祛斑软膏及其制备方法 技术领域：
本发明涉及一种祛斑软膏及其制备方法，尤其是一种含有中药成份的祛斑软膏及其制备方法。背景技术：
中医记载中色素斑有“雀斑”、“面尘”、“黧黑斑”等等，其主要包括现代医学的雀斑、黄褐斑、皮肤黑变病等多种色素沉着性病变。
中医认为，色素沉着症或由于风邪容于皮肤、痰饮渍于脏腑；或由于脏腑筋络气血不调，血虚不荣于面；或由于肾水不足，水亏炎滞而生；或由于七情内伤，肝郁气滞，肝脾不各；或由于饮食劳倦，月经不调，或由于火郁孙络之血分，风邪外博而发等原因所致。现代医学认为，色素沉着的发生多与女性激素代谢失调有关，常见于月经不调、妊娠、口服避孕药及肝病者，而日光的曝晒、精神创伤等为常见诱因，雌激素、黄体酮与日光照射均能促进黑色素的代谢。黑色素产生于基底层的黑素细胞内，由酪氨酸经含铜的酪氨酸酶的羟化作用形成多巴(dopa)，再经氧化而成。
中西医在治疗上针对其主要病机，防治皆以外用药涂抹为主，适当配合内服药、按摩等方法，目前常用的外用药有3％氢醌霜或消斑霜等，效果并不理想。发明内容：
本发明针对目前祛斑药物存在的问题，提供一种祛斑软膏及其制备方法。
本发明的解决方案主要基于祖国医学对色素沉着的认识和治疗原则，治则活血祛风，行滞、祛斑为主，按中医理论组方，提取精华，溶于膏体。
本发明所涉及的祛斑软膏含有的药物由下列组分(按重量份)范围中提取：
血竭：4-10、 三七：10-25、 杏仁：20-35、 桃仁：20-35、
牵牛子：20-35、 白芷：10-25、 制白附子：5-15、 丝瓜络：20-35、
当归：5-15、 薏苡仁：20 35、白僵蚕：5-15、 白蔹：10-25、
黄芩：5-15、 川芎：10-25、 珍珠：5-10。
本发明所涉及的祛斑软膏含有的药物由下列优选组分(按重量份)范围中提取：
血竭：4-6、 三七：10-20、 杏仁：20-30、 桃仁：20-30、
牵牛子：20-30、 白芷：10-20、 制白附子：5-10、丝瓜络：20-30、
当归：5-10、 薏苡仁：20-30、白僵蚕：5-10、 白蔹：10-20、
黄芩：5-10、 川芎：10-20、 珍珠：5-10。
本发明所涉及的祛斑软膏含有的药物由下列最佳重量份配比中提取：
血竭：4.5、 三七：15、 杏仁：30、 桃仁：30、
牵牛子：30、 白芷：18、 制白附子：9、 丝瓜络：30、
当归：9、 薏苡仁：25、 白僵蚕：9、 白蔹：18、
黄芩：9、 川芎：18、 珍珠：6。
含有上述药物组分的祛斑软膏的制备方法是：
a、将珍珠、血竭粉碎过120目筛备用；
b、将当归、川芎加水浸泡，用蒸馏法蒸馏，收集挥发油保存备用；
c、将三七、杏仁、桃仁、薏苡仁、牵牛子、白芷加75％乙醇冷浸后，加热回流提取，回收乙醇，滤液备用；
d、将黄芩、白僵蚕、制白附子、白蔹、丝瓜络与提取挥发油后的当归、川芎药渣合并加水煎煮过滤，滤液备用；
e、将加工提取的各备用中药成份加入膏体基质中。
依据本发明制作地祛斑软膏，分别作了皮肤用药刺激性实验、毛细血管通透性实验、对酪氨酸酶的抑制实验以及临床疗效验证，其实验数据如下：
1、刺激性实验
a：实验材料：
药物：本实施例批号为000802
动物：豚鼠，由浙江中医学院实验动物中心提供，豚鼠饲养合格证号为浙实动单项准第2001001号
b、实验方法：
取豚鼠6只，体重250±20g，雌雄各半。于给药前24小时将豚鼠脊柱两侧去毛，去毛区为8×5cm2，去毛后24小时检查，以确保去毛皮肤无受伤。
采用同体左右侧身自身对比，左侧去毛区涂受试药物1g，右侧涂1g赋形剂作为对照，用薄膜加纱布、胶布固定。每只豚鼠分笼饲养，给受试药24小时后，用温水洗去残留受试药，去除受试药后1、24、48、72小时肉眼观察和病理组织学检查，并记录涂抹部位有无红斑和水肿等情况，进行评分，记录各时日的评分值及恢复情况，并列表表达各组受试药及赋形药的平均分值，观察对完整皮肤的刺激性强度(见表1)。
