综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法 技术领域 本发明属于岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的提取纯化方法， 特别涉及一种从海带中 提取纯化岩藻黄质、 岩藻聚糖硫酸酯的方法。
背景技术 ：
岩 藻 黄 质 英 文 名 称 fucoxanthin， 亦 称 岩 藻 黄 素、 褐 藻 素， 属于类胡萝卜素 (carotenoids) 中叶黄素类， 很多研究表明其具有抗炎、 抗癌活性， 尤其是减肥效果明显， 岩 藻黄质可以通过两种方式来消除脂肪堆积。岩藻黄质能够激活被称为 UCP1 蛋白， 这种蛋白 可以促进脂肪分解。同时它也可以刺激肝脏生成降低胆固醇水平的 DHA。日本北海道大学 研究人员证实， 岩藻黄质将成为减肥的灵丹妙药。目前， 岩藻黄质作为减肥成分被广泛应 用， 尤其在日本、 美国、 欧洲应用较普遍。 有很多含有岩藻黄质的减肥产品在销售， 另外日本 还开发出了很多岩藻黄质终端产品。
岩藻聚糖硫酸酯英文名称 Fucoidan， 是褐藻多糖硫酸酯的一种， 又名褐藻糖胶、 岩 2藻依聚糖， 是海带细胞间的特有多糖， 存在于细胞壁基质中。 主要由含硫酸基 (S04 ) 的岩藻 糖 ( 岩藻糖单糖的英文名字叫 “Fucose” ) 组成， 其次还伴有少量半乳糖、 甘露糖、 木糖、 阿拉 伯糖、 糖醛酸等， 是一种水溶性杂聚多糖。岩藻聚糖硫酸酯最多的组成组分是 ： 1， 2-α- 岩 藻糖 -4- 硫酸基。也就是说 ： 能够叫 “岩藻聚糖硫酸酯” 或 “Fucoidan” 的， 在其组成组分上 需要有一个明显的特点， 就是将该物质在酸性条件下水解， 所得到的水解液里各种单糖中， 岩藻糖 (Fucose) 的含量应是最高的， 另外还要含有硫酸基。岩藻聚糖硫酸酯是一种优秀的 健康食品、 药品原料， 因天然含有硫酸根， 从而具有阴离子高分子化合物的特性。岩藻聚糖 硫酸酯具有抗凝血、 降血压、 抗氧化、 降血脂、 抗肿瘤、 抗病毒、 增强机体免疫机能等多种生 物学活性。
连续逆流提取是指在提取的过程中， 物料和溶剂同时连续运动， 但运动方向相反， 通过机械传输， 连续定量加料， 使物料和溶媒充分接触， 设备内溶剂不断更新， 最终连续出 渣。 同时在设备内部不断更新溶剂， 溶剂在流动过程中不断获得物料的有效成份， 浓度不断 提高。 在连续进液和连续出液的过程中， 溶剂中存在连续的浓度梯度， 从而使提取液可以获 得比较快的浸出速度， 也可以获得比较高的提取液浓度。
超声波是指频率在 20 ～ 50000kHz 之间的机械波。其原理 ： 超声波能产生机械效 应、 空化效应及热效应， 超声波发生器产生高于 20kHz 的超音频电信号， 通过浸入式换能器 转成同频率的机械振荡而传播到提取液介质中， 并以超音频纵波的形式在提取液中疏密相 间地向前辐射， 使提取液振荡而产生许多的微小气泡。由于超音频纵波传播的负压和正压 区交替作用产生超过 10000 个标准大气压的微小气泡并随即爆破， 形成了对物料表面的细 效应的过程中， 连续不断作用于 微局部撞击， 使物料迅速击碎、 分解。在这种被称作 “空化” 溶质， 使中药材及其他天然物在溶液中产生 “湍动” 效应， 使边界层减薄， 产生的界面效应增 大了固液两相的传质面积， 产生的聚能效应活化了分离物质。 在超声波的空化、 粉碎等特殊 作用下， 细胞在溶媒中瞬时产生的空化泡崩溃而破裂， 以使溶媒渗透到细胞内部， 从而使细胞中的成分溶于溶剂之中， 以加速相互的渗透、 溶解。 细胞的破裂为成分向溶媒的扩散提供 了条件， 提高了有效成分的提出率， 从而达到了加速提取有效成分的目的。
目前， 岩藻黄质提取已经有了多个专利， 中国专利 CN 1706836A 使用的提取溶剂 为二甲基亚砜 ； 中国专利 CN 101565411A 使用的是丙酮、 70-99％乙醇或甲醇水溶液 ； 中国 专利 CN101735178A 使用的是 1-20 个碳原子的脂肪醇或其所组成的组， 它们不是因为沸点 高难于去除， 就是会将海带中的大量无机盐一起提取出来， 这些都加大了后续纯化的成本。
纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯也要用到离子、 大孔、 聚酰胺等树脂， 中国专利 CN101565411A 纯化岩藻黄质使用的是硅胶 ； 中国专利 CN 101735178A 纯化岩藻黄质使用的 是大孔树脂、 聚酰胺、 活性碳和氧化铝的组 ； 中国专利 CN 1115166C 纯化岩藻聚糖硫酸酯时 用到阴阳离子交换树脂 ； 但均是使用单一树脂或他们的组合， 这样上完一种树脂柱再上另 一种树脂柱， 使得生产效率低， 有效成分损失大， 生产成本比较高。
目前， 只是利用海带提取岩藻黄质或提取岩藻聚糖硫酸酯， 这样对海带的利用很 不充分。 发明内容 本发明的目的是克服现有技术中的不足， 提供一种综合利用海带提取纯化岩藻黄 质和岩藻聚糖硫酸酯的方法。
本发明的技术方案概述如下 ：
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 去离子水洗净的海带经打浆机打浆后， 用己烷或石油醚或体积比为 0.1 ～ 99.9 ∶ 99.9 ～ 0.1 的己烷和石油醚的混合溶剂为提取溶剂， 采用连续逆流提取技术， 在避 光、 20℃～ 50℃， 料液质量比为 1 ∶ 10 ～ 40 的条件下提取 40 ～ 90 分钟， 过滤， 得海带浆渣 和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加 1 ～ 5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所 得滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另将所得海带浆渣加 2-8 质量倍体积百分浓度为 50％～ 90％ 的乙醇水溶液， 在 200 ～ 1000w 超声提取 30 ～ 60 分钟， 过滤， 滤渣加 2 ～ 8 质量倍的水在 200 ～ 1000w 超声提取 30 ～ 60 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 用 1 ～ 10 倍柱体积去离子水、 1 ～ 10 倍 柱体积的体积百分浓度为 20％～ 80％乙醇水溶液、 1 ～ 10 倍柱体积的无水乙醇进行洗脱， 收集无水乙醇洗脱液， 减压干燥或喷雾干燥， 即得到纯化后的岩藻黄质提取物 ； 将所述岩藻 聚糖硫酸酯粗提液上混合树脂柱， 用 1 ～ 10 倍柱体积去离子水进行洗脱， 收集去离子水洗 脱液， 减压干燥或喷雾干燥， 即得到纯化后的岩藻聚糖硫酸酯提取物， 所述混合树脂为离子 交换树脂、 大孔树脂和聚酰胺树脂中至少两种树脂的混合。
所述提取溶剂为体积比 10 ～ 30 ∶ 90 ～ 70 的己烷和石油醚的混合溶剂。
所述己烷是指正己烷、 2 一甲基戊烷、 3 一甲基戊烷、 2， 2 一二甲基丁烷、 2， 3 一二甲 基丁烷或环己烷 ； 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚。
