使用顺式-羟基依他康唑以避免依 他康唑和羟基依他康唑的副作用 1.技术领域
本发明涉及采用顺式-羟基依他康唑、顺式-依他康唑的代谢衍生物及其衍生物用于治疗细菌、微生物和真菌感染及其它病症，同时避免与服用依他康唑有关的伴随而来的不利副作用的治疗方法。羟基依他康唑具有化学式4-(4-(4-(4-((2，4-二氯苯基)-2-(1H-1，2，4-三唑-1-基甲基)-1，3-二氧戊环-4-基)甲氧基)苯基)-1-哌嗪基)苯基)-2，4-二氢-2-(2-羟基-1-甲基丙基)-3H-1，2，4-三唑-3-酮。(CAS登记号为112559-91-8)。本发明还涉及采用以下结构的化合物的治疗方法和药物组合物：其中R为氢、-P(O)(OH)2或-SO3H。
2.本发明背景2.1依他康唑和羟基依他康唑
依他康唑—一种具有式C35H38Cl2N8O4的化合物是商业上以SPORANOX销售的合成抗真菌剂。依他康唑是四个非对映体(两个对映体对)、每一个具有三个手性中心的1∶1∶1∶1外消旋混合物。依他康唑是一种具有口服活性、广谱的抗真菌剂，并且在结构上与咪康唑和克霉唑有关。
口服后，依他康唑被缓慢吸收。每天服用，15天后血浆水平达到峰值，而依他康唑的药物动力学行为是非线性的。所述化合物最终通过生物活性的羟基依他康唑代谢为几种非活性的代谢物。代谢显然是通过肝的机制进行，并且在大多数情况下没有代谢物经尿排泄。参见Hardin等人，Antimicro.Agents and Chemotherapy，32：1310-1313(1988年)。
依他康唑被广泛分布到亲脂性的组织中，使浓度达到对应血浆浓度的2-20倍。在体外的各种研究已显示，依他康唑抑制了麦角甾醇的基于细胞色素P450的合成，而这是真菌细胞膜的一个关键组分。这通常导致通透性地增加以及细胞内成分的渗漏。在高浓度下，细胞的内细胞器退化，过氧化物酶体增加，可能发生坏死的变化。在体外依他康唑表现出抑制皮炎芽生菌、荚膜组织孢浆菌、荚膜组织孢浆菌杜氏变种、黄曲霉、烟曲霉和新型隐球酵母的活性，以及对其它真菌种属的散发性抑制活性。
禁忌依他康唑与西沙必利、丁苯哌丁醇或阿司咪唑一起服用。服用依他康唑的其它可能的各种禁忌包括：特异体质肝炎、心脏节律障碍，和在有些情况下的死亡。由于当与依他康唑一起服用时，口服咪达唑仑或三唑仑也可导致血浆浓度的增加，因此这些药物不应与依他康唑一起使用。
依他康唑也是一种CYP3A4的有效抑制剂，CYP3A4与许多种药物包括洛伐他汀的代谢有关。最近有人报道依他康唑显著增加了这种降胆固醇药的血浆浓度而导致毒性，即骨骼肌肉毒性或肌病。参见Neuvonen和Jalava，Clin.Pharmacol.Ther.，60(1)：54-61(1996年)。
依他康唑在人体中通过肝脏代谢成各种代谢物。具体地说，依他康唑在仲丁基侧链上被CYP3A4所羟基化生成3-羟基-2-丁基基团，得到活性的代谢物羟基依他康唑。(例如参见Mikami等人，“In VitroAntifungal Activities of Hydroxy-Itraconazole，An ActiveMetabolite of Itraconazole”，Chemotherapy，42：290-296(1994年))。美国专利第4,791,111号公开了各种化合物(包括羟基依他康唑)的多血症，并描述这些化合物在温血动物中可用于抑制真菌和细菌。依他康唑具有3个立体化学(stereogenic)中心，而羟基依他康唑具有4个立体化学中心，提供16个立体异构的形式：8个顺式-异构体以及8个反式-异构体。
对于抑制某些真菌种属，羟基依他康唑的抗真菌活性已显示可与依他康唑相比。(参见Physician’s Desk Reference，第1305-1307页，第50版，Medical Economics Data Production Co.，N.J.，1996年)。还有人报道依他康唑通常比羟基依他康唑抑制真菌感染更为有效。(例如参见Mikami等人，“In Vitro Antifungal Activitiesof Hydroxy-Itraconazole，An Active Metabolite ofItraconazole”，Chemotherapy，42：290-296(1994年))。然而对于吡咯抗真菌剂而言，在体外最小的抑制浓度与临床数据之间尚未建立起关联作用。羟基依他康唑与依他康唑两者都是细胞色素P4503A4酶体系的抑制剂。因此，它们中每一个与主要被细胞色素P450 3A4酶体系所代谢的药物一起服用时都将导致可增加或延长治疗和不利影响如心律不齐的血浆浓度的增加。(参见Neuvonen和Jalava，“Itraconazole Drastically Increases Plasma Concentrations ofLovastatin and Lovastatin Acid”，Clin.Pharmaco.Ther.，60(1)：54-61(1996年7月)(Lovastatin)；Honig等人，J.Clin.Pharmacol.，33：1201-1206(1993年)(与丁苯哌丁醇相互作用)。
