说明书作为HCV入胞抑制剂的大环化合物
相关申请的交叉参考
本申请要求2013年2月7日提交的美国临时专利申请61/761,868的优先权，在此引入本申请作为参考。
技术领域
本发明涉及新的式I化合物，包括其药学上可接受的盐，所述化合物具有抗丙型肝炎病毒(HCV)的活性并可用于治疗HCV感染者。本发明也涉及组合物和使用这些化合物的方法。
背景技术
据估计世界范围内1.7亿人患有慢性丙型肝炎病毒(HCV)，其中仅美国就有3至4百万感染者(Boyer，N.和Marcellin，P.J.Hepatology.2000，32:98-112；Alter，M.J.等人Engl.J.Med.1999，341:556-562)。在二十世纪九十年代中期以前，用受感染的血制品输血为HCV传染的主要途径。在血液筛查方法引入之后，经注射药物使用的传染变成主要的危险因素。慢性感染通常导致严重的肝并发症的发展，这些并发症包括纤维化、肝硬化和肝细胞癌。在美国，HCV感染也是原位肝移植的主要原因。疾病进展与病毒和细胞因素的相关程度尚未得到完全了解。
在HCV基因组的核苷酸和所编码的氨基酸序列内发现相当大的异质性(Simmonds，P.J.Gen.Virology.2004，85:3173-3188)。基于该序列多样性，已经描述了六种主要的基因型和多个相关的亚型。HCV的各基因型在其世界范围内的分布上存在差别，且尽管对于基因型对发病机理和治疗的可能的影响进行了多项研究，HCV的基因异质性的临床重要性仍旧是难以弄清的。
HCV的医学治疗受疫苗或批准的特异性地靶向所述病毒的治疗的缺乏所局限。目前，患者接受用胃肠外给药的PEG化的α干扰素和口服利巴韦林的组合治疗。基因型1的HCV最难以治疗且该病毒的消除(持续的病毒学响应)仅在大约50％的患者上得以实现(Fried，M.W.等人N.Engl.J.Med. 2002，347:975-982；Zeumzem，S.Nature Clinical Practice.2008，5:610-622)。该治疗响应弱，并且通过该治疗所引起的通常是严重的副作用，这突出了对改善的抗病毒药物(具有更好的功效和安全谱)的需要。
HCV为具有单股的有义RNA基因组的黄病毒科病毒家族的成员。在感染宿主细胞后，所述9.6Kb基因组被翻译成大约3,000个氨基酸的多聚蛋白前体(在Lindenbach，B.D.和Rice，C.M.Nature.2005，436:933-938；Moradpour，D，Penin，F.和Rice，C.M.Nature Reviews.2007，5:453-463中进行了综述)。细胞和病毒蛋白酶的翻译后加工导致至少10个单独的病毒蛋白的产生。结构蛋白(按照定义发现于成熟病毒体中)包括核心、E1、E2和可能的p7，并且起始于多聚蛋白的氨基末端区域。核心蛋白组装至病毒核衣壳中。E1和E2糖蛋白形成围绕病毒颗粒的脂质被膜内发现的异二聚体，并调节宿主细胞受体结合和病毒进入细胞。不清楚p7是否为结构蛋白，并且仍需要确定其在复制中所扮演的角色。然而据信p7在细胞膜中形成离子通道，防止细胞内隔室(病毒粒子在其中组装)的酸化，且已经显示p7对于病毒复制和组装是关键的。非结构蛋白NS2、NS3、NS4A、NS4B、NS5A和NS5B是通过多聚蛋白的羧基末端区域的成熟切割而产生的。NS2和NS3的氨基末端形成NS2-3金属蛋白酶，其在NS2-NS3结合处切割。此外，NS2牵涉到新生病毒粒子的组装和释出中。NS3蛋白在其氨基末端区域含有丝氨酸蛋白酶，且在其羧基末端区域含有核苷酸依赖性RNA解螺旋酶。NS3与NS4A蛋白形成异源二聚体，构成了调节NS3的多聚蛋白下游的切割的活性蛋白酶(在NS3-NS4A切割位点为顺式，在剩余的NS4A-NS4B、NS4B-NS5A、NS5A-NS5B位点为反式)。NS3蛋白与NS4A的复合物形成对加工事件而言似乎是必须的，其提高了所有位点的蛋白水解效率。NS3蛋白也显示出核苷三磷酸酶和RNA解螺旋酶的活性。已经显示NS4B蛋白对于HCV蛋白向在细胞内的改变的膜结构中的复制复合体的定位而言是重要的。NS5B编码牵涉HCV的复制的RNA依赖性RNA聚合酶。
亚基因组HCV复制子(含有融合至非结构蛋白或全长的多聚蛋白的编码序列的非翻译区5’和3’)能够进行翻译、病毒蛋白的表达和在培养细胞内的复制(Lohmann，V.等人Science.1999，285:110-113；Moradpour，D，Penin，F.和Rice，C.M.Nature Reviews.2007，5:453-463)。已经证实所述复制子系 统对于靶向与这些功能有关的非结构蛋白的抑制剂的鉴定是有价值的。然而，仅有限的HCV基因组的亚组已经用于产生功能型复制子。
其它系统已经用于研究调节向宿主细胞的进入的HCV结构蛋白的生物学。例如，重组体杆状病毒感染的细胞中制备的病毒样颗粒(具有HCV核心、E1和E2蛋白)也已经用于研究HCV E1和E2蛋白的功能(Barth，H.等人J.Biol.Chem.2003，278:41003-41012)。此外，已经开发了假型化系统(pseudotyping system)，其中E1和E2糖蛋白用于功能上代替逆转录病毒的糖蛋白(Bartosch，B.，Dubuisson，J.和COsset，F.-L.J.Exp.Med.2003，197:633-642；Hsu，M.等人Proc.Natl.Acad.Sci.USA.2003，100:7271-7276)。这些系统产生了以据信类似于天然病毒的方式结合并进入宿主细胞的HCV假颗粒，因此使其成为了研究病毒进入步骤以及鉴定阻断该过程的抑制剂的方便的工具。
近来，分离了全长的基因型2a HCV克隆(即JFH1)并验证了在体外复制的能力。通过重复的传代和在细胞培养中适应，制备了具有增加的效价的有传染性的病毒(Lindenbach，B.D.等人Science.2005，309:623-626；Wakita，T.等人Nature Med.2005，11:791-796)。与HCV复制子或假型化系统相比，有传染性的病毒可用于研究完整的HCV复制循环，这不仅包括鉴定复制蛋白的抑制剂，还包括鉴定牵涉病毒感染的早期步骤(入胞和脱壳)和子代病毒的生成(基因组包装、核衣壳组装、病毒粒子包封和释出)的那些。
