激活灵芝孢子产生生理活性物质的方法 本发明涉及一种通过萌动生物转化激活处于休眠状态中的灵芝孢子在萌动期产生生理活性物质的方法。
灵芝在生长成熟期从菌盖弹射出象轻烟状的孢子称为灵芝孢子粉。据文献记载，灵芝孢子具有灵芝的全部遗传活性物质。关于灵芝及灵芝孢子粉对提高机体免疫功能的作用和机制以及对灵芝孢子的破壁方法，国内外已进行过大量的研究。有关灵芝孢子在萌动期产生干扰素诱生剂等生理活性物质的课题，迄今未见文献报道。
微小的灵芝孢子有着十分坚韧的双层孢壁，大自然中灵芝孢子萌发速度较慢，萌发率极低，在适宜条件下一般经24至48小时才可伸出芽管，72小时后菌丝可形成分枝，萌发率只有3-15％。
本发明的目的是提供一种通过萌动生物转化的方法，可显著提高灵芝孢子萌发率，激活处于休眠状态中的灵芝孢子在萌动期产生具有活性基团的生理活性成分。
本发明的方法是筛选成熟饱满的灵芝孢子，经浸泡诱导催芽、萌动培养、孢壁处理、干燥或浸提等工艺工序，有效保留灵芝孢子经萌动生物转化过程激活产生地大量的生理活性物质，具体步骤如下：
一、浸泡诱导催芽：筛选成熟饱满的灵芝孢子，加入清水、蒸馏水、生理盐水或促使灵芝孢子快速萌发的营养液进行浸泡诱导催芽，如椰子果腔水、1-5％麦芽浸出汁、0.5-25％灵芝子实体或灵芝菌丝体浸出液、0.1-5％生物素培养液、0.1-3％磷酸二氢钾及硫酸镁培养液，可选用其中一种或一种以上，加入量是灵芝孢子重量的0.1-5倍，浸泡时间视水温而定，通常在20-43℃水温中浸泡30分钟至8小时。
二、萌动培养：将浸泡中的灵芝孢子捞出，滴去多余水份，然后放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养。培养的相对湿度通常为65-98％，培养温度为18-48℃，萌动期时间为30分钟至24小时。灵芝孢子萌动率达95％以上。处于萌动期的灵芝孢子其孢壁已明显软化，有利提高其破壁率。
三、孢壁处理：将经萌动生物转化的灵芝孢子，在低温环境下经通常工业应用的几丁质酶、纤维素酶等酶解使其孢壁失去韧性并脆化，或采用通常工业超微粉碎、碾压、磨碎等机械进行超微粉碎破壁、碾压破壁、磨碎破壁、超高压微射流破壁或其它物理方法破壁，破壁率可超过99％。
四、干燥或浸提：在低温条件下进行干燥处理，包括采用通常工业冷冻干燥、真空干燥或低温干燥等)，成品水份小于4％。浸提可采用通常工业水提、醇提或薄膜浓缩等工艺方法提取有效成份配制成浸膏、针剂或口服液。
本发明方法灵芝孢子萌动率达95％以上。经历数千次实验及大量的药理学研究和化学分析表明，通过萌动生物转化工艺激活处于休眠状态中的灵芝孢子在萌动期产生生理活性物质，经进一步孢壁处理、干燥或浸提工艺工序，有效保留灵芝孢子经萌动生物转化过程激活产生的干扰素诱生剂、灵芝孢子内酯A、灵芝孢子酸A、孢醚、天然维生素E、超氧化物歧化酶(SOD)、活性糖蛋白、多种活性酶及细胞生长因子等具有活性基团的生理活性成分。
下面结合实施例对本发明作进一步详细说明。
实施例一：
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入1％麦芽浸出汁100公斤，进行浸泡诱导催芽6小时，水温20℃。
2．将经浸泡诱导催芽的灵芝孢子捞出，滴去多余水份，然后放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养。培养箱相对湿度为70％，培养温度为20℃，萌动期时间为12小时。经检查，灵芝孢子萌动率达96％，孢壁明显软化。
3．经超微磨处理，灵芝孢子破壁率达99％。
4．置于常规真空干燥装置中干燥处理，成品水份小于3％。
实施例二
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入椰子果腔水45公斤、蒸馏水100公斤进行浸泡诱导催芽30分钟，水温35℃。