在治疗人体中真菌感染中使用依他康唑已经显示了某些不利的副作用，包括(但不限于此)：异常的肝功能和毒性、心脏节律障碍、性欲降低、头晕、水肿、疲劳、发烧、胃肠病症，如恶心、呕吐、腹泻、腹痛和厌食，头痛、高血压、低钾血、阳痿、不适、瘙痒、皮疹和瞌睡。
在防止依他康唑各种缺点的一个进展中，美国专利第5,474,997号公开了采用旋光纯的(2R，4S)-依他康唑的方法和组合物。所述方法涉及治疗局部性和全身性的真菌、酵母菌和皮霉菌感染，而同时避免了与外消旋依他康唑有关的伴随而来的各种不利作用。
我们还知道某些药物，如酮康唑和/或红霉素能干扰细胞色素P450，籍此抑制抗感染或抗炎的化合物如依他康唑的代谢。由于干扰依他康唑代谢，因此还存在着更多的依他康唑或其它公知抑制细胞色素P450的抗感染或抗炎的药物之间潜在的不利相互作用。
我们知道依他康唑具有某些不利的作用，包括(但不限于此)上述的那些副作用。一个这种不利的作用为顺式-依他康唑干扰或抑制几种药物的氧化代谢。这种抑制的生化基础包括顺式-依他康唑与细胞色素P450的药物相互作用。这种细胞色素P450体系涉及各种药物，包括(但不限于此)三环状抗抑郁药、非镇静抗组胺剂、抗心律失常药和β-肾上腺素能阻断剂的代谢。参见Stevens和Wrighton，J.Pharm.Exp.Therap.266(2)：964-971(1993年)。依他康唑抑制药物代谢对其临床使用存在着一个重要的局限，因它具有改变随后服用或一起服用的药物的代谢及药物动力学的潜在能力。结果该药的相互作用限制了依他康唑和某些其它药物(当随后服用或同时与依他康唑一起服用)的安全使用。(参见Physician’s DeskReference，第1305-1307页，第50版，Medical Economics DataProduction Co.，N.J.，1996年)。2.2继发感染和真菌病
全身性的真菌疾病(全身真菌病)通常是慢性的，为被非正常情况下为病原体的机会病原真菌所诱发，非常缓慢发展的病症。然而当其进入被HIV、电离辐射、皮质类固醇、癌症、免疫抑制剂等所侵害的宿主时或在肺气肿、支气管扩张、糖尿病、白血病、烧伤等的病症下它们可能会变为病原体。这种真菌疾病的症状通常是不强烈的，可能包括发烧、发冷、厌食和体重下降、不适和抑郁症。真菌疾病通常被限制在典型的解剖学上的分布，许多涉及肺中的原发病灶，当真菌从原发病灶传播时具有更多具体的真菌感染特征表现。例如，球孢子菌病作为急性、良性、病程有限的呼吸疾病的原发形式发生，疾病逐渐从原发的状态发展为慢性、通常是致命的皮肤感染、淋巴结感染、脾脏感染以及肝脏感染。类似地，芽生菌病主要涉及到肺，并偶而扩展至皮肤。其它感染性疾病如类球孢子菌病和念珠菌病具有不同的进程，取决于病因是否表现出几种涉及皮肤、粘膜、淋巴结和内部器官的形式。具体真菌疾病的诊断通过将致病性的真菌从痰、尿、血液或骨髓分离出来，或通过根据组织侵入的流行真菌形式来进行。
表面的真菌感染是由于涉及皮肤外层、毛发或指甲的皮霉菌或真菌所引起的。感染可能导致温和的炎症，并引起间歇的缓解以及逐渐传播、扩大的加重、增加损伤。包括念珠菌病、口部念珠菌病(鹅口疮)的酵母菌感染通常局限于皮肤和粘膜，症状随感染部位的不同而异。一般而言，感染呈红斑，通常会痒，在腋窝、脐部、腹股沟、脚趾之间和指蹼上呈渗出性的斑。口部鹅口疮涉及炎症的舌头或颊粘膜，并呈白色渗出物斑，而慢性粘膜皮肤念珠菌病的特征为在前额或鼻子上呈红色、起脓胞的、结硬皮的、加厚的损伤。
许多“康唑(conazole)”抗真菌剂(包括依他康唑)具有同样不利的作用。这些不利的作用包括(但不限于此)恶心、呕吐、贫血、血小板增多、超敏性反应、肝细胞毒害性和一些中枢神经系统毒性。人们已经发现依他康唑的外消旋混合物引起恶心和呕吐、厌食、头痛和头晕。肝细胞毒害性和超敏性反应包括荨麻疹，而血清肝酶的提高也与服用所述药物有关。肝细胞毒害性是一种不太普遍、但更为严重的不利作用。实际上，因为存在潜在的肝细胞毒害性低影响的严重后果，通常我们是不赞同使用口服康唑作为第一线的抗真菌剂的。(例如参见Lavrijsen等人，Lancet 340：251-252(1992年))。2.3 CNS的继发感染