表1：豚鼠编号性别体重(g) 1hr 24hr 48hr 72hr 药 对 药 对 药 对 药 对红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿 1 ♀251 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 ♀264 1 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 3 ♀242 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4 ♂267 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 ♂259 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 6 ♂260 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0平均总分值 0.83 0 0.33 0 0 0 0 0刺激强度 无刺激性
取豚鼠6只，体重250±20g，雌雄各半。于给药前24小时将脊柱两侧去毛，去毛区为8×5cm2，用手术刀片以“#”将去毛消毒皮肤划破，以渗血为度，左右两侧皮肤的破损程度基本一致。
采用同体左右侧身自身对比，左侧去毛区涂受试药物1g，右侧涂1g赋形剂作为对照，用薄膜加纱布、胶布固定。每只豚鼠分笼饲养，给受试药24小时后，用温水洗去残留受试药，去除受试药后1、24、48、72小时肉眼观察和病理组织学检查，并记录涂抹部位有无红斑和水肿等情况，进行评分，记录各时目的评分值及恢复情况，并列表表达各组受试药及赋形药的平均分值，观察对破损皮肤的刺激性强度(见表2)。
表2：豚鼠编号性别体重(g) 1hr 24hr 48hr 72hr 药 对 药 对 药 对 药 对红斑水肿红斑 水 肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿红斑水肿 1 ♀ 234 2 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 2 ♀ 248 1 1 0 0 1 2 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 3 ♀ 275 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 4 ♂ 261 3 2 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 5 ♂ 247 1 1 0 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 6 ♂ 253 2 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0平均总分值 2.83 0 1.50 0 0.33 0 0 0刺激强度 轻微刺激性
2、毛细血管通透性实验：
实验材料：本软膏、市售消斑霜和浙江中医学院实验动物中心提供的小鼠。
实验方法：
取小鼠46只，随机分设二组：外抹本软膏组和市售消斑霜组。用脱毛剂将小鼠腹部去毛36小时后，取本软膏和市售消斑霜0.25g/10g，腹部涂药二次，每次间隔15分钟，然后腹部皮内注射组胺溶液0.02ml，每只小白鼠注射1-2个部位，1-2分钟内尾静脉注射1％依文思蓝溶液0.2ml，15分钟后，颈椎脱臼处死，剖开腹部皮肤，用卡尺直接测量法测蓝染面积(见表3)。
表3： 品 名 动物数 蓝染面积(mm2) 本软膏 23 96.5+6.6 市售消斑霜 23 57.8+5.1
3、酪氨酸酶抑制作用的实验：
实验材料：酪氨酸酶(Ec11.14.18.1)来源于蘑菇(美国sigma公司)；3，4-二羟苯丙氨酸含量＞98％，BR(上海化学化剂厂)；本软膏；市售消斑霜。
实验方法：
将本软膏、市售消斑霜分别用50％甲醇提取物沉悬于磷酸缓冲液中(PH6.8)，以缓冲液稀释成所需浓度，备用。
