一种氨曲南组合物、其粉针剂及其制备方法 【技术领域】
本发明属于药物合成及制剂领域，更具体的说，本发明涉及的是一种氨曲南组合物、其粉针剂及其制备方法。
背景技术
氨曲南(Aztreonam)为美国施贵宝公司开发的一种抗菌药物，1984年在意大利上市，它是第一个应用于临床的单环β-内酰胺类抗生素，对革兰阴性杆菌有较强的抗菌活性，对β-内酰氨酶稳定。近年来，随着抗菌药物的广泛应用，革兰阴性杆菌感染所占比例明显增高，其耐药菌株亦明显增多，使得头抱菌素类抗生素的临床疗效远不如以前。但氨曲南因其独特的结构，使细菌对其敏感，因而在临床上应用广泛。
氨曲南，英文名称为Aztreonam，化学名称为[2S-[2α，3β(Z)]-2-[[1-(2-氨基-4-噻唑基)-2-[(2-甲基-4-氧代-1-硫基-3-氮杂环丁烷基)氨基]-2-氧代亚乙基]氨基]氧代]-2-甲基-丙酸，其分子式为C13H17N5O8S2，分子量为435.44，化学结构式如下：
其药理作用为：氨曲南对大多数需氧革兰阴性菌具有高度的抗菌活性，如：埃希氏大肠杆菌、雷克白菌属的肺炎杆菌和奥可西托克菌、奇异变形杆菌、包括费氏枸橼酸杆菌的枸橼酸杆菌属、包括阴沟肠杆菌的肠杆菌属、嗜血流感杆菌(包括耐氨苄西林和其他产青霉素酶菌株)、铜绿假单胞菌和包括粘质沙雷菌的沙雷菌属。体外试验表明：氨曲南对嗜水气单胞菌、摩氏摩根菌、淋病奈瑟球菌(包括产青霉素酶菌株)、多杀巴斯得菌、普通变形杆菌、斯氏普罗威登斯菌、雷氏普罗威登斯菌等也具有良好的抗菌作用。氨曲南通过与敏感需氧革兰阴性菌细胞膜上青霉素结合蛋白3(PBP3)高度亲合而抑制细胞壁的合成。与大多数β-内酰胺类抗生素不同的是它不诱导细菌产生β-内酰胺酶，同时对细菌产生的大多数β-内酰胺酶高度稳定。
氨曲南具有多种晶体结构形式，分为α，β，γ，δ型，其中α型在水中的溶解度较大，但容易吸湿，且流动性较差，存储稳定性差，因此不能用来做制剂，β型不容易吸湿，且流动性好，其固态稳定性更好，故药用的氨曲南一般为β型，但β型氨曲南在水中的溶解度很小。
美国专利申请US4946838中介绍了一种制备β型氨曲南的方法，其中，α型以三乙胺盐形式溶解于无水乙醇，之后向其中加入无水氯化氢溶液就可以得到β型氨曲南。
美国专利申请US4775670中介绍了一种氨曲南的制备方法，涉及用2-2-氨基-4-噻唑基)-2-(1-二苯基甲氧羰基-1-甲基乙氧基)亚氨基乙酸盐酸盐与(2S-反式)-3-氨基-2-甲基-4-氧代-1-氮杂环丁烷基磺酸用二环己基炭二亚胺进行脱水反应，然后用三氟乙酸和茴香醚脱掉二苯甲基保护而制备氨曲南的方法。该申请中脱保护基所用的溶剂为三氟乙酸和茴香醚，脱保护效果不好，而且三氟乙酸成本较高，且无法回收，对环境产生危害。
中国专利申请CN02816342.7中介绍了一种β型晶体无水氨曲南的生产方法，其中，在-10℃～15℃的条件下，将α型氨曲南溶于无水乙醇，经过无菌过滤后，再将溶液加热至50-55℃，以形成无水β型氨曲南结晶。
中国专利申请CN200610161071.5中介绍了一种无水β晶型氨曲南的生产方法，包括在-10℃～25℃的温度下，将α晶型氨曲南溶于无水乙醇和丙酮的混合液，经过无菌过滤后，再将溶液加热至30-55℃或剧烈搅拌，以形成无水β型氨曲南结晶。
国际申请WO2004/013133公开了一种制备氨曲南的方法，在升高温度的条件下，通过酯和酸的水溶液进行反应而水解[3S-[3α(Z)，4β]]-3-[[(2-氨基-4-噻唑基)[(1-叔丁氧基基-1-甲基乙氧基)亚氨基]乙酰基]氨基]-4-甲基-2-氧代-1-氮环丁烷磺酸的酯基。该方法中步骤繁多，所得到产品的收率不高。
中国专利申请CN200680015648.X中介绍了一种一锅制备氨曲南的简化方法，所述方法使用氮杂环丁烷和TAEM作为起始原料，无需中间分离叔丁基氨曲南。该方法虽然步骤进一步简化，但由于产品与副产物分离不彻底，因此导致所制备的产品氨曲南的含量不高。
中国专利申请CN200610165272.2中介绍了一种抗菌药物氨曲南的制备方法，该方法包括侧链保护的氨曲南与甲酸或甲酸的水溶液反应，得到氨曲南的步骤。
专利申请CN200710092994中公开了氨曲南氨基酸盐的制备方法，该方法将氨曲南溶于有机溶剂，滴加氨基酸的水溶液，反应完后，冷却过滤得到氨曲南盐。该申请中利用有机溶剂作为反应溶液，使氨曲南的成盐反应更彻底，反应收率高。但是，所得的产品容易受到有机溶剂的污染。
综上所述，对于氨曲南这种药物，现有技术的研究主要从脱保护的方式以及如何将不稳定的α晶型氨曲南转化为稳定的β晶型氨曲南这两方面进行研究，且现有技术普遍存在着氨曲南的纯度不高，收率低以及溶剂无法回收从而造成对环境的危害的缺陷，为了克服上述缺陷，本发明研究人员通过长期的研究，以期获得一种合成高纯度和高收率氨曲南的方法以及一种高质量的氨曲南组合物，有鉴于此，特提出此发明。
