细胞存活和细胞增殖。由于受体型
酪氨酸激酶主要差异为胞外配体结合区，而胞内的酪氨酸激酶结构域
具有较高的同源性，本发明旨在合成胞外配体结合区结合良好的小分
子配体，从而抑制胞内酪氨酸激酶活性区，抑制酶的催化活性和酪氨
酸自磷酸化，进而抑制细胞周期进程、血管生成和肿瘤的转移等。
现有的表皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂，如吉非替尼、厄洛
替尼、拉帕替尼等，均存在着腹泻、皮疹、瘙痒等皮肤反应，及可能
的头痛、心脏QT间期延长和生物利用度降低等。
本发明所述化合物作为全新结构类型的表皮生长因子受体酪氨
酸激酶抑制剂，具有结构类型新颖，药效作用明显的特点。可用于治
疗或预防与表皮生长因子受体信号转导失调引起的相关疾病如小细
胞肺癌，鳞癌，腺癌，大细胞癌，结肠直肠癌、乳腺癌，卵巢癌，肾
细胞癌，支气管哮喘，具有良好的应用价值和开发应用前景。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供一种如式I所示的化合物、其前
体药物和药物活性代谢物以及其药学上可接受的盐，并提供了其在制
备预防和治疗EGFR信号转导失调相关的疾病的药物中的应用。
其中
其中
R1为H或C1-C4烷基；
R2独立的选自H、卤素、C1-C4烷基、羟基、C1-C4烷氧基。
优选地，
R1为H或乙基；
R2独立的选自H、氟、氯、溴、甲基、羟基、甲氧基、2,4-二甲
基。
“药物可接受的盐”指保留了式I化合物的生物效力和性质，并
与合适的非毒性有机或无机酸或有机或无机碱形成的常规酸加成盐
或碱加成盐。酸加成盐的实例包括醋酸盐，己二酸盐，藻酸盐，天冬
氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑
酸盐，樟脑磺酸盐，环戊丙酸盐，二葡萄糖酸盐，十二烷基硫酸盐，
乙磺酸盐，富马酸盐，葡庚糖酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，
己酸盐，氢氯酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，
马来酸盐，甲磺酸盐，2-萘磺酸盐，烟酸盐，硝酸盐，草酸盐，扑酸
盐，果胶酯酸盐，过硫酸盐，3-苯基丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，
丙酸盐，琥珀酸盐，硫酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十
一酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐，例如钠和钾盐，碱土金属盐，例
如钙和镁盐，有机碱的盐，例如二环己胺盐，N-甲基-D-葡糖胺盐，
和氨基酸的盐，例如精氨酸，赖氨酸等，而且，碱性含氮基团可以用
这样的试剂季铵化，例如低级烷基卤化物，如甲基，乙基，丙基和丁
基的氯，溴和碘化物；硫酸二烷基酯，如硫酸二甲酯，二乙酯，二丁
酯和二戊酯；长链卤化物，如癸基，月桂基，肉豆蔻基和硬脂酰基的
氯，溴和碘化物；芳烷基卤化物，如苄基和苯乙基的溴化物等。优选
用于生成酸加成盐的酸包括盐酸和醋酸。
“药学上可接受的”如药学上可接受地载体、赋性剂、前体药物等，
指药理学上可接受的、并对给药具体化合物的患者基本上无毒性。
“药学活性代谢物”指药学上可接受并有效的式I化合物的代谢产
物。
本发明也涉及抑制表皮生长因子受体酪氨酸激酶的药用组合物，
该组合物含有式I化合物或衍生物或其药学上适用的酸加成盐以及
药学上适用的载体。
本发明化合物可以通过不同的方法给患者服用，例如以胶囊剂或
片剂口服，以无菌溶液剂或混悬剂给药，并且在某些情况下，可以以
溶液剂形式静脉注射。可以将本发明的游离碱化合物以其药学上适用
的酸加成盐形式进行配制和服用。
具体实施方式
反应流程1概括了制备本发明化合物的合成步骤。
以下述实例详细叙述本发明。但是，应当明确，本发明不限于具
体叙述的下述实例。
实施例1：7-(4-乙氧基苯基)-4-苯硫基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并
[2,3-d]嘧啶(化合物编号01)的制备
步骤A：4-(4-乙氧基苯基)环己酮的制备
依次将4-(4-羟基苯基)环己酮15.0g(79.0mmol)，无水碳酸钾
109.0g(789.5mmol)，丙酮200mL，硫酸二乙酯24.4g(157.9mmol)放入
500mL茄型瓶中，加热回流搅拌6h后，减压蒸干溶剂，向剩余物中
加入水500mL，于室温下搅拌2h，抽滤，水洗2次，干燥后得白色
固体16.6g，收率96.5％，m.p.：70-72℃。
步骤B：2-氨基-6-(4-乙氧基苯基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺的
制备
向100mL三颈瓶中依次加入4-(4-乙氧基苯基)环己酮2.0g(9.2
mmol)，氰乙酰胺0.8g(9.2mmol)、硫粉(升华)0.3g(9.2mmol)，
无水乙醇6.0mL，然逐滴滴加哌啶0.8g(9.2mmol)，并控温45-50℃，
滴加完后于上述温度下搅拌反应5h。反应完毕后，将反应液冰冻2h，
抽滤析出的固体，乙醇洗涤2次，石油醚洗涤1次，自然风干后得橙
红色固体1.6g，收率56.1％。m.p.：219-221℃；IR:(KBr,cm-1)3458(m),
3291(d),2912(m),1632(s),1559(s),1510(s),1474(s),1414(s),1234(s),
1179(s),1114(s),1043(s),824(s)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.31(t,
3H,CH3),1.73-1.84(m,1H,CH2),1.91-1.95(m,1H,CH2),2.53-2.58(m,
1H,CH2),2.63-2.80(m,3H,CH2),2.81-2.90(m,1H,CH),3.99(m,2H,
CH2-O),6.53(brs,2H,NH2),6.85(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),6.94(s,2H,
NH2),7.19(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz)；ESI-MS(m/z):317.3([M+H]+)。
步骤C：7-(4-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶
-4(3H)-酮的制备
向50mL茄形瓶中加入2-氨基-6-(4-乙氧基苯基)-4,5,6,7-四氢苯
并[b]噻吩-3-甲酰胺1.0g(3.2mmol)和甲酰胺5.7g(126.4mmol)，
于165℃下搅拌反应6h后，冷却至室温，待其析出大量固体后加入
异丙醇5mL，于室温下搅拌1h，抽滤，异丙醇洗涤1次，自然风干
后得棕色固体0.7g，收率66.0％。m.p.：239-240℃；IR:(KBr,cm-1)
