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1、10申请公布号CN104098512A43申请公布日20141015CN104098512A21申请号201310116354822申请日20130403C07D231/26200601G01N30/0220060171申请人江苏先声药物研究有限公司地址210042江苏省南京市玄武区玄武大道699号18申请人江苏先声药业有限公司72发明人刘雯雯廖明毅张斐许向阳54发明名称依达拉奉衍生物及其制备方法、检测方法和用途57摘要本发明公开一种依达拉奉衍生物及其制备方法、检测方法和用途，本发明涉及如下结构的化合物、及其制备方法、检测方法和用途。其制备方法特征在于将依达拉奉溶于有机溶剂，然后与过氧化氢水溶。
2、液进行反应，再利用反相高效液相色谱法对上述依达拉奉反应液进行分离，制得Z23甲基5氧1苯基4,5二氢1H吡唑4基3E苯偶氮基2丁烯酸。此外本发明还提供了该化合物的检测方法。该化合物可用于依达拉奉杂质对照品，便于控制依达拉奉原料药和相关制剂的该化合物的量。51INTCL权利要求书1页说明书6页附图1页19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书6页附图1页10申请公布号CN104098512ACN104098512A1/1页21一种化合物，具有如下结构2一种制备权利要求1所述化合物的方法，该方法包括将依达拉奉与过氧化氢水溶液进行反应后，用反相高效液相色谱进行分离，040下。
3、避光旋干后即得。3根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，依达拉奉与过氧化氢反应前，先将依达拉奉加入有机溶剂配制成溶液或浑浊液，所述有机溶剂选自醇类、乙腈，所述醇类优选甲醇。4根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于依达拉奉和过氧化氢的质量比为1113，优选12125。5根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，依达拉奉与过氧化氢水溶液的反应温度为1520，反应时间为4872小时。6根据权利要求2所述制备方法，其特征在于，所述反相高效液相色谱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相是有机相和水相的混合溶剂，检测波长为240254NM，优选244NM。7根据权利要求6所述制备方法，其特。
4、征在于，流动相中有机相和水相的体积比为45558020，所述有机相选自甲醇或乙腈，所述水相PH为3055，水相选自易挥发性弱酸水溶液，优选乙酸水溶液或甲酸水溶液。8一种检测权利要求1所述化合物的方法，其特征在于采用高效液相色谱，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为有机相和水相的混合溶剂，流动相流速为0709ML/MIN，检测波长为240254NM。9根据权利要求8所述的检测方法，其特征在于，所述流动相中有机相与水相的体积比为45558020，流动相流速为08ML/MIN，检测波长为244NM，所述流动相选自甲醇水体系、甲醇缓冲盐体系、乙腈缓冲盐体系，优选甲醇乙酸水溶液。10权利要求1所述化。
5、合物在制备依达拉奉杂质对照品中的应用。权利要求书CN104098512A1/6页3依达拉奉衍生物及其制备方法、检测方法和用途发明领域0001本发明涉及一种依达拉奉衍生物，即Z23甲基5氧1苯基4,5二氢1H吡唑4基3E苯偶氮基2丁烯酸，及其制备方法、检测方法和用途。背景技术0002依达拉奉（式I化合物）是一种脑保护剂。脑梗塞急性期患者给予依达拉奉，可抑制梗塞周围局部脑血流量的减少，使发病后第28天脑中NAA含量较甘油对照组明显升高。依达拉奉可清除自由基，抑制脂质过氧化，从而抑制脑细胞、血管内皮细胞、神经细胞的氧化损伤。00030004作为临床常用药物，依达拉奉在其生产、贮存、使用过程中由于灭菌。
