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新型氰基嘧啶衍生物
    【技术领域】
     本发明涉及一种新型氰基嘧啶化合物， 和包含该化合物的药物组合物和配方。背景技术 腺苷是一种当它结合至细胞表面上的受体时可具有各种生理作用的物质。 细胞表 面上的腺苷受体属于 G- 蛋白质偶联受体类， 且可被划分为 A1， A2a， A2b 和 A3。其中， 腺苷 A1 和腺苷 A3 受体与 Gi- 蛋白质偶联且其激活导致细胞内 c-AMP 水平的下降。另外， 腺苷 A2a 和腺苷 A2b 受体与 Gs- 蛋白质偶联且其激活导致细胞内 c-AMP 水平的升高。这四种腺 苷受体子型分别已被克隆。
     已经报道了关于可作用于每一上述腺苷受体子型的激动剂和拮抗剂的各种研究。 其中， 腺苷 A2a 受体激动剂已被报道不仅具有有效的抗高血压作用和可用作上述药物如抗 高血压药物， 用于治疗 / 预防心脏或小脑缺血性疾病的药剂和抗动脉硬化药物， 而且具有 高眼压作用 ( 参见 J.Pharmcol.Exp.Ther.320-326， 273(1995)。
     WO 2005 ／ 105778 公开了作为腺苷 A2a 受体激动剂的氰基嘧啶化合物。但 WO 2005 ／ 105778 没有公开如本发明的任何特定氰基嘧啶化合物。
     本发明的公开内容 ( 本发明所要解决的问题 ) 本发明的一个目的是提供一种具有安全的和有效的腺苷 A2a 受体激动剂活性的新型 化合物。
     ( 解决该问题的方式 ) 本发明人为了以上目的已进行深入研究， 并且发现， 以下化合物具有有效的腺苷 A2a 受体激动作用以及优异的安全性。 另外， 本发明人还已发现， 以下化合物具有对眼睫状动脉 的血管松弛和对视网膜神经节细胞的神经保护。 本发明通过在这些发现的基础上进一步研 究而完成。
     本发明提供了一种在以下条款 1 中显示的氰基嘧啶化合物， 包含该化合物的组合 物和配方， 该化合物的用途， 一种用于治疗或预防疾病的方法， 和关于该化合物的一种工 艺。
     条款 1. 具有结构式 (1) 的氰基嘧啶化合物 :
     其中 R 是氢， 羟基 ( 低级烷基 ) 基团， 卤化 ( 低级烷基 ) 基团或 ( 低级烷氧基 ) 羰基 ( 低级烷基 ) 基团 或其盐。
     条款 2. 条款 1 的氰基嘧啶化合物， 选自 (1)N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺， (2)N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(2- 羟基乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 哌 嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺， (3)N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(3- 羟基丙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 哌 嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺， (4)N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(2- 氟乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 哌 嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺， 和 (5)N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(2- 甲氧基羰基乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲 基 ) 哌嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺， 或其盐。
     条款 3. 一种药物组合物， 包含条款 1 或 2 的化合物或其盐， 和药物可接受载体。
     条款 4. 用于治疗或预防眼病的条款 3 的药物组合物。
     条款 5. 用于治疗或预防青光眼的条款 4 的药物组合物。
     条款 6. 条款 1 或 2 的化合物或其盐作为腺苷 A2a 受体激动剂的用途。
     条款 7. 一种用于治疗眼病的方法， 包括将有效量的条款 1 或 2 的化合物或其盐向 需要这种治疗的动物或人给药。
     条款 8. 一种含水液体制剂， 包含条款 3 的药物组合物。
     条款 9. 条款 8 的含水液体制剂， 进一步包含一种更选自药物可接受缓冲剂， 等渗 剂， 防腐剂， 加溶剂和 pH 调节剂的添加剂。
     条款 10. 条款 9 的含水液体制剂， 其中缓冲剂选自丁二酸， 硼酸， 磷酸和氨基酸， 和 其药物可接受盐。
     条款 11. 条款 10 的含水液体制剂， 其中缓冲剂是丁二酸。
     条款 12. 条款 8 的含水液体制剂， 其中等渗剂是一种或两种选自葡萄糖， 山梨醇， 甘露醇， 氯化钠， 氯化钾， 丙二醇和甘油的等渗剂。
     条款 13. 条款 9 的含水液体制剂， 其中防腐剂选自苯扎氯铵， 氯化苄乙胺， 苯度溴 铵， 葡萄糖氯己定， 对 - 氧基苯甲酸甲基酯， 对 - 氧基苯甲酸丙基酯， 三氯叔丁醇和苯甲醇。
     条款 14. 任一条款 8 至 13 的含水液体制剂， 其中 pH 是约 5.0 至 9.0。
     在上述通式中定义的每一基团具体地含义如下。
     这里所用的卤素原子包括氟， 氯， 溴和碘原子。
     这里所用的 ( 低级烷氧基 ) 羰基基团包括烷氧基羰基基团， 其中烷氧基部分是包 含 1 至 6 个碳的直或支链烷氧基基团。更具体地， 它包括， 例如， 甲氧基羰基、 乙氧基羰基、 n- 丙氧基羰基、 异丙氧基羰基、 n- 丁氧基羰基、 异丁氧基羰基、 叔 - 丁氧基羰基、 仲 - 丁氧基 羰基、 n- 戊基氧基羰基、 新戊基氧基羰基、 n- 己基氧基羰基、 异己基氧基羰基、 3- 甲基戊基 氧基羰基等。这里所用的卤化 ( 低级烷基 ) 基团包括用 1 至 7 卤素原子， 优选 1 至 3 卤素原子 取代的低级烷基基团 ( 优选包含 1 至 6 个碳的直或支链烷基基团 )。更具体地， 它包括， 例 如， 氟甲基、 二氟甲基、 三氟甲基、 氯甲基、 二氯甲基、 三氯甲基、 溴甲基、 二溴甲基、 二氯氟甲 基、 2,2- 二氟乙基、 2,2,2- 三氟乙基、 五氟乙基、 2- 氟乙基、 2- 氯乙基、 3,3,3- 三氟丙基、 七 氟丙基、 2,2,3,3,3- 五氟丙基、 七氟异丙基、 3- 氯丙基、 2- 氯丙基、 3- 溴丙基、 4,4,4- 三氟 丁基、 4,4,4,3,3- 五氟丁基、 4- 氯丁基、 4- 溴丁基、 2- 氯丁基、 5,5,5- 三氟戊基、 5- 氯戊基、 6,6,6- 三氟己基、 6- 氯己基、 全氟己基等。
     这里所用的羟基 ( 低级烷基 ) 基团包括用 1 至 5 羟基基团， 优选 1 至 3 羟基基团取 代的上述低级烷基基团 ( 优选包含 1 至 6 个碳的直或支链烷基基团 )。更具体地， 它包括， 例如， 羟基甲基， 2- 羟基乙基， 1- 羟基乙基， 3- 羟基丙基， 2， 3- 二羟基丙基， 4- 羟基丁基， 3， 4- 二羟基丁基， 1， 1- 二甲基 -2- 羟基乙基， 5- 羟基戊基， 6- 羟基己基， 3， 3- 二甲基 -3- 羟基 丙基， 2- 甲基 -3- 羟基丙基， 2， 3， 4- 三羟基丁基， 全羟基己基， 等。
     这里所用的 ( 低级烷氧基 ) 羰基低级烷基基团包括具有 1 至 3( 优选 1 至 2) 个上 述 ( 低级烷氧基 ) 羰基基团 ( 优选包含 1 至 6 个碳的直或支链烷氧基羰基基团 ) 的上述低 级烷基基团 ( 优选包含 1 至 6 个碳的直或支链烷基基团 )。更具体地， 它包括， 例如， 甲氧基 羰基甲基， 乙氧基羰基甲基， 1- 甲氧基羰基乙基， 2- 甲氧基羰基乙基， 2- 乙氧基羰基乙基， 1- 乙氧基羰基乙基， 2- 叔丁氧基羰基乙基， 3- 甲氧基羰基丙基， 3- 乙氧基羰基丙基， 4- 乙氧 基羰基丁基， 5- 异丙氧基羰基戊基， 6-n- 丙氧基羰基己基， 1， 1- 二甲基 -2-n- 丁氧基羰基乙 基， 1- 甲基 -1- 甲氧基羰基乙基， 2- 甲基 -1- 甲氧基羰基丙基， 2- 甲基 -3- 叔丁氧基羰基丙 基， 3- 甲基 -1- 甲氧基羰基丁基， 二乙氧基羰基甲基， 1,2- 二乙氧基羰基乙基， 2-n- 戊基氧 基羰基乙基， n- 己基氧基羰基甲基， 等。
     在上述通式 (1) 中表示的嘧啶衍生物可通过各种方式制备。例如， 该衍生物可根 据以下方案 1 至 4 制备。其中 Ra 是羟基 ( 低级烷基 ) 基团， 卤化 ( 低级烷基 ) 基团或 ( 低级烷氧基 ) 羰基 ( 低 级烷基 ) 基团 ;X 是卤素原子或可如卤素原子进行取代反应的基团。
     在具有结构式 (2) 的化合物中， 被表示为 X 的卤素原子包括氟， 氯， 溴， 和碘原子。
     被表示为 X 的可如卤素原子进行取代反应的基团包括， 例如， 离去基团如 ( 低级烷 烃 ) 磺酰基氧基基团， 和芳基磺酰基氧基基团。
     这里所用的 ( 低级烷烃 ) 磺酰基氧基基团包括包含 1 至 6 个碳的直或支链烷烃磺 酰基氧基基团 ; 更具体地， 它包括， 例如， 甲磺酰基氧基， 乙磺酰基氧基， 异丙磺酰基氧基， n- 丙磺酰基氧基， n- 丁磺酰基氧基， 叔丁磺酰基氧基， n- 戊磺酰基氧基， n- 己磺酰基氧基， 等。
     这里所用的芳基磺酰基氧基基团包括， 例如， 苯基磺酰基氧基基团， 萘基磺酰基氧 基基团， 等苯基可具有 1 至 3 个选自， 例如， 包含 1 至 6 个碳的直或支链烷基基团， 包含 1 至 6 个碳的直或支链烷氧基基团， 硝基基团， 和卤素原子的取代基。 芳基磺酰基氧基基团的具体 例子包括， 例如， 苯基磺酰基氧基， 4- 甲基苯基磺酰基氧基， 2- 甲基苯基磺酰基氧基， 4- 硝 基苯基磺酰基氧基， 4- 甲氧基苯基磺酰基氧基， 2- 硝基苯基磺酰基氧基， 3- 氯苯基磺酰基 氧基， 等萘基磺酰基氧基基团的具体例子包括， 例如， α- 萘基磺酰基氧基， β- 萘基磺酰基 氧基， 等。
     具有结构式 (1b) 的化合物可通过化合物 (1a) 和化合物 (2) 反应而制备。
     该反应一般在对反应没有不利影响的常规溶剂， 例如， 水 ; 醇溶剂如甲醇， 乙醇，异丙醇， n- 丁醇， 三氟乙醇， 和乙二醇 ; 酮溶剂如丙酮和甲乙酮 ; 醚溶剂如四氢呋喃， 二 烷， 二乙基醚， 和二甘醇二甲醚 ; 酯溶剂如乙酸甲酯和乙酸乙酯 ; 质子惰性极性溶剂如乙 腈， N,N- 二甲基甲酰胺， 和二甲基亚砜 ; 卤化烃溶剂如二氯甲烷和氯化乙烯 ; 或其他有机 溶剂中进行。另外， 反应可在上述常规溶剂的混合物中进行。
     上述反应一般在碱性化合物的存在下进行。碱性化合物包括一般无机碱和有机 碱。
     这里所用的无机碱包括， 例如， 碱金属如钠和钾 ; 碱金属碳酸氢盐如碳酸氢锂， 碳 酸氢钠和钾碳酸氢盐 ; 碱金属氢氧化物如氢氧化锂， 氢氧化钠， 氢氧化钾和氢氧化铯 ; 碱金 属碳酸盐如碳酸锂， 碳酸钠， 碳酸钾和碳酸铯 ; 碱金属 ( 低级醇化物 ) 如甲醇钠和乙醇钠 ; 碱金属氢化物化合物如氢化钠和氢化钠 ; 等。
     这里所用的有机碱包括， 例如， 三烷胺如三甲胺， 三乙胺和 N- 乙基 - 二异丙胺 ; 吡 啶 ; 喹啉 ; 哌啶 ; 咪唑 ; 甲基吡啶 ; 二甲基氨基吡啶 ; 二甲基苯胺 ;N- 甲基吗啉 ;1,5- 二 氮杂双环 [4.3.0] 壬 -5- 基 (DBN);1,4- 二氮杂双环 [2.2.2] 辛烷 (DABCO);1,8- 二氮杂双 环 [5.4.0] 十一 -7- 基 (DBU); 等。 碱性化合物可作为单个成分或以两种或多种成分的任何组合使用。
     这里所用的碱性化合物的量一般是化合物 (1a) 的摩尔数的 0.5 至 10 倍， 优选化 合物 (1a) 的摩尔数的 0.5 至 6 倍。碱性化合物在其为液体时也可作为溶剂使用。
     如果合适， 以上反应介质可包括作为反应促进剂的碱金属碘化物如碘化钾和碘化 钠。
     用于以上方案 1 的化合物 (1a) 和化合物 (2) 之间的比率是至少 1 摩尔， 优选 1 至 5 摩尔化合物 (2)/1 摩尔化合物 (1a)。
     反应温度不受限制， 和反应一般可在冷却下， 在室温下或在加热下进行。优选， 以 上反应可在室温左右进行 1 至 30 小时。
     其中 R 定义如上。
     化合物 (1) 可通过将化合物 (3) 或其羧基基团被活化的其反应性衍生物， 和化合 物 (4) 或其亚氨基基团被活化的其反应性衍生物反应而制备。