【发明内容】
本发明的目的之一在于提供一种氨曲南组合物，所述的注射用氨曲南组合物可以作为注射用无菌粉针剂，其复溶性和稳定性好。所述的氨曲南，通过在现有技术的基础上对其制备方法进行改进，使得所制备的氨曲南纯度高，而且所述地方法原料易得，步骤简单，可操作性强。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种氨曲南组合物，所述的组合物中包括无菌氨曲南和精氨酸，且无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1∶1～1.5∶1，所述的无菌氨曲南重量以C13H17N5O8S2计。
本发明所述的组合物中无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1.25∶1，所述的无菌氨曲南重量以C13H17N5O8S2计。
本发明所述的无菌氨曲南由以下方法制备：
(1)氨曲南的合成：
先将三乙胺与二甲基亚砜混合均匀，得到三乙胺混合溶液，再将MSA加入至上述混合溶液中，得到MSA混合溶液，在搅拌的条件下，将TAEM滴加至上述MSA混合溶液中，滴加完毕后继续反应5-10小时，TLC检验反应完毕，得到反应液；
将反应液进行冷却，依次加入水和浓盐酸，在0℃-5℃搅拌，离心分离，水洗，干燥后得到氨曲南粗品；
(2)氨曲南的精制
将氨曲南粗品进行精制，得到氨曲南精品；
(3)无菌氨曲南的制备
在步骤(2)所得的氨曲南精品进行无菌处理，得到无菌氨曲南。
本发明所述的步骤(1)中，将TAEM滴加至上述MSA混合溶液中时，所述的滴加为匀速滴加，滴加的速度为每分钟滴加的TAEM为TAEM总量的1/360～1/120。
本发明所述的步骤(2)具体包括：
将氨曲南粗品加入至反应釜中，加入无水乙醇，冷却至0℃-5℃，再加入三乙胺，搅拌溶解后，得到氨曲南粗品溶液，将氨曲南粗品溶液在室温条件下过HP-20树脂柱，溶液温度上升至室温，用盐酸调pH值至1.5-2.5，然后再缓慢降温至0℃-5℃，析晶后，水洗，干燥即得氨曲南精品。
本发明中在过HP-20树脂柱时洗脱剂为水。
本发明所述的缓慢降温为每分钟下降1℃-3℃，优选所述的缓慢降温为每分钟下降1℃-2℃。
本发明所述的步骤(3)具体包括：
在步骤(2)所得的氨曲南精品中加入无水乙醇，冷却，再加入三乙胺，待氨曲南溶解后，加入活性炭进行处理，然后经0.22μm滤膜进行抽滤，得到的滤液转移至无菌反应釜中，用盐酸调节pH值至1.5-2.5，冷却，在0℃-5℃时在搅拌的条件下析出晶体，将晶体洗涤、干燥后即得到所述的无菌氨曲南。
本发明所述的三乙胺用量为氨曲南精品重量的20-30％，优选所述的三乙胺的用量为氨曲南精品重量的22-24％。所述的百分比为质量百分比。
本发明所述的活性炭的用量为氨曲南精品重量的1-2％，优选所述的活性炭的用量为氨曲南精品重量的1.5％。所述的百分比为质量百分比。
本发明中，在将氨曲南粗品溶解时，其搅拌速度为150-180转/分钟。
本发明的另一目的在于，提供一种氨曲南无菌粉针剂。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种氨曲南无菌粉针剂，所述的无菌粉针剂包括氨曲南组合物。
本发明还有一目的在于，提供一种氨曲南无菌粉针剂的制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案为：
一种制备氨曲南无菌粉针剂的方法，所述的方法包括：在无菌操作室内，依据处方量称取无菌氨曲南，无菌分装于抗生素玻璃瓶中，并加塞、轧盖即得。
下面对本发明进行详细描述：
一种氨曲南组合物，所述的组合物中包括无菌氨曲南和精氨酸，且无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1∶1～1.5∶1，所述的无菌氨曲南重量以C13H17N5O8S2计。
所述的组合物中无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1.25∶1，所述的无菌氨曲南重量以C13H17N5O8S2计。
在本发明中，由于无菌氨曲南在注射用水中的溶解性非常小，因此在制备注射用氨曲南组合物时，需要加入精氨酸作为助溶剂和稳定剂，使得该组合物在使用时能在规定的时间内溶解于注射用水中。另外，由于所制备的无菌氨曲南加水制成每1ml中含5mg的溶液，其pH值在2.2～2.8，而人体的pH耐受范围为4.0-9.0，因此加入精氨酸之后，能够调节无菌氨曲南的pH值，使其pH值处于人体耐受范围。研究人员经过实验发现，在无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1.25∶1时，既能使无菌氨曲南很好的溶解，又能使其pH值处于适当的范围，而且所制备出的氨曲南组合物产品的澄清度和稳定性更好。