2．将经浸泡诱导催芽的灵芝孢子滴干水份，放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养，培养箱相对湿度80％，温度36℃，萌动期时间为5小时。经电镜检查，灵芝孢子处于萌动状态，芽管已基本形成，孢壁明显软化。
3．加入几丁质酶0.1公斤、纤维素酶0.1公斤对已萌动生物转化的灵芝孢子酶解2小时，酶解温度40-55℃，使坚韧的双层孢壁失去韧性并脆化。或进一步经超微粉碎机破壁处理，灵芝孢子破壁率超过99％。
4．置于常规冷冻干燥装置中干燥处理，成品水份小于2.8％。
实施例三：
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入5％灵芝子实体浸出液150公斤进行浸泡诱导催芽4小时，水温30℃。
2．将经浸泡诱导催芽的灵芝孢子滴干水份，放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养，培养箱相对湿度65％，温度38℃，时间为5小时。经电镜检查，灵芝孢子处于萌动状态，但尚未伸出芽管，孢壁明显软化。
3．经超高压微射流装置破壁处理，灵芝孢子破壁率超过99％。
4．置于常规冷冻干燥装置中干燥处理，成品水份小于3.2％。
实施例四：
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入2％生物素培养液200公斤，进行浸泡诱导催芽3小时，水温40℃。
2．将经浸泡诱导催芽的灵芝孢子捞出，滴去多余水份，然后放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养。培养箱相对湿度为90％，温度为33℃，萌动期时间为4小时。经检查，灵芝孢子萌动率达95％，孢壁明显软化。
3．加入几丁质酶0.08公斤、纤维素酶0.2公斤，酶解温度40-55℃，对已萌动生物转化的灵芝孢子进行酶解3小时，使坚韧的双层孢壁失去韧性并脆化。经碾压机碾压处理，灵芝孢子破壁率超过99％
4．置于常规的低温鼓风干燥装置中干燥12小时，成品水份小于4％。
实施例五：
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入0.1％磷酸二氢钾及硫酸镁培养液100公斤，进行浸泡诱导催芽8小时，水温21℃。
2．将经浸泡诱导催芽的灵芝孢子滴干水份，放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养，培养箱相对湿度85％，温度42℃，时间为3小时。经电镜检查，灵芝孢子处于萌动状态，芽管已见形成，孢壁明显软化。
3．采用通常工业水提法抽提，然后再经醇提法抽提，合并抽提液并经薄膜浓缩处理。
4．进一步配制成浸膏、针剂或口服液。
实施例六：
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入5％灵芝菌丝体浸出液50公斤及1％麦芽浸出汁50公斤，进行浸泡诱导催芽7小时，水温25℃。
2．将经浸泡诱导催芽的灵芝孢子滴干水份，放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养，培养箱相对湿度85％，温度25℃，时间为12小时。经电镜检查，灵芝孢子处于萌动状态，但尚未伸出芽管，孢壁明显软化。
3．经超高压微射流装置破壁处理，灵芝孢子破壁率超过99％。
4．置于常规冷冻干燥装置中干燥处理，成品水份小于2.8％。
实施例七：
1．筛选成熟饱满的灵芝孢子100公斤，加入蒸馏水300公斤，水温32℃，浸泡8小时。
2．将经浸泡的灵芝孢子捞出，滴去多余水份，然后放置于保温保湿通风培养箱中进行孢子萌动培养。培养箱相对湿度为95％，培养温度为35℃，萌动期时间为24小时，经电镜检查，灵芝孢子处于萌动状态，但尚未伸出芽管，孢壁明显软化。
3．经超微磨处理，灵芝孢子破壁率达99％。
4．置于常规的真空干燥装置中干燥处理，成品水份小于3.5％。