     化合物 (3) 中的羧酸基团的优选的反应性形式包括酰卤， 酸酐， 活性酰胺， 活性 酯， 等羧酸基团的反应性形式的优选例子包括酰氯 ; 叠氮酸 ; 混合酸酐取代的磷酸 ( 如二 烷基磷酸， 苯基磷酸， 二苯基磷酸， 二苄基磷酸， 和卤化磷酸 )， 二烷基亚磷酸， 硫酸， 硫代硫 酸， 硫酸， 磺酸 ( 如甲烷磺酸 )， 脂族酸 ( 如乙酸， 丙酸， 丁酸， 异丁酸， 新戊酸， 戊酸， 异戊酸， 2- 乙基丁酸， 三氯乙酸 ) 或芳族酸 ( 如苯甲酸 ); 对称酸酐 ; 咪唑的活性酰胺， 4- 取代的咪 唑， 二甲基吡唑， 三唑或四唑 ; 活性酯 ( 如氰基甲基酯， 甲氧基甲基酯， 二甲基亚氨基甲基 酯， 乙烯基酯， 炔丙基酯， p- 硝基苯基酯， 2,4- 二硝基苯基酯， 三氯苯基酯， 五氯苯基酯， 甲 磺酰基苯基酯， 等 ) 或与 N- 羟基化合物 ( 如 N,N- 二甲基羟胺， 1- 羟基 -2-(1H)- 吡啶酮， N- 羟基琥珀酰亚胺， N- 羟基邻苯二甲酰亚胺， 1- 羟基 -1H- 苯并三唑， 等 ) 的酯。根据所要 使用的化合物 (3) 的种类， 可以从这些反应性衍生物中选择任何合适的化合物。
     如果化合物 (3) 作为游离酸或其盐用于以上反应， 那么该反应可优选在缩合剂 的存在下进行。缩合剂包括常规和熟知的那些， 例如， N,N'- 二氯己基碳二亚胺 ;N- 环己 基 -N'- 吗啉代乙基碳二亚胺 ;N- 环己基 -N'-(4- 二乙基氨基环己基 ) 碳二亚胺 ;N， N'- 二 乙基碳二亚胺 ;N,N'- 二异丙基碳二亚胺 ;N- 乙基 -N'-(3- 二甲基氨基丙基 ) 碳二亚胺或其盐酸盐 ;N， N'- 羰基二 (2- 甲基咪唑 ); 五亚甲基烯酮 -N- 环己基亚胺 ; 二苯基烯酮 -N- 环己 基亚胺 ; 乙氧基乙炔， 1- 烷氧基 -1- 氯亚乙基 ; 亚磷酸三烷基酯 ; 多磷酸乙基酯 ; 多磷酸异 丙基酯 ; 磷酰氯 ( 磺酰氯 ); 三氯化磷 ; 二苯基磺酰基叠氮化物 ; 亚硫酰氯 ; 草酰氯 ;( 低 级烷基 ) 卤甲酸酯 ( 如氯甲酸乙酯， 甲酸异丙基酯， 等 ); 三苯基膦 ;2- 乙基 -7- 羟基苯并异 唑 盐 ;2- 乙基 -5-(m- 磺基苯基 ) 异 唑 氢氧化物内盐 ; 苯并三唑 -1- 基氧基 - 三 -( 二甲基氨基 ) 磷六氟磷酸盐 ;1-(p- 氯苯磺酰基氧基 )-6- 氯 -1H- 苯并三唑 ; 通过将 N,N- 二甲基甲酰胺与亚硫酰氯， 光气， 氯甲酸三氯甲酯， 磷酰氯， 等反应而制备 的 Vilsmeier 试剂。更优选， 反应在上述缩合剂， 以及相结合使用的活性 - 酯化反应剂如 N- 羟基琥珀酰亚胺， N- 羟基邻苯二甲酰亚胺， 和 1- 羟基 -1H- 苯并三唑的存在下。
     化合物 (4) 中的亚氨基基团的优选的反应性衍生物包括通过将化合物 (4) 和羰基 化合物如醛和酮反应而生成的 Schiff 碱 - 型亚氨基基团或其烯胺 - 型互变异构体 ; 通过 将化合物 (4) 和甲硅烷基化合物如二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 乙酰胺， 单 ( 三甲基甲硅烷基 ) 乙酰胺， 和二 ( 三甲基甲硅烷基 ) 脲反应而生成的甲硅烷基衍生物 ; 通过将化合物 (4)， 和 三氯化磷， 光气， 等反应而生成的衍生物。
     反应一般在对反应没有不利影响的常规溶剂， 例如， 水 ; 醇溶剂如甲醇， 乙醇， 异丙醇， n- 丁醇， 三氟乙醇， 和乙二醇 ; 酮溶剂如丙酮和甲乙酮 ; 醚溶剂如四氢呋喃， 二 烷， 二乙基醚， 二异丙基醚， 和二甘醇二甲醚 ; 酯溶剂如乙酸甲酯和乙酸乙酯 ; 质子惰性极 性溶剂如乙腈， N， N- 二甲基甲酰胺， 和二甲基亚砜 ; 烃溶剂如 n- 戊烷， n- 己烷， n- 庚烷， 和 环己烷 ; 卤化烃溶剂如二氯甲烷和氯化乙烯 ; 或其他有机溶剂中进行。另外， 反应可在上 述常规溶剂的混合物中进行。
     以上反应可在碱的存在下进行。碱包括各种已知的无机或有机碱 . 这里所用的无 机碱包括， 例如， 碱金属如钠和钾 ; 碱金属碳酸氢盐如碳酸氢锂， 碳酸氢钠和钾碳酸氢盐 ; 碱金属氢氧化物如氢氧化锂， 氢氧化钠， 氢氧化钾和氢氧化铯 ; 碱金属碳酸盐如碳酸锂， 碳 酸钠， 碳酸钾和碳酸铯 ; 碱金属低级醇化物如甲醇钠和乙醇钠 ; 碱金属氢化物化合物如氢 化钠和氢化钠 ; 等。这里所用的有机碱包括， 例如， 三烷胺如三甲胺， 三乙胺和 N- 乙基二异 丙胺 ; 吡啶 ; 喹啉 ; 哌啶 ; 咪唑 ; 甲基吡啶 ; 二甲基氨基吡啶 ; 二甲基苯胺 ;N- 甲基吗啉 ;1， 5- 二氮杂双环 [4.3.0] 壬 -5- 基 (DBN);1,4- 二氮杂双环 [2.2.2] 辛烷 (DABCO);1,8- 二 氮杂双环 [5.4.0] 十一 -7- 基 (DBU); 等。而且， 碱在其为液体时也可用作溶剂。碱可作为 单个成分或以两种或多种成分的任何组合使用。这里所用的碱性化合物的量一般是 0.1 至 10 摩尔 /1 摩尔化合物 (3)， 优选 0.1 至 3 摩尔 /1 摩尔化合物 (3)。
     用于以上方案 2 的化合物 (3) 和化合物 (4) 之间的比率是至少 1 摩尔， 优选 1 至 5 摩尔化合物 (3)/1 摩尔化合物 (4)。
     反应温度不受限制， 且反应一般可在冷却下， 在室温下或在加热下进行。优选， 以 上反应可在室温至 100 摄氏度下进行 30 分钟至 30 小时， 优选 30 分钟至 5 小时。
     在以上反应中用作起始原料的化合物 (3) 是已知的化合物， 且该化合物的工艺描 述如下 ( 方案 4)。其中 W 是 N- 保护基团。
     化合物 (6) 可通过化合物 (3) 和化合物 (5) 按照类似于方案 2 的方式反应而制备。 进一步， 化合物 (1a) 可通过消去 N- 保护基团而制备。
     本文用作 W 的 N- 保护基团包括， 例如， ( 低级烷氧基 ) 羰基基团， 低级烷酰基基团，芳基 - 取代的 ( 低级烷基 ) 基团， 等。
     这里所用的 ( 低级烷氧基 ) 羰基基团包括包含 1 至 6 个碳的直或支链烷氧基羰基 基团， 例如， 甲氧基羰基， 乙氧基羰基， 丙氧基羰基， 丁氧基羰基， 叔丁氧基羰基， 戊基氧基羰 基， 己基氧基羰基， 等。
     这里所用的低级烷酰基基团包括包含 1 至 6 个碳的直或支链烷酰基基团， 例如， 甲 酰基， 乙酰基， 丙酰基， 丁酰基， 异丁酰基， 戊酰基， 叔丁基羰基， 己酰基， 等。
     这里所用的芳基 - 取代的 ( 低级烷基 ) 基团包括， 例如， 苄基， 2- 苯基乙基， 1- 苯基 乙基， 3- 苯基丙基， 4- 苯基丁基， 5- 苯基戊基， 6- 苯基己基， 二苯基甲基， 三苯甲基， 等， 和用 1 至 3 个苯基基团取代的包含 1 至 6 个碳的直或支链烷基基团。苯基基团上的取代基包括， 例如， 可任选地用 1 至 3 个选自卤素原子和羟基基团的基团取代的包含 1 至 6 个碳的直或支 链烷基基团 ( 如甲基， 乙基， 丙基， n- 丁基， 仲 - 丁基， 叔丁基， n- 戊基， n- 己基， 羟基甲基， 2- 羟基乙基， 1- 羟基乙基， 3- 羟基丙基， 2,3- 二羟基丙基， 4- 羟基丁基， 1,1- 二甲基 -2- 羟 基乙基， 5,5,4- 三羟基戊基， 5- 羟基戊基， 6- 羟基己基， 1- 羟基异丙基， 2- 甲基 -3- 羟基丙 基， 三氟甲基， 三氯甲基， 氯甲基， 溴甲基， 氟甲基， 碘甲基， 二氟甲基， 二溴甲基， 2- 氯乙基， 2,2,2- 三氟乙基， 2,2,2- 三氯乙基， 3- 氯丙基， 2,3- 二氯丙基， 4,4,4- 三氯丁基， 4- 氟丁 基， 5- 氯戊基， 3- 氯 -2- 甲基丙基， 5- 溴己基， 5,6- 二氯己基， 3- 羟基 -2- 氯丙基， 等 ); 可 任选地用 1 至 3 选自卤素原子和羟基基团的基团取代的包含 1 至 6 个碳的直或支链烷氧基 基团 ( 如甲氧基， 乙氧基， 丙氧基， n- 丁氧基， 仲 - 丁氧基， 叔丁氧基， n- 戊基氧基， n- 己基氧 基， 羟基甲氧基， 2- 羟基乙氧基， 1- 羟基乙氧基， 3- 羟基丙氧基， 2,3- 二羟基丙氧基， 4- 羟基 丁氧基， 1,1- 二甲基 -2- 羟基乙氧基， 5,5,4- 三羟基戊基氧基， 5- 羟基戊基氧基， 6- 羟基己 基氧基， 1- 羟基异丙氧基， 2- 甲基 -3- 羟基丙氧基， 三氟甲氧基， 三氯甲氧基， 氯甲氧基， 溴 甲氧基， 氟甲氧基， 碘甲氧基， 二氟甲氧基， 二溴甲氧基， 2- 氯乙氧基， 2,2,2- 三氟乙氧基， 2,2,2- 三氯乙氧基， 3- 氯丙氧基， 2,3- 二氯丙氧基， 4,4,4- 三氯丁氧基， 4- 氟丁氧基， 5- 氯 戊基氧基， 3- 氯 -2- 甲基丙氧基， 5- 溴己基氧基， 5,6- 二氯己基氧基， 3- 羟基 -2- 氯 丙氧 基， 等 ); 和卤素原子 ( 如氟， 溴， 氯， 碘原子 )。如果在苯基基团上有 2 或多个取代基， 那么 这些取代基可以是相同或不同的。
     N- 保护基团 W 的消去可通过常规方式如水解和氢化而进行。 反应一般在对反应没 有不利影响的常规溶剂， 例如， 水 ; 醇溶剂如甲醇， 乙醇， 异丙醇， n- 丁醇， 三氟乙醇， 和乙二 醇 ; 酮溶剂如丙酮和甲乙酮 ; 醚溶剂如四氢呋喃， 二 烷， 二乙基醚， 二甲氧基乙烷， 和二甘醇二甲醚 ; 酯溶剂如乙酸甲酯和乙酸乙酯 ; 质子惰性极性溶剂如乙腈， N,N- 二甲基甲酰 胺， 二甲基亚砜和 N- 甲基吡咯烷酮 ; 卤化烃溶剂如二氯甲烷和氯化乙烯 ; 或其他有机溶剂 中进行。另外， 反应可在上述常规溶剂的混合物中进行。
     (i) 水解 : 水解优选在碱或酸 ( 包括 Lewis 酸 ) 的存在下进行。
     这里所用的碱包括常规无机碱和有机碱 . 优选的无机碱包括， 例如， 碱金属如钠 和钾 ; 碱土金属如镁和钙 ; 和碱金属或碱土金属的氢氧化物， 碳酸盐或碳酸氢盐。 优选的有 机碱包括， 例如， 三烷胺如三甲胺和三乙胺 ; 甲基吡啶 ;1,5- 二氮杂双环 [4,3,0] 壬 -5- 基 ; 等。这里所用的酸包括常规有机酸和无机酸。优选的有机酸包括， 例如， 脂族酸如甲 酸， 乙酸和丙酸 ; 和三卤代乙酸如三氯乙酸和三氟乙酸。优选的无机酸包括， 例如， 氢氯酸， 氢溴酸， 硫酸， 氯化氢， 溴化氢， 等这里所用的 Lewis 酸包括， 例如， 醚合三氟化硼， 三溴化 硼， 氯化铝， 氯化高铁， 等。
     如果三卤代乙酸或 Lewis 酸用作酸， 反应优选在阳离子清除剂如茴香醚和苯酚的 存在下进行。
     这里所用的碱或酸的量不受限制， 只要该量足够用于水解。
     反应温度一般是 0 至 120 摄氏度， 优选室温至 100 摄氏度， 和更优选室温至 80 摄 氏度。反应时间一般是 30 分钟至 24 小时， 优选 30 分钟至 12 小时， 和更优选 1 至 8 小时。
     (ii) 氢化 : 这里所用的氢化可利用常规 / 已知的氢化而进行。常规氢化包括， 例如， 化学还原， 催 化还原， 等。
     用于化学还原的优选的还原剂包括氢化物如碘化氢， 硫化氢， 锂铝氢化物， 硼氢化 钠和氰基硼氢化钠 ; 或金属如锡， 锌和铁 ; 或金属化合物 ( 如氯化铬， 乙酸铬， 等 ) 和有机 或无机酸 ( 如甲酸， 乙酸， 丙酸， 三氟乙酸， p- 甲苯磺酸， 氢氯酸， 氢溴酸， 等 ) 的组合。
     用于催化还原的优选的催化剂包括铂催化剂如铂板， 海绵状铂， 铂黑， 胶体铂， 二 氧化铂， 和铂丝 ; 钯催化剂如海绵状钯， 钯黑， 氧化钯， 钯碳， 钯 / 硫酸钡， 和钯 / 碳酸钡 ; 镍 催化剂如还原镍， 氧化镍， 和 Raney 镍 ; 钴催化剂如还原钴， 和 Raney 钴 ; 铁催化剂如还原 铁 ; 等。
     用于化学还原的酸在其为液体时也可用作溶剂。
     用于催化还原的还原剂或催化剂的量可以是， 但不限于， 一般用量。
     反应温度一般是 0 至 120 摄氏度， 优选室温至 100 摄氏度， 和更优选室温至 80 摄 氏度。反应时间一般是 30 分钟至 24 小时， 优选 30 分钟至 10 小时， 和更优选 30 分钟至 4 小时。化合物 (3) 可通过化合物 (5) 和化合物 (6) 反应而制备。反应根据参考文件 (El-Sharabsy， S.A.;Abdel Gawad， S.M.;Hussain， S.M.;J.Prakt.Chem.， 1989， 331(2)， 207) 或与其类似的方法进行。
     反应一般在对反应没有不利影响的常规溶剂， 例如， 水 ; 醇溶剂如甲醇， 乙醇， 异
     丙醇， n- 丁醇， 三氟乙醇， 和乙二醇 ; 酮溶剂如丙酮和甲乙酮 ; 醚溶剂如四氢呋喃， 二 烷， 二乙基醚， 和二甘醇二甲醚 ; 酯溶剂如乙酸甲酯和乙酸乙酯 ; 质子惰性极性溶剂如乙 腈， N、 N- 二甲基甲酰胺， 和二甲基亚砜 ; 卤化烃溶剂如二氯甲烷和氯化乙烯 ; 或其他有机 溶剂中进行。另外， 反应可在上述常规溶剂的混合物中进行。
     以上反应可在没有催化化合物的情况下或在酸催化剂的存在下进行。一般， 反应 优选在碱性化合物的存在下进行。碱性化合物包括一般无机和有机碱。
