灭啮齿动物的诱饵凝胶中的微生物制剂 本发明涉及一种在凝胶中含有不同期致病原虫的制剂及其在灭啮齿动物中的应用。
人们熟知，肉孢子虫类群的原生动物(原生动物门、孢子虫纲、球虫亚纲、真球虫目、艾美球虫亚目)对啮齿动物(家鼠类、害鼠、水、Nosokia、鼠属)是致病菌，在足够的剂量下可使动物致死(Rzepczyk 1974，Intern.J.Parasitol.4，447-449；Brehm，Frank1980，Z.Parasitenkd.62，15-30)。一种这类群中的特别对于多种鼠类致病的寄生虫是Singaporensis肉孢子虫(Zamman等人，1975，z.Parasitenkd.47，169-185)。
寄生虫的终宿主是食肉动物或杂食动物；对于singaporensis肉孢子虫则是蛇亚目，例如蟒蛇。在终宿主的肠内形成孢子囊寄生虫。这种孢子囊将持续从粪便排出。如果中间宿主，在Singaporensis肉孢子的情况下例如鼠，通过口腔感染孢子囊，则孢子囊在鼠的肠内孵化并穿过肠壁。通过血液循环这时到达另外的器官，在那里它们能通过分裂(裂配生殖)繁殖。
在这种情况下可证实有两种裂配生殖，其一是在感染后约第六天，其二是在感染后约第14-16天。特别大量的裂殖体(裂殖子)出现在肺中，那里它们在内皮细胞中繁殖。
如果由于严重感染而使裂殖子在肺中大量繁殖，则鼠将在感染后约第16天的第二个寄生虫裂配生殖期间染病，并且大多数在数小时内死亡。
有可能将这种病源体的孢子囊施加给啮齿动物，以致使其死于感染。这种原理可用于灭啮齿动物(Wood 1985，J.Plant Protect.Trop．2，67-69)。已用Singaporensis肉孢子虫成功地进行灭鼠(Jkel等人，1996，J.Parasitol.82 280-287)。
鼠类和norvegicus感染20000以上孢子囊(与门类有关)照例会致死。动物在感染后14天之前无任何症状。然后很快衰弱，并在感染后的约第16天死于感染。
亚致死感染的鼠也在感染后14天无任何病状，并在抗过感染后未丧命。感染数天之后这些动物已具有抗病菌的免疫力。这些动物在以后对用Singaporensis肉孢子虫制剂杀灭已不敏感了。
孢子囊可在水性悬浮应付中保存两年，而不明显丧失及致病性。这种悬浮液可通过食管饲法对鼠给药，并表明在相应剂量下的致死作用。但是在干燥状态下孢子囊不能存活。
为了灭鼠应利用诱饵，并被动物吞食。这种带有Singaporensis肉孢子虫的孢子囊的诱饵在潮湿时都是致病的。在干燥后孢子囊很快丧失其致病能力。因此通常的基于谷物的诱饵不能用于这种寄生虫的有效施药。在申请人地研究中，亦未能在基于谷物的诱饵中保持Singaporensis肉孢子虫的孢子囊的传染能力。在混合后仅一天，这种诱饵已丧失作用。
含孢子囊的诱饵应该以湿状态包装在薄膜中。这种湿制剂的缺点是难于保存，因为谷物在数天内便会发霉或发芽。一种方案是在诱饵的空腔内配入悬浮液。膏状诱饵的碎块是成功应用的例子，该诱饵内部的空腔中皆含有致死剂量的悬浮液。但是，这种诱饵也应在制备后数天中应用，因为水会散发，或者膏状基质吸收水并胀起或发酵，从而使这种诱饵不能使用。
迄今用如Singaporensis肉孢子虫的原生动物灭啮齿动物的唯一实际可能是用含孢子囊的水性悬浮液和诱饵基质，例如谷物就在应用前制成诱饵。但问题在于很难取出计算量的孢子囊，因为它在悬浮液中很快下沉并浓集在容器的底部。因此，这样制成的诱饵含不确定量的、不均匀分布的孢子囊。这种诱饵很快变干，常常在混制过程中变干。其结果是孢子囊死亡，而诱饵则在数小时后即不再有效。
现在发现，肉孢子虫属-孢子囊出人意料地能在某些凝胶中长期保持其感染性，虽然过去的研究曾经表明，在谷物上、在如膨润土的膏状物和凝胶中在数天之后不再具有感染性。它们在本文所述的凝胶中能存活几个月是令人吃惊和意料之外的。从文献已知，在温和地区的很强的肉孢子虫，例如gigantea肉孢子虫对pH-值的变化和化学物质的反应敏感(McKenna等人，Veterinary Parasitology 1992，451-16)。因此，特别意外的是甚至地pH-值可能变化，此外还加防腐剂的情况下，寄生物的存活概率无明显的减小。
因此，本发明能够将孢子囊保存在凝胶中以便以后用于灭啮齿动物。它们的这种基质中均匀分布。从而有可能取出确定量的孢子囊。确定量的这种凝胶能与诱饵基质混合，直至达到均匀状态，因为凝胶只是很慢地被基质吸收。由于所采用的凝胶只是很慢地通过蒸发脱水，诱饵在干燥气氛中应用时亦能保持潮湿，从而保留其感染性。