已公开了三嗪。参见WO 2009/091388和US 2009/0286778。
本发明提供了技术优势，例如，所述化合物是新的并且有效对抗丙型肝炎。此外，所述化合物提供了药学用途的优势，例如，关于其作用机理、结合、抑制功效、靶向选择性、溶解度、安全谱或生物利用度中的一种或多种。
发明内容
本发明的一个方面为式I化合物，包括其药学上可接受的盐：
其中
a、b和c均为氮；
或a和b为氮，而c为-CH；
或b和c为氮，而a为-CH；
或a和c为氮，而b为-CH；
Q为亚烷基或亚烯基链，其含有1-2个选自氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、高哌嗪二基、稠合双环二胺、螺双环二胺、桥接双环二胺、内酰胺、1,5,9-三氮杂环十二烷和COCO的基团以及0-6个选自以下的基团：O、NR3、S、S(O)、S(O2)、C(O)O、C(O)NR4、OC(O)NR4、NR4C(O)NR4和Z，使得环A为13-32元，条件是任何O或S原子不直接键合至另一O或S原子；并且其中所述亚烷基和亚烯基链进一步被0-6个选自以下的取代基所取代：烷基、羟基、烷氧基、R6、(R6)烷基和苯基，其中所述苯基取代基进一步被0-4个氰基、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基或卤代烷氧基取代基所取代；
R1选自烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、环烷基、羟基环烷基、烷氧基环烷基、卤代环烷基、环烯基、茚满基、烷基羰基或苄基，其中所述苄基基团被0-3个选自以下的取代基所取代：卤素、烷基、卤代烷基、环烷基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、羟基和氰基；
R2选自氰基、氢、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基和Ar；
R3选自氢、CN、烷基、芳基、杂芳基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、(氨基)烷基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基((烷基羰基)氨基)烷基、((卤代烷基羰基)氨基)烷基、((烷氧基羰基)氨基)烷基、((苄基氧基羰基)氨基)烷基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、苄基氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基和二烷基氨基羰基；和其中所述芳基、杂芳基、烷基和环烷基可被0-3个选自以下的取代基所取代：烷基、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基、Ar、COOH、OH、NO2、氨基、酰氨基、烷氧基和烷基氧基羰基氨 基；
R4选自氢、CN、烷基、芳基、杂芳基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、(氨基)烷基、(烷基氨基)烷基和(二烷基氨基)烷基；和其中所述芳基、杂芳基、烷基和环烷基可被0-3个选自以下的取代基所取代：烷基、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基、Ar、COOH、OH、NO2、氨基、酰氨基、烷氧基和烷基氧基羰基氨基；
R5选自氢、CN、烷基、芳基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、(氨基)烷基、(烷基氨基)烷基和(二烷基氨基)烷基；和其中所述芳基、烷基和环烷基可被0-3个选自以下的取代基所取代：烷基、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基、Ar、COOH、OH、NO2、氨基、酰氨基、烷氧基和烷基氧基羰基氨基；
R6为吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基，并且被0-3个选自烷基、烷基羰基、烷氧基羰基和苄基氧基羰基的取代基所取代；
Ar选自苯基、五元杂环基、六元杂环基、萘基和双环杂环基；
X选自O、CH2、CO、CO2和C(O)NR5；以及
Z选自C3-7亚环烷基、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、亚苯基、吡咯烷二基、哌啶二基、哌嗪二基、高哌嗪二基、稠合双环二胺、螺双环二胺、桥接双环二胺、内酰胺、1,5,9-三氮杂环十二烷。
本发明也涉及包含式I化合物(包括其药学上可接受的盐)和药学上可接受的载体的药物组合物。
此外，本发明提供一种或多种治疗丙型肝炎感染的方法，其包括向患者给予治疗有效量的式I化合物。
作为本发明的部分，也提供一种或多种制备式I化合物的方法。
本发明涉及这些以及下文中描述的其它重要目的。
具体实施方式
除非在本申请的其它地方另有明确阐述，以下术语具有以下含义。“H”是指氢，包括其同位素，诸如氘。“卤素”表示氟、氯、溴或碘。“烷基”表示由1-6个碳构成的直链或支链烷基基团。“烯基”表示具有至少一个双键的由2-6个碳构成的直链或支链烷基基团。“环烷基”表示由3-8个碳构成的单环系统。“亚烷基”表示直链或支链二价烷基基团。“亚烯基”表示具有至少一个 双键的直链或支链二价烷基基团。“亚环烷基”表示由3-7个碳构成的二价环烷烃部分并包括偕二价(gem-divalency)(例如1,1-环丙二基)以及非偕二价(例如，1,4-环己二基)。“亚烯烷基(alkylidinyl)”表示二价烯烃取代基，其中二价出现于烯烃的同一个碳上。具有取代的烷基部分的“羟基烷基”、“烷氧基”和其它术语包括烷基部分由1-6个碳原子构成的直链和支链异构体。“卤代烷基”和“卤代烷氧基”包括从单卤代取代的烷基至全卤代取代的烷基的所有卤代异构体。“芳基”包括碳环和杂环芳香族取代基。亚苯基为二价苯环。“1,4-亚苯基”表示相对于二价部分的区域化学的1,4-苯二基。带括号的和带多层括号的术语意图为本领域技术人员阐明键合关系。例如，诸如((R)烷基)的术语表示被取代基R进一步取代的烷基取代基。