     这里所用的无机碱包括， 例如， 碱金属如钠和钾 ; 碱金属碳酸氢盐如碳酸氢锂， 碳 酸氢钠和钾碳酸氢盐 ; 碱金属氢氧化物如氢氧化锂， 氢氧化钠， 氢氧化钾和氢氧化铯 ; 碱金 属碳酸盐如碳酸锂， 碳酸钠， 碳酸钾和碳酸铯 ; 碱金属 ( 低级醇化物 ) 如甲醇钠和乙醇钠 ; 碱金属氢化物化合物如氢化钠和氢化钠 ; 等。
     这里所用的有机碱包括， 例如， 三烷胺如三甲胺， 三乙胺和 N- 乙基二异丙胺 ; 吡 啶 ; 喹啉 ; 哌啶 ; 咪唑 ; 甲基吡啶 ; 二甲基氨基吡啶 ; 二甲基 苯胺 ;N- 甲基吗啉 ;DBN， DABCO， DBU; 等。
     碱性化合物可作为单个成分或以两种或多种成分的任何组合使用。
     这里所用的碱性化合物的量一般是催化量至化合物 (5) 摩尔数的 10 倍， 优选当量 摩尔至化合物 (5) 摩尔数的 3.5 倍。碱性化合物在其为液体时也可用作溶剂。
     化合物 (6) 和化合物 (5) 之间的比率是至少 1 摩尔 /1 摩尔化合物 (6)， 优选 1 至5 摩尔化合物 (5)/1 摩尔化合物 (6)。
     反应温度不受限制， 和反应可一般在冷却下， 在室温下或在加热下进行。优选， 以 上反应可在回流下进行 1 至 30 小时。
     如果在反应中产生作为中间体的二氢形式化合物 (7)， 化合物 (7) 可被进一步氧 化， 得到化合物 (8)。
     化合物 (7) 的氧化可通过该技术领域常用的方法进行。优选的氧化剂包括， 例如， 2， 3- 二氯 -5， 6- 二氰基 -p- 苯醌 (DDQ)， N- 溴琥珀酰亚胺 (NBS)， 等。
     氧化反应一般纯净地或在对反应没有不利影响的常规溶剂， 例如， 醇溶剂如甲醇， 乙醇， 异丙醇， n- 丁醇， 三氟乙醇， 和乙二醇 ; 酮溶剂如丙酮和甲乙酮 ; 醚溶剂如四氢呋喃， 二 烷， 二乙基醚， 和二甘醇二甲醚 ; 酯溶剂如乙酸甲酯和乙酸乙酯 ; 质子惰性极性溶剂如乙腈， N， N- 二甲基甲酰胺， 和二甲基亚砜 ; 卤化烃溶剂如二氯甲烷和氯化乙烯 ; 或其他 有机溶剂中进行。另外， 反应可在上述常规溶剂的混合物中进行。
     这里所用的氧化剂的量一般是催化量至超过化合物 (7) 的摩尔数。
     反应温度不受限制， 和反应可一般在冷却下， 在室温下或在加热下进行。优选， 以 上反应可在回流下进行 0.5 至 75 小时。 以上方案 4 中的化合物 (7) 包括关于环双键位的异构体。
     用作起始原料的化合物 (4) 是可得已知的化合物。
     用于以上方案的起始原料可以是其合适的盐， 和每一反应中的所需化合物也可以 是合适的盐。
     以上每一方案中所示每一工艺的所需化合物和本发明化合物可根据常规方法分 离或纯化， 例如， 通过冷却， 过滤， 浓缩， 萃取， 等分离粗反应产物并随后通过色谱， 重结晶， 等纯化粗品。
     化合物 (1) 的优选的盐是药物可接受盐， 和包括， 例如， 与无机碱的盐如金属盐 ( 如碱金属盐如钠盐和钾盐， 碱土金属盐如钙盐和镁盐 )， 铵 盐， 碱金属碳酸盐 ( 如碳酸锂， 碳酸钾， 碳酸钠， 碳酸铯， 等 )， 碱金属碳酸氢盐 ( 如碳酸氢锂， 碳酸氢钠， 钾碳酸氢盐， 等 )， 和碱金属氢氧化物 ( 如氢氧化锂， 氢氧化钠， 氢氧化钾， 氢氧化 铯， 等 ); 与有机碱的盐如三 ( 低级 ) 烷胺 ( 如三甲胺， 三乙胺， N- 乙基 - 二异丙胺， 等 )， 吡啶， 喹啉， 哌啶， 咪唑， 甲基吡啶， 二甲基氨基吡啶， 二甲基苯胺， N-( 低级 ) 烷基 - 吗啉 ( 如 N- 甲 基吗啉， 等 )， DBN， DBU， 和 DABCO; 无机酸的盐如盐酸盐， 氢溴化物， 氢碘化物， 硫酸盐， 硝酸盐， 磷酸盐 ; 和 有机酸的盐如甲酸盐， 乙酸盐， 丙酸盐， 草酸盐， 丙二酸盐， 琥珀酸盐， 富马酸盐， 马来 酸盐， 乳酸盐， 苹果酸盐， 柠檬酸盐， 酒石酸盐， 碳酸盐， 苦味酸盐， 甲磺酸盐， 乙磺酸盐， 和 p- 甲苯磺酸盐， 谷氨酸盐。
     用于以上方案的起始原料如以上化合物 (1) 是其盐， 和每一反应中的所需化合物 也可以是合适的盐。
     另外， 起始原料和所需化合物的溶剂合物 ( 如水合物， 醇合物， 和类似物 ) 被包括 在每一通式中。优选的溶剂合物包括水合物。
     具有通式 (1) 的本化合物包括异构体如几何异构体， 立体异构体， 和光学异构体。
     本发明还包括具有结构式 (1) 的化合物， 其中该化合物中所包括的一个或多个原 子被替换为一个或多个其同位素。 可被引入本化合物中的同位素的例子包括， 例如， 氢， 碳， 2 3 13 14 15 17 18 18 36 氮， 氧， 硫， 氟， 和氯的同位素， 和更具体地， H， H， C， C， N， O， O， F， Cl， 等包含上述同 位素和 / 或其他原子的同位素的特定同位素 - 标记化合物， 例如， 包括放射性同位素如 3H 和 14 C 的化合物可用于该化合物和 / 或物质的地形 （topographical） 分析。氚标记 ( 即 3H) 或 C-14 标记 ( 即 14C) 同位素化合物从其容易制备和其可检测性方面是尤其优选的。另外， 具 2 有较重同位素如氘 ( 即 H) 的化合物还预期带来某些治疗优点如改善代谢稳定性 ( 如增加 体内半衰期 ) 和减少剂量。包括同位素原子的本化合物一般可利用上述方案和 / 或以下实 施例， 使用任何可得同位素标记试剂而制备。
     本发明化合物及其盐具有腺苷 A2a 受体激动剂活性和因此它们可作为腺苷 A2a 受 体激动剂用于哺乳动物， 包括人类。因此， 本发明还提供作为药物的药物组合物如腺苷 A2a 受体激动剂。
     以下， 药物组合物可选地被称作 " 本药物组合物 "。
     本药物组合物可被制成有效量的至少一种选自本发明化合物和其盐的化合物， 和 一些药物可接受载体的常规的药物配方包含。 用于本发明药物组合物的药物可接受载体可 以是固体如赋形剂或液体如稀释剂。这些载体的例子包括， 例如， 乳糖， 硬脂酸镁， 淀粉， 滑 石， 明胶， 琼脂， 果胶， 阿拉伯胶， 橄榄油， 芝麻油， 黄油， 乙二醇， 纯化水， 等。 另外， 本药物组合物可被制成适用于给药的剂量单元的配方。例子包括适用于口 服给药的固体和液体配方如片剂， 丸剂， 胶囊， 粒剂， 粉末和液体以及用于不经肠道给药的 配方如注射剂 ( 静脉内注射剂， 肌内注射剂， 等 )， 滴眼剂， 眼睛软膏， 栓剂， 经皮吸收剂和类 似物。尤其是， 优选的药物配方是滴眼剂， 因为本发明药物组合物基于其腺苷 A2a 受体激动 剂活性而被认为可用作眼内减压剂， 一种用于治疗青光眼和类似疾病的药物。
     本药物组合物可被制成含水液体， 和进一步用作眼睛药物组合物。 例如， 这些含水 液体配方可制备如下。
     向本化合物 ( 包括其盐， 以下相同 ) 可选地加入一种或多种选自药物可接受的缓 冲剂， 等渗剂， 防腐剂， 加溶剂， 和 pH 调节剂的根据需要的添加剂， 和所需含水配方通过常 规工艺制备。
     用于含水液体制剂的缓冲剂包括， 例如， 无机酸如硼酸和磷酸 ; 有机酸如氨基酸 和丁二酸 ; 和药物可接受盐。优选的缓冲剂是丁二酸， 磷酸和磷酸二氢钠。缓冲剂可作为 单个成分或两种或多种成分的任何组合使用。
     其中丁二酸或其药物盐用作缓冲剂的制剂可预防活性成分在长期储存过程中沉 淀， 因为活性成分与丁二酸的盐具有高溶解度。
     缓冲剂在含水液体制剂中的浓度优选为防止 pH 变化的最低浓度， 例如， 不超过 2％ (w/v)， 优选不超过 0.6％ (w/v)， 和更优选 0.2％ (w/v)。
     用于含水液体制剂的 pH 调节剂包括， 例如， 氢氯酸， 硫酸， 乳酸， 乙酸， 氢氧化钾， 氢氧化钠， 氢氧化钙， 氢氧化镁， 单乙醇胺， 三乙醇胺， 二异丙醇胺， 三异丙醇胺， 和其药物可 接受盐。优选的 pH 调节剂包括氢氯酸和氢氧化钠。pH 调节剂可作为单个成分或以两种或 多种成分的任何组合使用。
     用于含水液体制剂的等渗剂用于使制剂对泪水等渗。 这里所用的等渗剂是用于滴 眼剂的常规试剂， 和包括氯化钠， 氯化钾， 硼酸， 钠硼酸盐， 甘露醇， 甘油， 丙二醇， 聚乙二醇， 麦芽糖， 蔗糖， 山梨醇， 葡萄糖， 等， 优选甘油， 葡萄糖， 甘露醇， 丙二醇和山梨醇。更优选， 它 是甘油。等渗剂可作为单个成分或以两种或多种成分的任何组合使用 在其中甘油用作等渗剂的制剂可预防活性成分或其相关物质在长期储存过程中沉积， 因为甘油对活性成分的溶解度没有不利影响。包括等渗剂的含水液体制剂的渗透压力是， 例如， 170 至 460 mOsm/kg， 优选的 229 至 372 mOsm/kg， 和更优选的 256 至 316 mOsm/kg。
     这里所用的防腐剂包括， 例如， 季铵盐如苯扎铵， 苯索铵， 和苯度铵 ; 阳离子化合 物如氯己定 ; 对 - 氧基苯甲酸酯如对 - 氧基苯甲酸甲基酯， 和对 - 氧基苯甲酸丙基酯 ; 和 醇化合物如三氯叔丁醇和苄醇。优选的防腐剂包括苯扎氯铵和苯度溴铵， 和更优选盐酸苯 扎铵和苯度溴铵， 其中烷基链由仅由 12 个碳组成。
     本药物组合物可根据需要包含加溶剂 . 这里所用的加溶剂包括， 例如， 聚合物如 聚乙烯基吡咯烷酮， 聚乙二醇 ( 聚乙二醇 )， 聚乙烯醇， 和羟基丙基甲基纤维素 ; 表面活性剂 如聚山梨酯， 聚氧基亚乙基氢化蓖麻油， 和聚氧基亚乙基聚氧基亚丙基 ; 多元醇如丙二醇 ; 有机酸如苯甲酸和山梨酸 ; 氨基酸如门冬氨酸， 组氨酸， 甘氨酸， 和赖氨酸 ; 和黄嘌呤衍生 物如咖啡因。优选的加溶剂包括聚乙烯基吡咯烷酮， 聚乙二醇， 聚乙烯醇， 苯甲酸， 山梨酸， 和藻酸 ; 尤其聚乙烯基吡咯烷酮和聚乙二醇。加溶剂可作为单个成分或以两种或多种成分 的任何组合使用 包括本药物组合物的含水液体制剂的 pH 是约 4 至 9， 优选约 5 至 8， 尤其约 6 至 7， 和更 优选 6.3 至 6.9。
     用于口服给药的本发明固体配方如片剂， 粉末和粒剂可通过将本发明化合物与至 少一种惰性载体如乳糖， 甘露醇， 葡萄糖， 羟基丙基纤维素， 微晶纤维素， 淀粉， 聚乙烯基吡 咯烷酮， 偏硅酸和铝酸镁混合， 和根据常规方法配制该混合物而制备。 该制剂可进一步使用 其他的合适的添加剂， 例如， 润滑剂如硬脂酸镁 ; 崩解剂如纤维素羟乙酸钙 ; 稳定剂如乳 糖 ; 增溶剂如谷氨酸和门冬氨酸 ; 和类似物配制。它可进一步用增甜剂， 矫味剂， 香料， 防 腐剂和类似物配制。 片剂和丸剂可根据需要使用蔗糖， 明胶， 羟基丙基纤维素和邻苯二甲酸 羟基丙基甲基纤维素涂有包糖膜或胃内 - 或肠涂膜。
     用于口服给药的液体药物如乳液， 溶液， 悬浮液， 糖浆和酏剂可通过将本发明化合 物溶解或分散在一般使用的惰性稀释剂如纯化水和乙醇中而制备。 液体药物也可包含辅助 剂如润湿剂和悬浮剂， 增甜剂， 矫味剂， 香料， 防腐剂和类似物。
     用于不经肠道给药的注射剂包括无菌含水或非水溶液， 悬浮液， 乳液和类似物， 和 含水注射剂可根据常规方法， 例如， 使用注射用水和盐水作为稀释剂而制备。非水注射剂 可根据常规方法， 例如， 使用稀释剂或载体如丙二醇， 聚乙二醇或植物油如橄榄油 ; 醇如乙 醇 ; 聚山梨酯 80 制备。注射剂可进一步包含辅助剂如防腐剂， 润湿剂， 乳化剂， 分散剂， 稳 定剂 ( 如， 乳糖 ) 和增溶剂 ( 如， 谷氨酸和门冬氨酸 )。注射剂根据常规方法杀菌， 例如， 使 用过滤器过滤用于去除细菌， 加入抗微生物剂或辐射如 γ- 射线辐射。另外， 注射剂也可被 制成即制配方， 在使用之前将所制的无菌固体药物用注射用无菌水或无菌溶剂溶解。
     每一配方中本发明药物组合物的给药方案在每一情况下根据该药物组合物所给 药的患者 ( 给药主体 ) 的状况， 年龄， 性别等确定。一般来说， 包含本发明药物组合物的滴眼剂的剂量可被确定使得包含浓度 0.0001-10 ％ (w/v)， 优选 0.001-1.0 ％ (w/v)， 更优选 0.01-0.3％ (w/v) 的活性化合物的滴眼剂可一天滴或擦拭一至数次。每次使用的滴眼剂的 量一般是成人约 0.001-1 ml。
     如果本发明药物组合物是口服药物或注射剂， 该剂量可确定使得本发明化合物可 向成人给药 0.001-1000 mg/ 天的量。每日剂量可一天一次给药， 但优选分成多次。以上剂 量仅是准则， 因此也可增加或减少。如上所述， 希望根据各种情况确定每次所用的剂量。因 此， 根据这些情况， 减少的剂量仍可表现出足够的作用。
     ( 本发明的效果 ) 本药物组合物和化合物可具有作为腺苷 A2a 受体激动剂的各种活性如眼低血压， 增加 视神经乳头的血流量， 保护视神经， 血管舒张， 冠状扩张， 血压降低， 血小板凝聚抑制， 抗血 栓形成效果， 消炎， 支气管扩张， 和抑制免抑反应。
     因此本药物组合物和化合物可适用于治疗眼病如青光眼 ( 如常压青光眼， 高眼压 青光眼， 术后次生青光眼， 等 )， 高眼压， 糖尿病视网膜病， 年龄有关的黄斑变性 (ARDM)， 视 网膜色素变性 (RP)， 和青光眼引起的视网膜疾病 ; 高血压 ; 充血心脏衰竭 ; 冠状疾病 ; 咽 痛 ; 动脉硬化症 ; 缺血性心疾病 ; 脑血管局部缺血 ; 再灌注损伤 ; 血栓形成 ; 癫痫症 ; 鼻 炎 ; 窦炎 ; 肺气肿 ; 慢性阻塞性肺疾病 (COPD); 哮喘 ; 支气管炎 ; 呼吸疾病 ; 呼吸机能不 足综合症 ; 感染性休克 ; 肺纤维化 ; 胃炎 ; 间郁积胃炎 ; 溃疡性结肠炎 ; 克罗恩氏疾病 ; 炎症结肠疾病 ; 伤口愈合 ; 湿疹 ; 皮肤超敏 ; 皮炎 ; 牛皮癣 ; 慢性内风湿关节炎 ; 糖尿 病 ; 多发性硬化 ; 自身免疫疾病 ; 等。