所述料液比为 1 ∶ 20 ～ 35。
所述混合树脂为离子交换树脂、 大孔树脂和聚酰胺树脂中的任意两种树脂的混 合， 混合质量比为 5 ～ 95 ∶ 5 ～ 95。
所述离子交换树脂为阳离子交换树脂， 型号为 ： 001×1 ； 001×2 ； 001×3 ； 001×4 ； 001×7 ； 001×7FC ； 001×8 ； 7320 ； 001×10 ； 001×16 ； D001 ； D001FC ； D001SC ； D001MB ； 110 ； JK110 ； DK110 ； D111 ； D111FC ； D111SC ； D112 ； D112SC ； 122 ； 724 ； D113 ； D113FC ； D113SC ； CD-180 ； D151。
所 述 大 孔 树 脂， 型号为 ： AB-8 ； HPD-100 ； HPD-300 ； HPD722 ； DS401 ； X-5 ； NKA-II ； LKY134 ； D101 ； D101-1 ； D101B ； DA201 ； DM2 ； D8 ； D6 ； ME-1 ； ME-2 ； FL-1 ； FL-2 ； SA-1 ； XAD-1 ； XAD-2 ； XAD-3 ； XAD-4 ； XAD-5 ； XAD-6 ； XAD-7 ； XAD-8 ； XAD-10 ； HP-20 ； HP-30 ； HP-40 ； HP-50。
所述聚酰胺树脂为柱层析聚酰胺树脂， 型号为 14-30 目 ； 30-60 目 ； 60-100 目 ； 100-120 目 ； 200-400 目。
本发明的方法节省了大量溶剂 ； 可以将岩藻黄质提取物和岩藻聚糖硫酸酯提取出 来， 提高岩藻黄质的提取率的同时， 减少了产品中无机盐质量 ；
本发明使用的提取溶剂由于沸点低， 溶剂很容易除去， 溶剂残留很低。 采用本发明 的方法不仅提高了提取效率， 减少了大量的无机盐、 单糖、 色素等杂质进入岩藻聚糖硫酸酯 粗提液的量， 有利于后续纯化。
使用混合树脂纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 使得无机盐、 重金属、 叶绿 素等杂质一次性被除掉， 有效成分损失少， 可以大幅提高生产效率， 降低生产成本。
使用海带提取岩藻黄质后的海带浆渣， 再用来提取岩藻聚糖硫酸酯， 使得海带原 料得到了充分利用。 具体实施方式
下面通过具体的实施例说明本发明综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖 硫酸酯的方法， 下面的描述仅是为了使本领域的技术人员更好地理解本发明， 但不以任何 方式限制本发明。
在本发明中使用海带提取岩藻黄质后的海带浆渣， 再用来提取岩藻聚糖硫酸酯， 使得海带原料得到了充分利用。但本领域技术人员可以理解， 也可直接用新鲜海带解冻打 浆或干海带复水打浆为原料， 按照本发明的方法也可以提取纯化岩藻聚糖硫酸酯。
在本发明中使用混合树脂作为分离介质， 在提高岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯含量 的同时， 除去了无机盐， 重金属、 叶绿素等无机和有机杂质， 其中混合树脂选自离子交换树 脂、 大孔树脂和聚酰胺树脂的任意两种树脂的混合。各实施例中所指料液质量比指的是海 带与提取溶剂的质量比。
实施例 1
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻后用去离子水洗净打浆， 以正己烷为提取溶剂， 在避光 40℃条件下使用连续逆流提取 60 分钟， 其料液质量比为 1 ∶ 20， 过滤， 得海带浆渣和提取 液；
(2) 所得提取液减压浓缩挥尽正己烷， 加入 1.5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另在上述所得海带浆渣中， 加入 4 质量倍体积百分浓度为 80％乙 醇水溶液， 在 400w 超声提取 60 分钟， 过滤， 滤渣加 4 质量倍去离子水， 400w 超声提取 60 分 钟， 过滤， 所得滤液为岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；(3) 将岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 混合树脂由质量比为 20 ∶ 80 的阳离子交 换树脂 001×7 与柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 4 倍柱体积的去离子水、 4 倍柱体积 的体积百分浓度为 50％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 4 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水 乙醇洗脱液， 减压干燥得纯化后的岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 52％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.66ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱， 混合树脂为质量比由 20 ∶ 80 的阳 离子交换树脂 001×7 与聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 4 倍柱体积的去离子水洗脱， 收集去 离水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 81％， 硫酸基含量 33％， 重金属 含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.89ppm。
实施例 2
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以石油醚为提取溶剂， 所述石 油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 35℃条件下使用连续逆流提取 75 分 钟， 料液的质量比为 1 ∶ 30， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽石油醚后， 加入 2 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所 得滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另将所得海带浆渣加入 6 质量倍体积百分浓度为 90％乙醇水溶 液在 700w 功率下超声提取 40 分钟， 过滤， 滤渣加 6 质量倍去离子水， 在 700w 功率下超声提 取 40 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ； (3) 将岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 混合树脂是由质量比为 50 ∶ 50 为阳离子 交换树脂 001×4 和大孔树脂 HPD300 组成， 用 5 倍柱体积的去离子水， 5 倍柱体积的体积 百分浓度为 75％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 6 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗 脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 57％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 0.88ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱， 混合树脂为质量比为 50 ∶ 50 的阳 离子交换树脂 001×3 和柱层析聚酰胺树脂 14-30 目组成， 用 5 倍柱体积去离子水洗脱， 收 集去离水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 73％， 硫酸基含量 24％， 重 金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.96ppm。
实施例 3
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 50 ∶ 50 的正己烷 和石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 40℃条 件下使用连续逆流提取 90 分钟， 料液的质量比为 1 ∶ 35， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂， 加入 4 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得滤 液即岩藻黄质粗提液 ； 另将所得海带浆渣中， 加入 8 质量倍体积百分浓度为 50％的乙醇水 溶液， 在 1000w 超声提取 30 分钟， 过滤， 滤渣加 8 质量倍去离子水， 在 1000w 超声提取 30 分 钟， 过滤， 所得滤液为岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 混合树脂是由质量比为 20 ∶ 80 的阳 离子交换树脂 001×1 与柱层析聚酰胺树脂 60-100 目组成， 用 7 倍柱体积的去离子水， 7倍 柱体积的体积百分浓度为 35％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 6 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收
集无水乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 51％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.62ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 20 ∶ 80 的 阳离子交换树脂 001×2 和柱层析聚酰胺树脂 200-400 目组成， 用 7 倍柱体积去离子水洗 脱， 收集洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 86％， 硫酸基含量 37％， 重 金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.91ppm。
实施例 4
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 70 ∶ 30 的正己烷 和石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 50℃条 件下使用连续逆流提取 90 分钟， 料液的质量比为 1 ∶ 10， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂， 加入 3 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得滤 液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中， 加入 2 质量倍体积百分浓度为 50％的乙醇水 溶液， 在 500w 超声提取 50 分钟， 过滤， 滤渣加 5 质量倍去离子水， 在 500w 超声提取 50 分钟， 过滤， 所得滤液为岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ； (3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂是由质量比为 20 ∶ 80 的阳 离子交换树脂 001×7FC 和大孔树脂 AB-8 组成， 用 8 倍柱体积的去离子水， 8 倍柱体积的体 积百分浓度为 20％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 8 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇 洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 47％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐 含量 2.45ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液上另一混合树脂柱， 该混合树脂是由质量比为 20 ∶ 80 的阳离子交换树脂 001×8 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 8 倍柱体积去离子水洗 脱， 收集去离子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 46％， 硫酸基含量 21％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.87ppm。
实施例 5