本发明中，无菌氨曲南的制备方法主要包括以下步骤：
(1)氨曲南的合成；
先将三乙胺与二甲基亚砜混合均匀，得到三乙胺混合溶液，再将MSA加入至上述混合溶液中，得到MSA混合溶液，在搅拌的条件下，将TAEM滴加至上述MSA混合溶液中，滴加完毕后继续反应5-10小时，TLC检验反应完毕，得到反应液；
将反应液进行冷却，依次加入水和浓盐酸，在0℃-5℃搅拌，离心分离，水洗，干燥后得到氨曲南粗品；
本发明中在氨曲南粗品的合成过程中，先将三乙胺与二甲基亚砜混合，再将MSA加入至上述混合溶液中，得到MSA混合溶液，然后往该MSA混合溶液中滴加TAEM，所述的滴加为匀速滴加，滴加的速度为每分钟滴加的TAEM为TAEM总量的1/360～1/120。将TAEM以这样的速度滴加入MSA混合溶液中，使得氨曲南的反应能顺利进行，TAEM能与反应物MSA进行充分接触，这样就能有效避免副反应的发生，防止反应太剧烈而造成氨曲南粗品的纯度不高的问题。
在氨曲南粗品的合成过程中，滴加完毕后，在室温下搅拌反应5-10小时，优选其搅拌的速度为120-150转/分钟。为了保证该主反应的充分进行，需要对反应液进行搅拌，但是搅拌的速度需要控制，反应物搅拌速度太快，反应物之间无法进行充分的接触，使得反应不完全，反应物搅拌速度太低，则使得反应物之间存在明显的浓度差，从而导致副反应的发生，使得所制备的产品的收率不高。本发明的研究人员经过多次试验，发现其搅拌速度在120-150转/分钟时，反应物之间充分进行反应，使得所得到的氨曲南粗品的纯度和收率都高。
(2)氨曲南的精制
将氨曲南粗品加入至反应釜中，加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南粗品重量的3-6倍；优选无水乙醇的加入量为氨曲南粗品重量的5倍。将其冷却至0℃-5℃，搅拌，再加入三乙胺使其溶解，所述的三乙胺的用量为氨曲南粗品重量的20-30％，优选所述的三乙胺的用量为氨曲南粗品重量的22-24％；得到氨曲南粗品溶液，将氨曲南粗品溶液在室温条件下过HP-20树脂柱，之后溶液的温度上升至室温，用盐酸调pH值至1.5-2.5，然后再缓慢降温至0℃-5℃，析晶后，水洗，干燥即得氨曲南精品。过HP-20树脂柱时所用的洗脱剂为水。本发明所述的缓慢降温为每分钟下降1℃-3℃，优选所述的缓慢降温为每分钟下降1℃-2℃。
氨曲南是多晶型化合物，包括α，β，γ，δ型，而用于药物制剂最好的是β型晶体，为了得到纯度更高的药物最好的氨曲南，将氨曲南进行精制，以期获得高纯度的β型氨曲南晶体。在精制的过程中，先将氨曲南粗品放入反应釜中，再加入无水乙醇，冷却至0℃-5℃，并加入三乙胺助溶，搅拌溶解后所得到的氨曲南粗品溶液中还含有一些未反应完全的反应物和一些反应副产物，因此将所述粗品溶液过HP-20树脂，而HP-20树脂具有吸附量高、颗粒均匀、机械强度好、不易破碎、残留物少的优点，针对本发明的氨曲南粗品溶液，研究人员发现经过以水为洗脱剂将该粗品溶液过HP-20树脂后，所述氨曲南的纯度较现有技术用的重结晶方法的纯度高。
过HP-20树脂后，氨曲南粗品溶液的温度上升至室温，用盐酸调节pH值至1.5-2.5后，再经过缓慢降温，本发明中选择每分钟下降1℃-3℃，在这样的降温速度下进行析晶，使得晶体的析出速度适中，不会因为析晶太快而造成晶体结构中包裹其它杂质分子，因此，本发明所述的氨曲南的纯度高。
(3)无菌氨曲南的制备
在步骤(2)所得的氨曲南精品中加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南精品重量的3-6倍；优选无水乙醇的加入量为氨曲南精品重量的5倍。将其进行冷冻，再加入的三乙胺，所述的三乙胺用量为氨曲南精品重量的20-30％，所述的百分比为重量百分比。待氨曲南精品完全溶解后，加入活性炭进行处理，然后经0.22μm滤膜进行抽滤，得到的滤液转移至无菌反应釜中，用盐酸调节pH值至1.5-2.5，冷却，在0℃-5℃时在搅拌的条件下析出晶体，将晶体洗涤、干燥后即得到所述的无菌氨曲南。所述的活性炭的用量为氨曲南精品重量的1-2％，优选所述的活性炭的用量为氨曲南精品重量的1.5％。无菌氨曲南的制备在无菌条件下进行的。本发明所述的百分比为重量百分比。
本发明所述的冷却为冷却至0-5℃，溶解时，所用的助溶剂为三乙胺。用盐酸调节pH值至1.5-2.5时，所用的盐酸的浓度为1-3mol/L，将晶体洗涤时，用水洗涤，洗涤2次，而进行干燥时，所述的干燥在真空的条件下温度为30-35℃干燥18-36小时。在这样的干燥条件下，既不会造成对晶体及其成分的破坏，从而影响其氨曲南组合物作为粉针剂使用时的稳定性和澄清度，而且还能将无菌氨曲南中所含的水分降低至1％以下，从而满足其质量标准(水分低于2％)的要求。
