用于降低或消除环境激素毒性的 含熊去氧胆酸的制剂 【技术领域】
本发明涉及用于降低或消除环境激素毒性的制剂，其中包含熊去氧胆酸(3α，7β-二羟-5β-胆烷酸；以下称为UDCA)或其可药用盐或酯作为解毒剂。背景技术
UDCA(分子量：392.58；分子式：C24H40O4)在体内具有多种药理学作用。例如，可清洁胆小管从而消除其中的废物以及毒性胆汁酸，可稳定肝细胞膜和保护肝细胞。它也可增加肝脏中的血流量，抑制胆固醇的吸收和生物合成，溶解胆石并抑制其形成，以及使免疫应答正常化。因此，目前UDCA被用于临床治疗胆石病、胆道疾病、慢性肝脏疾病、肝功能不全、肠切除术后消化不良和脂肪肝等。UDCA是动物胆汁的组成成分，但是在人胆汁中量非常低。取而代之UDCA的立体异构体CDCA(鹅脱氧胆酸)通常以与甘氨酸或牛磺酸结合的形式存在于人胆汁中。
环境激素是能破坏内分泌系统正常机能的化学物质。它们可释放到环境中，并被吸收到体内，从而在体内表现出激素样作用。因此，往往将其称为“内分泌的破坏剂”。目前，在WWF(世界野生生物基金会)目录中登记的环境激素包括67种化学物质，而在日本卫生和福利部中登记的有142种物质，例如化工原料、药品和食品添加剂等。在WWF目录中登记的内分泌破坏剂可分为：6类有机氯化合物包括二噁英(dioxin)，44种杀虫剂包括DDT，8种邻苯二甲酸酯包括邻苯二甲酸丁苄酯，3种重金属包括镉、双酚A和苯并芘。
这些环境激素对生物体有多种影响，例如男性化和女性化、行为障碍和助长肿瘤等。最近，许多研究者发现它们对野生生态系统具有明显的影响，而且对人也具有相似的作用。由于其雌激素样活性(因此被称为环境中的外源雌激素)，其中大多数内分泌破坏剂甚至在非常低的水平即可在体内表现出毒性。
在包括韩国的许多国家中，已从塑料、铝罐的内涂层材料、方便面容器、洗涤剂的降解产物、焚烧炉废气和杀虫剂等中检测出多种环境激素。尽管它们的排放量非常低，但是由于其高度的亲脂性和在环境内持续存在，它们可在介质之间转移，并通过食物链而得到生物学浓缩。因此，对生态系统有严重地不利影响。
在内分泌破坏剂中，DDT和双酚A是具有体内雌激素样活性的代表。双酚A可用作聚氯乙烯(制造塑料的主要成分)的增溶剂，大量存在于广泛使用的家用塑料器具中。因此，人类处于与其接触的尤其高度危险中。已知DDT和双酚A对雌性生殖器官有影响，例如可引起子宫肥大。在动物试验中，这种子宫肥大可导致子宫重量增加。其已知的分子生物学机制是它们可与雌激素受体结合，从而表现出雌激素样活性。因此，在卵巢结扎的动物体内，DDT和双酚A均表现出与雌激素相同的对子宫的重量和形状的影响。尤其地，环境激素中最值得注意的物质--卤化芳烃化合物，例如多氯化苯化合物和二噁英(dioxin)，已知通过共同的反应机制而表现出相似的毒性。
卤化芳烃包括多氯化二苯并二噁英和多氯化氧芴，是燃烧化石燃料或焚化医药垃圾或漂白纸过程中排出的最典型的环境污染物。二噁英(其化学名为2，3，7，8-四氯二苯并-p-二噁烯，TCDD)，是多氯化芳烃中最具毒性的化合物，它也通过共同的反应机制而表现出毒性。人类普遍地与已经进入食物、饮用水、土壤、灰尘、烟雾或空气中的这类化合物接触。尤其是从事生产、使用或破坏这种物质的劳动者，更可能连续地或间歇地与相对高浓度的多卤化芳烃接触，因此他们的健康受到极大威胁。这些化合物会生物学浓缩于鱼体内，然后渔民或嗜鱼者就会经口接触这些物质。焚化工厂附近的农民也可能经口接触这些物质。另外，生产事故和不恰当地处置工业废料也可排放高浓度的这些化合物。焚烧炉中燃尽后留下的灰中所含的挥发性二噁英易吸收进肺部。二噁英以非常低的浓度存在于土壤、空气和沉积物中，但是可借助于其持久的稳定性和亲脂性而通过食物链生物学浓缩。人类通常通过食品接触二噁英。二噁英通过食品与人接触的浓度被认为是约0.1-0.3pg/kg/天。
二噁英以及有关物质的亲脂性可提高它们在母乳中的浓度，并增加其在哺乳期从乳房脂肪组织中释放出来。因此，用母乳喂养的新生儿每日约接触10-20倍更高浓度的二噁英。先前对二噁英的阻断剂和解毒剂的研究发现，二噁英通过与芳烃受体结合而导致免疫抑制、内分泌紊乱、致癌作用和缺血性心脏病。
据Casper R.F.等(Mol.Phar.Macol.1999年10月：56(4)：784-790)报道，从红酒中提取的白藜芦醇具有防止二噁英毒性的作用，它可与二噁英化合物竞争结合芳烃受体。先前的研究表明白藜芦醇具有适当的药理学作用，而且是一种无毒的物质。在将来，经许多临床试验后，它将被开发成用于预防二噁英毒性的药物。然而，尽管这种化合物对已吸收到体内的二噁英具有竞争性抑制活性，但是它并不能抑制二噁英本身的连续吸收，也不能增强其排泄。这样，已吸收的二噁英会在组织尤其是肝脏或脂肪组织中蓄积。因此，它并不能完全地抑制二噁英毒性。
另外，蔗糖聚酯(olestra)(Lancet，1999年10月，9；354(9186)：1266-1267)已知作为对二噁英具有潜在的吸附和促排泄活性的物质，是一种多脂肪酸酯，其中的许多脂肪酸与蔗糖结合而使其不被胰酶降解。这种化合物对二噁英具有强烈的吸附活性，因此可有效地排泄经胃肠循环再吸收的二噁英，并且能阻断再吸收本身，因此在临床上很有用。然而，它们对亲脂性维生素例如维生素A、D、E、K和类胡萝卜素也具有吸附活性，其缺点是妨碍了这些必需维生素的吸收。
另外，活性炭也可用作二噁英的吸附剂，但是由于其类似于蔗糖聚酯的较低的吸附选择性，难于广泛使用。
被称作雌激素或类似活性物质抑制剂的他莫昔芬和Faslodex(ICI182，780，AstraZeneca)，已经被开发成乳腺癌的治疗剂，目前正处于临床试验中。它们可能在临床上用作二噁英的解毒。然而，目前用作乳腺癌治疗剂的他莫昔芬也有副作用(例如向子宫活性)，因此其在人体中用作降低环境激素危险的药物方面也有限制。在先前研究结果的基础上，降低乳腺癌治疗剂他莫昔芬副作用的Faslodex表现出优异的临床效力。但是它的活性仅限于抗癌活性，并且其抗雌激素活性基本上仅限于对雌激素受体的竞争性抑制作用。因此，它与UDCA明显不同，UDCA对体内负荷的雌激素以及雌激素活性类似物均具有消除活性。发明内容
本发明人发现，UDCA可通过增加胆汁流量而促进有毒物质的排泄，由此完成了本发明。因此，本发明的目的是提供用于预防或改善可能因环境激素所致的体重下降、生长抑制、血糖调节降低、癌症、免疫调节降低、生殖毒性和免疫毒性等的制剂。
本发明涉及用于降低或消除环境激素毒性的制剂，其中含有UDCA或其药用盐或酯作为活性成分。
UDCA可通过增加胆汁流量来促进有毒物质的排泄。它还可通过有效地清除二噁英来保护正常的肝细胞，其中与其它任何器官相比，二噁英更易在肝脏中蓄积。同时，它不抑制必需亲脂性物质的吸收，这样就可很有效地解毒有毒物质而不引起任何严重的副作用。