通常在无免疫应答的病人、特别是感染HIV的病人中，继发感染固定于脑部或中枢神经系统(“CNS”)的其它部位。这些类型的感染很难进行治疗，因为活性剂无法通过血脑屏障并渗透到CNS。此外，可以有效或无效渗透血脑屏障的各种药物通常会导致CNS中毒。因此很显然需要一种具有显著抗菌或抗真菌的活性并具有通过血脑屏障而不引起显著毒性的活性剂。
虽然已经有人就分子通过血脑屏障的能力做了一些预言，但这些预言至多仅是推测。一般人们考虑一种化合物进入脑部的速率和程度，主要通过其分配系数、电离常数和分子大小来加以确定。对于脑渗透没有出现单一的分配溶剂体系作为普遍可应用的模式(虽然辛醇水体系得到特别的关注)，而Hansch及其同事提出，对于进入CNS，在该体系中分配系数约为100是最适宜的。(参见Glave和Hansch，J.Pharm.Sci.，61：589(1972年)；Hansch等人，J.Pharm.Sci.，76：663(1987年))。但是，优化一种化合物的结构以改进脑部渗透可能导致其功效的降低。因此，根本的困难在于优化血脑屏障的渗透性以及化合物的功能。
在开发一种药物、特别是一种通常用于与其它疗法结合的治疗方案中的抗真菌剂时必须考虑许多因素。例如，配制药物的各种物理性能、生物利用率、功效、药物的相互作用、药物代谢、毒性等。依他康唑的相对极性和不溶解性使其很难在非肠道溶液中进行制备。另外，由于依他康唑与细胞色素P-450之间的相互作用(肝代谢)以及由于这些药物通常对其有效的真菌和细菌感染通常发现于CNS、特别是脑部，使得这些药物的使用受到局限。类似地，由于依他康唑通常与抗病毒药、抗菌素、抗组胺药、抗抑郁药、抗心律不齐药、抗肿瘤药、β-受体阻滞药和低胆固醇血剂或其各种组合同时或联合给予病人，故药物之间的相互作用是一个主要的考虑因素。
特别需要开发各种组合物和方法用于治疗上述细菌、真菌或其它微生物感染，而同时减少药物代谢的抑制、减少不利的药物相互作用、减少肝细胞毒害性以及改进选择性、CNS渗透率和总的功效。
3.本发明概要
我们现在发现顺式-羟基依他康唑是一种有效治疗人体局部性和全身性感染的药物，而同时显著降低或避免各种不利的副作用，包括(但不限于此)肝细胞毒害性、抑制药物代谢、药物相互作用以及与Qt期间延长有关的心脏副作用。此外，我们还发现顺式-羟基依他康唑是一种有效治疗位于脑部或CNS其它部位的继发机会致病性感染的药物。顺式-羟基依他康唑可以渗透血脑屏障并选择性地与真菌细胞色素P450相互作用以通过最低的肝细胞毒害性和CNS毒性的代价根治所述真菌疾病。顺式-羟基依他康唑的使用提供了一种有效治疗局部性和全身性真菌、酵母菌和其它皮霉菌感染，而同时减少不利作用的方法。
本发明方法提供了一种治疗人体中各种感染和炎症，而同时避免通常与服用各种化合物如依他康唑有关的不利副作用的方法。这些不利的副作用包括(但不限于此)异常的肝功能、心脏节律障碍、性欲减低、头晕、水肿、疲劳、发烧、胃肠病症如恶心、呕吐、腹泻、腹痛和厌食、头痛、高血压、低钾血、阳痿、不适、QT期间延长、瘙痒、皮疹和瞌睡。
本发明还包括通过给所述病人服用治疗有效量的顺式-羟基依他康唑、磷酸盐衍生物、硫酸盐衍生物或其药学上可接受的盐来治疗局部性或全身性的微生物感染，而同时避免与服用依他康唑有关的伴随而来的各种不利副作用的方法。
本发明还包括治疗局部性或全身性的微生物感染、细菌感染、真菌感染、酵母菌感染、皮霉菌感染或炎症的各种方法，通过给所述病人服用治疗有效量的顺式-羟基依他康唑或其药学上可接受的盐，每一种方法都能达到其各自的目的而同时避免与服用顺式-依他康唑有关的伴随而来的各种不利副作用。
本发明的方法可以达到目的而同时基本上避免抑制其它药物通过细胞色素P450途径的代谢。顺式-羟基依他康唑的治疗有效量通常为约1.0毫克-约1000毫克/天，更优选为约10毫克-约500毫克/天。所述量的顺式-羟基依他康唑、磷酸盐衍生物、硫酸盐衍生物或其药学上可接受的盐可与药学上可接受的载体一起服用。
本发明的方法包括治疗细菌感染，包括(但不限于此)猪红斑丹毒丝菌(Erysipelotric insidiosa)、葡萄球菌属如溶血性葡萄球菌，或链球菌属，如酿脓链球菌；和真菌、酵母菌和皮霉菌感染，包括(但不限于此)曲霉病、烟曲霉、芽生菌病、皮炎芽生菌、白假丝酵母病和口腔念珠菌病(鹅口疮)、白色念珠菌、热带念珠菌、球孢子菌病、隐球菌病、新型隐球菌、栉霉属mentagrophytes、组织胞浆菌病、犬小孢子菌、毛霉菌属各种、甲真菌病、巴西芽生菌、疣状瓶霉、卵状糠秕孢子菌、水霉属各种、申克侧孢、孢子丝菌属schenckii、须发癣菌和红色发癣菌。
本发明还涉及用于治疗人体的药物组合物，它包括药学上可接受的载体和治疗有效量的顺式-羟基依他康唑或其药学上可接受的盐。