3430(m),2925(s),2880(s),1657(s),1592(s),1511(s),1370(s),1247(d),
1175(s),834(s)；1H-NMR(400MHz,DMSO-d6):δ1.31(t,3H,CH3),
1.87-1.94(m,1H,CH2),1.97-2.03(m,1H,CH2),2.78-2.86(m,2H,CH2),
2.96-3.01(m,2H,CH2),3.12-3.18(m,1H,CH2),4.00(m,2H,CH2-O),
6.87(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),7.23(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),8.02(s,1H,
Ar-H),12.34(brs,1H,NH)；ESI-MS(m/z):327.4([M+H]+)。
步骤D：4-氯-7-(4-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧
啶的制备
向100mL茄形瓶中依次加入7-(4-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并
[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶-4(3H)-酮10.0g(31.0mmol)和三氯氧磷30mL
(315.3mmol)，加热回流搅拌，待固体全部溶解后，再回流10min，
减压蒸干溶剂，得棕黑色油状粗品。经柱层析分离(石油醚∶乙酸乙
酯＝2:1)得到淡黄色晶体9.4g，收率88.3％。m.p.：166-169℃；IR:(KBr,
cm-1)3442(m),2974(s),2924(d),2875(s),1515(s),1493(s),1428(s),
1383(s),1253(s),1122(s),1046(s),838(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):
δ1.42(t,3H,CH3),1.96-2.06(m,1H,CH2),2.23-2.29(m,1H,CH2),
2.98-8.15(m,4H,CH2),3.36-3.42(m,1H,CH),4.04(m,2H,CH2-O),
6.89(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.19(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),8.74(s,1H,
Ar-H)；ESI-MS(m/z):345.3([M+H]+)。
步骤E：7-(4-乙氧基苯基)-4-苯硫基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]
嘧啶(化合物编号01)的制备
将4-氯-7-(4-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧
啶0.5g(1.5mmol)与苯硫酚0.2g(1.6mmol)投入50mL茄形瓶，加
入正丁醇4.8mL，加入三乙胺0.4g(4.4mmol)，加热回流反应1h，
冷却析出固体，抽滤，用水10mL和乙醇30mL各洗涤1次，自然风
干后即得到淡黄色固体0.5g，收率77.0％。m.p.：153-155℃；IR:(KBr,
cm-1)3454(m),2919(s),2851(s),1643(m),1512(s),1493(s),1384(s),
1246(s),1117(m),825(s),750(s),620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):
δ1.42(t,3H,CH3),2.01-2.09(m,1H,CH2),2.26-2.31(m,1H,CH2),
2.94-3.01(m,1H,CH2),3.07-3.23(m,3H,CH2),3.45-3.50(m,1H,CH),
4.04(m,2H,CH2),6.89(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),7.21(d,2H,Ar-H,
J＝8.8Hz),7.47(brs,3H,Ar-H),7.59-7.61(m,2H,Ar-H),8.55(s,1H,
Ar-H)；ESI-MS(m/z):419.4([M+H]+)。
实施例2：7-(4-乙氧基苯基)-4-(2-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号02)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(2-甲氧基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号02)0.4g，收率
58.5％。m.p.:140-142℃；IR:(KBr,cm-1)3452(m),2921(s),2851(s),
1612(m),1512(s),1495(s),1383(s),1246(s),1115(m),828(s),752(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),1.99-2.09(m,1H,
CH2),2.25-2.30(m,1H,CH2),2.94-3.01(m,1H,CH2),3.06-3.26(m,3H,
CH2),3.50-3.56(m,1H,CH),3.80(s,3H,CH3),4.04(m,2H,CH2),6.89(d,
2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.02-7.07(m,2H,Ar-H),7.21(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),
7.47-7.51(m,1H,Ar-H),7.56(dd,1H,J1＝7.2Hz,J2＝2.0Hz),8.53(s,1H,
Ar-H)；ESI-MS(m/z):449.2([M+H]+)。
实施例3：7-(4-乙氧基苯基)-4-(3-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号03)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(3-甲氧基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号03)0.4g，收率
58.5％。m.p.:146-148℃；IR:(KBr,cm-1)3450(m),2921(s),2851(s),
1641(m),1512(s),1492(s),1411(s),1383(s),1246(s),1114(s),828(s),
779(s),620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),