按照本发明，可能由于与多种环境激素接触而产生的任何毒性，均可通过使用UDCA或其等同物来改善或消除。在本发明中，UDCA的等同物包括在本领域中已知与UDCA具有相当的药理学效力的其任何药用盐或酯。其代表性实例为UDCA钠盐和UDCA牛磺酸结合物。
在此所用的术语“环境激素”包括卤化芳烃例如PCB和二噁英化合物，和内分泌破坏剂例如DDT、邻苯二甲酸酯、烷基酚、双酚A等。
本发明证实，通过向人为接触二噁英的实验动物施用UDCA，可使由二噁英所引起的多种毒性病症例如死亡、体重下降、生长抑制、血糖调节丧失、睾丸重量下降等得到抑制或使其正常化。另外，还发现通过施用UDCA可有效地抑制雌激素样物质所致的子宫肥大。基于上述研究，证实UDCA在体内具有抗雌激素效力。
在本发明中，对已施用了药理学有效量UDCA的小鼠经皮下注射TCDD，在给定期限后，通过测量死亡率的变化、血液学检验、摘取器官和免疫染色法，来评价UDCA对TCDD的解毒作用。然后，为了证实这种效力，将其与活性炭的结果比较，已知活性炭可通过抑制TCDD的体内吸收来阻断和清除通过肠肝循环连续表现出的TCDD毒性。
根据本发明，UDCA可使因不断在体内蓄积而显示出毒性的高度亲脂性物质例如DDT、邻苯二甲酸酯、烷基酚、双酚A等在胆汁中增溶，从而有效地排泄和解毒这些物质。因此，UDCA可使这些物质在体内的效力减至最小。
尽管本发明实验是针对TCDD(一种代表性的卤化芳烃)和双酚A进行的，但是本发明的范围不应限于这些特定物质，因为已知任何环境激素均通过共同的反应机制而表现出相似毒性。因此，采用UDCA进行的临床试验适用于解毒、抑制和预防任何其它环境激素所致的毒性。因此，无论环境激素的种类或数量，本发明均可有效地防止或治疗环境激素的毒性。
本发明制剂可包含本领域常规的可药用载体，并可通过与所述药用载体混合而制成片剂、散剂、颗粒剂、溶液剂、糖浆、胶囊等。另外，也可制成供肌肉或静脉内施用的可注射溶液剂。可经任何药学可接受的途径施用UDCA。
按照本发明，以能抑制环境激素所致毒性的有效量施用UDCA，优选每天以分剂量若干次施用10-2,000mg。附图简述
图1为施用溶剂对照组的细精管的光学显微照片(×200)。
图2为单独施用27.5μg/kg TCDD剂量组的细精管的光学显微照片(×200)。如该图所示，可观察到精子生成显著降低。由于细胞质的破裂，大多数细胞的形状不清楚。基底部分中的生殖内皮细胞显著溶解。在睾丸的细精管中，可见精原细胞从基底部分离。在基底部与腔部分之间存在较大空隙。在细精管中几乎观察不到正常的精子生成，同时可观察到仅有支持细胞而没有生殖细胞的细精管。
图3是27.5μg/kg TCDD与0.5重量％UDCA联用组的细精管的光学显微照片(×200)。如该图所示，可观察到正常的细精管，同时在细精管中心观察到一些受损的细精管和未成熟的精细胞。
图4是施用溶剂对照组的支持细胞和生殖细胞的电子显微镜照片(×3,000)。支持细胞与生殖细胞紧密接触，可观察到紧密连接。
图5为莱迪希氏细胞和细胞质细胞器的电子显微镜照片(×2,500)。较好地保持了莱迪希氏细胞和细胞器的正常形状。
图6是单独施用27.5μg/kg剂量TCDD组的莱迪希氏细胞的电子显微镜照片(×4,000)。可在莱迪希氏细胞的细胞质中观察到吞噬溶酶体。
图7是单独施用27.5μg/kg剂量TCDD组的支持细胞的电子显微镜照片(×4,000)。可在支持细胞的细胞质中观察到大的脂滴，还观察到细胞质空泡和吞噬溶酶体。
图8是施用溶剂对照组的精子头部的电子显微镜照片(×25,000)。可观察到正常发育的精子头。
图9是单独施用27.5μg/kg剂量TCDD组的精子头部的电子显微镜照片(×10,000)。可在支持细胞的细胞质空泡中频繁观察到精子头。
图10是27.5μg/kg TCDD与0.5重量％UDCA联用组的精子头部的电子显微镜照片(×8,000)。保持了精子头部的正常形状。实施本发明的最佳方式
通过以下实施例可更好地理解本发明。然而，本领域技术人员将很容易理解在此描述的特定材料和结果仅仅是示例性的，不应视为是对后附权利要求书中更为全面完整地定义的本发明范围的限制。
实施例1：UDCA对二噁英的解毒作用1.实验动物
购入雄性C57B1/6J小鼠(5周龄，平均体重为18-22g，在CRJ(日本Charles River)繁殖)，用作该实施例的实验动物。使这些小鼠对恒定饲养条件(即温度24±1℃、湿度60±10％和12小时的亮/暗周期)适应1周，然后进行实验。
供给实验动物Purina粉末饲料(购自Hae Eun Trade)，并随意进水。在试验期间，所有动物每周称重2次。2.试验物质的配制和施用
将2，3，7，8-四氯二苯并-p-二噁烯(TCDD，美国Chem.Services公司生产)溶于甲苯(气相色谱法分析纯度为95％或更高)，经氮气挥发获得粉末。将粉末溶于包含丙酮和玉米油(体积比1∶6)的混合溶剂中。将包含110、27.5和6.9μg/kg TCDD的所得溶液对小鼠进行皮下注射(5ml/体重)。将试验物质UDCA分别以0.5、0.25和0.125％(重量)的量掺入粉状饲料中。从施用TCDD之前(施用前)10天至施用TCDD后(施用后)60天间，用上述饲料喂养小鼠。3.取样和测试
在完成上述60天的实验后，实验动物禁食24小时，并用乙醚麻醉。然后，切开腹部，由腹部腔静脉收集血液。放血处死小鼠，摘取肝脏、肾、睾丸和附睾，并称重。仅单独保留睾丸并在光学和电子显微镜下观察。用离心机从血液中分离血清，供生物化学试验，分离的血清用自动血液生化分析仪Dimension(Dupont公司，美国)分析。将血液移至另一血液采集瓶中，然后用自动血细胞分析仪Celldyn(Abbott公司，美国)分析。4.对睾丸的光学显微镜检
将摘取的睾丸于10％中和的福尔马林缓冲剂中固定24小时，并用流动水洗涤。接着用乙醇脱水并用二甲苯清理，然后用石蜡包埋。用切片机(microm HM 440E)切成厚度为2-3μm的切片，然后用苏木精和曙红双重染色，在光学显微镜下观察。5.对睾丸的电子显微镜检
将摘取的睾丸用pH7.3磷酸盐缓冲液配制的预固定剂(2.5％戊二醛)浸透，并切成1mm3大小。于4℃，在预固定剂中预固定4小时，然后用相同的缓冲溶液洗涤。接着用1％四氧化锇(pH7.3)固定2小时，并用相同缓冲液洗涤。用乙醇脱水，并用环氧丙烷置换，然后包埋于环氧类树脂混合溶液中。使用超薄切片机(Reichert-Jung，Ultracut E)，将包埋的组织制成60-70nm厚的超薄切片，然后用乙酸双氧铀和柠檬酸铅双重染色，在透射电子显微镜(H-600，Hitachi公司，日本)下观察。6.确定Johnsen评分