顺式-羟基依他康唑在组合物中的量通常为约50毫克-约1200毫克，但在优选的实施方案中其量为约100毫克-约1000毫克。所述组合物可以口服、非胃肠(静脉内)或局部给药。上述组合物可任选含有一种或一种以上其它的活性组分，包括抗真菌剂。
本发明还包括采用具有增强效力、改进溶解性、增强的生物利用率、具备渗透CNS的能力、选择性抑制真菌细胞色素P450以及降低心脏副作用或不利的药物的相互作用的治疗全身性和局部性的细菌或真菌感染的改进方法。这些化合物具有下式：其中R选自氢、-P(O)(OH)2、-SO3H或其盐。在这些化合物的化学结构中有四个不对称的碳(以星号表示)：两个在三唑酮的仲丁基侧链上，两个在二氧戊环上。这些化合物特别适用于治疗无免疫应答的病人、特别是感染HIV的病人的脑部的真菌感染。
本发明还包括通过给人服用治疗有效量的下式化合物治疗人体中枢神经系统的念珠菌病感染的方法：其中R为氢、-P(O)(OH)2、-SO3H或其药学上可接受的盐。在一个实施方案中，发现待治疗的感染部位位于脑部。在一个优选的实施方案中，避免了顺式-羟基依他康唑与抑制细胞色素P450的药物之间的相互作用。服用的顺式-羟基依他康唑的量通常为约1毫克-约1000毫克/天。4.本发明详述
本发明包括在人体中治疗或预防选自细菌、真菌、酵母菌或皮霉菌感染的感染，而同时避免与服用依他康唑有关的伴随而来的各种不利副作用的方法，它包括给所述病人服用治疗有效量的顺式-羟基依他康唑或其药学上可接受的盐。
本发明还包括治疗或预防中枢神经系统包括(但不限于此)脑部的细菌、真菌、酵母菌或皮霉菌感染，它包括给需要这种治疗的病人服用有效量的顺式-羟基依他康唑或其药学上可接受的盐。具体地说，本发明包括使用下式的化合物：其中R为-PO(OH)2、-SO3H或其盐。这些顺式-羟基依他康唑的衍生物由于其渗透CNS或通过血脑屏障和通过选择性抑制真菌CP450的相互作用多于抑制人体CP450的相互作用从而抑制真菌感染的能力而显得特别有利。
本发明还包括用于治疗或预防上述正常或无免疫应答或免疫抑制的病人的感染的药物组合物，它包含药学上可接受的载体和治疗有效量的顺式-羟基依他康唑，或磷酸盐衍生物、硫酸盐衍生物或其药学上可接受的盐。
如上所述，羟基依他康唑含有四(4)个不对称的碳，能得到十六(16)个立体异构体—八个顺式和八个反式。本发明仅包括顺式-羟基依他康唑，并包括外消旋顺式-羟基依他康唑，以及八(8)个顺式-羟基依他康唑的旋光纯的异构体和其任何可以分离或另外制备的组合。对于所权利要求的治疗方法而言，本发明应被本领域技术人员理解为具体包括使用含有这些异构体或其混合物的组合物的方法。
我们发现，与依他康唑相比，当顺式-羟基依他康唑或其药学上可接受的盐或立体异构体给需要抗感染或抗炎治疗的病人服用时，它有利地：避免了与QT间期延长有关的伴随而来的心脏副作用、赋予了增强的效力、增加了生物利用率、改进了通过血脑屏障的输送能力、降低了细胞色素P450基的药物-酶的相互作用、降低了肝细胞毒害性，以及使与真菌细胞色素P450的相互作用比与人体细胞色素P450相互作用更强。
我们相信，服用本治疗方法中的顺式-羟基依他康唑使治疗医生能更加容易地在同时或相继采用顺式-羟基依他康唑疗法时使用其它疗法。这样使得可以有一个更好的完整和连续的治疗计划。采用顺式-依他康唑不易做到这一点，因为医生须考虑不利的药物相互作用、短的半衰期以及组织分布，而这可源自依他康唑的抑制效果、一起服用的药物，或两者皆有。本发明不但使治疗医生在顺式-羟基依他康唑治疗后更快地介入到相继另外一种药物的服用，而且其它药物可以与顺式-羟基依他康唑组合或平行使用，因为我们相信后者不会干扰前者的代谢。这就是顺式-羟基依他康唑明显优于顺式-依他康唑之处。
顺式-羟基依他康唑在治疗剂量上并非同样抑制细胞色素P450体系，因而可以更安全和更迅速地用于相继或同时的协同疗法中。因此其它药物，如抗抑郁药、抗心律失常药、抗组胺剂、抗菌素、抗真菌剂以及此处所述的其它药物都可以在继顺式-羟基依他康唑之后或与顺式-羟基依他康唑组合使用。
因而，我们发现当顺式-羟基依他康唑与抑制或被细胞色素P450所代谢的药物，包括(但不限于此)酮康唑、西沙必利、洛伐他汀、丁苯哌丁醇、氟西汀、阿司咪唑、氯雷他定、咪达唑仑、三唑仑以及本领域技术人员所公知的其它药物同时服用时，与顺式-依他康唑同时与所述药物相比，其与所述药物之间的相互作用得到减少。
因此，本发明也包括一种避免药物与细胞色素P450体系之间的相互作用，而同时能治疗人体中由于微生物所引起的感染(如细菌、真菌、皮霉菌)的方法，其中所述病人服用顺式-羟基依他康唑或磷酸盐衍生物、硫酸盐衍生物或其药学上可接受的盐。