除非另有指明，上述取代基可以在任何合适的附着点连接。然而，正如本领域技术人员所理解的那样，应当理解本发明所涵盖的化合物为化学上稳定的那些。此外，本公开所涵盖的化合物为适合地稳定的用作药剂的那些。
本发明包括该化合物所有药学上可接受的盐形式。药学上可接受的盐为其中抗衡离子并不显著地对化合物的生理活性或毒性做出贡献且由此起药理学上等价物作用的那些。这些盐可以根据常规有机技术采用可商购的试剂来制备。一些阴离子盐形式包括乙酸盐、醋硬脂酸盐、苯磺酸盐、溴化物、樟脑磺酸盐、氯化物、柠檬酸盐、延胡索酸盐、葡萄糖醛酸盐(glucouronate)、氢溴酸盐、氢氯酸盐、氢碘酸盐、碘化物、乳酸盐、马来酸盐、甲磺酸盐、硝酸盐、扑酸盐、磷酸盐、琥珀酸盐、硫酸盐、酒石酸盐、甲苯磺酸盐和昔萘酸盐(xinofoate)。一些阳离子盐形式包括铵盐、铝盐、N,N-二苄基乙二胺盐(benzathine)、铋盐、钙盐、胆碱盐、二乙胺盐、二乙醇胺盐、锂盐、镁盐、葡甲胺盐、4-苯基环己胺盐、哌嗪盐、钾盐、钠盐、氨丁三醇盐(tromethamine)和锌盐。
本发明的一些化合物具有不对称碳原子(参见例如下述结构)。本发明包括所有立体异构体形式，包括对映异构体和非对映异构体以及立体异构体诸如外消旋体的混合物。一些立体异构体可以使用本领域已知的方法来制备。所述化合物和相关的中间体的立体异构体混合物可以根据本领域通常已知的方法分离成单个异构体。在下述方案和表格中的分子结构的描述中所使用的楔形线(wedges)或虚线(hashes)仅意图表示相对的立体化学，而不应被解释为暗示绝对立体化学指定。
本发明意图包括在本化合物中所出现的原子的所有同位素。同位素包括具有相同的原子序数但不同的质量数的那些原子。作为一般性的实例而不是限制，氢的同位素包括氘和氚。碳的同位素包括13C和14C。同位素标记的本发明的化合物通常可以通过本领域技术人员已知的常规技术或通过类似于本申请所描述的那些的方法，使用合适的同位素标记的试剂来代替以其它方式采用的非标记的试剂来制备。这样的化合物可具有多种潜在的用途，例如在生物学活性的确定中作为标准和试剂。在稳定同位素的情况下，这样的化合物可具有有利地修饰生物学、药理学或者药代动力学性质的潜质。
如上所述，本发明涉及式I化合物，包括其药学上可接受的盐：
其中
a、b和c均为氮；
或a和b为氮，而c为-CH；
或b和c为氮，而a为-CH；
或a和c为氮，而b为-CH；
Q为亚烷基或亚烯基链，其含有1-2个选自氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、高哌嗪二基、稠合双环二胺、螺双环二胺、桥接双环二胺、内酰胺、1,5,9-三氮杂环十二烷和COCO的基团以及0-6个选自以下的基团：O、NR3、S、S(O)、S(O2)、C(O)O、C(O)NR4、OC(O)NR4、NR4C(O)NR4和Z，使得环A为13-32元，条件是任何O或S原子不直接键合至另一O或S原子；并且其中所述亚烷基和亚烯基链进一步被0-6个选自以下的取代基所取代：烷基、羟基、烷氧基、R6、(R6)烷基和苯基，其中所述苯基取代基进一步被0-4个氰基、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基或卤代烷氧基取代基所取代；
R1选自烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、卤代烷基、环烷基、羟基环烷基、烷氧基环烷基、卤代环烷基、环烯基、茚满基、烷基羰基或苄基，其中所述苄基基团被0-3个选自以下的取代基所取代：卤素、烷基、卤代烷基、环烷 基、烷氧基、卤代烷氧基、烯基、炔基、羟基和氰基；
R2选自氰基、氢、卤素、烷基、卤代烷基、烷氧基、卤代烷氧基和Ar；
R3选自氢、CN、烷基、芳基、杂芳基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、(氨基)烷基、(烷基氨基)烷基、(二烷基氨基)烷基((烷基羰基)氨基)烷基、((卤代烷基羰基)氨基)烷基、((烷氧基羰基)氨基)烷基、((苄基氧基羰基)氨基)烷基、烷基羰基、芳基羰基、烷氧基羰基、芳基氧基羰基、苄基氧基羰基、氨基羰基、烷基氨基羰基和二烷基氨基羰基；和其中所述芳基、杂芳基、烷基和环烷基可被0-3个选自以下的取代基所取代：烷基、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基、Ar、COOH、OH、NO2、氨基、酰氨基、烷氧基和烷基氧基羰基氨基；
R4选自氢、CN、烷基、芳基、杂芳基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、(氨基)烷基、(烷基氨基)烷基和(二烷基氨基)烷基；和其中所述芳基、杂芳基、烷基和环烷基可被0-3个选自以下的取代基所取代：烷基、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基、Ar、COOH、OH、NO2、氨基、酰氨基、烷氧基和烷基氧基羰基氨基；
R5选自氢、CN、烷基、芳基、环烷基、烯基、环烯基、炔基、(氨基)烷基、(烷基氨基)烷基和(二烷基氨基)烷基；和其中所述芳基、烷基和环烷基可被0-3个选自以下的取代基所取代：烷基、2-氧代-1,3-二氧杂环戊烯基、Ar、COOH、OH、NO2、氨基、酰氨基、烷氧基和烷基氧基羰基氨基；