酶活力测定：按Mason和Nagatsu方法：0.1ml酪氨酸酶溶液(1.375u/1)加0.9ml磷酸缓冲溶液和1ml含或不含中药的提取液的缓冲液混匀，25℃保温10min，加1ml0.03％3，4-二羟苯丙氨酸，25℃保温2min后，在475nm处测吸收光值，算出酸氨酸酶反应抑制百分率，以50％抑制浓度ID50来评价药物对酪氨酸酶抑制作用(见表4)。
表4：品名 用药浓度 用药量酪氨酸酶用量 抑制率本软膏 2.7mg/ml 1ml 1ml 62.00％市售消斑霜 2.7mg/ml 1ml 1ml 16.20％
4、临床实验：
上海第一人民医院历时八个月对584例黄褐斑患者外用本软膏进行临床治疗，同时与对照组的68例采用传统方法治疗。
在治疗组的584例中：男性22例，女性562例，年龄最小的21岁，最大的58岁，病期最短5个月，最长32年。有45例伴发脂溢性角化症(老年疣)，52例伴发雀斑。20例有日光性皮炎史。
对照组的68例，其中男性4例，女性64例，年龄最小26岁，最大54岁。病程最短6个月，最长24年。色斑沉着程度及范围与治疗组大致相同。
为排除季节因素对疗效的影响，全部病例均在12月份至7月份之内，日晒逐渐增强的季节进行治疗、观察。
治疗组的584例单独外用本软膏涂擦患处每日2-3次，涂药后对患部按摩揉擦3-5分钟，直到药物充分揉进患处为止。
对照组的68例外用3％氢醌霜，用药次数及方法同治疗组。
判定标准如下：
痊愈(含基本痊愈)：色素沉着完全消退，或恢复近正常肤色；显效：色素沉着消退60％以上，或大部分皮损色素明显转淡；有效：色素沉着消退30％以上，或半数及以上皮损色素转淡，无效：用药二个月后皮损无明显改善，或仅部分30％皮损色素转淡(见表5)。
表5：组别 疗效 痊愈 显效 有效 无效 总有效 例数 例 ％ 例 ％ 例 ％ 例 ％ 例 ％治疗组 584 78 13.36 224 38.36 210 35.96 72 12.32 512 87.68对照组 68 2 2.94 10 14.70 20 29.42 36 52.94 32 47.06
上述实验证明，本发明的优点在于：由于处方中的血竭、三七、当归、桃仁、川芎活血去淤；黄芩清热凉血、消斑防晒；白芷、白附子、牵牛子、白僵蚕以祛除面部风邪；丝瓜络活血、通络祛风，以上十一味活血清热祛风共为本方主药，另配以珍珠、薏苡仁润肤白面；白蔹、杏仁清热散风，本处方紧密围绕风、火、血郁这三个成斑形成的主要病因进行合理组方，使用中对皮肤无刺激，有利于改善皮肤毛细血管通透性，促进皮下循环，对酪氨酸酶有较强的抑制率，对治疗黄褐斑有较好的效果。具体实施方式：
按照下列配比称取中药原料(千克)
血竭：4.5、 三七：15、 杏仁：30、 桃仁：30、
牵牛子：30、 白芷：18、 制白附子：9、 丝瓜络：30、
当归：9、 薏苡仁：25 白僵蚕：9、 白蔹：18、
黄芩：9、 川芎：18、 珍珠：6。
具体制备方法如下：
a、将珍珠、血竭粉碎过120目筛备用；
b、将当归、川芎加16倍量水浸泡2-3小时，用蒸馏法蒸馏6小时，收集挥发油保存备用；
c、将三七、桃仁、薏苡仁、牵牛子、白芷加7倍量75％乙醇冷浸48小时后，加热回流提取2小时，第二次加6倍量75％乙醇提取2小时，趁热滤过，合并滤液，回收乙醇，滤液备用；
d、将黄芩、白僵蚕、制白附子、白蔹、丝瓜络与提取挥发油后的当归、川芎药渣合并，每次加8倍量水煎煮两次，每次2小时，滤过，合并滤液备用；
e、取硬脂酸10千克、单硬脂酸甘油脂25千克、十六一十八醇20千克、羊毛脂20千克、液体石蜡120千克、氮酮10千克、对羟基苯甲酸甲酯0.6千克、对羟基苯甲酸丙酯1.4千克、乙氧化基甲基葡萄糖甙硬脂酸酯10千克、羟苯甲酮25千克、混合加入蒸气夹套锅中边搅拌边加热至95℃，滤过杂质，将滤液真空保温半小时，待降温至85℃得油相，保温备用；
f、取甲基葡萄糖甙硬脂酸脂8千克、甘油30千克、丙二醇50千克以及备用的乙醇提取液、滤液和水加入蒸气夹套锅中，边搅拌边加热至95℃，保温半小时，趁热过滤，待降温至85℃时，加入保温备用的油相、粉碎备用的珍珠粉、血竭以及α-甲基紫罗兰酮1000ml，搅拌均匀制成1000公斤膏体。
依据本实施例制备的产品为淡黄色乳膏，气香。