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 99.9 ∶ 0.1 的 正己烷∶石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 20℃条件下使用连续逆流提取 40 分钟， 料液的质量比为 1 ∶ 40， 过滤， 得海带浆渣和提取 液；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 5 质量倍体积百分浓度为 60％的乙醇水 溶液， 在 600w 超声提取 55 分钟， 过滤， 滤渣加 7 质量倍去离子水在 600w 超声提取 55 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 5 ∶ 95 的阳 离子交换树脂 7320 和大孔树脂 HPD100 混合组成， 用 6 倍柱体积的去离子水， 4 倍柱体积的 体积百分浓度为 40％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 9 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙 醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质浸膏， 岩藻黄质含量为 43％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐 含量 2.82ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 50 ∶ 50 的阳离子交换树脂 001×10 和柱层析聚酰胺树脂 14-30 目组成， 用 6 倍柱体积去离子水洗 脱， 收集去离子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 53％， 硫酸基含量 24％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 1.46ppm。
实施例 6
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以环己烷为提取溶剂， 在避光 40℃条件下使用连续逆流提取 50 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 25， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 1 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 7 质量倍体积百分浓度为 70％的乙醇水 溶液， 在 200w 超声提取 60 分钟， 过滤， 滤渣加 3 质量倍去离子水在 200w 超声提取 60 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 95 ∶ 5 的阳 离子交换树脂 001×16 和柱层析聚酰胺树脂 14-30 目混合组成， 用 3 倍柱体积的去离子水， 4 倍柱体积的体积百分浓度为 20％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 4 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 11％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 0.72ppm ； 将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 95 ∶ 5 的 阳离子交换树脂 D001 和柱层析聚酰胺树脂 14-30 目组成， 用 3 倍柱体积去离子水洗脱， 收 集去离子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 33％， 硫酸基含量 11％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 0.59ppm。
实施例 7
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 20 ∶ 80 的 2 一甲 基戊烷和石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 30℃条件下使用连续逆流提取 80 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 15， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 3.5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所 得滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 3 质量倍体积百分浓度为 55％的乙醇 水溶液， 在 300w 超声提取 45 分钟， 过滤， 滤渣加 5.5 质量倍去离子水在 300w 超声提取 45 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 5 ∶ 95 的 阳离子交换树脂 D001FC 和大孔树脂 HPD722 混合组成， 用 10 倍柱体积的去离子水， 10 倍 柱体积的体积百分浓度为 30％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 10 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收 集无水乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 42％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 2.81ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 5 ∶ 95 的 阳离子交换树脂 D001SC 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 10 倍柱体积去离子水洗 脱， 收集去离子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 77％， 硫酸基含量 28％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 2.94ppm。
实施例 8