R6为吡咯烷基、哌啶基或哌嗪基，并且被0-3个选自烷基、烷基羰基、烷氧基羰基和苄基氧基羰基的取代基所取代；
Ar选自苯基、五元杂环基、六元杂环基、萘基和双环杂环基；
X选自O、CH2、CO、CO2和C(O)NR5；以及
Z选自C3-7亚环烷基、氧杂环丁烷、氮杂环丁烷、亚苯基、吡咯烷二基、哌啶二基、哌嗪二基、高哌嗪二基、稠合双环二胺、螺双环二胺、桥接双环二胺、内酰胺、1,5,9-三氮杂环十二烷。
更优选的化合物，包括其药学上可接受的盐，选自：
此外，其它优选的化合物，包括其药学上可接受的盐，选自：
药物组合物和治疗方法
所述化合物显示对抗HCV NS5B的活性并可用于治疗HCV和HCV感染。因此，本发明的另一个方面为包含化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体的组合物。
本发明的另一个方面为进一步包含具有抗HCV活性的化合物的组合物。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的化合物为干扰素或利巴韦林的组合物。本发明的另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化干扰素α、同感干扰素(consensus interferon)、干扰素α2A、干扰素λ和淋巴细胞样干扰素τ。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的化合物为环孢菌素的组合物。本发明的另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺的组合物。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的化合物有效地抑制靶标功能以治疗HCV感染的组合物，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV入胞、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH和核苷类似物。
本发明的另一个方面为包含化合物或其药学上可接受的盐、药学上可接受的载体、干扰素和利巴韦林的组合物。
本发明的另一个方面为抑制HCV复制子功能的方法，其包括使HCV复制子与化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明的另一个方面为抑制HCV NS5B蛋白功能的方法，其包括使HCV NS5B蛋白与化合物或其药学上可接受的盐接触。
本发明的另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述化合物有效地抑制HCV复制子的功能。在另一个实施方案中，所述化合物可有效地抑制HCV NS5B蛋白的功能。
本发明的另一个方面为治疗患者中HCV感染的方法，其包括向所述患者给予治疗有效量的化合物或其药学上可接受的盐，并组合给予(之前、之后或同时)具有抗HCV活性的另一化合物。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的其它化合物为干扰素或利巴韦林的方法。
本发明的另一个方面为其中所述干扰素选自干扰素α2B、PEG化干扰素α、同感干扰素、干扰素α2A、干扰素λ和淋巴细胞样干扰素τ的方法。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的其它化合物为环孢菌素的方法。
本发明的另一个方面为其中所述环孢菌素为环孢菌素A的方法。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的其它化合物选自白细胞介素2、白细胞介素6、白细胞介素12、提高1型辅助T细胞应答发展的化合物、干扰RNA、反义RNA、咪喹莫特、利巴韦林、肌苷5'-单磷酸脱氢酶 抑制剂、金刚烷胺和金刚乙胺的方法。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的其它化合物有效地抑制靶标功能以治疗HCV感染的方法，所述靶标选自HCV金属蛋白酶、HCV丝氨酸蛋白酶、HCV聚合酶、HCV解螺旋酶、HCV NS4B蛋白、HCV入胞、HCV组装、HCV释出、HCV NS5A蛋白、IMPDH和核苷类似物。
本发明的另一个方面为其中具有抗HCV活性的其它化合物有效地抑制除HCV NS5B蛋白之外的HCV生命周期中的靶标的功能的方法。
“治疗有效的”表示提供有意义的患者益处所需要的药剂的量，如肝炎和HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“患者”表示感染有HCV病毒且适于治疗的人，如肝炎和HCV感染领域中的执业医师所理解的那样。
“治疗”、“疗法”、“给药方案”、“HCV感染”及相关术语如肝炎和HCV感染领域中的执业医师所理解的那样来使用。
本发明的化合物通常以药物组合物的形式来给予，所述组合物包含治疗有效量的化合物或其药学上可接受的盐及药学上可接受的载体，且可含有常规的赋形剂。药学上可接受的载体为具有可接受安全性的那些常规已知载体。组合物涵盖所有常见固体和液体形式，包括例如胶囊剂、片剂、锭剂和粉剂以及液体混悬剂、糖浆剂、酏剂和溶液。组合物使用一般制剂技术来制备，且常规的赋形剂(诸如粘合剂和润湿剂)和媒介物(诸如水和醇)通常用于组合物。参见，例如，Remington's Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Company，Easton，PA，17th edition，1985。
固体组合物通常以剂量单位形式配制且提供约1至1000mg活性成分/剂量的组合物是优选的。剂量的一些实例为1mg、10mg、100mg、250mg、500mg和1000mg。通常，其它药剂将以类似于临床上使用的该类药剂的单位范围而存在。典型地，其为0.25-1000mg/单位。