     另外， 本药物组合物和化合物可用作心肌梗死的诊断剂。
     以下， 本发明通过用于制备起始化合物的参考实施例和通过用于制备本发明化合 物和配方的实施例， 以及药理试验的实验来说明， 但不应理解为受此局限。
     以下提及的实施例中的核磁共振 (NMR) 光谱在以下条件下测定。简化符号定义如 下。
     装置 :JNM-AL300(JEOL) 内标准物质 :TMS s: 单峰， d: 双峰， t: 三重峰， q: 四重峰， Quint: 五重峰， sext: 六重峰 附图的简要描述 图 1 显示将实施例 1 的化合物以 0.25， 0.5 和 1 mM 加入兔角膜上皮细胞时的细胞存活 性。
     图 2 显示实施例 1 的化合物对兔睫状动脉的作用。
     图 3 显示实施例 1 的化合物对鼠视网膜神经节细胞的细胞存活的影响。
     实现本发明的最佳方式 参考实施例 1 (E)-3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙烯酸甲基酯 2- 溴吡啶 -6- 甲醇 (50.0 g) 溶解在干 N， N- 二甲基甲酰胺 (250 ml) 中。向该溶液 加入丙烯酸甲酯 (47.9 ml)， 四 (n- 丁基 ) 氯化铵 (73.9 g)， 碳酸氢钠 (47.7 g) 和分子 筛 3A(1/16)(50.0 g)， 和进一步在氩气氛下向其中加入乙酸钯 (II)(2.98 g)。混合物在 80 摄氏度下搅拌 5 小时。在冷却反应混合物之后， 过滤出所得沉淀物， 并向滤液中加入水， 用乙酸乙酯提取。有机层用盐水洗涤， 在无水硫酸镁上干燥和真空浓缩， 得到 50.2 g (E)-3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙烯酸甲基酯。
     棕色粉末。 1
     H-NMR(CDCl3)7.72(1H， t， J=7.5 Hz)， 7.68(1H， d， J=15.6 Hz)， 7.32(1H， d， J=7.5 Hz)， 7.21(1H， d， J=7.5 Hz)， 6.97(1H， d， J=15.6 Hz)， 4.78(2H， d， J=4.2 Hz)， 3.85(1H， t， J=4.2 Hz)， 3.83(3H， s)。
     参考实施例 2 3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 将 (E)-3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙烯酸甲基酯 (50.2 g) 几乎溶解在异丙醇 (502 ml) 中。向该溶液加入 5％钯 -( 活性炭 )(2.51 g)， 并将混合物在 50 摄氏度在常压氢气氛 下搅拌 2.5 小时。在冷却反应混合物之后， 过滤出催化剂并将滤液真空浓缩， 得到 50.0 g 3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯。
     棕色油。 1
     H-NMR(CDCl3)7.58(1H， t， J=7.5 Hz)， 7.09(1H， d， J=7.5 Hz)， 7.03(1H， d， J=7.5 Hz)， 4.71(2H， s)， 4.01(1H， br)， 3.69(3H， s)， 3.15(2H， t， J=7.2 Hz)， 2.81(2H， t， J=7.2 Hz)。
     参考实施例 3 3-(6- 甲磺酰基氧基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (50.0 g) 溶解在乙酸乙酯 (1000 ml)。向该 溶液加入三乙胺 (53.5 ml)， 和混合物在冰温下搅拌 10 分钟。向该混合物中滴加甲磺酰氯 (23.8 ml)10 分钟， 和所得混合物在冰温下搅拌 30 分钟。 向该反应混合物中加入水， 并将混 合物转移至分液漏斗， 和用含水饱和碳酸氢钠和盐水洗涤， 在无水硫酸镁上干燥和真空浓 缩， 得到 63.0 g 3-(6- 甲磺酰基氧基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯。
     棕色油。 1
     H-NMR(CDCl3)7.63(1H， t， J=7.5 Hz)， 7.26(1H， d， J=7.5 Hz)， 7.19(1H， d， J=7.5 Hz)， 5.28(2H， s)， 3.67(3H， s)， 3.12(2H， t， J=7.2 Hz)， 3.07(3H， S)， 2.79(2H， t， J=7.2 Hz)。
     参考实施例 4 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ] 吡啶 -2- 基 } 丙酸甲基酯 4- 乙酰胺 - 苯甲醛 (1000 g) 溶解在乙醇 (16000 ml)。向该混合物中加入丙二腈 (607 g) 和哌啶 (40 g)， 和所得混合物在回流下搅拌 2 小时。反应混合物被冷却至室温并随后搅 拌 30 分钟。将沉淀的晶体收集在过滤器上， 用乙醇洗涤 (2000 ml) 洗涤和干燥， 得到 1049 g N-[4-(2， 2- 二氰基乙烯基 ) 苯基 ] 乙酰胺作为黄色粉末。
     3-(6- 甲磺酰基氧基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (7.0 g) 溶解在甲醇 (75 ml)， 并随后向其中加入硫脲 (1.85 g)。 混合物回流 1.5 小时。 在冷却反应混合物之后， 向其中加 入三乙胺 (10.7 ml)， 并将混合物搅拌片刻。 随后， 向其中加入甲醇 (75 ml)， 以上 N-[4-(2， 2- 二氰基乙烯基 ) 苯基 ] 乙酰胺 (4.33 g)， 并随后加入 N- 溴琥珀酰亚胺 (3.67 g)， 和将混 合物搅拌 1 小时。 将沉淀的晶体收集在过滤器上， 用甲醇 (40 ml) 洗涤， 和干燥， 得到 5.5 g 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ] 吡啶 -2- 基 } 丙酸甲基酯。 白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6)10.23(1H ， s) ， 8.20-7.60(2H ， br) ， 7.83(2H ， d， J=8.7 Hz) ， 7.72(2H， d， J=8.7 Hz)， 7.63(1H， t， J=7.8 Hz)， 7.35(1H， d， J=7.8 Hz)， 7.15(1H， d， J=7.8 Hz)， 4.45(2H， s)， 3.57(3H， s)， 2.96(2H， t， J=7.2 Hz)， 2.74(2H， t， J=7.2 Hz)， 2.09(3H， s)。
     参考实施例 5 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ] 吡啶 -2- 基 } 丙酸 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ] 吡啶 -2- 基 } 丙 酸甲基酯 (5 g) 悬浮在 50％含水乙腈 (150 ml)。 向该悬浮液中加入一水合氢氧化锂 (1.35 g)， 并将混合物在室温下搅拌 1 小时。随后将柠檬酸 (4.11 g) 在水 (20 ml) 中的溶液逐渐 加入反应混合物， 和反应混合物在室温下搅拌另外 2 小时。将沉淀的晶体收集在过滤器上， 用水洗涤 (75 ml) 洗涤， 和干燥， 得到 5 g 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰 基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ] 吡啶 -2- 基 } 丙酸。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.25(1H， s)， 7.84(2H， d， J=8.7 Hz)， 7.72(2H， d， J=8.7 Hz)， 7.64(1H， t， J=7.8 Hz)， 7.36(1H， d， J=7.8 Hz)， 7.16(1H， d， J=7.8 Hz)， 4.47(2H， s)， 2.95(2H， t， J=7.2 Hz)， 2.65(2H， t， J=7.2 Hz)， 2.09(3H， s)。
     参考实施例 6 1- 叔丁氧基羰基 -4-( 哌嗪 -1- 基 ) 甲基哌啶 1- 叔丁氧基羰基 -4- 哌啶基甲醇 (10 g) 溶解在乙酸乙酯 (150 ml) 中。向该溶液加 入三乙胺 (12.8 ml)， 和混合物在冰温下搅拌片刻。向该混合物中慢慢滴加甲磺酰氯 (5.4 ml)， 和反应混合物在冰温下搅拌 30 分钟。向该反应混合物中加入水， 并将混合物转移至 分液漏斗， 用水洗涤 (50 ml) 洗涤， 和用乙酸乙酯 (50 ml， 两次 ) 提取。将合并的有机层在 无水硫酸镁上干燥和真空浓缩。残余物溶解在乙腈 (200 ml) 中， 和将哌嗪 (18 g) 加入溶 液。混合物在回流下搅拌 3 小时。反应混合物被真空浓缩， 随后将沉淀的哌嗪过滤出。向 滤液中加入盐水 (50 ml) 和乙酸乙酯 (50 ml)， 并将混合物搅拌过夜。将混合物转移至分 液漏斗， 并将有机层分离， 用盐水 (50 ml， 两次 ) 洗涤， 和真空浓缩。向残余物中加入水 (50 ml)， 和并将混合物用 1N 氢氯酸在冰温下中和。向其中加入乙酸乙酯 (100 ml) 并将混合物 搅拌片刻。随后将混合物转移至分液漏斗， 并将水层分离。水层用 5N 氢氧化钠在冰温下强 碱化。混合物用乙酸乙酯提取， 在无水硫酸镁上干燥和真空浓缩， 得到 9.96 g 1- 叔丁氧基 羰基 -4-( 哌嗪 -1- 基 ) 甲基哌啶。
     无色油。 1
     H-NMR(CDCl3)4.11-4.05(2H， m)， 2.87(4H， t， J=4.8 Hz)， 2.72-2.64(2H， m)， 2.36(4H， br)， 2.14(2H， d， J=6.9 Hz)， 1.74-1.65(3H， m)， 1.45(9H， m)， 1.13-0.99(2H， m)。
     参考实施例 7 4-((4-(3-(6-((4-(4- 乙酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基 嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 )-1- 叔丁氧基羰基哌啶二盐酸盐 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ] 吡啶 -2- 基 }
     丙酸 (2.16 g) 悬浮在丙酮 (44 ml) 中。向悬浮液中依次加入 1- 羟基 -1H- 苯并三唑 (781 mg)， 1- 乙基 -3-(3- 二甲基氨基丙基 )- 碳二亚胺盐酸盐 (1.1 g)， 和 1- 叔丁氧基羰 基 -4-( 哌嗪 -1- 基 ) 甲基哌啶 (1.5 g)， 和混合物回流 1 小时。丙酮被真空去除， 并随后 向其中加入乙酸乙酯 (30 ml) 和水 (30 ml)， 和将混合物搅拌 30 分钟。将混合物转移至分 液漏斗， 依次用饱和含水碳酸氢钠和盐水洗涤， 在无水硫酸镁上干燥和真空浓缩。将残余 物完全溶解在甲醇 (25 ml) 中， 随后浓氢氯酸 (0.85 ml) 在冰温下慢慢向其中滴加， 并将 混合物在室温下搅拌 1 小时。然后， 向其中加入乙醇 (50 ml)， 并将混合物在 50 摄氏度下 搅拌 1 小时。在冷却反应混合物之后， 将沉淀的晶体收集在过滤器上， 和干燥， 得到 2.95 g 4-((4-(3-(6-((4-(4- 乙酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基 嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 )-1- 叔丁氧基羰基哌啶二盐酸盐。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.30(1H， s)10.15(1H， br-s)8.00-7.81(4H， m)7.72(2H， d， J=8.7 Hz)7.65(1H， br-s)7.40(1H， br-s)4.57(2H， s)4.36-4.31(1H， m)4.02-3.89(3H， m)3.70-3.30(8H， m)3.17-2.73(8H， m)2.09(3H， s)1.99(1H， m)1.78-1.73(2H， m)1.39(9H， s)。
