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1、10申请公布号CN102329316A43申请公布日20120125CN102329316ACN102329316A21申请号201110210609822申请日20110726C07D471/0420060171申请人苏州宝泽堂医药科技有限公司地址215125江苏省苏州市工业园区星湖街218号纳米科技园A2栋101室72发明人李法庆刘东锋54发明名称一种苦马豆素的制备方法57摘要本发明提供一种苦马豆素的制备方法，方法是将疯草原料粉碎，加入甲醇浸泡提取，将提取液浓缩，加适量的水进行分散，过滤，滤液加入大孔树脂，收集柱通过液，减压浓缩，浓缩至近干，浓缩液加适量氨水，用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩至小。
2、体积，采用高速逆流色谱分离，收集流分回收试剂，真空干燥即得产品。本方法具有工艺操作简单、产品无损失、制备量大、污染小的特点。51INTCL19中华人民共和国国家知识产权局12发明专利申请权利要求书1页说明书3页CN102329326A1/1页21一种苦马豆素的制备方法，其特征在于将疯草原料粉碎，加入58倍量甲醇浸泡提取23次，每次提取23小时，提取液回收甲醇，浓缩液加适量水分散，过滤，滤液加入大孔树脂柱，收集柱通过液减压浓缩，浓缩液加适量氨水，加入二氯甲烷萃取，萃取液浓缩至小体积，再采用高速逆流色谱分离，收集流分回收试剂，真空干燥即得产品。2如权利要求1所述的苦马豆素的制备方法，其特征在于所述。
3、的甲醇浸泡提取条件为甲醇为8090甲醇溶液，提取温度为4555。3如权利要求1所述的苦马豆素的制备方法，其特征在于所述的大孔树脂可选非极性大孔树脂。4如权利要求1所述的苦马豆素的制备方法，其特征在于所述的高速逆流色谱分离条件为溶剂系统为氯仿甲醇丁醇水，比例302511712，上相为流动相，下相为固定相，转速800950R/MIN，流速14ML/MIN。权利要求书CN102329316ACN102329326A1/3页3一种苦马豆素的制备方法技术领域0001本发明属于天然产物分离领域，特别是涉及一种苦马豆素的制备方法。背景技术0002苦马豆素是一种吲哚类生物碱，化学名是1，2，8三羟基八氢吲哚兹。
4、啶，高纯度苦马豆素为白色针状结晶，熔点144145，分子式C8H15NO3，分子量173，酸解离常数74，易溶于水。0003苦马豆素是最初从灰苦马豆中分离出来一种毒性成分，是导致动物中毒的疯草的主要成分。现代医学研究表明，苦马豆素能激活动物腹腔吞噬细胞的细胞结合活性，从而可抑制肿瘤细胞，对治疗肿瘤、感染性疾病、免疫抑制性疾病有重要意义。最新研究表明，苦马豆素能有效逆转致死性辐照或高剂量化疗所造成的骨髓抑制。在世界范围内，苦马豆素作为一种新的天然抗肿瘤药物越来越受到重视。文献“苦马豆素研究进展”和陕西日报对其做了详细论述。0004当前，苦马豆素的来源主要有三类一是从微生物菌丝体或发酵液中进行提取。
5、；二是化学合成；三是从植物中提取。微生物发酵和化学合成反应条件苛刻和繁琐，很难批量生产。从植物中制备，原料是一种毒草，而且易得，是一种变废为宝的做法。0005疯草包括棘豆属和黄芪属两属有毒植物，国内外均有广泛分布。在我国主要分布于西北、西南、华北的主要牧区。家畜采食后可引起中毒、死亡、流产等危害。0006现有从植物中提取苦马豆素方法，多采用有萃取法和硅胶柱分离。如“疯草中苦马豆素提取的提纯工艺”（专利申请号021145903）公开的方法是采用阳离子交换法提取出大极性生物碱粗品，再用碱性氯仿抽提，抽提部分经硅胶柱层析分离得到苦马豆素粗品，最后分步升华获得苦马豆素纯品。但是生产中会产生了很多酸、碱。
6、废水污染严重，硅胶柱分离重现性差。还有“从甘肃棘豆中分离提取苦马豆素的工艺方法”（专利申请号2006101049183）该方法也是采用硅胶柱分离纯化。而“一种从豆科棘豆属或黄芪属植物中提纯苦马豆素的工艺”（专利申请号2008100181783），该专利公开的方法是先超声进行提取，再过大孔树脂分离粗品，最后用升华的方法获得精品。但是工艺采用水提取，也是存在污染严重问题。专利（专利申请号200710017542X）“连续柱层析法提纯苦马豆素的工艺”，该专利公开的方法是采用大孔树脂、硅胶柱和高效液相连续柱层析，得到苦马豆素。该方法工业操作复杂，制备量较小。发明内容0007本发明的目的是解决现有技术的。