液体组合物通常在剂量单位范围内。通常，液体组合物将在1-100mg/mL的单位剂量范围内。剂量的一些实例为1mg/mL、10mg/mL、25mg/mL、50mg/mL和100mg/mL。通常，其它药剂将以类似于临床上使用的该类药剂的单位范围而存在。典型地，其为1-100mg/mL。
本发明涵盖所有常规的给药方式；口服和胃肠外方法是优选的。通常，给药方案将类似于临床上使用的其它药剂。典型地，每日剂量将为 1-100mg/kg体重/日。通常，口服需要更多的化合物而胃肠外需要更少。然而，特定的给药方案将由医师使用合理的医学判断来确定。
本发明也涵盖其中所述化合物以组合疗法的方式给予的方法。即，所述化合物可以与用于治疗肝炎和HCV感染的其它药剂组合，但以单独的形式使用。在这些组合方法中，所述化合物将通常以约1-100mg/kg体重每日的每日剂量与其它药剂组合给予。其它药剂通常将以治疗上使用的量给予。然而，特定的给药方案将由医师使用合理的医学判断来确定。
适合于组合物和方法的化合物的一些实例列于表1中。
表1.
合成方法
所述化合物可以通过本领域可用的方法以及下面描述的那些(并包括本领域能力内的变化)来制备。一些试剂和中间体是本领域已知的。其它试剂和中间体可以通过本领域已知的方法使用容易获得的物质制备。用于描述所述化合物合成的变量(例如编号的“R”取代基)仅意图举例说明如何制备所述化合物且并不意图与权利要求或说明书的其它部分的变量相混淆。下述方法是用于举例说明的目的且并不意图限制本发明的范围。
方案中所使用的缩写通常遵循本领域中所使用的惯例。在说明书和实施例中所使用的化学缩写按如下所定义：“NaHMDS”为双(三甲基硅烷基)氨基钠；“DMF”为N,N-二甲基甲酰胺；“MeOH”为甲醇；“NBS”为N-溴代琥珀酰亚胺；“Ar”为芳基；“TFA”为三氟乙酸；“LAH”为氢化铝锂；“BOC”、“DMSO”为二甲亚砜；“h”为小时；“rt”为室温或保留时间(上下文将指明)；“min”为分钟；“EtOAc”为乙酸乙酯；“THF”为四氢呋喃；“EDTA”为乙二胺四乙酸；“Et2O”为乙醚；“DMAP”为4-二甲基氨基吡啶；“DCE”为1,2-二氯乙烷；“ACN”为乙腈；“DME”为1,2-二甲氧基乙烷；“HOBt”为1-羟基苯并三唑水合物；“DIEA”为二异丙基乙胺，“Nf”为CF3(CF2)3SO2-；以及“TMOF”为原甲酸三甲酯。
缩写按如下所定义：“1x”为一次，“2x”为两次，“3x”为三次，“℃”为摄氏度，“eq”为当量，“g”为克，“mg”为毫克，“L”为升，“mL”为毫升，“μL”为微升，“N”为当量浓度(normal)，“M”为摩尔，“mmol”为毫摩尔，“min”为分钟，“h”为小时，“rt”为室温，“RT”为保留时间，“atm”为大气压，“psi”为磅/平方英寸，“conc.”为浓缩的或浓缩物，“sat”或“sat’d”为饱和的，“MW”为分子量，“mp”为熔点，“ee”为对映体过量，“MS”或“Mass Spec”为质谱，“ESI”为电喷射离子化质谱，“HR”为高分辨，“HRMS”为高分辨质谱，“LCMS”为液相色谱质谱，“HPLC”为高压液相色谱，“RP HPLC”为反相HPLC，“TLC”或“tlc”为薄层色谱，“NMR”为核磁共振光谱，“1H”为质子，“δ”为delta，“s”为单峰，“d”为双峰，“t”为三重峰，“q”为四重峰，“m”为多重峰，“br”为宽峰，“Hz”为赫兹，且“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”为本领域技术人员所熟悉的立体化学命名。
化学实验
化合物可以通过本领域已知的方法制备，包括下文描述的那些以及本领 域技术内的变化方案。一些试剂和中间体在本领域中是已知的。其他试剂和中间体可以通过本领域已知的方法使用容易获得的材料制备。用来描述合成化合物的变量(如，编号为“R”取代基)仅意在诠释如何制备化合物，并不意在与权利要求或在本说明书其他部分中的变量混淆。以下方法用于解释目的并且不意在限制本发明范围。
在方案中使用的缩写一般根据本领域中使用的约定。在说明书和实施例中使用的化学缩写并如下定义：“NaHMDS”表示双(三甲基甲硅烷基)铵化锂；"DMF"表示N,N-二甲基甲酰胺；“MeOH”表示甲醇；“NBS”表示N-溴代琥珀酰亚胺；“Ar”表示芳基；"TFA"表示三氟乙酸；“LAH”表示氢化锂铝；“BOC”、“DMSO”表示二甲基亚砜；“h”表示小时；“rt”表示室温或保留时间(上下文会有说明)；“min”表示分钟；"EtOAc"表示乙酸乙酯；"THF"表示四氢呋喃；“EDTA”表示乙二胺四乙酸；“Et2O”表示二乙醚；"DMAP"表示4-二甲基氨基吡啶；“DCE”表示1,2-二氯乙烷；“ACN”表示乙腈；“DME”表示1,2-二甲氧基乙烷；“HOBt”表示1-羟基苯并三唑水合物；“DIEA”表示二异丙基乙胺；“Nf”表示CF3(CF2)3SO2-；和“TMOF”表示原甲酸三甲基酯。
缩写定义如下：“1x”表示一次，“2x”表示两次，“3x”表示三次，“℃”表示摄氏度，“eq”表示当量，“g”表示克，“mg”表示毫克，“L”表示升，“mL”表示毫升，“μL”表示微升，“N”表示摩尔浓度，“M”表示摩尔，“mmol”表示毫摩尔，“min”表示分钟，“h”表示小时，“rt”表示室温，“RT”表示保留时间，“atm”表示大气压，“psi”表示磅每平方英寸，“conc.”表示浓(缩)，“sat”或“sat’d”表示饱和的，“MW”表示分子量，“mp”表示熔点，“ee”表示对应异构体过量，“MS”或“Mass Spec”表示质谱，“ESI”表示电喷射离子化质谱，“HR”表示高分辨，“HRMS”表示高分辨质谱，“LCMS”表示液相色谱质谱，“HPLC”表示高压液相色谱，“RP HPLC”表示反相HPLC，“TLC”或“tlc”表示薄层色谱，“NMR”表示核磁共振谱，“1H”表示质子，“δ”表示delta，“s”表示单峰，“d”表示双重峰，“t”表示三重峰，“q”表示四重峰，“m”表示多重峰，“br”表示宽峰，“Hz”表示赫兹，以及“α”、“β”、“R”、“S”、“E”和“Z”时本领域技术人员熟悉的立体化学上的符号。