术语“不利作用”或“不利副作用”包括(但不限于此)异常的肝功能、肝细胞毒害性、心脏节律障碍、与QT间期延长有关的各种心脏副作用，如心脏心律不齐、不利的药物相互作用、性欲降低、头晕、水肿、疲劳、发烧、肠胃病症、头痛、高血压、低钾血、阳痿、不适、瘙痒、皮疹和瞌睡，或其各种综合症。术语“肠胃病症”包括(但不限于此)恶心、呕吐、腹泻、腹痛和厌食，及其各种综合症。有人报道服用某些康唑可能增加心脏心律不齐的危险。有报道说心律不齐是全身性的外消旋依他康唑的一种副作用，据报道，当外消旋的依他康唑与丁苯哌丁醇同时服用时会发生一种特别亚型的心律不齐一扭转型心动过速(Torsades de Pointes)。缺乏许多心律不齐或QT异常的临床报道只不过反映了目前相对较少的患者人群。
短语“治疗有效量”指在治疗或控制感染及其它病症中能提供治疗益处的顺式-羟基依他康唑的量。
术语“抗感染的”包括(但不限于此)抗细菌、抗微生物、抗真菌、抗各种酵母菌和抗皮霉菌或其各种组合。术语“感染”包括细菌感染、微生物感染、真菌感染、酵母菌感染和皮霉菌感染，或其各种组合。
顺式-羟基依他康唑在急性和慢性的疾病控制中预防或治疗剂量的大小将随所治疗病症的严重程度及给药途径的不同而异。所述剂量和给药频率也将根据个别病人的年龄、体重和反应而有所不同。一般而言，对于此处所述的各种病症，总的日剂量为约0.1毫克至少于约10毫克，以单剂量或分次的剂量口服、局部、经皮或通过吸入法局部给药。例如，优选的口服日剂量范围应为约0.1毫克至约5毫克、更优选为约0.2毫克至约1毫克。
我们还推荐小孩、年龄超过65岁的病人以及那些肾功能或肝功能被损害的病人开始时接受低剂量，然后再根据其个别的反应或血液水平逐渐增加(titrate)。在一些情况下需要使用这些范围以外的剂量，这对于本领域技术人员来说是显而易见的。另外还应注意，根据个别病人的反应，临床医师或治疗医生应懂得如何以及何时中断、调整或终止治疗。
术语“顺式-羟基依他康唑或药学上可接受的盐或其立体异构体的治疗有效量”和“顺式-羟基依他康唑或其药学上可接受的盐的治疗有效量”包括在上述的给药频率和剂量内。
可采用任何适宜的给药途径为病人提供有效剂量根据本发明的方法的顺式-羟基依他康唑。例如，可采用口服、直肠、非胃肠、静脉内、局部、经皮、皮下、肌内等各种给药的形式。药剂的形式包括片剂、锭剂、分散液、悬浮液、溶液、胶囊、贴剂等。
用于本发明方法中的药物组合物包含作为活性成分的顺式-羟基依他康唑、顺式-依他康唑的代谢衍生物或其药学上可接受的盐，并可含有药学上可接受的载体，以及任选的其它治疗成分。
术语“药学上可接受的盐”指从药学上可接受的、无毒性的酸或碱(包括无机或有机酸)中制备的盐。这些无机酸的例子为盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸和磷酸。适宜的有机酸可选自，例如脂族类、芳族类、羧酸类和磺酸类的有机酸，其例子为甲酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、羟基乙酸、葡糖醛酸、马来酸、糠酸、谷氨酸、苯甲酸、邻氨基苯甲酸、水杨酸、苯乙酸、扁桃酸、embonic(朴酸)、甲磺酸、乙磺酸、泛酸、苯磺酸、硬脂酸、磺胺酸、algenic和半乳糖醛酸。这种无机碱(可与本发明的硫酸盐或磷酸盐化合物形成盐)的例子包括从铝、钙、锂、镁、钾、钠和锌中制得的金属盐。适宜的有机碱可选自如N，N-二苄基乙二胺、氯代普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、乙二胺、meglumaine(N-甲基葡糖胺)、赖氨酸和普鲁卡因。
用于本发明方法中的组合物包括各种组合物，如悬浮液、溶液和酏剂、气溶胶，或各种载体，如淀粉、糖、微晶纤维素、稀释剂、成粒剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂等，在口服固体制剂的情况中(如粉末、胶囊和片剂)，以口服固体制剂优选于口服液体制剂。最优选的口服固体制剂为片剂。
因片剂和胶囊易于服用，故其代表着最好的口服剂量单位的形式，在这些情况中使用固体药用载体。如需要，可通过标准水溶液或非水溶液的技术将片剂包衣。
除了上述一般的剂量形式外，用于本发明方法中的化合物也可以通过控制释放的方式和/或输送装置如美国专利3,845,770、3,916,899、3,536,809、3,598,123和4,008,719中所述(这些公开的内容此处通过引用并入本文)进行给药。