     实施例 1 N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺三盐酸盐 向 4-((4-(3-(6-((4-(4- 乙酰胺苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 )-1- 叔丁氧基羰基哌啶二盐酸盐 (40 g) 中加入 400 ml 盐酸 [1 mol/L， 在乙酸乙酯中 ]， 并将混合物在室温下搅拌 24 小时。将沉淀物收集 在过滤器上和用乙酸乙酯洗涤 (80 ml) 洗涤。将沉淀物干燥得到白色粗晶。粗晶在室温下 溶解在水 (245 ml) 中， 和过滤。向滤液中慢慢加入丙酮 (875 ml)， 并将混合物与其种晶搅 拌 6 小时。 将沉淀的晶体收集在过滤器上， 用丙酮 (140 ml) 洗涤， 并随后干燥， 得到 29.8 g N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺三盐酸盐。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6 )11.23(1H ，br-s)10.43(1H ，s)9.05(1H ，br-s)8.93(1H ， br-s)8.30(1H， t， J=7.8 Hz)7.96(1H， d， J=7.8 Hz)7.81(2H， d， J=8.7 Hz)7.78-7.73(3H， m)4.77(2H ， s)4.36-4.31(1H ， m)4.02-3.74(3H ， m)3.53-3.45(2H ， m)3.26-3.23(5H ， m)3.02-2.81(8H， m)2.10-1.91(6H， m)1.50-1.39(2H， m)。
     实施例 2 N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(2- 羟基乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 哌 嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺马来酸盐 N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺三盐酸盐 (1.01 g) 溶解在干 N， N- 二甲基甲酰胺 (15 ml) 中。向该溶液加入 2- 氯乙醇 (186μl)， 三乙胺 (0.6 ml)， 碳酸钾 (386 mg)， 和碘化钠 (300 mg)， 并将混合物在 50 摄氏度下搅拌 3 小时。反应混合物在减压 下浓缩， 并将残余物通过色谱在硅胶上纯化 ( 二氯甲烷 : 甲醇 :28％含水氨 =100:10:1)， 得到 220 mg N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(2- 羟基乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 哌嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺。化合物 溶解在甲醇 (5 ml) 中， 和向其中加入马来酸 (38.8 mg)。混合物搅拌片刻。溶液被真空浓 缩， 得到 250 mg N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3-(4-((1-(2- 羟基乙基 ) 哌啶 -4- 基 ) 甲基 ) 哌嗪 -1- 基 )-3- 氧代丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺马 来酸盐。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6 )10.25(1H ，s)7.83(2H ，d ，J=8.7 Hz)7.71(2H ，d ，J=8.7 Hz)7.63(1H ， t， J=7.5 Hz)7.35(1H ， d， J=7.5 Hz)7.15(1H ， d， J=7.5 Hz) ， 6.04(2H ， s)5.76(1H ，br-s)4.47-4.35(4H ，m)3.71(2H ，br-s)3.45-3.32(9H ，m)3.11(2H ， br-s)2.97-2.87(4H， m)2.73-2.69(2H， m)2.36-2.19(3H， m)2.09(3H， s)1.88-1.83(3H， m)1.35-1.31(2H， m)。
     以下实施例 3-5 根据类似于实施例 2 的工艺制备。实施例 6 N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-(6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基 甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙 -D3- 酰胺三盐酸盐 (6-3)
     4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙 -D3- 酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯二盐酸盐 (6-2) 4-(4-(3-(6-((4- 氨 基 -6-(4- 氨 基 苯 基 )-5- 氰 基 嘧 啶 -2- 基 硫 代 ) 甲 基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙 酰 基 ) 哌 嗪 -1- 基 ) 甲 基 ) 哌 啶 -1- 羧 酸 t- 丁 基 酯 (6-1)(3.4 g) 溶 解 在二氯甲烷 (68 ml) 中。在冰温下向该溶液加入三乙胺 (1.4 ml)， 并将混合物搅拌片 刻。向其中慢慢滴加乙酰 -D3 氯 (532μl)， 并将混合物在室温下搅拌过夜。向其中加入 水并将混合物转移至分液漏斗。水层用二氯甲烷 ( 两次 ) 提取， 和将合并的有机层在无 水硫酸镁上干燥和真空浓缩。残余物通过色谱在硅胶上纯化 ( 二氯甲烷 : 甲醇 =25:1)， 得 到 3.1 g 4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙 -D3- 酰 氨 基 苯 基 )-6- 氨 基 -5- 氰 基 嘧 啶 -2- 基 硫 代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯。将该化 合物完全溶解在甲醇 (20 ml) 中， 随后在冰温下向其中慢慢滴加浓 HCl(1.7 ml)， 并将混 合物在室温下搅拌 3 小时。然后， 向其中加入乙醇 (40 ml) 并将混合物在 50 摄氏度下搅 拌 1 小时。在冷却反应混合物之后， 将沉淀的晶体收集在过滤器上， 和干燥， 得到 2.06 g 4-((4-(3-(6-((4-(4- 乙 -D3- 酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯二盐酸盐 (6-2)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.29(1H， s)10.15(1H， br-s)8.00-7.90(1H， m)7.82(2H， d， J=8.7 Hz)7.73(2H， d， J=8.7 Hz)7.59(1H， m)7.40(1H， m)4.57(2H， s)4.36-4.31(1H， m)4.02-3.89(3H ， m)3.70-3.30(8H ， m)3.17-2.73(8H ， m)1.99(1H ， m)1.78-1.73(2H ， m)1.39(9H， s)。
     N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-(6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙 -D3- 酰胺三盐酸盐 (6-3) 向 4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙 -D3- 酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯二盐酸盐 (6-2)(2.0 g) 中加入 20 ml 盐酸 [1 mol/L， 在乙酸乙酯中 ]， 并将混合物在室温下搅拌 41 小时。将沉 淀物收集在过滤器上和用乙酸乙酯洗涤 (4.0 ml) 洗涤。粗晶在室温下溶解在水 (10 ml) 中， 和过滤。向滤液中慢慢加入丙酮 (40 ml)， 并将混合物与其种晶搅拌 2 小时。将沉淀的 晶体收集在过滤器上， 用丙酮 (4 ml) 洗涤， 并随后干燥， 得到 1.75 g N-(4-(6- 氨基 -5- 氰 基 -2-(6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙 -D3- 酰胺三盐酸盐 (6-3)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)11.06(1H， br-s)10.38(1H， s)8.94-8.81(2H， m)8.16(1H， t， J=7.8 Hz)7.83-7.80(3H， m)7.75(2H， d， J=8.7 Hz)7.64(1H， d， J=7.8 Hz)4.70(2H， s)4.36-4.31(1H， m)4.02-3.74(3H， m)3.53-3.45(2H， m)3.26-3.23(5H， m)3.02-2.81(8H， m)2.10-1.91(3H， m)1.50-1.39(2H， m)。
     实施例 74- 硝基苯甲酸甲基酯 -2， 3， 5， 6-D4(7-2) 4- 硝基苯甲酸 -D4 酸 (7-1)(5 g) 溶解在甲醇 (100 ml) 中。向该溶液加入浓氢氯酸 (1.0 ml)， 和混合物回流 15 小时。反应混合物被真空浓缩并随后将水加入残余物中。混合 物用二氯甲烷提取。有机层用含水碳酸氢钠洗涤， 在无水硫酸镁上干燥， 和真空浓缩， 得到 5.3 g 4- 硝基苯甲酸甲基酯 -2， 3， 5， 6-D4(7-2)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(CDCl3)3.99(3H， s)。
     4- 硝基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 醇 (7-3) 4- 硝基苯甲酸甲基酯 -2， 3， 5， 6-D4(7-2)(5.3 g) 悬浮在二 烷 (53 ml) 和水 (53ml) 的混合物中。向该悬浮液中加入硼氢化钠 (9.4 g)， 并将混合物在室温下搅拌 6 小时。 在反应完成之后， 反应混合物用 5 N HCl 弱酸化和转移到分液漏斗。 水层用乙酸乙酯提取和 将合并的有机层在无水硫酸镁上干燥和真空浓缩， 得到 3.75 g 4- 硝基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 醇 (7-3)。 黄色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)5.53(1H， t， J=5.7 Hz)4.64(2H， d， J=5.7 Hz)。
     4- 氨基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 醇 (7-4) 4- 硝基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 醇 (7-3)(3.75 g) 溶解在乙酸乙酯 (37 ml) 和二甲基甲酰 胺 (10 ml) 的混合物中。向该溶液加入 5％钯 -( 活性炭 )(400 mg)， 并将混合物在大气氢 压力下搅拌 6 小时。在反应完成之后， 过滤出催化剂并将滤液真空浓缩， 得到 2.65 g 4- 氨 基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 醇 (7-4)。
     黄色油。 1
     H-NMR(CDCl3)4.56(2H， s)。
     4- 乙酰氨基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 乙酸酯 (7-5)
     4- 氨基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 醇 (7-4)(2.65 g) 溶解在乙酸乙酯 (53 ml) 中。在冰温下向 该溶液加入三乙胺 (12.9 ml)， 并将混合物搅拌片刻。并随后向其中慢慢滴加乙酰氯 (5.5 ml)， 和将混合物搅拌 1 小时。在反应完成之后， 将水加入反应混合物， 并将混合物转移至 分液漏斗。水层用乙酸乙酯提取和将合并的有机层在无水硫酸镁上干燥和真空浓缩， 得到 4.28 g 4- 乙酰氨基苄基 -2， 3， 5， 6-D4 乙酸酯 (7-5)。
     黄色油。 1
     H-NMR(DMSO-d6)4.99(2H， s)2.09(6H， s)。