对于在0000系列中的化合物部分，所有液相色谱(LC)数据记录于Shimadzu LC-10AS或LC-20AS液相色谱(使用SPD-10AV或SPD-20A UV-Vis检测器)上且质谱(MS)数据用LC的Micromass Platform以电喷射模 式确定。
HPLC方法(即，化合物分离)。将通过制备性HPLC纯化的化合物在甲醇(1.2mL)中稀释并使用Shimadzu LC-8A或LC-10A或Dionex APS-3000或Waters AcquityTM自动化制备性HPLC系统纯化。
制备1001：
步骤1：4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(1.2g)、1,3-二溴丙烷(0.739g)和K2CO3(0.675g)在丙酮(20mL)中的悬浮液于85℃加热16小时。混合物以水稀释并以EtOAc(3x150mL)淬灭。合并各有机层，以水、盐水洗涤，经MgSO4干燥并真空浓缩。剩余物通过硅胶柱纯化(己烷:EtOAc＝3:1)，得到4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(0.35g)。
步骤2：向4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(350mg)在CH2Cl2(4mL)中的混合物添加TFA(0.5mL)。将混合物于室温搅拌6小时，然后真空除去溶剂。剩余物不经进一步纯化以其本身用于后续步骤。
步骤3：向4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸(60mg)在DMF(1mL)中的溶液添加O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(35mg)、2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯(24mg)和iPr2NEt(28mg)。将反应混合物于室温搅拌2小时，然后通过水淬灭。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到7-(4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯。
步骤4：将TFA(0.106mL)添加7-(4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨 基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰基)-2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯(70mg)在CH2Cl2(7mL)中的溶液。将反应混合物于室温搅拌16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到(4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)(2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)甲酮。
步骤5：(4-((4-((4-(3-溴丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)(2,7-二氮杂螺[4.4]壬-2-基)甲酮(40mg)和K2CO3(25mg)在乙腈(4mL)中的混合物在密封试管中于115℃加热16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到化合物1001。
制备1002：从步骤1至步骤3，化合物1002was prepared根据合成化合物1001的相同方法，使用1,5,9-三氮杂环十二烷代替2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料来制备。制得1002的最终步骤显示如下，其根据制备1001中的步骤5的相同方法。
制备2001:
步骤1：4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(0.6g)、3-氯-2-(氯甲基)丙-1-烯(0.23g)和K2CO3(0.34g)在丙酮(15mL)中的悬浮液加热至回流保持16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过硅胶柱纯化(己烷：EtOAc＝6：1至3：1)，得到4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(280mg)。
步骤2：4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(580mg)在CH2Cl2(3mL)和TFA(2mL)中的溶液于室温搅拌16小时。真空除去全部溶剂并且剩余物不经纯化用于后续步骤中。
步骤3：向4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸(62mg)和TBTU(41.8mg)在DMF(2mL)中的溶液添加(氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁基酯(22.04mg)和iPr2NEt(0.124mL)。于室温搅拌2小时后，混合通过制备性HPLC纯化，得到((1-(4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(30mg).