本发明所述TAEM为
本发明所述的MSA为(3S-反式)-4-甲基-2-氧代-3氨基-1-氮杂环丁基磺酸
本发明的有益效果是：
(1)本发明所述的注射用氨曲南组合物，其稳定性和澄清度好，水分含量低，是一种高质量的注射用氨曲南组合物，可以作为注射用氨曲南粉针剂使用。
(2)本发明的无菌氨曲南的制备方法，其在现有技术的基础上进行改进，使得所制备的适合药用氨曲南的纯度和收率较现有技术得到了提高。
【具体实施方式】
实施例1
(1)氨曲南的合成
先将三乙胺1.8Kg与二甲基亚砜(DMSO)10L在50L反应釜中混合均匀，得到三乙胺混合溶液，再将MSA1.1Kg加入至上述混合溶液中，得到MSA混合溶液，在搅拌的条件下，将TAEM3.8Kg滴加至上述MSA混合溶液中，滴加的速度为每分钟滴加的TAEM为TAEM总量的1/240。滴加完毕后继续反应5小时，TLC检验反应完毕，展开剂为体积比为乙腈∶水＝4∶1的溶液，得到反应液；
将反应液进行冷却至0℃，依次加入水和浓盐酸，在0℃搅拌2小时，离心分离，用10L水洗，在30℃真空干燥后得到氨曲南粗品2.23Kg，产率为83.5％；以TLC控制杂斑不超过10％。(展开剂为体积比乙腈∶水＝4∶1.5)
(2)氨曲南的精制
将氨曲南粗品2.23Kg加入至50L反应釜中，加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南粗品重量的5倍即11.15Kg，冷却至0℃，再加入三乙胺，三乙胺的加入量为氨曲南粗品重量的25％，即0.5575Kg，以180转/分钟的搅拌速度搅拌使其溶解后，得到氨曲南粗品溶液，将氨曲南粗品溶液在室温条件下过HP-20树脂柱，以水为洗脱剂，之后溶液的温度上升至室温，用盐酸调pH值至1.5，然后再缓慢降温至0℃-5℃并同时进行搅拌5小时，所述缓慢降温的速度为每分钟1℃，析晶后，离心机离心，用5L水洗两次，在30℃真空干燥即得氨曲南精品2.11Kg，经红外鉴别本品的红外光吸收图谱与对照品图谱一致。
(3)无菌氨曲南的制备
在万级车间的50L反应釜中加入步骤(2)所得到的氨曲南精品，再加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南精品重量的4倍，冷却至0℃，再加入三乙胺，三乙胺的加入量为氨曲南精品重量的30％，待氨曲南精品溶解后，加入活性炭进行处理，活性炭的用量为氨曲南精品重量的0.15％，然后经0.22μm滤膜进行抽滤，得到的滤液转移至无菌反应釜中，用盐酸调节pH值至1.5，冷却，在0℃-5℃时在搅拌的条件下进行5小时析晶过程，用离心机进行离心，得到的晶体用2L的水洗涤两次，再用无水乙醇洗涤，在30℃真空干燥后即得到所述的无菌氨曲南1.85Kg。
实施例2
(1)氨曲南的合成
先将三乙胺2.2Kg与二甲基亚砜(DMSO)10L在50L反应釜中混合均匀，得到三乙胺混合溶液，再将MSA1.8Kg加入至上述混合溶液中，得到MSA混合溶液，在搅拌的条件下，将TAEM4.1Kg滴加至上述MSA混合溶液中，滴加的速度为每分钟滴加的TAEM为TAEM总量的1/120。滴加完毕后继续反应8小时，TLC检验反应完毕，展开剂为体积比为乙腈∶水＝4∶1的溶液，得到反应液；
将反应液进行冷却至3℃，依次加入水和浓盐酸，在3℃搅拌2小时，离心分离，用10L水洗，在30℃真空干燥后得到氨曲南粗品2.4Kg，产率为83.3％；以TLC控制杂斑不超过10％。(展开剂为体积比乙腈∶水＝4∶1.5)
(2)氨曲南的精制
将氨曲南粗品2.4Kg加入至50L反应釜中，加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南粗品重量的3倍，冷却至5℃，再加入三乙胺，三乙胺的加入量为氨曲南粗品重量的20％，以150转/分钟的搅拌速度搅拌使其溶解后，得到氨曲南粗品溶液，将氨曲南粗品溶液在室温条件下过HP-20树脂柱，以水为洗脱剂，之后溶液的温度上升至室温，用盐酸调pH值至2.5，然后再缓慢降温至3℃并同时进行搅拌5小时，所述缓慢降温的速度为每分钟3℃，析晶后，离心机离心，用5L水洗两次，在30℃真空干燥即得氨曲南精品2.27Kg，经红外鉴别本品的红外光吸收图谱与对照品图谱一致。
(3)无菌氨曲南的制备
在万级车间的50L反应釜中加入步骤(2)所得到的氨曲南精品，加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南精品重量的6倍，冷却至0℃，再加入三乙胺，三乙胺的加入量为氨曲南精品重量的30％，待氨曲南溶解后，加入活性炭进行处理，活性炭的用量为氨曲南精品重量的0.1％，然后经0.22μm滤膜进行抽滤，得到的滤液转移至无菌反应釜中，用盐酸调节pH值至2.5，冷却，在0℃在搅拌的条件下进行6小时析晶过程，用离心机进行离心，得到的晶体用2L的水洗涤两次，再用无水乙醇洗涤，在32℃真空干燥后即得到所述的无菌氨曲南2.05Kg。