通过这种方式可能将孢子囊保存数月，而不致使凝胶分离或使病原体感染性明显降低。所引的应用Carbopo1-凝胶的例子证明，这种混合物可应用数月。
本发明要求保护在凝胶中保存单细胞寄生虫状态的原理。这种凝胶单独或与饵剂混合用于灭啮齿动物。
原则上孢子虫纲的全部原生动物皆适宜作为致病生物。特别适宜的是球虫亚纲类，最适宜的是艾美球虫亚目的代表。例如，但不限于肉孢子虫属，如Singaporensis肉孢子虫。
本发明的制剂可以所有常规为制备啮齿动物的饲料诱饵的配方加工，例如加工成基于谷物的诱饵，呈膏、凝胶和蜡块形式，以及呈谷物和配方助剂的挤压混合物。其次，病源体可以水基饮用诱饵的形式提供。本发明意义中的诱饵可如灭有害啮齿动物的常规诱饵那样使用。它们可放在改建的空间和野外，根据目标物和诱饵放置密度，每个诱饵放置位置可放5g-500g。它们也可放在拟灭啮齿动物的建筑物的入口。
凝胶中病源体的剂量可任意调整。优选的剂量为1000-10000000孢子囊/ml。特别优选500000-2000000孢子囊/ml。
诱饵中病源体的剂量应为1000-200000孢子囊/g诱饵，优选2000-100000孢子囊/g，更优选的浓度为10000-30000，特别优选20000孢子囊/g。亦可采用更高的剂量，但通常不需要。而且既可采用一种病源体的孢子囊，又可采用不同病源体的孢子囊的混合物。
本发明意义上的拟灭的啮齿动物系指啮齿目的啮齿动物，特指家鼠类、鼠属、害鼠、Nosokia和田鼠属。尤其指鼠类和害鼠的代表，例如家鼠类、norvegicus鼠、bengalensis鼠、indica鼠。
本发明意义上的凝胶系指水基和与相应增稠剂混合的凝胶。作为增稠剂可采用如纤维素衍生物的高分子，例如羟丙基纤维素、羟乙基纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟乙基甲基纤维素、羟乙基丙基纤维素或黄原胶、藻酸盐、聚乙烯基醇、聚乙烯基吡咯烷酮、聚丙烯酸和它们的衍生物或无机凝胶形成剂如高分散的二氧化硅(参见，例如，Rudolf Voigt，PharmazeutischeTechnologie(药物工业)，362-385页，Ulstein Mosby)。特别适宜的是纤维素衍生物和聚丙烯酸。
凝胶的水含量变化宽，例如30-98重量％，尤其是50-90重量％，更优选70-80重量％。
凝胶的pH-值变化也宽，例如pH2-10，尤其是pH4-9，更优选pH6-8。
凝胶可添加防府剂如对羟基苯甲酸酯、苯甲酸盐、山梨酸、柠檬酸盐或对羟基苯甲酸酯；保湿剂如甘油或丙二醇；氧化稳定剂如丁基羟甲苯或丁基羟苯甲醚、维生素E、抗坏血酸、调味剂或其它配方助剂。
在本发明的制剂中，病源原生物的孢子囊还可与另一些如对灭啮齿动物有作用的化学活性物组合使用。这里可列举，但不限于香豆素的例子。
本发明的制剂通过相应量的组分的混合来制备。混合可采用机械的，例如在搅拌罐或其它适合此目的的设备中实现。
下列实施例应对本发明作出阐明，但不作限制。实施例：方法
所采用的S5门类的孢子囊(由Hohenheim大学，寄生虫系提供)在1998年8月17日取自泰国的一个海峡。计数采用NeubauerHmozytometer计。凝胶用1％Carbopol 974P(Carbopole：弱交联的聚丙烯酸)和水(342ppm)制备。pH值采用2N NaOH滴定。作为防腐剂采用0.02％Solbrol P和0.14％Solbrol M(Solbrole：对-羟基苯甲酸酯(-甲基，-乙基，-丁基)。一个试样含20％甘油。向所有的凝胶加入50000孢子囊/ml，并剧烈搅拌，以便达到均匀分布。凝胶在约6℃下保存在冷箱中，并按相应的试验计划按各种试验日期进行施药。
用野生的norvegicus鼠作试验动物。在喂孢子囊诱饵前14小时动物不随意进食和水。诱饵基于麦屑。每只鼠得到5g与1ml凝胶混合的麦屑。只是在鼠吞食孢子囊诱饵之后，鼠才能再随意得到标准饲料。每种剂量采用2只鼠，对它们在接受剂量后观察21天。死亡率按与凝胶配方和贮存时间的关系来确定。在预期的病源体作用期(第13-第17天)内症状表现重的鼠在自然条件下不能活下来，因此被灭掉。结果
表1：
摄取含50000孢子囊(*为100000孢子囊)的不同凝胶的麦屑诱饵后的死亡率与凝胶贮存时间的关系。凝胶 贮存期(周)内的死亡率(％)pH Solbrol 甘油 0 2 4 6 8 10 12 14 19 246,17 + - 100 100 100 50 07,04 + + 100 50 0 0 07,05 - - 100 100 100 0 50*8,19 + - 100 100 100 0 0