1.99-2.09(m,1H,CH2),2.26-2.31(m,1H,CH2),2.95-3.01(m,1H,CH2),
3.06-3.21(m,3H,CH2),3.44-3.49(m,1H,CH),3.83(s,3H,CH3-O),
4.04(m,2H,CH2),6.89(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),7.01(dd,1H,Ar-H,
J1＝8.4Hz,J2＝2.4Hz),7.14(t,1H,Ar-H),7.17-7.22(m,3H,Ar-H),7.38(t,
1H,Ar-H),8.58(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):449.3([M+H]+)。
实施例4：7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号04)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-甲氧基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号04)0.4g，收率
58.5％。m.p.:158-160℃；IR:(KBr,cm-1)3449(m),2923(s),2677(s),
1592(s),1512(s),1494(s),1383(s),1245(s),1175(s),1115(s),1034(s),
827(s),621(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),
2.00-2.09(m,1H,CH2),2.26-2.30(m,1H,CH2),2.94-3.02(m,1H,CH2),
3.07-3.25(m,3H,CH2),3.46-3.50(m,1H,CH),3.87(s,3H,CH3-O),
4.04(m,2H,CH2),6.89(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),7.00(d,2H,Ar-H,
J＝8.0Hz),7.20(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),7.50(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),
8.56(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):449.2([M+H]+)。
实施例5：7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-甲基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号05)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-甲基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号05)0.5g，收率
81.0％。m.p.:158-159℃；IR:(KBr,cm-1)3453(m),2920(s),2851(s),
1640(s),1512(s),1495(s),1384(s),1244(s),1116(s),827(s),778(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),1.99-2.09(m,1H,
CH2),2.26-2.30(m,1H,CH2),2.42(s,3H,CH3),2.94-3.01(m,1H,CH2),
3.06-3.24(m,3H,CH2),3.45-3.51(m,1H,CH),4.04(m,2H,CH2),6.89(d,
2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.21(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.28(d,2H,Ar-H,
J＝7.6Hz),7.48(d,2H,Ar-H,J＝7.6Hz),8.56(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
433.2([M+H]+)。
实施例6：7-(4-乙氧基苯基)-4-(2,4-二甲基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并
[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号06)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(2,4-二甲基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号06)0.6g，收率
87.7％。m.p.:150-152℃；IR:(KBr,cm-1)3454(m),2921(s),2851(s),
1642(m),1512(s),1494(s),1383(s),1247(s),1115(s),826(s),779(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),2.00-2.10(m,1H,
CH2),2.26-2.31(m,1H,CH2),2.34(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),
2.94-3.01(m,1H,CH2),3.07-3.25(m,3H,CH2),3.49-3.55(m,1H,CH),
4.05(m,2H,CH2),6.89(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),7.10(d,1H,Ar-H,
J＝8.0Hz),7.20-7.22(m,3H,Ar-H),7.45(d,1H,Ar-H,J＝8.0Hz),8.53(s,
1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):447.3([M+H]+)。
实施例7：7-(4-乙氧基苯基)-4-(2-氟苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩
并[2,3-d]嘧啶(化合物编号07)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(2-氟苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号07)0.6g，收率
93.7％。m.p.:136-138℃；IR:(KBr,cm-1)3454(m),2919(s),2851(s),