实施例3
(1)氨曲南的合成
先将三乙胺1.6Kg与二甲基亚砜(DMSO)10L在50L反应釜中混合均匀，得到三乙胺混合溶液，再将MSA1.1Kg加入至上述混合溶液中，得到MSA混合溶液，在搅拌的条件下，将TAEM3.5Kg滴加至上述MSA混合溶液中，滴加的速度为每分钟滴加的TAEM为TAEM总量的1/360。滴加完毕后继续反应10小时，TLC检验反应完毕，展开剂为体积比为乙腈∶水＝4∶1的溶液，得到反应液；
将反应液进行冷却至5℃，依次加入水和浓盐酸，在5℃搅拌2小时，离心分离，用10L水洗，在30℃真空干燥后得到氨曲南粗品2.06Kg，产率84.0％；以TLC控制杂斑不超过10％。(展开剂为体积比乙腈∶水＝4∶1.5)
(2)氨曲南的精制
将氨曲南粗品加入至50L反应釜中，加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南粗品重量的6倍，冷却至0℃，再加入三乙胺，三乙胺的加入量为氨曲南粗品重量的25％，以170转/分钟的搅拌速度搅拌使其溶解后，得到氨曲南粗品溶液，将氨曲南粗品溶液在室温条件下过HP-20树脂柱，以水为洗脱剂，之后溶液的温度上升至室温，用盐酸调pH值至2.5，然后再缓慢降温至0℃并同时进行搅拌5小时，所述缓慢降温的速度为每分钟2℃，析晶后，离心机离心，用5L水洗两次，在35℃真空干燥即得氨曲南精品1.97Kg，经红外鉴别本品的红外光吸收图谱与对照品图谱一致。
(3)无菌氨曲南的制备
在万级车间的50L反应釜中加入步骤(2)所得到的氨曲南精品，加入无水乙醇，无水乙醇的加入量为氨曲南精品重量的5倍，冷却至0℃，再加入三乙胺，三乙胺的加入量为氨曲南精品重量的28％，待氨曲南溶解后，加入活性炭进行处理，活性炭的用量为氨曲南精品重量的0.2％，然后经0.22μm滤膜进行抽滤，得到的滤液转移至无菌反应釜中，用盐酸调节pH值至2.5，冷却，在5℃时在搅拌的条件下进行4小时析晶过程，用离心机进行离心，得到的晶体用2L的水洗涤两次，再用无水乙醇洗涤，在30℃真空干燥后即得到所述的无菌氨曲南1.69Kg。
实施例4
一、处方组成(1000瓶)
本品为氨曲南制成的无菌粉末；按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算，标示量分别为0.5g。
1、规格：0.5g/瓶
氨曲南 500g(以C13H17N5O8S2计)
精氨酸 400g
制成 1000瓶
二、制备工艺
在无菌操作室内，依据处方量称取化验合格的无菌氨曲南，按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算分别为0.5g/瓶，无菌分装于抗生素玻璃瓶中，并加塞、轧盖即得。
1、包装材料的处理：
(1)抗生素玻璃瓶用常水初洗后，再用0.2um滤过的注射用水反冲合格，无菌压缩空气吹干，320℃干热灭菌25分钟以上，备用；
(2)丁基胶塞加酸煮沸30分钟，用常水洗至中性，再用0.2um滤过的注射用水反冲合格，无菌压缩空气吹干，120℃热压灭菌2小时后烘干，备用。
(3)铝塑盖115℃-125℃干热灭菌2小时。
2、样品制备：
(1)在无菌操作室内按处方量准确称取无菌氨曲南和精氨酸。
(2)按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算0.5g/瓶，精氨酸0.4g/瓶，分别无菌分装于抗生素玻璃瓶中。
(3)加塞、轧盖。
(4)成品包装入库并送检。
实施例5
一、处方组成
本品为氨曲南制成的无菌粉末；按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算，标示量分别为1.0g。
1、规格：1.0g/瓶
氨曲南 1000g(以C13H17N5O8S2计)
精氨酸 800g
制成 1000瓶
二、制备工艺
1、包装材料的处理：
(1)抗生素玻璃瓶用常水初洗后，再用0.2um滤过的注射用水反冲合格，无菌压缩空气吹干，320℃干热灭菌25分钟以上，备用；
(2)丁基胶塞加酸煮沸30分钟，用常水洗至中性，再用0.2um滤过的注射用水反冲合格，无菌压缩空气吹干，120℃热压灭菌2小时后烘干，备用。
(3)铝塑盖115℃-125℃干热灭菌2小时。
2、样品制备：
(1)在无菌操作室内按处方量准确称取无菌氨曲南和精氨酸。
(2)按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算1.0g/瓶，精氨酸0.8g/瓶，分别无菌分装于抗生素玻璃瓶中。