     N-(4-( 羟基甲基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-6) 4- 乙酰胺苄基 -2， 3， 5， 6-D4 乙酸酯 (7-5)(4.28 g) 溶解在甲醇 (80 ml) 中。向该溶液 加入碳酸钾 (2.9 g)， 和将混合物搅拌 1.5 小时。在反应完成之后， 将反应混合物过滤。滤 液被真空浓缩， 得到 3.4 g N-(4-( 羟基甲基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-6)。
     黄色油。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.07(1H， s)4.42(2H， s)2.02(3H， s)。
     N-(4- 甲酰基苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-7) N-(4-( 羟基甲基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-6)(3.4 g) 溶解在二甲基甲酰胺 (68 ml)。向该溶液加入二氧化锰 (17 g)， 并将混合物在 60 摄氏度下搅拌 6 小时。在反应完成 之后， 将反应混合物过滤。向滤液中加入水， 和混合物用乙酸乙酯提取。有机层在无水硫酸 镁上干燥和真空浓缩， 得到 2.5 g N-(4- 甲酰基苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-7)。 白色粉末。 1
     H-NMR(CDCl3)9.93(1H， s)7.50(1H， br-s)2.23(3H， m)。
     N-(4-(2， 2- 二氰基乙烯基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-8) N-(4- 甲酰基苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-7)(2.5 g) 溶解在乙醇 (50 ml) 中。向该 溶液加入丙二腈 (1.1 g) 和哌啶 (2 滴 )， 并将混合物在室温下搅拌 8 小时。将沉淀的晶体 收集在过滤器上， 用乙醇洗涤， 和干燥， 得到 2.1 g N-(4-(2， 2- 二氰基乙烯基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-8)。
     黄色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.52(1H， s)8.37(1H， s)2.12(3H， s)。
     N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2- 巯基 -3， 4- 二氢嘧啶 -4- 基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙 酰胺 (7-9) 并将混合物在 向其中溶解有金属钠 (276 mg) 的 20 ml 乙醇溶液中加入硫脲 (760 mg)， 室温下搅拌 1 小时。然后， 向其中加入 N-(4-(2， 2- 二氰基乙烯基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙 酰胺 (7-8)(2.1 g) 并将混合物在回流下搅拌 3 小时。在反应完成之后， 乙醇在减压下去除 掉。残余物溶解在温水中并用乙酸弱酸化。将沉淀物收集在过滤器上和干燥， 得到 2.91 g N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2- 巯基 -3， 4- 二氢嘧啶 -4- 基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺 (7-9)。
     黄色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)9.99(1H， s)9.69(1H， s)6.13(2H， m)4.93(1H， s)2.07(3H， s)。
     3-(6-(4-(4- 乙酰基氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (7-10) N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2- 巯基 -3， 4- 二氢嘧啶 -4- 基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺
     (7-9)(2.91 g) 溶解在二甲基甲酰胺 (60 ml) 中。向该溶液加入甲基 3-(6- 甲磺酰基氧基 甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸酯 (2.73 g) 和碳酸钾 (2.76 g)， 并将混合物在室温下搅拌过夜。然 后， 向其中加入 N- 溴琥珀酰亚胺 (1.77 g)， 和将混合物搅拌另外 1 小时。 在反应完成之后， 将水加入反应混合物和混合物用乙酸乙酯提取。 有机层在无水硫酸镁上干燥， 和真空浓缩。 残余物通过色谱在硅胶上纯化 ( 二氯甲烷 : 甲醇 =20:1)， 得到 3.52 g 3-(6-(4-(4- 乙酰基 氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (7-10)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6 )10.26(1H ，s)7.63(1H ，t ，J=7.8 Hz)7.36(1H ，d ，J=7.8 Hz)7.16(1H， d， J=7.8 Hz)4.46(2H， s)3.57(3H， s)2.99(2H， t， J=7.2 Hz)2.73(2H， t， J=7.2 Hz)2.09(3H， s)。
     3-(6-(4-(4- 乙酰基氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲 基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸 (7-11) 3-(6-(4-(4- 乙酰基氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (7-10)(3.52 g) 悬浮在 50％含水乙腈 (100 ml) 中。向该悬浮液 中加入一水合氢氧化锂 (331 mg)， 和混合物回流 2 小时。随后将柠檬酸 (1.59 g) 在水 (10 ml) 中的溶液逐渐加入反应混合物， 和反应混合物在 50 摄氏度下搅拌 1 小时。 在冷却反应混 合物之后， 将沉淀的晶体收集在过滤器上， 用水洗涤， 和干燥， 得到 2.29 g 3-(6-(4-(4- 乙 酰基氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基 嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸 (7-11)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.25(1H， s)， 7.64(1H， t， J=7.8 Hz)， 7.36(1H， d， J=7.8 Hz)， 7.16(1H， d， J=7.8 Hz)4.46(2H， s)2.92(2H， t， J=7.2 Hz)2.65(2H， t， J=7.2 Hz)2.09(3H， s)。
     4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙酰氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫 代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯二盐酸盐 (7-12) 3-(6-(4-(4- 乙酰基氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸 (7-11)(2.29 g) 悬浮在丙酮 (46 ml) 中。向悬浮液中依次加入 1- 羟 基 -1H- 苯并三唑 (820 mg)， 1- 乙基 -3-(3- 二甲基氨基丙基 )- 碳二亚胺盐酸盐 (1.16 g)， 和 4- 哌嗪 -1- 基甲基 - 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (1.43 g)， 和混合物回流 1 小时。丙酮被 真空去除， 并随后向其中加入乙酸乙酯 (23 ml) 和水 (23 ml)， 和将混合物搅拌 30 分钟。 将 混合物转移至分液漏斗。有机层依次用饱和含水碳酸氢钠和盐水洗涤， 在无水硫酸镁上干 燥和真空浓缩。在残余物完全溶解在甲醇 (22.5 ml) 中之后， 在冰温下向其中慢慢滴加浓 HCl(1.43 ml) 并将混合物在室温下搅拌 1 小时。然后， 向其中加入乙醇 (45 ml) 并将混合 物在 50 摄氏度下搅拌 1 小时。在冷却反应混合物之后， 将沉淀的晶体收集在过滤器上， 和 干燥， 得到 2.35 g 4-((4-(3-(6-((4-(4- 乙酰氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧 啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基 酯二盐酸盐 (7-12)。白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6)10.30(1H ， s)7.95(1H ， m)7.65(1H ， m)7.45(1H ， m)4.59(2H ， s)4.40-4.31(1H ， m)4.10-3.85(3H ， m)3.70-3.30(8H ， m)3.17-2.73(8H ， m)2.09(3H ， s)1.99(1H， m)1.78-1.74(2H， m)1.39(9H， s)。
     N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-(6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺三盐酸盐 (7-13) 向 4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙酰氨基苯基 -2， 3， 5， 6-D4)-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫 代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯二盐酸盐 (7-12)(2.35 g) 中加入 23 ml 盐酸 [1 mol/L， 在乙酸乙酯中 ]， 并将混合物在室温下搅拌 24 小时。 将沉淀物收集在过滤器上和用乙酸乙酯洗涤 (4.7 ml) 洗涤。 粗晶在室温下溶解在水 (10 ml) 中， 和过滤。 向滤液中慢慢加入丙酮 (40 ml)， 并将混合物与其种晶搅拌 2 小时。 将 沉淀的晶体收集在过滤器上， 用丙酮 (4.7 ml) 洗涤， 并随后干燥， 得到 1.93 g N-(4-(6- 氨 基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 -2， 3， 5， 6-D4) 乙酰胺三盐酸盐 (7-13)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6)11.04(1H ， br-s)10.38(1H ， s)8.92-8.80(2H ， m)8.10(1H ， m)7.79(1H， m)7.59(1H， m)4.67(2H， s)4.37-4.33(1H， m)4.07-4.03(1H， m)3.70-2.82(17H， m)2.10-1.98(6H， m)1.48-1.37(2H， m)。
     在下文中， 以下化合物的工艺作为参考实施例给出。
     3-(6-(4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸 (8-2) 3-(6-(4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸 (8-1)(230 mg) 悬浮在乙腈 (20 ml) 中。向该悬浮液中加入 5N 氢氯酸 (2 ml)， 并将 混合物在 60 摄氏度下搅拌过夜。在冷却反应混合物之后， 依次将含水柠檬酸逐渐加入其 中以中和反应混合物。将沉淀的晶体收集在过滤器上， 用乙醇洗涤， 和干燥， 得到 150 mg 3-(6-(4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酸 (8-2)。
     浅黄色粉末。29102307621 A CN 102307628