1641(m),1513(s),1494(s),1384(s),1248(s),1116(m),826(s),772(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),2.00-2.10(m,1H,
CH2),2.27-2.32(m,1H,CH2),2.94-3.01(m,1H,CH2),3.07-3.24(m,3H,
CH2),3.46-3.52(m,1H,CH),4.05(m,2H,CH2),6.89(d,2H,Ar-H,
J＝8.4Hz),7.20-7.27(m,4H,Ar-H),7.48-7.54(m,1H,Ar-H),7.57-7.61(m,
1H,Ar-H),8.53(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):437.3([M+H]+)。
实施例8：7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-氟苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩
并[2,3-d]嘧啶(化合物编号08)的制备
参照实例1的方法，7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-氟苯硫基)-5,6,7,8-四
氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号08)0.2g，收率34.9％。m.p.:
147-149℃；IR:(KBr,cm-1)3452(m),2921(s),1612(s),1513(s),1491(s),
1384(s),1250(s),1119(s),828(s),777(s),621(s)；1H-NMR(400MHz,
CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),2.00-2.06(m,1H,CH2),2.28-2.30(m,1H,
CH2),2.97-3.01(m,1H,CH2),3.08-3.21(m,3H,CH2),3.44-3.47(m,1H,
CH),4.04(m,2H,CH2),6.89(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.16-7.21(m,4H,
Ar-H),7.56-7.58(m,2H,Ar-H),8.57(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
437.0([M+H]+)。
实施例9：7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-氯苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩
并[2,3-d]嘧啶(化合物编号09)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-氯苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号09)0.6g，收率
89.4％。m.p.:161-163℃；IR:(KBr,cm-1)3454(m),2921(s),2852(s),
1640(s),1513(s),1496(s),1474(s),1383(s),1245(s),1116(m),822(s),
746(s),621(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),
1.99-2.09(m,1H,CH2),2.26-2.30(m,1H,CH2),2.95-3.02(m,1H,CH2),
3.06-3.21(m,3H,CH2),3.42-3.48(m,1H,CH),4.04(m,2H,CH2),6.89(d,
2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.20(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.44(d,2H,Ar-H,
J＝8.4Hz),7.52(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),8.55(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
453.0([M+H]+)。
实施例10：7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-溴苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号10)的制备
参照实例1的方法，制得7-(4-乙氧基苯基)-4-(4-溴苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号10)0.6g，收率
78％。m.p.:165-167℃；IR:(KBr,cm-1)3454(m),2920(s),2852(s),
1640(m),1512(s),1496(s),1472(s),1384(s),1243(s),1115(m),826(s),
779(s),620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),
1.99-2.09(m,1H,CH2),2.26-2.30(m,1H,CH2),2.94-3.01(m,1H,CH2),
3.06-3.19(m,3H,CH2),3.42-3.47(m,1H,CH),4.04(m,2H,CH2),6.89(d,
2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.20(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.45(d,2H,Ar-H,
J＝8.4Hz),7.59(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),8.55(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
496.8([M+H]+)。
实施例11：7-(4-羟基苯基)-4-苯硫基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并
[2,3-d]嘧啶(化合物编号11)的制备
将7-(4-乙氧基苯基)-4-苯硫基-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]
嘧啶(化合物编号01)0.6g(1.5mmol)和无水三氯化铝0.6g(4.5mmol)
投入100mL茄形瓶，加入甲苯10mL，加热回流搅拌，反应1h后，
停止反应，向反应体系中加入水30mL，室温下搅拌3h，抽滤，自
然风干，产物经柱层析(甲醇：二氯甲烷＝1:30)得到黄色固体0.3g，
收率45.8％。m.p.:195-197℃；IR:(KBr,cm-1)3453(m),2920(s),