(3)加塞、轧盖。
(4)成品包装入库并送检。
实施例6
一、处方组成
本品为氨曲南制成的无菌粉末；按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算，标示量分别为2.0g。
1、规格：2.0g/瓶
氨曲南 2000g(以C13H17N5O8S2计)
精氨酸 1600g
制成 1000瓶
二、制备工艺
1、包装材料的处理：
(1)抗生素玻璃瓶用常水初洗后，再用0.2um滤过的注射用水反冲合格，无菌压缩空气吹干，320℃干热灭菌25分钟以上，备用；
(2)丁基胶塞加酸煮沸30分钟，用常水洗至中性，再用0.2um滤过的注射用水反冲合格，无菌压缩空气吹干，120℃热压灭菌2小时后烘干，备用。
(3)铝塑盖115℃-125℃干热灭菌2小时。
2、样品制备：
(1)在无菌操作室内按处方量准确称取无菌氨曲南和精氨酸。
(2)按氨曲南(C13H17N5O8S2)计算2.0g/瓶，分别无菌分装于抗生素玻璃瓶中。
(3)加塞、轧盖。
(4)成品包装入库并送检。
实施例7
其余步骤都与实施例4相同，所不同的是，无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1∶1，即规格：0.5g/瓶
氨曲南 500g(以C13H17N5O8S2计)
精氨酸 500g
制成 1000瓶
实施例8
其余步骤都与实施例5相同，所不同的是，无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1.5∶1，即1.0g/瓶
氨曲南 1000g(以C13H17N5O8S2计)
精氨酸 666g
制成 1000瓶
实施例9
其余步骤都与实施例6相同，所不同的是，无菌氨曲南与精氨酸的重量比为1.4∶1，即规格：2.0g/瓶
氨曲南 2000g(以C13H17N5O8S2计)
精氨酸 1428g
制成 1000瓶
试验例1
本试验例涉及无菌氨曲南粉末的相关质量检测
一、样品及对照品来源
供试品：试验例批号：031020(按照实施例1制备的无菌氨曲南粉末)、031027(按照实施例2制备的无菌氨曲南粉末)、031104(按照实施例3制备的无菌氨曲南粉末)
质量对比用氨曲南对照品为上市注射用氨曲南抽提精制所得；含量测定用氨曲南对照品为美国药典对照品。
二、性状
1.外观 本品三批样品均为白色结晶性粉末。
2.引湿性试验 取本品适量，精密称定，置相对湿度92.5％的密闭环境中吸湿已达饱和的扁型称量瓶中，并于上述条件下放置，于不同时间取样，测定供试品的引湿量(％)。结果见表1。
表1 氨曲南引湿性试验结果(％)
氨曲南在相对湿度92.5％环境中放置48小时，引湿量低于5％，外观性状变为粉红色。
三、鉴别
1.红外光谱鉴别 本品的红外光吸收图谱与对照品的红外光吸收图谱一致。2.HPLC鉴别在含量测定项下记录的色谱图中，供试品主峰的保留时间与对照品主峰的保留时间一致，结果见表2。
表2 氨曲南HPLC鉴别结果
批号 031020 031027 031104 对照品 保留时间(min) 9.88 9.73 9.74 9.80
四、检查 对本品进行了酸度、溶液的澄清度与颜色、水分、炽灼残渣、重金属、无菌、细菌内毒素、有机溶剂残留、有关物质等项目的检查。
1.酸度 参照JP14标准，取本品及对照品，分别加水制成每1ml中含5mg的溶液，依法测定(中国药典2005年版二部附录VI H)pH值，结果见表3。
表3氨曲南酸度测定结果
批号 031020 031027 031104 对照品 酸度(pH值) 2.6 2.4 2.3 2.5
可见本品溶液的pH值在2.2～2.8之间。
2.溶液的澄清度与颜色取本品及对照品各0.5g，分别加精氨酸溶液(23.4→1000)(即称取23.4g精氨酸固体加水溶解至1000ml)5ml溶解后，结果见表4。
表4氨曲南溶液的澄清度与颜色检查结果
批号 031020 031027 031104 对照品 溶液的澄清度 澄清 澄清 澄清 澄清 溶液的颜色 小于黄色2号 小于黄色2号 小于黄色2号 小于黄色2号
可见本品的颜色均小于黄色2号。
3.水分 取本品，照水分测定法(中国药典2005年版二部附录VIII M)测定，结果见表5。
表5 氨曲南水分检查结果
批号 031020 031027 031104 对照品 水分(％) 0.7 0.8 0.7 0.9
可见，本品的水分均小于等于0.8％，含水量低，有利于本发明中的无菌氨曲南和氨曲南组合物的贮存。
4.炽灼残渣 取本品1.0g，依法检查(中国药典2005年版二部附录VIII N)，结果见表6。
表6 氨曲南炽灼残渣检查结果
批号 031020 031027 031104 炽灼残渣(％) 0.05 0.03 0.04