用于本发明方法中适合于口服给药的药物组合物可为独立单位的形式，如胶囊、扁囊剂或片剂，或气溶胶喷雾剂的形式，每一种含有预定量的为粉末或颗粒，或含水液体或非水液体中的溶液或悬浮液、水包油乳化液或油包水乳化液的活性成分。这些组合物可通过任何制药方法进行制备，但所有方法都包括将活性成分与组成一种或一种以上所需成分的载体一起混合的步骤。一般而言，通过使活性成分与液体载体或细分的固体载体或两者进行均匀和紧密的混合，然后如需要将产物做成所需的形式来制备所述组合物。
例如，通过压制或模制，任选采用一种或一种以上助剂可制备片剂。压制的片剂可通过在适宜的机器上压缩自由流动形式如粉末或颗粒的活性成分，任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、表面活性剂或分散剂混合来制备。模制的片剂可通过在适宜的机器上模制用惰性液体稀释剂进行湿润的粉末状化合物的混合物来制得。最好每一个片剂含有约0.1毫克至不超过约10毫克的活性成分，每一个扁囊剂或胶囊含有约0.1毫克至不超过约10毫克的活性成分，即顺式-羟基依他康唑。
可以采用微生物学和药理学研究以确定具有抗许多真菌、酵母菌和皮霉菌的广谱活性的、作为抗真菌剂的羟基依他康唑旋光纯的对映体和外消旋混合物的相对效力以及特性分布。
关于上述各种化合物的抗微生物活性，所选择的实验用来说明描述有用的抗微生物活性，且在任何情况下对本发明都不构成限制，包括易染的微生物的范畴。在体外可评价抗真菌康唑在几种浓度(微克/毫升)下抗各种真菌和细菌性能。(参见Van Cutsem，Chemotherapy38 Suppl.1：3-11(1992年)和Van Cutsem等人，Rev.Infect.Dis.9 Suppl.1：S15-S32(1987年))。抑制真菌的测试在16×160毫米试管中的Sabouraud氏液体(每100毫升蒸馏水中1克neopeptoneDifco和2克葡萄糖Difco)中进行，每一个含有4.5毫升已经在120℃下高压消毒5分钟的液体介质。将所试验的化合物溶解于50％乙醇中，初始浓度为20毫克/毫升。随后溶液用无菌的蒸馏水稀释至浓度为10毫克/毫升。在蒸馏水中进行连续的十进制稀释。将所述药物的0.5毫升溶液加入到含有4.5毫升Sabouraud氏液体介质的试管中，籍此得到1000、500、100、10和1微克/毫升介质的浓度。通过将0.5毫升蒸馏水加到4.5毫升介质中，加入乙醇以得到与含有1000和500微克药物相同的浓度，从而制得对照试管。将丝状的真菌在25℃的Sabouraud氏琼脂中孵育2-3周。然后将2×2×2毫米的块状物接种到介质中。所有的培养物都进行重复试验，并在25℃孵育14天。羟基依他康唑的抗真菌活性在体外含10％钝化的牛血清的Sabouraud培养液中得到增强，并取决于所用的试验介质。孵育14天后可以观察到在Sabouraud培养液中完全或显著抑制了以下菌种的生长：狗小孢霉、须发癣菌、白假丝酵母、孢子丝菌schenckii、巴西芽生菌、皮炎芽生菌、组织胞浆菌属spp.、曲霉属spp.以及其它真菌和细菌。可以比较羟基依他康唑、其衍生物及标准药物如咪康唑有关范围和功效的浓度/反应曲线。
羟基依他康唑在体内的活性可与实验的豚鼠中的皮肤念珠菌病(candidosis)和大鼠的阴道念珠菌病进行比较。通过采用白色念珠菌在卵巢切除和子宫切除的Wistar大鼠(100克)(每周用100微克芝麻油中的雌二醇十一酸酯进行皮下处理)诱发阴道感染来评估所述化合物在阴道念珠菌病中的体内活性。假动情期的动物用固定浓度生理盐水中的白色念珠菌进行阴道内感染。在感染后固定的天数通过获取阴道涂片来评价感染或治愈的对比。可以给出在毫克/千克的基础上进行预防或治疗的待评估和比较的药物，通过比较每一个药物组中阴性动物在总数中的比例来判断其效力。在类似的研究中，抑制豚鼠皮肤念珠菌病的活性(Van Cutsem等人，Chemotherapy，17：392(1972年))为测试本发明化合物提供了基础。
通过检查羟基依他康唑在人体、兔子和犬心脏中对心脏动作电位和收缩性的影响来评估促使心律不齐的电位。
扭转型心动过速是一种公知的抗心律不齐的药物，如奎尼定、索他洛尔和乙酰基普鲁卡因胺的副作用，它导致心脏再极化的延长。所有这些药物共同具有阻断被称为延迟矫正器(IK)的细胞内钾通道的能力，并通常假定这在机械上与其诱发扭转型心动过速综合征的能力有关。(参见Zehender等人，Cardiovascular Drugs Ther.515-530(1991年))。