为了评价精子发生的水平，于存在或缺乏按精子发生成熟排列的主细胞基础上，确定Johnsen评分(从10到1)。睾丸中Johnsen评分的基础如下：
10：理想的精子发生，有许多精子，胚胎上皮细胞的组织具有恒定厚度，和开放的腔
9：尽管有许多精子，但胚胎上皮细胞与基底膜明显分离并破裂，或失去腔
8：在切片中有5到小于10个精子
7：许多精细胞但没有精子
6：5到小于10个精细胞但无精子
5：几个或许多精母细胞但没有精子和精细胞
4：不到5个精母细胞没有精子和精细胞
3：仅存在精原细胞为生殖细胞
2：仅存在支持细胞没有任何生殖细胞
1：细精管切片中没有细胞7.统计学
所得结果用均值±标准偏差表示。采用单侧方差分析(ANOVA)，对急性毒性试验中体重、饲料和水摄取、生化数据、血液学数据和器官重量进行了统计分析(等分布)。若在ANOVA中表现出显著性，则在p＜0.05和p＜0.01水平上进行学生t-检验。8.结果(1)对死亡率和死亡时间的影响
表1.UDCA对单次皮下注射TCDD致小鼠死亡的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) 死亡小鼠数/ 给药小鼠数 死亡率 (％)死亡时间(天) (均值±SD) 0 溶剂对照 0/10 0 - 6.9 UDCA(0) UDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5) 0/10 0/10 0/10 0/10 0 0 0 0 - - - - 27.5 UDCA(0) UDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5) 3/10 0/10 0/10 0/10 30 0 0 0 55±5 - - - 110.0 UDCA(0) UDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5) 活性炭(0.5) 10/10 10/10 9/10 4/10 7/10 100 100 90 40 70 35±7 33±4 34±5 51±8 35±6
-施用6.9μg/kg剂量TCDD的组：无论是否与UDCA接触，没有动物死亡。
-施用27.5μg/kg剂量TCDD的组：未与UDCA接触，死亡率是30％和死亡时间是55±5天，即动物大约在试验结束时死亡。与之相比，与0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA接触的动物，不论剂量多大都未出现死亡，
-施用110μg/kg剂量TCDD的组：未与UDCA接触，所有动物在35±7天时死亡。与0.125％(重量)UDCA接触，所有动物在33±4天时死亡。与0.25％(重量)UDCA接触的动物中，有90％在34±5天时死亡。与0.5％(重量)UDCA接触的动物中，有40％在51±8天时死亡。比较起来，与0.5％(重量)活性炭接触的动物中，有70％在35±6天时死亡。(2)对体重变化的影响
表2.UDCA对单次皮下注射TCDD致体重变化的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) 给予TCDD后体重变化 0天 12 天 22 天 32 天 39 天 50 天 59 天 0 0 20.67± 0.29 22.99± 0.42 24.54± 0.49 25.86± 0.58 27.15± 0.62 28.73± 0.62 29.28± 0.76 6.9 0 UDCA 20.22± 0.31 19.77± 22.27± 0.37 21.95± 23.68± 0.36 23.16± 24.37± 0.48 24.15± 25.35± 0.66 25.21± 27.03± 1.35 26.62± 25.98± 1.44** 27.06± (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 0.21 20.13± 0.34 19.97± 0.28 0.28 22.18± 0.38 21.81± 0.32 0.32 23.81± 0.43 23.26± 0.37 0.38 24.21± 0.47 24.28± 0.50 0.46 25.69± 0.45 25.22± 0.49 0.56 27.15± 0.46 27.15± 0.49 0.60 27.74± 0.48 27.06± 0.56 27.5 0 UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 19.54± 0.22 19.80± 0.25 19.96± 0.30 19.08± 0.20 20.91± 0.52** 22.04± 0.26 22.22± 0.29 21.09± 0.32 19.82± 1.14** 23.59± 0.28 23.56± 0.37# 22.52± 0.33 18.54± 1.16** 24.17± 0.33## 24.34± 0.38## 23.33± 0.32## 17.80± 1.40** 25.48± 0.36## 25.38± 0.37## 24.07± 0.34## 16.74± 1.22** 26.63± 0.28## 26.94± 0.50## 25.31± 0.43## 15.72± 1.17** 26.93± 0.34## 27.27± 0.51## 24.52± 0.42## 110.0 0 UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 活性炭 (0.5) 19.36± 0.31 19.48± 0.29 19.65± 0.44 19.71± 0.14 20.10± 0.32 19.96± 0.32** 19.40± 0.40 20.64± 0.50 20.52± 0.32 21.06± 0.35 20.02± 0.47** 18.44± 0.87 19.69± 1.03 21.15± 0.82 20.46± 0.87 19.84± 0.55** 12.61 18.78± 1.14 20.76± 1.04 21.25± 1.20 17.62± 1.14** - 14.26 19.81± 1.37 20.54± 1.76 - - 14.85 18.19± 1.80 19.20± 0.77 - - 17.10 18.53± 1.59 18.28± 1.58
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
#：与单独施用二噁英组有显著差异，p＜0.05
##：与单独施用二噁英组有显著差异，p＜0.01
-：所有动物死亡