可见，三批样品的炽灼残渣均小于0.1％。
5.无菌 取本品，加经过灭菌的精氨酸溶液(23.4→1000)(即称取23.4g精氨酸固体加水溶解至1000ml)制成每1ml中含氨曲南0.1g的溶液，再加入到100ml 0.9％无菌氯化钠溶液中，用薄膜过滤法处理后，依法检查(中国药典2005年版二部附录XI H)。结果见表7。
表7 氨曲南无菌检查结果
批号 031020 031027 031104 无菌 符合规定 符合规定 符合规定
供试品细菌内毒素检查
取本品，照细菌内毒素检查法(中国药典2005年版二部附录XI E)进行测定。结果见表8。
表8氨曲南细菌内毒素检查结果
批号 031020 031027 031104 细菌内毒素 小于0.17EU/mg 小于0.17EU/mg 小于0.17EU/mg
6.有机残留溶剂检查 本品在精制过程中用到乙醇，从临床用药的安全性角度考虑，对本品在合成过程中所用到的有机溶剂从药学质量控制方面进行研究。照有机溶剂残留量测定法(中国药典2005年版二部附录VIII P)，采用气相色谱法(中国药典2005年版二部附录VE)对本品中可能残留的乙醇进行含量限度检查。
6.1色谱条件
色谱仪GC-9790，浙江温岭福立分析仪器有限公司
色谱柱2M×3mm不锈钢色谱柱
柱填料GDX-102，60-80目
检测器FID Anastar色谱工作站
柱温：100℃；
汽化温度：150℃；
检测器温度：150℃；
载气 N2，30ml/min 0.1MPa
H2，30ml/min 0.1MPa
空气400ml/min 0.03MPa
进样量1μl 放大器灵敏度及衰减104×1/4
6.2限度的确定及对照溶液的制备 乙醇限度定为0.5％。
乙醇对照溶液的制备称取乙醇50mg，置100ml量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
空白溶液制备 取二甲亚砜，即得。
6.4供试品有机溶剂残留检查
供试品溶液的制备 取本品1.0g，精密称定，置10ml量瓶中，加二甲亚砜溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取供试品溶液1μl，注入气相色谱仪，记录色谱图，检测结果如表9。
表9氨曲南有机残留检查结果
批号 031020 031027 031104 检测结果 符合规定 符合规定 符合规定
供试品溶液中乙醇残留量均符合规定。同时对氨曲南制备过程中涉及到的其他有机溶剂进行检测，均符合规定。
7、样品有关物质的测定
供试品溶液的制备 取本品及对照品适量(相当于氨曲南25mg)，精密称定，置25ml量瓶中，加流动相适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
对照溶液的制备 精密移取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。
取对照溶液20μl注入液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满量程的10％～20％；再取供试品溶液和对照溶液各20μl注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍。供试品溶液色谱图中如异构体峰与有杂质峰，分别量取异构体峰及其他各杂质峰面积的和，与对照溶液主峰面积相比较，结果见表10。
表10 氨曲南有关物质检查结果
批号 031020 031027 031104 对照品 有关物质(％) 1.44 1.46 1.49 1.55 反式异构体(％) 0.37 0.38 0.36 0.48
由上表可见，本品3批样品有关物质均小于3.0％，异构体均小于1.0％。
五、含量测定 照高效液相色谱法(中国药典2005年版二部附录V D)
仪器及色谱条件同有关物质检查 取本品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含氨曲南0.2mg的溶液，摇匀，作为供试品溶液；另取氨曲南对照品适量，精密称定，加流动相溶解并稀释制成每1ml中含0.2mg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。取上述两种溶液各20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，量取峰面积，以外标法计算含量。其结果如11所示。
表11氨曲南含量测定结果
批号 031020 031027 031104 含量(％，以无水物计) 95.0 93.5 94.2
按无水物计算，三批样品含氨曲南均在93％以上。
试验例2
本试验例涉及合成方法对无菌氨曲南的纯度和收率的影响