步骤4：向((1-(4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰基)氮杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯(30mg)在CH2Cl2(5mL)中的溶液添加TFA(1mL)。将混合物于室温搅拌3小时。真空除去溶剂并且剩余物以EtOAc(50mL)稀释，以10％NaHCO3(20mL)、盐水(30mL)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到(3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基)(4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)甲酮(22mg)。
步骤5：向(3-(氨基甲基)氮杂环丁烷-1-基)(4-((4-((4-((2-(氯甲基)烯丙基)氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)甲酮(30mg)在乙腈(5mL)中的溶液添加NaHCO3(8.51mg)。将混合物于115℃搅拌16小时，然后真空除去溶剂。剩余物通过制备性HPLC纯化，得到2001(12.3mg)。
制备2002：化合物2002根据合成化合物2001的相同方法，使用1,4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁基酯代替(氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。
制备2003：化合物2003从合成化合物2001的相同方法，使用2,6-二氮杂螺[3.3]庚烷-2-甲酸叔丁基酯代替(氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。
制备2003：化合物2003从合成化合物2001的相同方法，使用六氢吡咯并[3,4-c]吡咯-2(1H)-甲酸叔丁基酯代替(氮杂环丁烷-3-基甲基)氨基甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。
制备3001:
步骤1：向4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(1.0g)、(R)-3-溴-2-甲基丙-1-醇(0.311g)和Ph3P(0.534g)在THF(5mL)中的溶液，于0℃添加氮杂二羧酸二异丙基酯(0.411g)。将反应混合物于室温搅拌16小时。真空除去溶剂并且剩余通过硅胶柱纯化(乙烷：EtOAc＝9：1至4：1)，得到(R)-4-((4-((4-(3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯。
步骤2：将TFA(0.46mL)添加至干(R)-4-((4-((4-(3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(0.25g)在CH2Cl2(2mL)中的溶液。将反应混合物于室温搅拌16小时。真空除去全部溶剂并且剩余物不经纯化用于后续步骤中。
步骤3：将O-苯并三唑-1-基-N,N,N',N'-四甲基脲鎓四氟硼酸盐(34mg)、3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸叔丁基酯(21mg)和iPr2NEt(27mg)添加至(R)-4-((4-((4-(3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪 -2-基)氨基)苯甲酸(60mg)在DMF(1mL)中的溶液。将反应混合物于室温搅拌2小时。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到(3-(4-((4-((4-((R)-3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁基酯。
步骤4：将TFA(0.08mL)添加至(3-(4-((4-((4-((R)-3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰基)-3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基)氨基甲酸叔丁基酯(50mg,0.067mmol)在CH2Cl2(1mL)中的溶液。将反应混合物于室温搅拌16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到(6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)(4-((4-((4-((R)-3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)甲酮。
步骤5：(6-氨基-3-氮杂双环[3.1.0]己-3-基)(4-((4-((4-((R)-3-溴-2-甲基丙氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯基)甲酮(25mg)和K2CO3(5.31mg)在乙腈(4mL)中的混合物在密封试管中于115℃加热16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到化合物3001.
制备3002：化合物3002根据合成化合物3001的相同方法，使用六氢-1H-吡咯并[3,4-c]吡啶-5(6H)-甲酸叔丁基酯代替3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。
制备3003：从步骤1至步骤3，化合物3003根据合成化合物3001的相同方法，使用1,5-二甲基-3,7-二氮杂双环[3.3.1]壬-9-酮代替3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。得到3003的最终步骤显示如下，其根据在制备3001中的步骤5相同步骤。
制备4001、4002、4003、4004和4005：
步骤1：向4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸叔丁基酯(1g)在CH2Cl2(5mL)中的溶液添加TFA(3mL)。将混合物于室温搅拌16小时。真空除去溶剂得到4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸(0.8g)。
步骤2：向4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酸(2.7g)和TBTU(2.190g)在NMP(20mL)中的溶液添加(3-氨基-2,2-二甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(1.51g)和iPr2NEt(4.33mL)。于室温搅拌2小时后，混合物以100mL的水稀释并以EtOAc(2x 150mL)萃取。合并有机层，以盐水(100mL)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。剩余物通过硅胶柱纯化，得到(3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(2.5g)。
步骤3：将TFA(2mL)添加至(3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(0.6g)在CH2Cl2(10mL)中的溶液。将混合物于室温搅拌4小时。真空除去溶剂得到N-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(0.5g)。