-施用6.9μg/kg剂量TCDD的组：未接触UDCA组与溶剂对照组之间没有统计学显著差异。但是，施用TCDD后59天体重显著地降低。与之相比，通过与0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA接触，可抑制这种统计学显著意义的体重下降。
-施用27.5μg/kg剂量TCDD的组：未接触UDCA，与溶剂对照组相比较，从施用TCDD后12天起，该组的体重连续且显著地降低。然而，通过与0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA接触，可抑制这种统计学显著意义的体重下降，并使体重保持在与溶剂对照组动物几乎相同的水平。
-施用110μg/kg剂量TCDD的组：未与UDCA接触，与溶剂对照组相比较，该组的体重从施用TCDD后12天起连续且显著地降低。此外，同未接触UDCA的组一样，与0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA接触组的体重连续降低。(3)饲料和水的摄取
表3.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠饲料摄取的影响剂量(μg/kg) 添加剂 (wt％) 给予TCDD后饲料摄取变化 10天 20天 30天 40天 50天 60天 - 溶剂 对照 4.61± 0.58 4.31± 0.58 4.44± 0.79 3.89± 0.44 3.90± 0.35 4.31± 0.95 6.9 - UDCA/0.125 UDCA/0.25 UDCA/0.5 4.76± 0.74 4.64± 0.73 4.39± 0.79 4.48± 0.67 4.33± 0.84 4.55± 0.44 4.86± 0.90 4.00± 1.11 4.97± 1.00 3.83± 0.36 3.78± 0.57 4.66± 0.67 4.97± 1.00 3.83± 0.36 3.78± 0.57 4.66± 0.67 3.51± 0.31 3.19± 0.13 3.18± 0.56 3.12± 0.40 3.28± 1.56 2.59± 0.23 2.90± 0.30 3.35± 1.56 27.5 - UDCA/0.125 UDCA/0.25 UDCA/0.5 3.86± 0.87 4.15± 0.64 4.07± 0.40 4.31± 1.49 3.17± 1.68 3.85± 0.43 3.41± 0.71 4.67± 1.13 2.37± 0.37** 3.99± 0.34## 3.59± 0.38## 3.99± 0.36## 1.90± 0.27** 3.72± 0.21## 3.32± 0.39## 3.49± 0.57## 1.50± 0.16** 2.90± 0.98## 3.16± 0.24## 3.18± 0.55## 1.58± 0.32** 2.96± 0.29## 3.10± 0.77## 3.17± 0.49## 110.0 - UDCA/0.125 UDCA/0.25 4.19± 0.96 3.77± 0.43 3.65± 3.21± 1.13 3.64± 1.16 3.09± 3.88± 0.96 2.94± 0.64 3.23± 2.23± 0.56 1.99± 0.58 3.06± - - - - - - UDCA/0.5 活性炭/ 0.33 3.87± 0.57 3.64± 0.44 3.77± 0.62 3.53± 0.55 3.39± 0.24 3.12± 1.89 2.72± 0.72 2.54± 2.19± 0.22 1.69± 2.05± 0.62 3.76± 0.5 0.52 0.24 0.47 0.33 0.33 1.79
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
-：所有动物死亡
如以上表3所示，动物对饲料的摄取随着接触TCDD浓度的提高而显著降低。
-施用6.9μg/kg剂量TCDD的组：接触UDCA组与未接触UDCA组之间没有统计学显著差异。
-施用27.5μg/kg剂量TCDD的组：从施用TCDD后30天起，未接触UDCA组与接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA组之间可观察到统计学显著差异。即通过施用UDCA而抑制了饲料摄取的降低。
-施用110μg/kg剂量TCDD的组：接触UDCA组与未接触UDCA组之间的饲料摄取没有统计学显著差异。
表4.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠水摄取的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) 给予TCDD后水摄取变化 10天 20天 30天 40天 50天 60天 - 溶剂 对照 4.39± 0.46 4.36± 0.33 4.82± 0.13 5.36± 0.13 6.25± 1.70 7.07± 0.58 6.9 - UDCA/0.125 UDCA/0.25 UDCA/0.5 4.23± 0.52 4.54± 0.71 4.27± 1.16 4.12± 0.94 4.08± 0.72 3.75± 0.90 3.83± 1.04 3.80± 0.70 4.70± 0.42 4.00± 0.00 4.00± 0.00 4.00± 0.63 4.30± 0.42** 4.00± 0.00 3.60± 0.57 3.78± 0.31 4.72± 0.39** 4.06± 1.34 4.28± 1.02 4.35± 1.08 4.88± 0.17** 4.64± 0.51 4.69± 0.43 5.06± 0.70 27.5 - UDCA/0.125 3.38± 0.75 3.67± 3.58± 0.14* 3.92± 3.10± 0.14** 4.30± 3.10± 0.14** 4.20± 2.89± 0.63** 4.44± 3.19± 0.21** 4.81± UDCA/0.25 1.10 4.04± 1.13 3.92± 0.42## 4.00± 0.28## 4.00± 0.79## 4.44± 0.26## 4.81± UDCA/0.5 0.75 3.91± 0.95 0.63 4.35± 0.98 0.00## 4.44± 0.00## 0.00## 4.44± 0.00## 0.79## 4.41± 1.00## 0.26## 4.88± 0.33## 110.0 - UDCA/0.125 UDCA/0.25 UDCA/0.5 炭/ 2.5 3.27± 0.78 4.03± 1.21 3.79± 1.06 3.75± 0.50 4.21± 1.04 4.00± 0.66 4.07± 0.64 3.83± 0.14 3.42± 0.80 4.64± 0.47 4.70± 0.42 3.33± 0.94 4.67± 0.94 4.20± 0.28 4.70± 0.42 - - 4.14± 0.20 3.50± 0.71 3.30± 0.990 - - - 3.14± 0.59 7.67± 1.41 - - - 3.32± 0.33 7.04± 0.44