一、合成方法对氨曲南纯度和收率的影响
(1)氨曲南的合成步骤中，本发明中实施例1中采用将TAEM滴加至MSA的三乙胺混合溶液中，其中滴加速度为每分钟滴加的TAEM为总量的1/240，所得到的氨曲南粗品为样品1；其余与实施例1相同，其中滴加速度为每分钟滴加的TAEM为总量的1/120，所得到的氨曲南粗品为样品2；其余与实施例1相同，其中滴加速度为每分钟滴加的TAEM为总量的1/360，所得到的氨曲南粗品为样品3；而对照品采用将TAEM、MSA和三乙胺这三种物质进行直接混合，其余与实施例1相同，所得到的氨曲南粗品为对照品1。比较结果如表12所示：
表12 滴加速度对氨曲南粗品的收率的影响
序号 样品1 样品2 样品3 对照品 滴加速度 每分钟滴加总量 的1/240 每分钟滴加总量的 1/120 每分钟滴加总量 的1/360 将反应物直接 混合 氨曲南粗品重量 2.23 2.15 2.24 2.05 收率 83.5％ 80.5％ 83.8％ 76.7％
由上表可以看出，采用滴加的方法加入TAEM，使得氨曲南粗品的收率得到了较大的提高。
(2)氨曲南的精制和无菌氨曲南的制备步骤对无菌氨曲南的收率以及纯度的影响。
在氨曲南的精制过程中，本发明中实施例1中，采用HP-20树脂柱对氨曲南进行精制，所得到的氨曲南精品为样品4；其余与实施例1相同，所不同的是在溶解氨曲南时搅拌的速度为150转/分钟，所得到的氨曲南精品为样品5；其余与实施例1相同，所不同的是在溶解氨曲南时搅拌的速度为190转/分钟，所得到的氨曲南精品为样品6；其余与实施例1相同，所不同的是氨曲南的精制过程中采用现有技术的用乙醇进行重结晶的方法进行精制(将氨曲南粗品加入至无水乙醇中，加热至55℃，搅拌使其溶解后，搅拌速度为180转/分钟，停止加热，搅拌3小时，冷至0℃，过滤，干燥得到氨曲南精品)所得到的氨曲南精品为对照品2。
表13精制方法对氨曲南精品收率以及无菌氨曲南收率和纯度的影响
序号 样品4 样品5 样品6 对照品2 搅拌速度 180转/分钟 150转/分钟 190转/分钟 180转/分钟 氨曲南精品重量 2.11 2.05 1.99 1.98 精品收率 94.6％ 91.9％ 89.2 88.8％
序号 样品4 样品5 样品6 对照品2 无菌氨曲南的重量 1.85 1.78 1.81 1.68 无菌氨曲南的收率 92.0％ 91.3％ 91.0％ 84.8％ 无菌氨曲南的纯度 95.5％ 93.8％ 94.7％ 89.9％
由上表可以看出，利用本发明的方法所制备出的无菌氨曲南的收率和纯度都比现有技术的方法都高。
试验例3
本试验例涉及的是本发明所述的氨曲南组合物(注射用氨曲南粉末)影响因素的考察。
1、样品制备：分别按照实施例4的方法进行制备
2、放样：将样品分别置于室温(25℃)，高温(60℃)、高温(40℃)、相对湿度75％、相对湿度92.5％和光照4500Lx六种条件下。
3、考察结果：于第5天、10天取样考察各项指标，并以0天结果为对照，结果见下：
表14影响因素考察(规格1)
条件 时间 (天) 酸碱度 溶液的澄清 度 水分(％) 反式异构体 有关物质(％) 含量(％) -- 0 6.0 澄清无色 0.7 0.37 1.44 95.58％ 室温 25℃ 5 6.0 澄清无色 0.7 0.37 1.44 95.58％ 10 6.0 澄清无色 0.7 0.37 1.47 95.56％ 高温 40℃ 5 6.0 澄清无色 0.7 0.37 1.45 95.57％ 10 6.1 澄清无色 0.6 0.37 1.48 95.55％ 高温 60℃ 5 6.1 澄清无色 0.6 0.37 1.47 95.56 10 6.1 澄清无色 0.6 0.38 1.52 94.81％ 相对湿 度75％ 5 6.0 澄清无色 0.8 0.37 1.44 95.58％ 10 5.9 澄清无色 0.8 0.37 1.45 95.57％
条件 时间 (天) 酸碱度 溶液的澄清 度 水分(％) 反式异构体 有关物质(％) 含量(％) 相对湿 度92.5％ 5 5.9 澄清无色 0.8 0.37 1.44 95.58％ 10 5.9 澄清无色 0.9 0.39 1.45 95.57％ 光照 4500Lx 5 6.0 澄清无色 0.7 0.38 1.44 95.58％ 10 6.0 澄清无色 0.8 0.39 1.48 95.55％
由上可见，本品在室温25℃条件下各项指标无明显变化；在相对湿度75％、相对湿度92.5％和光照4500Lx的条件下放置5天、10天，除有关物质略有升高外，其余各项指标无明显变化；在高温40℃、60℃条件下，有关物质升高较快，故确定本品的贮藏条件为：密闭，在25℃以下保存。
分别对其他实施例的产品进行相应的实验，其结果如同上述实验结果。