2851(s),1641(m),1384(s),1115(m),829(s),780(s),620(s)；
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.42(t,3H,CH3),1.99-2.09(m,1H,CH2),
2.25-2.31(m,1H,CH2),2.94-3.00(m,1H,CH2),3.06-3.24(m,3H,CH2),
3.45-3.51(m,1H,CH),5.30(s,1H,Ar-OH),6.83(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),
7.17(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.46-7.48(m,3H,Ar-H),7.59-7.61(m,2H,
Ar-H),8.55(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):391.1([M+H]+)。
实施例12：7-(4-羟基苯基)-4-(4-甲基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号12)的制备
参照实例11的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(4-甲基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号12)0.4g，收率
58.3％。m.p.:227-229℃；IR:(KBr,cm-1)3443(m),2918(s),2850(s),
1644(m),1516(s),1493(s),1412(s),1384(s),1112(s),829(s),781(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ2.01-2.08(m,1H,CH2),
2.25-2.29(m,1H,CH2),2.42(s,3H,CH3),2.93-2.99(m,1H,CH2),
3.05-3.21(m,3H,CH2),3.45-3.49(m,1H,CH),4.97(s,1H,Ar-OH),
6.82(d,2H,Ar-H,J＝7.2Hz),7.16(d,2H,Ar-H,J＝7.2Hz),7.28(d,2H,
Ar-H,J＝7.2Hz),7.47(d,2H,Ar-H,J＝7.2Hz),8.56(s,1H,Ar-H)；ESI-MS
(m/z):405.2([M+H]+)。
实施例13：7-(4-羟基苯基)-4-(2,4-二甲基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号13)的制备
参照实例11的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(2,4-二甲基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号13)0.4g，收率
54.7％。m.p.:250-252℃；IR:(KBr,cm-1)3453(m),2919(s),2851(s),
1641(m),1513(s),1494(s),1410(s),1384(s),1108(m),829(s),782(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.99-2.10(m,1H,CH2),
2.26-2.31(m,1H,CH2),2.34(s,3H,CH3),2.39(s,3H,CH3),2.93-3.00(m,
1H,CH2),3.06-3.25(m,3H,CH2),3.49-3.54(m,1H,CH),4.75(s,1H,
Ar-OH),6.83(d,2H,Ar-H,J＝7.6Hz),7.09(d,1H,Ar-H,J＝7.2Hz),7.18(t,
3H,Ar-H),7.45(d,1H,Ar-H,J＝7.2Hz),8.53(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
419.1([M+H]+)。
实施例14：7-(4-羟基苯基)-4-(2-氟苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩
并[2,3-d]嘧啶(化合物编号14)的制备
参照实例11的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(2-氟苯硫基)-5,6,7,8-
四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号14)0.4g，收率62.7％。
m.p.:111-113℃；IR:(KBr,cm-1)3449(m),2919(s),2851(s),1640(m),
1515(s),1475(s),1413(s),1384(s),1111(m),827(s),758(s),619(s)；
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.99-2.10(m,1H,CH2),2.26-2.31(m,1H,
CH2),2.94-3.01(m,1H,CH2),3.07-3.26(m,3H,CH2),3.46-3.51(m,1H,
CH),4.80(s,1H,Ar-OH),6.83(d,2H,Ar-H,J＝7.6Hz),7.17(d,2H,Ar-H,
J＝7.6Hz),7.21-7.23(m,1H,Ar-H),7.26(brs,1H,Ar-H),7.49-7.54(m,1H,
Ar-H),7.59(t,1H,Ar-H),8.54(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
409.2([M+H]+)。
实施例15：7-(4-羟基苯基)-4-(4-氯苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩
并[2,3-d]嘧啶(化合物编号15)的制备
参照实例11的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(4-氯苯硫基)-5,6,7,8-
四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号15)0.4g，收率66.1％。
m.p.:209-211℃；IR:(KBr,cm-1)3452(m),2920(s),2851(s),1640(m),
1515(s),1495(s),1414(s),1384(s),1110(s),826(s),780(s),620(s)；
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ2.02-2.06(m,1H,CH2),2.26-2.30(m,1H,
CH2),2.94-3.00(m,1H,CH2),3.06-3.22(m,3H,CH2),3.42-3.47(m,1H,