6、等高温过程的存在，有可能产生杂质而导致药物质量下降。0005国内对于依达拉奉在生产、贮存等过程中的相关物质研究的较多，比如反应原料乙酰乙酸乙醋和苯肼，在依达拉奉注射液的制备及长期存放中产生的3,3二甲基1,1二苯基1H,1H4,4二吡唑5,54H,4H二酮等。对于依达拉奉原料药在存放过程中产生的有关物质报道较少。0006因此，对依达拉奉原料在制备和存放过程中产生的杂质及杂质制备方法、检测方法进行研究是十分有必要的。发明内容0007我们经研究发现，由于氧化反应等，依达拉奉原料在存放过程中会产生杂质，我们对放置一定时间的依达拉奉原料采用高效液相色谱进行分离检测，发现确有杂质峰，其中包括一种新的杂质。
7、化合物。具体方法为将上述依达拉奉原料用甲醇水冰醋酸455501的混合溶液溶解并定容，配置成依达拉奉含量为02MG/ML的样品，然后采用高效液相色谱法，色谱柱为AGILENTECLIPSEXDBC18，46150MM（35M），流动相A为甲醇水冰醋酸455501，流动相B为甲醇，流动相流速为08ML/MIN，柱温为20，检测波长为244NM，进样量为20ML。梯度洗脱如下说明书CN104098512A2/6页40008时间（MIN）流动相A比例（）流动相B比例（）010002210005236647236648010000009检测结果发现出峰时间为173MIN的化合物是一种新的化合物。0010。
8、本发明的目的之一即是提供此种如下式结构的新化合物0011Z23甲基5氧1苯基4,5二氢1H吡唑4基3E苯偶氮基2丁烯酸，以下简称化合物A。00120013在一定条件下，化合物A的烯醇式和酮式可以相互转化。0014本发明的目的之二是提供一种制备上述化合物A的方法，为实现上述目的，采用以下制备分离工艺0015将依达拉奉加入溶剂配制成溶液或浑浊液，再与过氧化氢水溶液进行反应后，旋去部分溶剂，用反相高效液相色谱进行分离，040下避光旋干后即得。0016进一步，依达拉奉和过氧化氢的质量比为1113，优选12125。0017再进一步，所述溶剂为有机溶剂，所述有机溶剂选自醇类、乙腈，醇类优选甲醇，所述依达拉。
9、奉与过氧化氢水溶液的反应温度为1520，反应时间为4872小时。0018再进一步，所述反相高效液相色谱采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱，流动相是有机相和水相的混合溶剂，检测波长为240254NM，优选244NM。0019再进一步，流动相中有机相和水相的体积比为45558020，所述有机相选自甲醇或乙腈，所述水相PH为3055，水相选自易挥发性弱酸水溶液，优选乙酸水溶液或甲说明书CN104098512A3/6页5酸水溶液。0020最终将化合物A用HPLC分析其纯度，并采用MS、NMR确证其结构。0021本发明的目的之三是提供一种检测上述化合物A的方法。该方法为采用高效液相色谱，以十八烷基。
10、硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为有机相和水相的混合溶剂，流动相流速为0709ML/MIN，检测波长为240254NM，其中所述流动相中有机相与水相的体积比为45558020。0022进一步，所述流动相选自甲醇水体系、甲醇缓冲盐体系、乙腈缓冲盐体系，优选甲醇乙酸水溶液，流动相流速为08ML/MIN，检测波长为244NM。0023依达拉奉为全合成脑卒中神经保护剂，制剂及存放过程中由于存在高温灭菌、氧化等因素，其原料药或制剂中可能产生化合物A而导致质量下降。本发明采用的化合物A的制备方法简单，产品纯度高，检测方法简便，可作为依达拉奉杂质对照品，便于控制依达拉奉原料药及其相关制剂中化合物A的量。附图说明。