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 10 ∶ 90 的正己烷 和石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 30℃条 件下使用连续逆流提取 55 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 30， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 4.5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所 得滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 4.5 质量倍体积百分浓度为 85％的乙 醇水溶液， 在 800w 超声提取 35 分钟， 过滤， 滤渣加 2 质量倍去离子水在 800w 超声提取 35 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 混合树脂柱由质量比为 50 ∶ 50 的大孔 树脂 DS401 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目混合组成， 用 2 倍柱体积的去离子水， 1 倍柱体积 的体积百分浓度为 80％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 3 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水 乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 34％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 2.54ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 50 ∶ 50 的 大孔树脂 X-5 和柱层析聚酰胺树脂 60-100 目组成， 用 2 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离 子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 61％， 硫酸基含量 24％， 重金属 含量小于 10ppm， 砷盐含量 2.46ppm。
实施例 9
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 0.1 ∶ 99.9 的正 己烷和石油醚为提取溶剂 ( 石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚 )， 在避光 40℃ 条件下使用连续逆流提取 85 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 15， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 2.5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所 得滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 5.5 质量倍体积百分浓度为 75％的乙 醇水溶液， 在 400w 超声提取 40 分钟， 过滤， 滤渣加 5 质量倍去离子水在 500w 超声提取 35 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 5 ∶ 95 的大 孔树脂 NKA-II 和聚酰胺 30-60 目混合组成， 用 1 倍柱体积的去离子水， 1 倍柱体积的体积百 分浓度为 80％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 1 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱 液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 28％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.83ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 95 ∶ 5 的 大孔树脂 NKA-II 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 9 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去 离子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 56％， 硫酸基含量 22％， 重金 属含量小于 10ppm， 砷盐含量 2.31ppm。
实施例 10
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 90 ∶ 10 的 3 一甲基戊烷和石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚， 在避光 40℃条件下使用连续逆流提取 75 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 20， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 3 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 4 质量倍体积百分浓度为 80％的乙醇水 溶液， 在 400w 超声提取 35 分钟， 过滤， 滤渣加 6 质量倍去离子水在 300w 超声提取 45 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上另一混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 50 ∶ 50 的大孔树脂 LKY134 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目混合组成， 用 5 倍柱体积的去离子水， 5 倍柱体积的体积百分浓度为 50％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 5 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 19％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.65ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 50 ∶ 50 的 大孔树脂 D101 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 1 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离 子水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 69％， 硫酸基含量 27％， 重金属 含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.31ppm。 实施例 11