在离体的豚鼠或兔子心脏中QT持续时间和动作电位持续时间的增加可用来说明致心律不齐的作用。心脏用含有0.0、1.0、5.0、10.0或30.0微摩尔外消旋依他康唑的充氧的Tyrode氏溶液进行灌注。从心脏电极中测定QT持续时间和动作电位持续时间(APD)。在单独的实验中，将心脏分成3个接受依他康唑或羟基依他康唑的亚组以确定其各自对QT持续时间和APD的影响。
为了观察体内的影响将重5-20千克的两种性别的杂种狗麻醉并通过标准技术安装用于测定血压及EKG的装置。将dP/dT的固态传感器放置于左心室中，并放入心外膜电极。试验化合物以逐渐增加的剂量注入，从2微克/千克/分开始达15分钟，并逐渐增加直到发生心血管萎陷为止。所测量的参数有：血压、心率、dP/dT和QT间期。根据测试的化合物测量血液动力学和电活性。
在体外，在人肝的微粒体、人淋巴细胞和细胞培养体系中评价促使肝细胞毒害性的可能性。肝微粒体从人肝脏中制得。将组织解冻，然后在Polytron均化器中的0.15M的KCl中进行均化。将均浆离心，使沉淀物重新悬浮并均化于0.15M的KCl中。对等份试样在-70℃下冷冻并贮存。将人淋巴细胞从新鲜、肝素化的人血液中无菌地分离出来。血液用Eagle的最小基本介质进行稀释，并在Ficoll-Paque上分层。将样品离心，然后将淋巴细胞从水溶性的Ficoll界面中移出并悬浮于介质(15Mm HEPES，pH＝7.4)中。然后将细胞离心，在HEPES介质中洗涤一次，再重新进行悬浮。
通过3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-二苯基溴化四唑鎓(tetrazolim)(MTT)转化为紫色甲来评价细胞毒性。MTT转化为染料在多孔板上进行。制备后，肝微粒体或淋巴细胞单独或与浓度为1-400微摩尔的所述试验化合物一起在增湿的孵化器中37℃进行孵育。孵育后，微粒体/细胞用5％HEPES-缓冲介质中的白蛋白洗涤并重新悬浮。然后这些微粒体/细胞在37℃下在增湿的孵育器中进行孵育。孵育后将125微克的MTT加入到每个孔中。使多孔板在37℃下孵育并进行离心。离心后，加入100微升异丙醇，孵育后采用自动板-读数器测定光密度。
本发明通过参考以下详细描述用于本发明方法中的化合物和组合物及其效用的实施例进一步得到解释。对本领域技术人员而言，显而易见可以进行许多在本发明范畴之内的包括材料及方法上的修改。5.实施例5.1 实施例1：顺式-依他康唑和依他康唑代谢物的制备
依他康唑可通过Heeres，J.等人在J.Med.Chem.27：894-900(1984年)的文章中所公开的方法进行合成，而(2R，4S)-依他康唑可通过美国专利第5,474,997号中所公开的方法进行合成，此处特地通过引用这两个公开的内容用于制备依他康唑。通过本领域中常规的反应步骤类似地制备羟基依他康唑。羟基依他康唑的制备见述于例如美国专利第4,791,111号中，此处特地通过引用此公开的内容用于制备羟基依他康唑。
二氧戊环DTTT通过文献方法从R-3-甲苯磺酰氧基(toxyloxy)-1，2-丙二醇或S-3-甲苯磺酰氧基-1，2-丙二醇，通过酸性催化缩酮化反应提供DTTT来制备。
二氧硫代戊环(dioxothiolane)从合适构型的丁二醇中，通过采用亚硫酰氯进行处理，随后在三氯化钉的存在下通过采用高碘酸钠就地对所得的环状亚硫酸酯进行氧化来制备。
通过美国专利4,267,179中实施例XVII的方法所制备的2，4-二氢-4-[4-[4-(4-甲氧基苯基)-哌嗪基]苯基]-3H-1，2，4-三唑-3-酮与二氧硫代戊环通过修改的Gao和Sharpless在J.Am.Chem.Soc.110：7538(1988年)上的方法，在冠醚的存在下采用DMF中的氢化钾进行反应。所得的甲氧基-硫酸盐通过在100-110℃下用48％的HBr进行加热而裂解成酚-醇。
使所述甲苯磺酸酯与所述酚-醇在DMF中的氢氧化钾的存在下进行反应以得到产物。
当需要R为硫酸盐时，可以重排各步骤的次序使2，4-二氢-4-[4-[4-(4-甲氧基苯基)-哌嗪基]苯基]-3H-1，2，4-三唑-3-酮的甲氧基在残余的仲丁基侧链加成前进行裂解，并代以先加入二氧戊环DTTT，然后是二氧硫代戊环。
当需要R为磷酸盐时，甲氧基-硫酸盐可在45-50℃下用48％的HBr进行部分水解以得到酚-醇的类似物(其中所述酚仍保持被甲基化)。然后根据PCT申请WO 94/17407(此处通过引用并入本文)的方法用二苄基二异丙基氨基磷酸酯(phosphoramidite)和叔丁基氢过氧化物进行处理。在钯催化剂的存在下通过氢解使苄基保护基裂解后便得到上述的产物。5.2实施例2：抗真菌活性Kirby-Bauer检验法