CH),4.78(s,1H,Ar-OH),6.83(d,2H,Ar-H,J＝7.6Hz),7.16(d,2H,Ar-H,
J＝7.6Hz),7.43(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.52(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),
8.55(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):425.2([M+H]+)。
实施例16：7-(4-羟基苯基)-4-(4-溴苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩
并[2,3-d]嘧啶(化合物编号16)的制备
参照实例11的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(4-溴苯硫基)-5,6,7,8-
四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号16)0.4g，收率56.9％。
m.p.:224-225℃；IR:(KBr,cm-1)3454(m),2920(s),2851(s),1640(m),
1516(s),1496(s),1469(s),1413(s),1384(s),1113(s),828(s),781(s),
620(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ2.04(brs,1H,CH2),2.25-2.30(m,
1H,CH2),2.94-3.00(m,1H,CH2),3.06-3.16(m,3H,CH2),3.41-3.47(m,
1H,CH),4.71(brs,1H,Ar-OH),6.82(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.16(d,2H,
Ar-H,J＝8.4Hz),7.45(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),7.59(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),
8.55(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):469.0([M+H]+)。
实施例17：7-(4-羟基苯基)-4-(2-羟基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号17)的制备
将7-(4-乙氧基苯基)-4-(2-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号02)0.7g(1.5mmol)和无水三氯化铝1.2g
(9.0mmol)投入100mL茄形瓶，加入甲苯11mL，加热回流搅拌，
反应15min后，停止反应，向反应体系中加入水30mL，室温下搅拌
3h，抽滤，自然风干，产物经柱层析(甲醇：二氯甲烷＝1:30)得到
黄色固体0.5g，收率72.6％。m.p.:116-118℃；IR:(KBr,cm-1)3452(m),
2919(s),2851(s),1641(m),1515(s),1472(s),1414(s),1384(s),1111(m),
830(s),755(s),620(s)；1H-NMR(400MHz,DMSO):δ1.95-2.04(m,1H,
CH2),2.13-2.17(m,1H,CH2),2.91-3.03(m,2H,CH2),3.09-3.17(m,2H,
CH2),3.36-3.41(m,1H,CH),6.73(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),6.89(t,1H,
Ar-H),6.98(d,1H,Ar-H,J＝7.6Hz),7.15(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),7.35(t,
1H,Ar-H),7.44(d,1H,Ar-H,J＝7.6Hz),8.52(s,1H,Ar-H),9.22(s,1H,
Ar-OH),9.93(s,1H,Ar-OH)；ESI-MS(m/z):407.1([M+H]+)。
实施例18：7-(4-羟基苯基)-4-(3-羟基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号18)的制备
参照实例17的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(3-羟基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号18)0.4g，收率
63.6％。m.p.:214-216℃；IR:(KBr,cm-1)3450(m),2919(s),2850(s),
1640(m),1515(s),1413(s),1384(s),1109(m),831(s),781(s),620(s)；
1H-NMR(400MHz,DMSO):δ1.95-2.04(m,1H,CH2),2.11-2.16(m,1H,
CH2),2.91-3.14(m,5H,2×CH2,CH),6.73(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),
6.90(d,1H,Ar-H,J＝8.8Hz),6.99-7.02(m,2H,Ar-H),7.15(d,2H,Ar-H,
J＝8.4Hz),7.29(t,1H,Ar-H),8.58(s,1H,Ar-H),9.22(s,1H,Ar-OH),
9.76(s,1H,Ar-OH)；ESI-MS(m/z):407.2([M+H]+)。
实施例19：7-(4-羟基苯基)-4-(4-羟基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号19)的制备
参照实例17的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(4-羟基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号19)0.3g，收率
76.7％。m.p.:277-279℃；IR:(KBr,cm-1)3435(m),2919(s),2851(s),
1643(m),1492(s),1412(s),1384(s),1111(m),829(s),782(s),620(s)；
1H-NMR(400MHz,DMSO):δ1.92-2.03(m,1H,CH2),2.12-2.16(m,1H,
CH2),2.90-3.16(m,4H,2×CH2),3.36(brs,1H,CH),6.73(d,2H,Ar-H,
J＝7.6Hz),6.88(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),7.15(d,2H,Ar-H,J＝7.6Hz),