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 60 ∶ 40 的 2， 2 一二甲基丁烷和石油醚为提取溶剂 ( 石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚 )， 在 避光 40℃条件下使用连续逆流提取 65 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 20， 过滤， 得海带浆渣和提 取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 4 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 6 质量倍体积百分浓度为 70％的乙醇水 溶液， 在 300w 超声提取 40 分钟， 过滤， 滤渣加 6.5 质量倍去离子水在 400w 超声提取 30 分 钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 50 ∶ 50 的阳 离子交换树脂 D001MB 和大孔树脂 D101-1 混合组成， 用 4 倍柱体积的去离子水， 5 倍柱体积 的体积百分浓度为 50％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 7 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水 乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 26％， 重金属含量小于 5ppm， 砷 盐含量 0.69ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 50 ∶ 50 的 阳离子交换树脂 D001MB 和大孔树脂 D101B 组成， 用 4 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离子 水洗脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 43％， 硫酸基含量 17％， 重金属含 量小于 10ppm， 砷盐含量 1.48ppm。
实施例 12
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以正己烷为提取溶剂， 在避光 35℃条件下使用连续逆流提取 60 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 25， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 2 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得
滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 7 质量倍体积百分浓度为 80％的乙醇水 溶液， 在 400w 超声提取 45 分钟， 过滤， 滤渣加 7.5 质量倍去离子水在 500w 超声提取 30 分 钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 60 ∶ 40 的大 孔树脂 DA201 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 5.5 倍柱体积的去离子水， 7 倍柱体积 的体积百分浓度为 25％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 6 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水 乙醇洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 44％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.54ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 40 ∶ 60 的 阳离子交换树脂 110 和大孔树脂 DM2 组成， 用 7.5 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离子水洗 脱液， 减压干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 56％， 硫酸基含量 27％， 重金属含量小 于 10ppm， 砷盐含量 1.51ppm。
实施例 13
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将去离子水加入干海带浸泡 3 个小时复水后， 清洗干净表面杂质， 打浆， 以 2， 3 一二甲基丁烷为提取溶剂， 在避光 40℃条件下使用连续逆流提取 70 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 35， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ； (2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 5 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 6 质量倍体积百分浓度为 65％的乙醇水 溶液， 在 700w 超声提取 30 分钟， 过滤， 滤渣加 7 质量倍去离子水在 800w 超声提取 30 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 70 ∶ 30 的阳 离子交换树脂 JK110 和大孔树脂 D8 组成， 用 7 倍柱体积的去离子水， 5.5 倍柱体积的体积百 分浓度为 55％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 2 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱 液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 12％， 重金属含量小于 10ppm， 砷盐含量 1.78ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 30 ∶ 70 的 阳离子交换树脂 DK110 和大孔树脂 D6 组成， 用 8 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离子水洗 脱液， 喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 61％， 硫酸基含量 27％， 重金属含量小 于 10ppm， 砷盐含量 1.83ppm。
实施例 14