     1说明书27/33 页H-NMR(DMSO-d6)7.83(2H， d， J=8.7 Hz)7.74(1H， t， J=7.5 Hz)7.30(1H， d， J=7.5 Hz)7.12(1H， d， J=7.5 Hz)6.61(2H， d， J=8.7 Hz)5.90(2H， br-s)4.44(2H， s)2.91(2H， t， J=7.5 Hz)2.48(2H， t， J=7.5 Hz)。
     4-(4-(3-(6-((4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-5- 氰基 嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (8-3) 3-(6-(4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-5- 氰基嘧啶 -2- 基 磺胺基甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙 酸 (8-2)(2.58 g) 悬浮在丙酮 (50 ml) 中。向悬浮液中依次加入 1- 羟基 -1H- 苯并三唑 (1.28 g)， 1- 乙基 -3-(3- 二甲基氨基丙基 )- 碳二亚胺盐酸盐 (1.8 g)， 和 4- 哌嗪 -1- 基 甲基 - 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (1.8 g)， 和混合物回流 1 小时。丙酮被真空去除， 并随后 向其中加入乙酸乙酯 (30 ml) 和水 (30 ml)， 和将混合物搅拌 30 分钟。将混合物转移至 分液漏斗。有机层依次用饱和含水碳酸氢钠和盐水洗涤， 在无水硫酸镁上干燥和真空浓 缩。残余物通过色谱在硅胶上纯化 ( 二氯甲烷 : 甲醇 :28％含水氨 =100:10:1)， 得到 3.9 g 4-(4-(3-(6-(4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 ) 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (8-3)。
     浅黄色粉末。 1
     H-NMR(CDCl3)7.95(2H， d， J=8.7 Hz)7.50(1H， t， J=7.5 Hz)7.28(1H， d， J=7.5 Hz)7.08(1H， d， J=7.5 Hz)6.71(2H， d， J=8.7 Hz)5.70(2H， br-s)4.51(2H， s)4.16-4.09(4H， m)3.59(2H， t， J=4.8 Hz)3.45(2H， t， J=4.8 Hz)3.13(2H， t， J=7.5 Hz)2.80(2H， t， J=7.5 Hz)2.75-2.65(2H， m)2.34-2.30(4H， m)2.13(2H， d， J=7.2 Hz)1.72-1.64(1H， m)1.46(9H， s)1.07-1.02(2H， m)。
     4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-2-(6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 甲腈四盐酸盐 (8-4) 向 4-(4-(3-(6-(4- 氨 基 -6-(4- 氨 基 苯 基 )-5- 氰 基 嘧 啶 -2- 基 硫 代 ) 甲 基 ) 吡 啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (8-3)(3.6 g) 中加入 54 ml 盐酸 [1 mol/L， 在乙酸乙酯中 ]， 并将混合物在室温下搅拌 24 小时。将沉淀的晶体收集 在过滤器上， 用乙酸乙酯洗涤， 和干燥， 得到 4.3 g 4- 氨基 -6-(4- 氨基苯基 )-2-(6-(3- 氧 代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -5- 甲腈四 盐酸盐 (8-4)。
     浅黄色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)11.23(1H， br-s)9.05(1H， br-s)8.93(1H， br-s)8.30(1H， t， J=7.5 Hz)7.79-7.68(4H， m)6.92(2H， d， J=8.7 Hz)4.77(2H， s)4.40-4.31(8H， m)3.36-3.18(4H， m)3.02-2.75(6H， m)2.21-1.98(3H， m)1.52-1.34(2H， m)。
     下文中， 以下化合物的工艺作为参考实施例给出。3-(6- 羟基甲基 -1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (9-2) 3-(6- 羟基甲基吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (9-1)(1.37 g) 溶解在二氯甲烷 (15 ml) 中， 和将 m- 氯过苯甲酸 (1.46 g) 在二氯甲烷中的溶液慢慢加入其中， 和将混合物搅拌 2 小时。 反应溶液依次用 10％含水亚硫酸钠， 含水碳酸氢钠， 和水洗涤。有机层在无水硫酸镁上干 燥， 得到 880 mg 3-(6- 羟基甲基 -1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (9-2)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(CDCl 3 )7.48-7.29(1H ，m)7.25-7.22(2H ，m)5.01(1H ，m)4.80(2H ， s)3.67(3H， s)3.23(2H， t， J=7.2 Hz)2.87(2H， t， J=7.2 Hz)。
     N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2- 巯基嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺 (9-4) 硫脲 (1.52 g) 悬浮在乙醇 (15 ml) 中， 并随后向其中加入碳酸钠 (2.12 g)， 并将混合 物在 60 摄氏度下搅拌 30 分钟。然后， 向其中加入 N-(4-(2， 2- 二氰基乙烯基 ) 苯基 ) 乙 酰胺 (9-3)(4.22 g) 并将混合物在回流下搅拌 5 小时。在反应完成之后， 乙醇在减压下被 去除。残余物溶解在温水中并用乙酸弱酸化。将沉淀的晶体收集在过滤器上， 和干燥， 得到 1.87 g N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2- 巯基嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺 (9-4)。
     黄色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6 )10.29(1H ，s)7.73(2H ，d ，J=8.7 Hz)7.64(2H ，d ，J=8.7 Hz)2.09(3H， s)。
     3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基磺胺基甲基 ]-1- 氧 基 - 吡啶 -2- 基 } 丙酸甲基酯 (9-5) 3-(6- 羟基甲基 -1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (9-4)(880 mg) 溶解在二氯甲烷 (18 ml) 中。 向该溶液加入三乙胺 (1.15 ml)， 和混合物在冰温下搅拌 10 分钟。 向其中慢慢 滴加甲磺酰氯 (0.48 ml)， 和混合物在冰温下搅拌 30 分钟。 向该反应混合物中加入水， 并将 混合物转移至分液漏斗。有机层用饱和含水碳酸氢钠和盐水洗涤。有机层在无水硫酸镁上 干燥， 得到 3-(6- 甲磺酰基氧基甲基 -1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯。然后， 化合物溶
     解在二甲基甲酰胺 (10 ml) 中， 和向其中加入 N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2- 巯基嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺 (1.14 g) 和碳酸钾 (1.1 g) 并将混合物在室温下搅拌过夜。在反应完成之 后， 向其中加入水。将沉淀物收集在过滤器上， 和干燥， 得到 580 mg 3-(6-(4-(4- 乙酰基 氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基磺胺基甲基 )-1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酸甲基酯 (9-5)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.26(1H， s)7.83(2H， d， J=8.7 Hz)7.74-7.69(3H， m)7.37(1H， d， J=7.8 Hz)7.23(1H， t， J=7.8 Hz)4.50(2H， s)3.59(3H， s)3.05(2H， t， J=7.2 Hz)2.76(2H， t， J=7.2 Hz)2.09(3H， s)。
     3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基磺胺基甲基 ]-1- 氧 基 - 吡啶 -2- 基 } 丙酸 (9-6) 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基磺胺基甲基 ]-1- 氧基 - 吡 啶 -2- 基 } 丙酸甲基酯 (9-5)(580 mg) 悬浮在 50％含水乙腈 (17 ml) 中。向该悬浮液中加 入一水合氢氧化锂 (53 mg)， 和混合物在 80 摄氏度下搅拌 2 小时。然后， 向其中加入柠檬 酸 (253 mg)， 并将混合物在 50 摄氏度下搅拌 1 小时。在冷却反应混合物之后， 将沉淀的晶 体收集在过滤器上， 用水洗涤， 和干燥， 得到 540 mg 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨 基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基磺胺基甲基 ]-1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 } 丙酸 (9-6)。 白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d6)10.25(1H， s)7.83(2H， d， J=8.7 Hz)7.74-7.68(3H， m)7.37(1H， d， J=7.8 Hz)7.23(1H， t， J=7.8 Hz)4.50(2H， s)3.02(2H， t， J=7.2 Hz)2.67(2H， t， J=7.2 Hz)2.09(3H， s)。
     4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙 酰 氨 基 苯 基 )-6- 氨 基 -5- 氰 基 嘧 啶 -2- 基 硫 代 ) 甲 基 )-1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (9-7) 3-{6-[4-(4- 乙酰基氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基磺胺基甲基 ]-1- 氧基 - 吡 啶 -2- 基 } 丙酸 (9-6)(520 mg) 溶解在丙酮 (10 ml) 和二甲基甲酰胺 (10 ml) 的混合物中。 向该溶液依次加入 1- 羟基 -1H- 苯并三唑 (224 mg)， 1- 乙基 -3-(3- 二甲基氨基丙基 )- 碳 二亚胺盐酸盐 (318 mg)， 4- 哌嗪 -1- 基甲基 - 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (315 mg)， 和混合 物回流 2 小时。丙酮被真空去除， 并随后向其中加入乙酸乙酯和水， 和将混合物搅拌 30 分 钟。 将混合物转移至分液漏斗， 和有机层依次用饱和含水碳酸氢钠和盐水洗涤， 在无水硫酸 镁上干燥和真空浓缩。残余物通过色谱在硅胶上纯化 ( 二氯甲烷 : 甲醇 =50:1)， 得到 470 mg 4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲基 )-1- 氧 基 - 吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸 t- 丁基酯 (9-7)。
     白色粉末。 1