7.38(d,2H,Ar-H,J＝8.0Hz),8.54(s,1H,Ar-H),9.22(s,1H,Ar-OH),
9.95(s,1H,Ar-OH)；ESI-MS(m/z):407.2([M+H]+)。
实施例20：7-(4-羟基苯基)-4-(2-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号20)的制备
步骤A：4-氯-7-(4-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶
的制备
将4-氯-7-(4-乙氧基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧
啶2.5g(7.2mmol)和无水三氯化铝2.9g(21.6mmol)投入100mL
茄形瓶，加入甲苯50mL，加热回流搅拌，反应30min后，停止反应，
向反应体系中加入水100mL，室温下搅拌3h，抽滤，自然风干，经
柱层析(甲醇：二氯甲烷＝1:40)分离得到黄色固体1.1g，收率48.5％。
m.p.：202-204℃；IR:(KBr,cm-1)3261(m),2907(m),1561(s),1540(s),
1513(s),1487(s),1384(s),1221(s),1171(s),1131(s),845(s)；
1H-NMR(400MHz,DMSO):δ1.91-2.00(m,1H,CH2),2.09-2.14(m,1H,
CH2),2.93-3.08(m,3H,CH2),3.13-3.17(m,1H,CH2),3.25(brs,1H,CH),
6.72(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.14(d,2H,Ar-H,J＝8.4Hz),8.84(s,1H,
Ar-H),9.22(s,1H,Ar-OH)；ESI-MS(m/z):317.2([M+H]+)。
步骤B：7-(4-羟基苯基)-4-(2-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻
吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号20)的制备
将4-氯-7-(4-羟基苯基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶
0.5g(1.6mmol)和2-甲氧基苯硫酚0.2g(1.7mmol)投入50mL茄形
瓶中，加入三乙胺0.5g(4.8mmol)，加入正丁醇4mL，加热搅拌回
流1h，反应结束后冷却析出晶体，抽滤，用水10mL和乙醇10mL
各洗涤1次，自然风干后得到黄色固体0.5g，收率77.3％。m.p.:
161-163℃；IR:(KBr,cm-1)3444(m),2921(s),2851(s),1585(s),1515(s),
1412(s),1383(s),1247(s),1129(s),830(s),753(s),621(s)；
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.98-2.08(m,1H,CH2),2.25-2.29(m,1H,
CH2),2.93-2.99(m,1H,CH2),3.05-3.25(m,3H,CH2),3.49-3.55(m,1H,
CH),3.80(s,3H,CH3-O),4.93(s,1H,Ar-OH),6.82(d,2H,Ar-H,
J＝7.2Hz),7.02-7.07(m,2H,Ar-H),7.16(d,2H,Ar-H,J＝7.2Hz),7.49(t,
1H,Ar-H),7.55(d,1H,Ar-H,J＝7.6Hz),8.51(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
420.9([M+H]+)。
实施例21：7-(4-羟基苯基)-4-(3-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号21)的制备
参照实例20的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(3-甲氧基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号21)0.5g，收率
72.7％。m.p.:176-178℃；IR:(KBr,cm-1)3457(m),2920(s),2851(s),
1640(m),1515(s),1383(s),1111(s),829(s),781(s),620(s)；
1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ1.98-2.09(m,1H,CH2),2.26-2.29(m,1H,
CH2),2.93-3.00(m,1H,CH2),3.06-3.21(m,3H,CH2),3.44-3.49(m,1H,
CH),3.83(s,3H,CH3-O),4.78(s,1H,Ar-OH),6.83(d,2H,Ar-H,
J＝8.4Hz),7.01(d,1H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.14-7.19(m,4H,Ar-H),7.38(t,
1H,Ar-H),8.58(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):421.2([M+H]+)。
实施例22：7-(4-羟基苯基)-4-(4-甲氧基苯硫基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]
噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号22)的制备
参照实例20的方法，制得7-(4-羟基苯基)-4-(4-甲氧基苯硫
基)-5,6,7,8-四氢苯并[4,5]噻吩并[2,3-d]嘧啶(化合物编号22)0.6g，收率
87.9％。m.p.:231-233℃；IR:(KBr,cm-1)3450(m),2920(s),2851(s),
1642(m),1514(s),1494(s),1384(s),1250(s),1173(m),1110(s),827(s),
621(s)；1H-NMR(400MHz,CDCl3):δ2.02-2.10(m,1H,CH2),
2.26-2.30(m,1H,CH2),2.95-3.00(m,1H,CH2),3.09-3.16(m,3H,CH2),
3.45-3.50(m,1H,CH),3.87(s,3H,CH3-O),4.71(s,1H,Ar-OH),6.83(d,
2H,Ar-H,J＝8.4Hz),7.00(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),7.17(d,2H,Ar-H,