如上在Van Cutsem的讨论和在美国专利第5,474,997号中所述制备白色念珠菌、新型隐球菌和酿酒酵母的活性生长培养物。将培养物稀释至0.5McFarland标准，然后涂到150毫米的Sabouraud氏葡糖琼脂板上。采用圆盘分液器将纸盘(7毫米)置于琼脂板上。接着将10微升的10毫克/毫升每个样品羟基依他康唑溶液吸移到各自的纸盘上。然后各盘在30℃下孵育16个小时。然后以毫米为单位测量抑制区，汇总如下： 化合物白色念珠菌新型隐球菌 酿酒酵母 A 22 28 22 B 25 25 20±依他康唑 17 22 15
数据代表抑制区(毫米)；A和B为羟基依他康唑样品。
羟基依他康唑和衍生物体内的活性可比较其抗试验的豚鼠皮肤念珠菌病和大鼠的阴道念珠菌病的情况。通过采用白色念珠菌在卵巢切除和子宫切除的Wistar大鼠(100克)(每周用100微克芝麻油中的雌二醇十一酸酯进行皮下处理)诱发阴道感染来评估这些化合物在阴道念珠菌病中的体内活性。假动情期的动物用固定浓度生理盐水中的白色念珠菌进行阴道内感染。在感染后固定的天数，通过获取阴道涂片来评价感染或治愈的对比。可以给出在毫克/千克的基础上进行预防或治疗的待评估和比较的药物，通过比较每一个药物组中阴性动物在总数中的比例来判断其效力。在类似的研究中，抑制豚鼠皮肤念珠菌病的活性为比较提供了基础(Van Cutsem等人，Chemotherapy，17：392(1972年))。5.3实施例3：细胞色素P450的抑制
进行本研究以确定顺式-依他康唑和顺式-羟基依他康唑抑制人细胞色素P4503A4(CYP3A4)的程度。CYP3A4涉及许多药-药间相互作用，并且顺式-依他康唑和顺式-羟基依他康唑对CYP3A4的定量抑制表明了这种药-药间相互作用的可能性。采用定名为h3A4v3的人类淋巴母细胞系制备的微粒体中的模型底物睾酮和cDNA-衍生的CYP3A4测定抑制率。研究设计
本抑制研究包括确定测试物50％的抑制浓度(IC50)。一式两份测试单一的睾酮浓度(120微摩尔，约为表观Km的两倍)和十个测试物的浓度(相差约1/2个对数值)。通过6(β)-羟基睾酮代谢物的产生来分析睾酮的代谢情况。经具有吸光度检测的HPLC分离很容易将这种代谢物定量。测试物的贮存/制备并加入孵育液
测试物将在室温下下贮存。将测试物溶解于乙醇中以加入到孵育液中。对所有测试物的浓度而言，溶剂的浓度将是恒定的。IC50确定
最终测试物的浓度为100、30、10、3、1、0.3、0.1、0.03、0.01、0.003和0微摩尔。每一种测试浓度将根据以下方法在双份孵育液中进行测试：方法
将0.5毫升含有0.7毫克/毫升蛋白质、1.3毫摩尔NADP+、3.3毫摩尔葡萄糖-6-磷酸酯、0.4U/毫升葡萄糖-6-磷酸酯脱氢酶、3.3毫摩尔氯化镁和120微摩尔在100毫摩尔磷酸钾(pH＝7.4)中的睾酮的反应混合物在37℃下孵育30分钟。加入已知量作为内标物的11(β)-羟基睾酮以校正提取期间的回收率。将所述反应混合物用1毫升二氯甲烷进行提取。提取液经无水硫酸镁进行干燥并在真空下进行蒸发。将样品溶解于甲醇中并注入到4.6×250毫米5u C18 HPLC柱中并在50℃下以流动相为甲醇/水以流速为1毫升/分进行分离。对6(β)-羟基的保留时间约为6分钟，对11(～)-羟基的保留时间为8分钟，对睾酮的保留时间为12分钟。通过产物和内标物在254纳米处的吸光度对其进行检测，通过采用11(β)-羟基峰的吸光度校正提取效率并与6(β)-羟基睾酮标准曲线的吸光度相比较来进行定量。数据报告
对于每一种测试物，测定了6(β)-羟基睾酮代谢物在每一种平行的孵育液中的浓度，计算相对于溶剂对照物的抑制百分数。通过线性内插法计算IC50。
用于本发明方法中给予所述化合物的有用药剂形式可以说明如下：5.4实施例4胶囊
大量单位胶囊是通过填充标准两节硬明胶胶囊来制得的，每一个胶囊装有1-100毫克粉末状活性成分、150毫克乳糖、50毫克纤维素和6毫克硬脂酸镁。5.5实施例5软明胶胶囊
制备在可消化的油如豆油、卵磷脂、棉子油或橄榄油中的活性成分的混合物，并通过容积式泵注入到明胶中形成含有1-100毫克活性成分的软明胶胶囊。洗涤胶囊并干燥。5.6实施例6片剂
大量的片剂通过常规方法进行制备，使得剂量单位为1-100毫克活性成分、0.2毫克胶体二氧化硅、5毫克硬脂酸镁、275毫克微晶纤维素、11毫克淀粉和98.8毫克乳糖。可以涂覆适当的包衣以增加适口性或延缓吸收。
除了此处示意和描述的那些内容之外，本发明的各种修改对于本领域技术人员来说(从以上的描述)将是显而易见的。这些修改将属于所附权利要求书的范畴之内。上述公开包括使本领域技术人员能实施所权利要求的本发明的所有最基本的资料。由于所引述的专利或公开内容可以提供进一步有用的资料，因此这些引述的材料此处通过引用全部并入本文。