     H-NMR(CDCl3)7.98(2H， d， J=8.7 Hz)7.69-7.61(3H， m)7.43(1H， dd， J=7.8， 1.8 Hz)7.31(1H ， dd ， J=7.8 ， 1.8 Hz)7.09(1H ， t， J=7.8 Hz)5.75(2H ， s)4.65(2H ， s)4.12-4.00(2H， m)3.55(2H， br-s)3.46(2H， br-s)3.24(2H， t， J=7.2 Hz)2.87(2H， t， J=7.2 Hz)2.71-2.63(2H， m)2.32-2.29(4H， m)2.23(3H， s)2.11(2H， d， J=6.9 Hz)1.71-1.67(3H， m)1.46(9H， s)1.07-0.97(2H， m)。
     N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基 - 甲基 ) 哌嗪 -1- 基 )
     丙基 )-1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺三盐酸盐 (9-8) 向 t- 丁基 4-(4-(3-(6-(4-(4- 乙酰氨基苯基 )-6- 氨基 -5- 氰基嘧啶 -2- 基硫代 ) 甲 基 )-1- 氧基吡啶 -2- 基 ) 丙酰基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 甲基 ) 哌啶 -1- 羧酸盐 (450 mg) 中加 入 4.5 ml 盐酸 [1 mol/L， 在乙酸乙酯中 ]， 并将混合物在室温下搅拌 24 小时。将沉淀物收 集在过滤器上， 用乙酸乙酯洗涤， 和干燥， 得到白色粗晶。粗晶在室温下溶解在水 (2.5 ml) 中， 和过滤。向滤液中慢慢加入丙酮 (10 ml)， 和将混合物搅拌 6 小时。将沉淀的晶体收集 在过滤器上， 用丙酮洗涤， 并随后干燥， 得到 230 mg N-(4-(6- 氨基 -5- 氰基 -2-((6-(3- 氧 代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 )-1- 氧基 - 吡啶 -2- 基 ) 甲硫基 ) 嘧 啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺三盐酸盐。
     白色粉末。 1
     H-NMR(DMSO-d 6 )10.65(1H ，m)10.33(1H ，s)8.80-8.66(2H ，m)7.82(2H ，d ， J=8.7 Hz)7.75-7.69(3H， m)7.43(1H， d， J=7.8 Hz)7.25(1H， t， J=7.8 Hz)4.50(2H， s)4.42-4.38(1H， m)4.18-4.09(1H， m)3.74-3.25(8H， m)3.08-3.01(4H， m)2.87-2.70(4H， m)2.09(3H， s)2.08-1.97(2H， m)1.47-1.39(2H， m)。
     下文中， 给出包含本化合物的药物组合物的一些实施例。 实施例 8 向 5 L 不锈烧杯中加入纯化水 ( 约 4.5 kg)。向其中加入浓甘油 (130 g) 作为等渗 剂和丁二酸 (3.5 g) 作为缓冲剂， 并将混合物搅拌溶解。然后， 将 N-(4-(6- 氨基 -5- 氰 基 -2-((6-(3- 氧代 -3-(4-( 哌啶 -4- 基甲基 ) 哌嗪 -1- 基 ) 丙基 ) 吡啶 -2- 基 ) 甲硫 基 ) 嘧啶 -4- 基 ) 苯基 ) 乙酰胺 ( 实施例 1 的化合物 )(0.5 g) 加入该溶液， 并将混合物搅 拌溶解。向该溶液加入苯度溴铵 (0.3 g) 作为防腐剂， 并将混合物轻轻搅拌。视觉确认反 应完成。向该溶液逐渐加入 4％ (w/w) 含水氢氧化钠以调节 pH 至 6.6。在调节 pH 之后， 将 纯化水加入溶液以达到总重 5.0 kg， 并将溶液轻轻搅拌。 溶液被无菌过滤， 随后滤液被无菌 装入滴眼剂瓶并将瓶密封。
     实施例 9 实施例 9 的药物组合物使用磷酸二氢钠 (3.00 g) 作为缓冲剂替代丁二酸， 按照类似于 实施例 8 的方式制备。
     实施例 10 实施例 10 的药物组合物使用葡萄糖 (275 g) 作为等渗剂替代浓甘油， 按照类似于实施 例 8 的方式制备。
     实施例 11 实施例 11 的药物组合物使用甘露醇 (255 g) 作为等渗剂替代浓甘油， 按照类似于实施 例 8 的方式制备。
     实施例 12 实施例 12 的药物组合物使用浓甘油 (68 g) 和丙二醇 (50 g) 作为等渗剂替代浓甘油， 按照类似于实施例 8 的方式制备。
     实施例 13 实施例 13 的药物组合物使用浓甘油 (105 g) 和山梨醇 (43 g) 作为等渗剂替代浓甘油， 按照类似于实施例 8 的方式制备。
     实施例 14 实施例 14 的药物组合物使用丙二醇 (50 g)， 甘露醇 (100 g) 和山梨醇 (43 g) 作为等 渗剂替代浓甘油， 按照类似于实施例 8 的方式制备。
     实施例 15 实施例 15 的药物组合物使用苯扎氯铵 (0.5 g) 作为防腐剂替代苯度溴铵， 按照类似于 实施例 8 的方式制备。
     以下描述使用本发明化合物的药理试验的实施例。
     试验 1: 在表达腺苷 A2a 受体的细胞中的 c-AMP 生成作用 试 验 如 下 所 述 根 据 参 考 文 件 (Klotz k.N. 等 人， Naunyn-Schmiedeberg's Arch. Pharmol.， (1998)357， 1-9;Shryock J.C. 等人， 分子药理学， (1998)53， 886-893) 中所公开 的方法进行。
     至于用于试验的细胞， 使用表达腺苷 A2a 受体 ( 人 ) 的 HEK293 细胞 (PerkinElmer Life Sciences， 代码 No.RBHA2AC)。
     至于培养基， 使用包括 10％ FBS( 胎畜牛血清 ) 和 1 mM 丙酮酸钠的 Dulbecco's 改 性 Eagles 培养基 (DMEM)。
     细胞被放在 96 井板 (1 x 105/ 井 ) 上， 和培养过夜。 在去除上层清液之后， 向每一 井中加入 0.1 ml 包含 20 mM HEPES， 0.1 mM IBMX(3- 异丁基 -1- 甲基黄嘌呤 ) 和 2 个单位 /mL 腺苷脱氨基酶的 DMEM( 没有 FBS)， 并将它们在 37 摄氏度下培养 30 分钟。然后， 向每一 井中加入 0.1 ml 包含预定浓度试验化合物的 DMSO 溶液的培养基， 并将它们培养另外 30 分 钟。 在去除上层清液之后， 向其中加入溶胞溶液以使反应淬灭。 c-AMP 在每一井中的量通过 使用 c-AMP 酶免疫分析 (EIA) 体系 (Amersham Biosciences， 代码 No.RPN225) 而测定。
     相同分析是使用 CGS-21680(2-p- 羧基乙基 ) 苯乙基氨基 -5'-N- 乙基酰胺基腺苷 盐酸盐， (Sigma， 代码 C141) 作为参考化合物重复。
     1μM 参考化合物所产生的所得 c-AMP 在参考培养基中的量被定义为 100％。测定 所得 c-AMP 在每一试验培养基中的量， 和产生 50％ c-AMP 量的浓度根据预定浓度的每一试 验化合物的结果而计算， 定义为 EC50 值。
     使用在上述实施例中制备的本发明以下化合物得到的以上试验结果在下表中给 出。
     结果实施例 1 2 3 4 5
     A2a 激动剂活性 (EC50， nM) 3.3 2.9 1.8 6.1 8.4试验 2: 实施例 1 的化合物对角膜上皮细胞的作用 [ 方法 ] 兔角膜上皮细胞 (KURABO) 用作试验细胞。向被放在 96 井板上的兔角膜上皮细胞加 入实施例 1 的化合物， 并将样品培养 60 分钟。然后， 使用太阳模拟器 (SOL500) 将样品用 2 UVA(3.5 mW/cm ) 照射 70 分钟。然后， 细胞用缓冲剂洗涤。在 24 小时之后， 细胞存活性通 过中性红吸收量试验而评估。[ 结果 ] 结果在图 1 中给出。在加入实施例 1 的化合物 (0.25， 0.5 和 1 mM) 并随后用太阳模拟 器照射之后的细胞存活性分别为 106.3％， 115.0％和 100.7％， 和因此根本没有观察到细 胞存活性的下降。
     根据以上结果， 本制剂显然可以高浓度使用， 甚至在日晒的户外， 因为本化合物甚 至在高浓度使用时也不具有任何细胞毒性， 因此本制剂是一种可安全使用的药物。
     试验 3: 血管松弛 眼循环病症出现在青光眼， 视网膜色素变性， 黄斑变性， 缺血性视神经病， 视网膜动脉 堵塞， 视网膜静脉堵塞， 糖尿病视网膜病， 和虹膜睫状体炎。 尤其， 视神经乳头的循环病症被 认为是青光眼的一个重要因素。
     眼血流量具有两个循环体系。一个路径是通过睫状动脉， 而另一路径是通过中心 视网膜动脉。睫状动脉经过脉络膜， 视神经乳头， 虹膜， 和睫状体中的动脉。另一方面， 中 枢视网膜动脉经过视网膜中的动脉， 且一部分中枢视网膜动脉分支到视神经乳头中的细动 脉。
     松弛睫状动脉的实施例 1 的化合物被认为改善了眼血流量。因此实施例 1 的化合 物被预期为一种有效地用于治疗眼病如青光眼， 视网膜色素变性， 黄斑变性， 缺血性视神经 病， 视网膜动脉堵塞， 视网膜静脉堵塞， 糖尿病视网膜病， 和虹膜睫状体炎的药物。
     < 材料和方法 > 兔通过静脉内给药用剂量过量的戊巴比妥钠处置。眼被挖出并分离出睫状动脉。睫 状动脉上切出 2 mm 长的血管环并放在 Danish Multi Myograph System 610M(Danish myo technology) 下进行显微镜观察。血管在使用 5％ CO2 和 95％ O2 充氧的 krebs 溶液中在 37 摄氏度下平衡。
     为了确认血管的内皮损伤， 测试 100μM 卡巴胆碱对睫状动脉的松弛。如果卡巴胆 碱松弛超过 30％， 那么其内皮没有损伤的血管被用于实验。
     在睫状动脉与高 K+-krebs 溶液接触之后， 实施例 1 的化合物被连续地从 0.3μM 至 300μM 向腔给药。压力通过 Myodaq ver 2.01(Danish myo technology) 测定。
     < 结果 > 结果在下表和图 2 中给出。实施例 1 的化合物剂量依赖性地松弛兔的睫状动脉， 和其 EC50 是 17.0μM。因此推断， 实施例 1 的化合物表现出睫状动脉的松弛 ：浓度 (μM) 0.3 1 3 10 30 100 300
     松弛 (％ ) 2.6±0.5 4.8±1.2 7.9±2.3 35.3±14.4 65.6±9.5 82.4±3.7 90.1±2.4试验 4: 神经保护 青光眼是一种导致失明的眼病， 为此选择性地损伤视网膜神经节细胞 (RGC)。随后将 视神经损伤， 和最后出现视野缺损。视网膜动脉堵塞， 视网膜静脉堵塞， 糖尿病视网膜病和 缺血性视神经病也是与眼有关的视神经病症。另外， 黄斑变性， 视网膜色素变性和 Leber's遗传视神经病是涉及视网膜的神经元细胞损害的眼病。
     实施例 1 的化合物表现出对 RGC 的神经保护作用， 预期成为用于治疗眼病如视网 膜动脉堵塞， 视网膜静脉堵塞， 糖尿病视网膜病， 缺血性视神经病， 黄斑变性， 视网膜色素变 性和 Leber's 遗传视神经病的神经保护药物。
     < 材料和方法 > 该实验根据 Otori 等人报道的方法 (Invest Opthalmol Vis Sci.39:972-981， 1998) 进行。
     挖出 7 日龄的大鼠 （Long Evans 鼠） 的眼。从眼中分离出视网膜。视网膜通过用 包括 15 U/mL 木瓜蛋白酶的神经基质培养基在 37 摄氏度下培养 30 分钟而分离。制备视网 膜悬浮液。
     视网膜悬浮液在抗 SIRP 抗体 (Chemicon)- 涂覆烧瓶中在室温下培养 30 分钟。将 非粘连细胞放在 anti-thy-1 抗体 (Chemicon)- 涂覆烧瓶中。细胞在室温下培养 30 分钟。 最后将烧瓶中的粘连细胞用神经基质培养基洗涤。在 800 rpm 下离心 5 分钟之后， 制成纯 化 RGC。 细胞在已涂有聚 -L- 赖氨酸和层粘连蛋白的玻璃盖片上接种。 纯化 RGC 在包含 B27 补充剂， 1 mM 谷酰胺 50 ng/mL CNTF， 10μM Forskolin 的神经基质培养基中培养。培养物 在 37 摄氏度下在包含 5％ CO2 和 95％空气的潮湿气氛中供养。将 BDNF(50 ng/mL) 或实施 例 1 的化合物以 0 nM( 控制 )， 3 nM， 10 nM 或 30 nM 的最终浓度在细胞接种之后立即给药。
     细胞存活 ( 细胞存活性 ) 通过计数被染色的 RGC 而确定。在培养开始 5 天之后， 将 RGC 用 1μM Calcein-AM( 分子探头 ) 染色。使用萤光显微镜计数 RGC 的数目。细胞存 活 ( 细胞存活性 ) 的百分数通过使用对照组的计数为 0％， 和 BDNF 组的计数为 100％而计 算。
     < 结果 > 结果在下表和图 3 中给出。实施例 1 的化合物剂量依赖性地表现出细胞存活的增加。 该结果表明， 实施例 1 的化合物 had 对 RGC 的神经保护作用。
     数据 = 中值 ±SE 细胞存活通过使用对照组的计数为 0％， 和 BDNF 组的计数为 100％而计算。