步骤4：2-氯-2-氧代乙酸甲酯(0.13g)于室温递交至N-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(0.5g)在THF(15mL)中的溶液，接着添加iPr2NEt(0.67mL)。将混合物于室温搅拌4小时，然后以EtOAc(200mL)稀释，以水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。剩余物通过硅胶柱纯化(己烷：EtOAc＝1：1至1：3)，得到2-((3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基)-2-氧代乙酸甲基酯(0.6g)。
步骤5：将在水(5mL)中的K2CO3(0.502g)添加至2-((3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基)-2-氧代乙酸甲基酯(0.55g)在丙酮(10mL)中的溶液。将混合物于室温搅拌16小时，然后以1N HCl酸化至pH～3。真空除去丙酮并且混合物以EtOAc(100mL)稀释，以水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩，得到2-((3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基)-2-氧代乙酸(480mg)，以其本身使用。
步骤6：将4-氨基苯酚(97mg)和iPr2NEt(0.57mL)添加至2-((3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基)-2-氧代乙酸(480mg)和TBTU(287mg)在DMF(8mL)中的溶液。将混合物于室温搅拌3小时，然后以EtOAc(200mL)稀释，以水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，经MgSO4干燥并浓缩。剩余物通过硅胶柱纯化(己烷：EtOAc＝2：1至1：1)，得到N1-(3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)-N2-(4-羟基苯基)草酰胺(300mg)。
步骤7：将K2CO3(2eq.)添加至N1-(3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)-N2-(4-羟基苯基)草酰胺(1eq)和二亲电体(0.5eq.)在丙酮中的溶液。将混合物于80℃在密封试管中加热16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过制备性HPLC纯化，得到式I的化合物。
制备5001:
步骤1：(3-(4-((4-((4-羟基苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(150mg)、3,3-双(氯甲基)氧杂环丁烷(113mg)和K2CO3(134mg)在丙酮(5mL)中的悬浮液于85℃加热16小时。真空除去溶剂并且剩余物通过硅胶柱纯化(己烷：EtOAc＝5：1至2：1)，得到(3-(4-((4-((4-((3-(氯甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(44mg)。
步骤2：向(3-(4-((4-((4-((3-(氯甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰氨基)-2,2-二甲基丙基)氨基甲酸叔丁基酯(44mg)在CH2Cl2(2mL)中的溶液添加TFA(0.5mL)。将混合物于室温搅拌2小时，然后真空除去溶剂。剩余物以EtOAc(50mL)稀释并以10％的NaHCO3(20mL)、盐水(20mL)洗涤并经MgSO4干燥并浓缩，以其本身使用。
步骤3：N-(3-氨基-2,2-二甲基丙基)-4-((4-((4-((3-(氯甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲氧基)苄基)氨基)-6-(2,2,2-三氟乙氧基)-1,3,5-三嗪-2-基)氨基)苯甲酰胺(30mg)在乙腈(5mL)中的溶液加热至回流保持3天。加压除去溶剂。剩余物通过制备性HPLC纯化，得到5001(3.3mg)。
制备6001：从步骤1至步骤3，化合物6001根据合成化合物1001的相同方法，使用((3-(氨基甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯代替2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。得到6001的最终步骤显示如下，其根据在制备1001的步骤5中的相同方法。
制备6002：从步骤1至步骤3，化合物6002根据合成化合物3001的相同方法，使用((3-(氨基甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯代替3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸叔丁基叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。得到6002的最终步骤显示如下，其根据制备3001中的步骤5的相同方法。
制备6003：化合物6003根据合成化合物1001的相同方法，使用3,3-双(溴甲基)氧杂环丁烷代替步骤1中的1,3-二溴丙烷并使用(3-氨基丙基)氨基甲酸叔丁基酯代替2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料制备。得到6003的最终步骤显示如下，其根据在制备1001的步骤5中的相同方法。
制备6004：化合物6004根据合成化合物3001的相同方法，除了使用(S)-3-溴-2-甲基丙-1-醇代替步骤1中的(R)-3-溴-2-甲基丙-1-醇作为起始物料和使用((3-(氨基甲基)氧杂环丁烷-3-基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯代替步骤3中的3-氮杂双环[3.1.0]己-6-基氨基甲酸叔丁基酯作为起始物料。得到6004的最终步骤显示如下，其根据在制备3001中的步骤5的相同方法。
制备6005：化合物6005根据合成化合物1001的相同方法，使用3,3-双(溴甲基)氧杂环丁烷代替步骤1中的1,3-二溴丙烷和使用((1-(氨基甲基)环丙基)甲基)氨基甲酸叔丁基酯代替2,7-二氮杂螺[4.4]壬烷-2-甲酸叔丁基酯作为步骤3中的起始物料。得到6005的最终步骤显示如下，其根据制备1001的步骤5中的相同方法制备。
生物学方法
感染测定。使用标准化的方法学(Bartosch，B.，Dubuisson，J.和COsset，F.-L.J.Exp.Med.2003，197:633-642)制备的HCV假颗粒是通过293T细胞的基于脂质体的转染操作，使用表达鼠白血病病毒壳体和聚合酶蛋白、编码萤光素酶报告基因的MLV基因组和来自HCV或水泡性口膜炎病毒(VSV)的被膜糖蛋白的质粒制备的。基因型1a HCV E1和E2被膜编码序列源自于H77C 分离物(GenBank登录号AF009606)。在转染后3天收集含有假颗粒的培养基，过滤，并在-20℃储存作为病毒储备液。在384孔板中通过在存在或缺少测试抑制剂的情况下混合假病毒(1x 104个Huh7细胞/孔)进行感染，随后在37℃温育。在感染后2天测量荧光素酶活性(反映假颗粒进入宿主细胞的程度)。通过评价对VSV假颗粒感染的抑制确定化合物抑制HCV的特异性。
化合物和数据分析。将测试化合物以3倍连续稀释于二甲亚砜(DMSO)中，得到50.0μM至0.04pM的测试终浓度范围。最大活性(对照的100％)和背景分别源自于含有DMSO但无抑制剂的对照孔或未感染的孔。然后将每个化合物测试孔中的单个信号除以背景扣除后的平均对照值并乘以100％以确定百分比活性。将测定重复进行两次并计算平均EC50值(反映实现50％病毒复制的抑制的浓度)。化合物EC50数据表达为A＝0.01≤10nM；B＝10-1000nM。化合物的代表性数据报告于表2中。
表2
对于本领域技术人员明显的是，本公开内容不限于上述示例性实施例，且在不背离其基本属性的情况下本公开可按其它具体形式来实施。因此，期望所述实施例在所有方面都应被视为示例性而非限制性的，应参考所附权利要求书而非上述实施例，因此，落入权利要求书的等价意义和范围内的所有 变化都意图涵盖在本申请范围内。