*：与溶剂对照有显著差异，p＜0.05
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
-：所有动物死亡
如以上表4所示，动物的水摄取随着接触TCDD浓度的提高而显著降低。
-施用6.9μg/kg剂量TCDD的组：接触UDCA组与未接触UDCA组之间没有统计学显著差异。
-施用27.5μg/kg剂量TCDD组：从施用TCDD后30天起，未接触UDCA组与接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA组之间可观察到统计学显著差异。即通过施用UDCA而抑制了水摄取的降低。
-施用110μg/kg剂量TCDD组：未接触UDCA组与接触UDCA组之间水摄取没有统计学显著差异。(4)生化研究
为了获得血清中的生化数据，测定了血清中葡萄糖(GLU)、GOT、GPT、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)和碱性磷酸酶(ALP)的水平，结果如下所示。
表5.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠血液生化变化的影响剂量(μg/kg) 添加剂 (wt％) GLU (mg/dl) GOT (IU/l) GPT (IU/l) TG (mg/dl) HDL-C (mg/dl) LDL-C (mg/dl) ALP (IU/l) - 溶剂 对照 140.38± 19.48 52.00± 3.82 21.25± 5.87 81.38± 11.67 52.88± 4.91 35.75± 6.45 66.88± 9.95 6.9 - UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 96.00± 15.15** 128.00± 27.26# 104.60± 24.87 125.50± 14.98## 55.16± 6.65 49.80± 2.74 57.30± 4.83 47.11± 1.9 21.66± 5.39 23.50± 8.32 24.00± 6.39 18.78± 5.07 76.14± 14.03 79.56± 1129 75.90± 11.55 84.20± 7.66 39.29± 9.38** 45.67± 2.74 46.30± 5.08 44.83± 2.04 24.43± 11.81* 14.56± 6.28# 21.20± 5.25 28.33± 4.63 69.67± 8.80 66.78± 7.21 72.05± 6.63 85.24± 10.28 27.5 - UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 28.20± 8.23** 55.22± 9.34## 82.44± 13.04## 64.22± 9.35## 230.40± 72.90** 75.22± 6.38## 58.67± 5.54## 96.67± 31.63## 70.4± 23.46** 54.67± 23.28 42.11± 22.05# 45.38± 21.74# 92.67± 16.79 98.78± 17.14 97.00± 17.68 133.33± 13.17## 21.80± 6.76** 34.78± 4.35## 37.44± 3.64 47.00± 7.66## 43.80± 14.99 2.40± 1.14## 4.29± 4.03## 15.33 3.35## 65.4± 19.05 75.14± 18.33 79.63± 6.07 80.57± 14.52
*：与溶剂对照有显著差异，p＜0.05
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
#：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.05
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
GLU的显著降低与TCDD施用剂量正比例。在每一TCDD施用剂量下，与0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA接触均可显著抑制血清中葡萄糖水平的降低。与溶剂对照组比较，在施用27.5μg/kg剂量TCDD的组中，GOT显著增加，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著抑制这种增加。然而，与溶剂对照组相比，施用6.9μg/kg剂量TCDD组的GOT未显著增加。与溶剂对照组比较，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的GPT显著地增加，而接触0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种增加。HDL-C的显著降低与TCDD施用剂量成比例，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种降低。与溶剂对照组比较，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的LDL-C未显著地降低，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可引起显著差异。与溶剂对照组相比，施用6.9μg/kg剂量TCDD组的LDLC显著地下降，而接触0.125％(重量)UDCA可引起显著差异。TG和ALP没有显著变化。(5)血液学研究
为了进行血液学研究，测定了白细胞(WBC)、嗜中性粒细胞(NEU)、淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MONO)、嗜酸性粒细胞(EOS)、嗜碱性粒细胞(BASO)和红血球(RBC)计数，和血红蛋白浓度(HGB)、血细胞比容(HCT)、平均细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)、红细胞分布宽度(RDW)和血小板计数(PLT)，结果如下。