11、0024图1为依达拉奉、原料及杂质定位图。（其中色谱峰1苯肼；2依达拉奉；3Z23甲基5氧1苯基4,5二氢1H吡唑4基3E苯偶氮基2丁烯酸。）0025图2为依达拉奉及杂质定位图。（其中色谱峰A为Z23甲基5氧1苯基4,5二氢1H吡唑4基3E苯偶氮基2丁烯酸。）具体实施方式0026下面结合具体实施例对本发明作进一步阐述，但不限制本发明。0027依达拉奉原料药由吉林博大制药有限责任公司提供，其他所用试剂均为市售可得。0028实施例1化合物A的制备0029取依达拉奉原料药10G加入甲醇200ML溶解，缓慢加入质量分数为30的过氧化氢50ML，室温20搅拌48小时，10温度下旋去部分溶剂，溶液备用。0。
12、030然后采用反相高效液相色谱仪对上述溶液进行分离，色谱条件为色谱柱为WATERSNOVAPAKC18，6M，190300MM，流动相A为甲醇水冰醋酸455501，流动相B为甲醇，流速20ML/MIN，柱温20，检测波长244NM，进样量05ML。梯度洗脱如下0031时间（MIN）流动相A比例（）流动相B比例（）01000221000523664723664801000说明书CN104098512A4/6页60032采集相对保留时间为3036的制备液，10温度下旋干溶剂，得到化合物A5MG，收率0048。0033最终产品用核磁、质谱进行结构鉴定，附数据说明如下。0034化合物A00351、LC。
13、MSESI分子离子峰（M1），M/Z3631；0036LCMSESI分子离子峰（M1），M/Z3612；0037MSMS碎片峰（ESI），M/Z3452；M/Z3171；M/Z771；0038（ESI），M/Z3171；M/Z2762。00392、NMR（CD3OD）0040化合物A在氘代甲醇中大部分以烯醇式形式存在0041004200430044实施例2化合物A的制备0045取依达拉奉原料药10G加入乙腈200ML溶解，缓慢加入质量分数为30的过氧化氢50ML，室温20搅拌48小时，10温度下旋去部分溶剂，溶液备用。0046然后采用反相高效液相色谱仪对上述溶液进行分离，色谱条件为色谱柱为WA。
14、TERSNOVAPAKC18，6M，190300MM，流动相A为水冰醋酸99901，流动相B为乙说明书CN104098512A5/6页7腈，流速20ML/MIN，柱温20，检测波长244NM，进样量05ML。梯度洗脱如下0047时间（MIN）流动相A比例（）流动相B比例（）075251075253045554045550048采集相对保留时间为2329的制备液，10温度下旋干溶剂，得到化合物A5MG，收率007。0049实施例3化合物A的检测0050样品的配制精密称取依达拉奉原料药10MG，置于50ML容量瓶中，用甲醇水冰醋酸455501的混合溶液溶解并定容，配置成依达拉奉含量为02MG/ML。
15、的样品，4控温，半小时内现配现做。0051色谱条件与检测0052仪器AGILENT1200HPLC0053色谱柱AGILENTECLIPSEXDBC18，46150MM（35M）；0054流动相A为甲醇水冰醋酸455501，流动相B为甲醇，流速08ML/MIN，柱温20，检测波长244NM，进样量20ML。梯度洗脱如下0055时间（MIN）流动相A比例（）流动相B比例（）010002210005236647236648010000056检测结果化合物A出峰时间为173MIN，原料苯肼出峰时间为18MIN。（附图1）0057实施例4化合物A的检测0058样品的配制精密称取依达拉奉原料药10MG，。
16、置于50ML容量瓶中，用乙腈溶解并定容，配置成依达拉奉含量为02MG/ML的样品，4控温，半小时内现配现做。0059色谱条件与检测0060仪器AGILENT1200HPLC0061色谱柱AGILENTECLIPSEXDBC18，46150MM（35M）；说明书CN104098512A6/6页80062流动相A为水冰醋酸99901，流动相B为乙腈，流速08ML/MIN，柱温20，检测波长244NM，进样量20ML。梯度洗脱如下0063时间（MIN）流动相A比例（）流动相B比例（）075252075256055457055457175250064检测结果化合物A出峰时间为277MIN。（附图2）说明书CN104098512A1/1页9图1图2说明书附图CN104098512A。