7、不足，提供一种苦马豆素的制备方法。0008本发明目的是通过以下技术方案来实现的一种苦马豆素的制备方法，其特征在于将疯草原料粉碎，加入甲醇浸泡提取23次，每次提取23小时，提取液进行浓缩，浓缩后加水进行分散，然后过滤，滤液加入大孔树脂柱，收集柱通过液减压浓缩，浓缩液加适量氨水，用二氯甲烷萃取，萃取液浓缩至小体积，以说明书CN102329316ACN102329326A2/3页4氯仿甲醇丁醇水作为溶剂系统，采用高速逆流色谱分离，收集流分回收试剂，真空干燥即得产品。0009所述的甲醇浸泡提取条件为甲醇为8090甲醇溶液，提取温度为4555。0010所述的大孔树脂可选非极性大孔树脂。0011所述的高速。
8、逆流色谱分离条件为溶剂系统为氯仿甲醇丁醇水，比例302511712，上相为流动相，下相为固定相，转速800950R/MIN，流速14ML/MIN。本发明优点是采用高浓度甲醇热浸提取可以减少极性物质的溶出，有利于纯化，减少废水的产生；大孔树脂纯化，利用水溶性生物碱在大孔树脂中不吸附的原理，吸附杂质，简化了后续纯化步骤；高速逆流色谱分离，样品无损失，制备量大，重现性高，还不产生废液。0012下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。具体实施方式0013实施例1疯草原料粉碎20目，取2KG，加入10L80甲醇加热到45保温提取3小时，滤出液体，再加10L8。
9、0甲醇提取3小时，合并提取液浓缩至无醇，加适量的水进行分散，过滤，滤液加入HPD100大孔树脂柱，收集柱通液，减压浓缩，浓缩液加氨水调节PH至10，然后加入200ML二氯甲烷进行萃取，萃取2次，萃取液浓缩至小体积。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶剂，按比例2711712混合，取上相为流动相，下相为固定相，把固定相注入高速逆流色谱仪柱内，开启机器，调节主机转速800R/MIN，流速1ML/MIN，注入样品分离，收集目标成分，真空减压干燥得白色苦马豆素83MG，含量992。0014实施例2疯草原料粉碎40目，取4KG，加入30L90甲醇加热到55保温提取2小时，滤出液体，再加20L90甲醇提取2小时，合并。
10、提取液浓缩至无醇，加适量的水进行分散，过滤，滤液加入AB8大孔树脂柱，收集柱通液，减压浓缩，浓缩液加氨水调节PH至12，然后加入300ML二氯甲烷进行萃取，萃取2次，萃取液浓缩至小体积。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶剂，按比例3011712混合，取上相为流动相，下相为固定相，把固定相注入高速逆流色谱仪柱内，开启机器，调节主机转速950R/MIN，流速4ML/MIN，注入样品分离，收集目标成分，真空减压干燥得白色苦马豆素180MG，含量981。0015实施例3疯草原料粉碎60目，取10KG，加入60L90甲醇加热到50保温提取2小时，滤出液体，再加60L90甲醇提取2小时，合并提取液浓缩至无醇，加适量。
11、的水进行分散，过滤，滤液加入HZ816大孔树脂柱，收集柱通液，减压浓缩，浓缩液加氨水调节PH至11，然后加入300ML二氯甲烷进行萃取，萃取3次，萃取液浓缩至小体积。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶剂，按比例2511712混合，取上相为流动相，下相为固定相，把固定相注入高速逆流色谱仪柱内，开启机器，调节主机转速900R/MIN，以流速2ML/MIN，注入样品分离，收集目标成分，真空减压干燥得白色苦马豆素432MG，含量985。0016实施例4疯草原料粉碎40目，取20KG，加入100L80甲醇加热到50保温提取2小时，提取3说明书CN102329316ACN102329326A3/3页5次，合并提取液浓缩至无醇，加适量的水进行分散，过滤，滤液加入HZ816大孔树脂柱，收集柱通液，减压浓缩，浓缩液加氨水调节PH至12，然后加入600ML二氯甲烷进行萃取，萃取3次，萃取液浓缩至小体积。取氯仿、甲醇、丁醇、水溶剂，按比例2811712混合，取上相为流动相，下相为固定相，把固定相注入高速逆流色谱仪柱内，开启机器，调节主机转速900R/MIN，流速2ML/MIN，注入样品分离，收集目标成分，真空减压干燥得白色苦马豆素852MG，含量983。说明书CN102329316A。