表6.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠血液学变化的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) WBC (103) NEU (103) LYM (103) MONO (103) EOS (103) BASO (103) RBC (106) - 溶剂 对照 6.29± 2.06 0.36± 0.11 5.72± 1.92 0.06± 0.05 0.02± 0.04 0.14± 0.09 9.74± 0.24 6.9 - UDCA (0.125) UDCA 5.94± 1.85 5.55± 1.91 5.68± 0.40± 0.24 0.32± 0.13 0.28± 4.27± 2.05 5.06± 1.70 5.17± 0.10± 0.07 0.05± 0.06 0.04± 0.01± 0.01 0.004± 0.005 0.003± 0.21± 0.12 0.12± 0.07 0.09± 9.29± 0.85 9.66± 0.24 9.42± (0.25) UDCA (0.5) 1.50 5.76± 1.13 0.07 0.34± 0.11 1.49 5.12± 1.13 0.02 0.04± 0.03 0.002 0.002± 0.002 0.04 0.10± 0.06 0.37 9.64± 0.26 27.5 - UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 4.29± 1.05 3.69± 0.72 3.78± 1.19 3.71± 0.99 2.58± 0.97** 0.34± 0.10## 0.48± 0.09## 0.59± 0.23## 1.43± 0.60** 2.06± 0.81 2.99± 1.06## 3.04± 0.77## 0.07± 0.04 0.02± 0.01 0.05± 0.03 0.05± 0.04 0.018± 0.028 0.002± 0.003 0.008± 0.007 0.005± 0.003 0.17± 0.07 0.09± 0.04 0.18± 0.07 0.14± 0.07 9.10± 0.71 9.61± 0.29 9.48± 0.29 9.57± 0.25 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) HGB (g/dl) HCT (％) MCV (fl)MCH(pg) MCHC (g/dl) RDW (％) PLT (103) - 溶剂 对照 14.60± 0.35 46.00± 1.32 47.20± 0.8114.98±0.20 31.73± 0.56 20.27± 1.00 1073.80± 69.74 6.9 - UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 13.65± 1.34* 14.35± 0.37 14.16± 0.44 14.47± 0.29 12.90± 43.12± 5.04 44.61± 1.14 44.77± 1.57 45.35± 0.93 39.12± 46.33± 1.97 46.18± 0.55 47.56± 0.81 47.08± 0.63 42.97±14.70±0.4114.87±0.2215.04±0.2514.98±0.1914.17± 31.76± 0.70 32.18± 0.43 31.63± 0.58 31.87± 0.41 33.02± 20.38± 1.21 20.17± 1.07 19.73± 0.91 20.19± 0.72 20.97± 1140.88± 133.39 1117.7± 88.65 1141.22± 67.79 1112.89± 76.53 1473.17± 27.5 - UDCA (0.125) UDCA (0.25) UDCA (0.5) 1.00** 14.64± 0.67## 14.23± 0.55## 14.80± 0.78## 3.25** 43.77± 1.37## 43.65± 1.24## 44.49± 1.63## 0.56** 45.51± 0.35## 46.09± 0.42## 46.46± 0.86##0.40**15.32±0.39##15.01±0.44##15.46±0.59## 0.86** 33.65± 1.04 32.58± 0.73 33.23± 1.04 2.27 20.08± 1.20 19.99± 1.08 20.44± 0.82 110.35** 1172.44± 80.58## 1069.70± 128.48## 1068.14± 84.28##
*：与溶剂对照有显著差异，p＜0.05
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
施用TCDD后，WBC、MON0、EOS、BASO、RBC和RDW没有显著变化。与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的NEU显著地增加，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种增加。与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的LYM显著地降低，而接触0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种降低。与溶剂对照组相比较，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的HGB显著地降低，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种降低。与溶剂对照组相比较，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的HCT显著地降低，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种降低。与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的MCV显著地降低，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种降低。与溶剂对照组相比，MCH显著降低，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种降低。与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的MCHC显著地降低，但是接触UDCA不能抑制这种降低。与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的PLT显著地增加，而接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种增加。与溶剂对照组相比，施用6.9μg/kg剂量TCDD组的PLT没有显著变化。(6)测量器官重量