J＝8.4Hz),7.50(d,2H,Ar-H,J＝8.8Hz),8.56(s,1H,Ar-H)；ESI-MS(m/z):
421.2([M+H]+)。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其
它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术
内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发
明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简
单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
药理实施例
实施例23：
表皮生长因子(EGFR)体外活性测定
按照Mowafy等(Eur.J.Med.Chem,2013,61,132-145)介绍的方
法，进行本项测定。
本测定使用的是Kinase-GloPlus发光激酶检测试剂盒。它通过测
量激酶反应后溶剂中ATP的量来评定激酶活性。发光信号强弱与ATP
的量成正比而与激酶活性成反比。将测试化合物在10％DMSO中稀
释至100μM，然后取出5μl的稀释液加入到50μl的反应中以保证所
有反应中DMSO的最终浓度均为1％。所有的酶促反应均在30℃下
反应40min。在50μl的反应混合物中包含40mM的三羟甲基氨基甲
烷(Tris)，10mM的MgCl2，0.1mg/mL的牛血清白蛋白(BSA)，
0.2mg/mL的复合基质(Glu，Tyr)，10μM的ATP和EGFR，并控制
pH保持在7.4。在酶促反应结束后，向每个反应中加入50μl的
Kinase-GloPlus发光激酶检测溶剂并随后在室温下培育5min。发光信
号通过Tecan公司的无限M1000型酶标仪来测定。
IC50值的测定通过使用ADP-GloTM检测试剂盒来完成。它通过
蛋白激酶来测定ADP的生成，在上述试剂盒中伴随激酶反应而生成
的ADP会导致发光信号增强。首先，将反应混合物置于96孔板中于
30℃下培育30min，随后向其中加入25μl的ADP-GloTM试剂。摇
晃该96孔板，然后于室温下继续培育40min。最后加入50μl的激酶
检测试剂，随后96孔板的结果通过GloMax酶标仪来读取。空白组
的试验方法与样品组完全平行一致。最终，蛋白激酶的活性数值通过
减除空白组的数值来进行校正。
按照上述方法，测试本发明代表性化合物与EGFR的结合，IC50
值的结果示于表1。
表1
实施例24：A-549细胞增殖测定
按照Stockert等(ActaHistochemica,2012,114(8),785-796)介绍
的方法，进行本项测定。
本测定使用MTT法并利用人类肺癌细胞株A549来评价发明代
表性化合物的抗肿瘤增值活性。A549细胞株在Dulbecco氏改进的
Eagle培养基(DMEM)上进行培养，该培养基包含10％小牛血清
(FBS)，100U/mL的青霉素以及100g/mL的链霉素。当细胞增殖至
80～90％时使其合并随后进行不超过20代的传代培养，然后在下一
步处置前使它们适应环境达到24h。将这些细胞置于96孔板上
(8×104/mL)，然后在含有5％CO2的湿润环境中培养过夜并控温在
37℃。24h过后加入20μM/50μM的发明代表性化合物。再经过24h
的培养,向其中加入MTT(5mg/mL)并继续培养4h。移除培养基质，
将晶体溶解于DMSO中，利用酶标仪(TECANSPECTRA,Wetzlar,德
国)在490nm波长下测量吸光度。抑制作用通过抑制率和IC50值来表
示。
按照上述方法测定本发明代表性化合物，结果示于表2。
表2
实施例25：对卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用
对数生长期细胞用胰酶消化后，以6×103个/孔细胞数加人96
孔培养板，置37℃、5％CO2培养箱中培养，第2天待大部分细胞贴
壁后置人4℃恒温箱1h，以促成细胞同步化生长。吸去上清液，加
人含10％新生小牛血清(FCS)RPMI1640培养液，200μL/孔，按实验
设计分组。把无菌生理盐水配制的化合物注射液加入96孔中，每孔
中加入200μL，使每孔的药物浓度分别为1mg/mL、2mg/mL和5
mg/mI，以0mg/mL为阴性对照组。继续培养24、48、72h后，各
孔分别加人20μLMTT溶液(浓度为5mg/mL)，轻轻震荡培养板，放
回培养箱内再孵育4h，然后吸尽上清液，于各孔中加二甲亚砜200μL，
置震荡器上震荡5-10min，用酶标光度计测出每孔中波长为580nm
的吸光值(A＝580)，A＝580值与活细胞数量成正比。
按照上述方法测定本发明代表性化合物，结果示于表3。
表3
实施例26：对骨肉瘤细胞U2OS-EGFP-4A12G增殖的作用
对数生长期细胞用胰酶消化后，台盼蓝计数，配制成细胞密度为
1×l04个/mL的细胞悬液，接种于96孔板中，每孔200μL，每孔约2×103
个细胞，预培养24h，把无菌生理盐水配制的化合物注射液加入96
孔中，每孔中加入200μL，使每孔的药物浓度分别为1mg/mL、2mg/mL
和5mg/mI，以0mg/mL为阴性对照组。在分别培养0h、12h、24h
和48h后每孔加入MTT溶液(5mg/mL)20μL，继续孵育4h，终止培
养。小心吸弃培养孔中的上清液，每孔加入150μL的二甲基亚砜
(DMSO)，震荡10min，使甲腊充分溶解，选择490nm波长，在酶联
免疫检测仪上测定各孔光吸收值(A值)，重复检测5次。
按照上述方法测定本发明代表性化合物，结果示于表4。
表4
制剂实施例
下列制剂实施例仅举例说明本发明的保护范围，但不以任何方式构成
限定。
实施例27：明胶胶囊
硬明胶胶囊的制备采用：
可以根据所提供的合理变化来改进上述制剂。
实施例28：片剂
片剂的制备采用
将上述组分混合并压制成片剂。
实施例29：片剂
每片中含有2.5-1000mg活性组分的片剂制备如下：
使活性成分、淀粉和纤维素通过45号目筛并彻底混合。将聚乙烯
吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后经14号目筛。将生成的颗粒在
50-60℃下干燥并经18号目筛。将预先经过60号目筛的羧甲基纤维
素钠、硬脂酸镁和滑石粉加入到上述颗粒中，随后混合，在压片机上
压制得到片剂。
实施例30：混悬液
每5ml含有0.1-1000mg药物的混悬液制备如下：
令药物经45号目筛并与羧甲基纤维素钠和糖浆混合形成平滑的
糊剂。将苯甲酸溶液、矫味剂和着色剂用一些水稀释并在搅拌下加入
上述糊剂。随后加入足量的水以达到所需的体积。
实施例31：组合片剂
使活性成分、淀粉和纤维素通过45号目筛并彻底混合。将聚乙
烯吡咯烷酮溶液与所得粉末混合，随后经14号目筛。将生成的颗粒
在50-60℃下干燥并经18号目筛。将预先经过60号目筛的羧甲基纤
维素钠、硬脂酸镁和滑石粉加入到上述颗粒中，随后混合，在压片机
上压制得到片剂。
对于上述说明，本领域技术人员可容易地理解本发明的必要特征，不
背离本发明的精神和范围，本发明可进行各种改变和改进以适应不同
的应用和条件。