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将去离子水加入干海带浸泡 3 个小时复水后， 清洗干净表面杂质， 打浆， 以石 油醚为提取溶剂 ( 石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚 )， 在避光 45℃条件下使 用连续逆流提取 50 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 30， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 1 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 8 质量倍体积百分浓度为 80％的乙醇水 溶液， 在 400w 超声提取 50 分钟， 过滤， 滤渣加 8 质量倍去离子水在 300w 超声提取 60 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 95 ∶ 5 的阳 离子交换树脂 D113 和大孔树脂 XAD-4 组成， 用 8 倍柱体积的去离子水， 9 倍柱体积的体积百 分浓度为 30％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 8 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱 液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 8.5％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 0.41ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 70 ∶ 30 的 阳离子交换树脂 D112 和柱层析聚酰胺树脂 30-60 目组成， 用 7 倍柱体积去离子水洗脱， 收 集去离子水洗脱液， 喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 47％， 硫酸基含量 18％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 0.69ppm。
试验证明 ： 用型号为 ： 100-120 目的柱层析聚酰胺树脂替代本实施例中的柱层析 聚酰胺树脂 30-60 目， 也可以对岩藻聚糖硫酸酯粗提液进行分离。
实施例 15
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将冷冻的新鲜海带解冻用去离子水洗净打浆后， 以体积比为 5 ∶ 95 的正己烷 和石油醚为提取溶剂 ( 石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸点石油醚 )， 在避光 32℃条件 下使用连续逆流提取 72 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 28， 过滤， 得海带浆渣和提取液 ； (2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 2.6 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所 得滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 4.7 质量倍体积百分浓度为 72％的乙 醇水溶液， 在 350w 超声提取 42 分钟， 过滤， 滤渣加 6.3 质量倍去离子水在 450w 超声提取 48 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 70 ∶ 30 的阳 离子交换树脂 D151 和大孔树脂 XAD-10 组成， 用 6.3 倍柱体积的去离子水， 8 倍柱体积的体 积百分浓度为 57％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 5 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇 洗脱液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 5.8％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐 含量 0.61ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 45 ∶ 55 的 阳离子交换树脂 CD180 和大孔树脂 HP-30 组成， 用 7.2 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离子 水洗脱液， 喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 43％， 硫酸基含量 21％， 重金属含 量小于 10ppm， 砷盐含量 0.93ppm。
实施例 16
综合利用海带提取纯化岩藻黄质和岩藻聚糖硫酸酯的方法， 包括如下步骤 ：
(1) 将去离子水加入干海带浸泡 3 个小时复水后， 清洗干净表面杂质， 打浆， 以体 积比为 30 ∶ 70 的正己烷和石油醚为提取溶剂， 所述石油醚是沸点在 90 摄氏度以下的低沸 点石油醚， 在避光 30℃条件下使用连续逆流提取 60 分钟， 料液质量比为 1 ∶ 25， 过滤， 得海 带浆渣和提取液 ；
(2) 将所得提取液减压浓缩挥尽溶剂后， 加入 3 质量倍无水乙醇溶解， 过滤， 所得 滤液即岩藻黄质粗提液 ； 另向所得海带浆渣中加入 5 质量倍体积百分浓度为 75％的乙醇水 溶液， 在 300w 超声提取 60 分钟， 过滤， 滤渣加 7 质量倍去离子水在 400w 超声提取 60 分钟， 过滤， 所得滤液即岩藻聚糖硫酸酯粗提液 ；
(3) 将所述岩藻黄质粗提液上混合树脂柱， 该混合树脂柱由质量比为 65 ∶ 35 的阳 离子交换树脂 724 和大孔树脂 SA-1 组成， 用 5 倍柱体积的去离子水， 7 倍柱体积的体积百 分浓度为 50％的乙醇水溶液洗涤， 最后用 8 倍柱体积的无水乙醇洗脱， 收集无水乙醇洗脱 液， 减压干燥得岩藻黄质提取物， 岩藻黄质含量为 12.6％， 重金属含量小于 5ppm， 砷盐含量 0.73ppm ；
将岩藻聚糖硫酸酯粗提液， 上另一混合树脂柱， 该混合树脂由质量比为 20 ∶ 80 的 阳离子交换树脂 001×7 和大孔树脂 HP-50 组成， 用 6 倍柱体积去离子水洗脱， 收集去离子 水洗脱液， 喷雾干燥得岩藻聚糖硫酸酯提取物， 多糖含量 59％， 硫酸基含量 26％， 重金属含 量小于 10ppm， 砷盐含量 1.22ppm。
试验证明 ： 用型号为 ： D111 ； D111FC ； D111SC ； D112SC ； 122 ； D113FC 或 D113SC 的阳 离子交换树脂替代本实施例中的阳离子交换树脂 001×7， 也可以对岩藻聚糖硫酸酯粗提液 进行分离。
用 型 号 为： ME-1 ； ME-2 ； FL-1 ； FL-2 ； XAD-1 ； XAD-2 ； XAD-3 ； XAD-5 ； XAD-6 ； XAD-7 ； XAD-8 ； HP-20 或 HP-40 的本实施例中的大孔树脂替代大孔树脂 HP-50， 也可以对岩藻聚糖硫 酸酯粗提液进行分离。13