对器官即肝脏、肾、睾丸和附睾进行称重，结果如下所示。
表7.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠体重和肝脏重量以及肝脏相对重量变化的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) 体重 (g) 肝 重量(g) 相对重量 (％) - 溶剂对照 26.88±2.11 0.966±0.049 3.605±0.181 6.9 - UDCA/0.125 UDCA/0.25 UDCA/0.5 22.96±3.97* 24.12±1.83 24.72±1.39 24.19±1.38 0.935±0.173 0.980±0.073 0.954±0.057 1.028±0.073 4.092±0.403** 4.069±0.167 3.870±0.289 4.258±0.327 27.5 - 16.18±2.51** 0.734±0.151** 4.506±0.304** UDCA/0.125 UDCA/0.25 UDCA/0.5 24.58±1.07## 24.62±1.44## 22.15±1.14## 1.187±0.086## 1.088±0.030## 1.057±0.069## 4.832±0.327 4.428±0.198 4.773±0.250 110.0 UDCA/0.125 UDCA/0.25 炭/2.5 15.93 18.53±3.79 17.36±4.99 0.8153 1.379±0.327 1.066±0.319 5.118 8.600±3.276 6.145±0.880
*：与溶剂对照有显著差异，p＜0.05
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的肝脏重量显著地降低，其相对重量显著地增加。接触0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA可显著地抑制这种重量的下降，但是不能抑制相对重量的增加。与溶剂对照组相比，施用6.9μg/kg剂量TCDD组中仅相对重量显著地增加。接触UDCA不能抑制这种增加。
表8.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠肾重量以及肾相对重量变化的影响 剂量 (μg/kg)添加剂 (wt％) 左肾 右肾 重量(g) 相对重量 (％) 重量(g) 相对重量 (％) -溶剂对照 0.133±0.013 0.495±0.053 0.130±0.012 0.485±0.046 6.9 -UDCA(0.125)UDCA(0.25)UDCA(0.5) 0.115±0.018 0.116±0.014 0.119±0.009 0.121±0.007 0.508±0.050 0.480±0.050 0.484±0.036 0.500±0.025 0.117±0.022 0.123±0.008 0.123±0.013 0.125±0.009 0.513±0.066 0.511±0.049 0.500±0.048 0.516±0.043 27.5 -UDCA(0.125)UDCA(0.25)UDCA(0.5) 0.101±0.012** 0.127±0.012## 0.125±0.010## 0.119±0.011## 0.625±0.037** 0.517±0.056## 0.508±0.038## 0.539±0.040## 0.092±0.012** 0.120±0.013## 0.125±0.007## 0.119±0.009## 0.571±0.030** 0.489±0.055## 0.508±0.029## 0.538±0.045## 110.0UDCA(0.25)UDCA(0.5)活性炭(0.5) 0.1069 0.121±0.022 0.113±0.031 0.6711 0.704±0.199 0.652±0.017 0.0963 0.113±0.010 0.107±0.025 0.6045 0.659±0.133 0.622±0.017
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg TCDD组的肾重量显著地降低，其相对重量显著地增加。接触UDCA不能抑制这种变化。与溶剂对照组相比，施用6.9μg/kg TCDD组没有观察显著变化。
表9.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠睾丸重量以及其相对重量变化的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) 左睾丸 右睾丸 重量(g) 相对重量 (％) 重量(g) 相对重量 (％) - 溶剂 对照 0.076±0.006 0.283±0.024 0.075±0.005 0.281±0.023 6.9 - UDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5) 0.067±0.011* 0.072±0.006 0.071±0.008 0.075±0.010 0.296±0.030 0.297±0.020 0.287±0.036 0.310±0.050 0.65±0.010** 0.073±0.007# 0.072±0.008 0.074±0.007# 0.285±0.035 0.304±0.020 0.290±0.030 0.307±0.031 27.5 - UDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5) 0.058±0.014** 0.070±0.005# 0.072±0.007# 0.067±0.011 0.356±0.051** 0.284±0.025## 0.293±0.032## 0.304±0.040## 0.058±0.015** 0.070±0.003# 0.071±0.007 0.067±0.007 0.352±0.059** 0.285±0.016## 0.290±0.030# 0.301±0.030# 110.0 UDCA(0.25) UDCA(0.5) 活性炭(0.5) 0.343 0.057±0.019 0.057±0.014 0.2153 0.316±0.074 0.332±0.037 0.363 0.057±0.019 0.056±0.016 0.2279 0.314±0.067 0.326±0.22
*：与溶剂对照有显著差异，p＜0.05
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
#：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.05
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg剂量TCDD组的睾丸重量显著地降低，其相对重量显著地增加。接触UDCA可抑制这种变化，但抑制程度取决于UDCA浓度。与对照组相比，施用6.9μg/kg TCDD组仅重量显著地降低。与0.125和0.5％(重量)UDCA接触可抑制这种降低。
表10.UDCA对单次皮下注射TCDD的小鼠附睾重量以及其相对重量变化的影响 剂量 (μg/kg) 添加剂 (wt％) 左附睾 右附睾 重量(g) 相对重量 (％) 重量(g) 相对重量 (％) - 溶剂 对照0.029±0.002 0.107±0.007 0.029±0.004 0.108±0.012 6.9 - UTDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5)0.023±0.005**0.029±0.003##0.030±0.003##0.029±0.003## 0.101±0.012 0.121±0.011## 0.121±0.011## 0.121±0.010## 0.025±0.007 0.029±0.003 0.029±0.002 0.027±0.004 0.110±0.027 0.121±0.014 0.115±0.009 0.114±0.015 27.5 - UDCA(0.125) UDCA(0.25) UDCA(0.5)0.021±0.006**0.027±0.003#0.029±0.003##0.025±0.004 0.124±0.024* 0.112±0.017 0.120±0.018 0.115±0.015 0.021±0.006** 0.026±0.003 0.030±0.005## 0.029±0.011 0.129±0.027* 0.105±0.015# 0.124±0.020 0.132±0.041 110.0 UDCA(0.25) UDCA(0.5) 活性炭(0.5)0.01950.021±0.0070.022±0.007 0.122 0.114±0.025 0.128±0.017 0.0128 0.024±0.009 0.030±0.011 0.080 0.127±0.024 0.152±0.015
*：与溶剂对照有显著差异，p＜0.05
**：与溶剂对照组有显著差异，p＜0.01
#：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.05
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
与溶剂对照组相比，施用27.5μg/kg TCDD组的附睾重量显著地降低，其相对重量显著地增加。接触UDCA可抑制这种变化，但抑制程度取决于UDCA浓度。与溶剂对照组相比，施用6.9μg/kg TCDD组中仅左附睾的重量显著地降低，接触UDCA可抑制这种降低。与单独施用TCDD的组相比，其相对重量显著地增加。(7)光学显微镜下的组织病理学研究
在单独施用TCDD的组中，包括精原细胞在内的大多数生殖细胞表现出分化降低。由于生殖上皮细胞的溶解，可观察到基底膜周围的精原细胞分离，和相邻细胞之间的空隙扩大。还发现基底部分与腔之间的空隙(邻近部分的内部空间)扩大。此外，还观察到精母细胞和精细胞的生长停滞。在某些组中，可观察到坏死病变区域以及仅有支持细胞的细精管。上述结果表明TCDD可引起非常严重的变化。与之相比，在接触UDCA的组中，细精管的形状与溶剂对照组相似，有时候精子发生还反而增加(参见附图1、2和3)。(8)电子显微镜下细胞微观结构的变化
在单独施用TCDD的组中，可观察到莱迪希氏细胞中细胞质空泡的形成、线粒体的肿胀和变性、以及平滑内质网的减少和变形。还观察到吞噬溶酶体和脂粒的增加以及核凝聚。在细精管中，特征性发现基底膜与生殖细胞分离，还观察到生殖细胞中不规则形状的核以及染色质凝聚。此外，还发现细胞质细胞器的破裂和丢失。与之相比，在施用UDCA的组中，几乎所有情况下均保留了与溶剂对照组相似的细胞形态和微观结构，有时候还可观察到发育良好的细胞微观结构(参见附图4-10)。(9)测定Johnsen评分以定量组织病理学发现结果
表11.睾丸组织的Johnsen评分 TCDD剂量(μg/kg) 饲料中的添加剂(wt％) 评分 0.0 溶剂对照 9.22±0.07 6.9 UDCA(0.000) UDCA(0.125) UDCA(0.250) UDCA(0.500) 8.06±0.09** 8.7±0.09## 8.84±0.10## 9.10±0.08## 27.5 UDCA(0.000) UDCA(0.125) UDCA(0.250) UDCA(0.500) 7.42±0.11** 8.40±0.10## 8.42±0.08## 8.81±0.07##
**：与溶剂对照有显著差异，p＜0.01
##：与单独施用TCDD组有显著差异，p＜0.01
如以上表11所示，与溶剂对照组相比，在单独施用6.9μg/kg TCDD和27.5μg/kg TCDD的各组中，可观察到统计学显著差异(p＜0.01)。在单独施用6.9μg/kg TCDD组与分别联用0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA和6.9μg/kg TCDD的组之间，可观察到统计学显著差异(p＜0.01)。另外，在单独施用27.5μg/kg TCDD组与分别联用0.125、0.25和0.5％(重量)UDCA和27.5μg/kg TCDD的组之间，可观察统计学显著差异(p＜0.01)。因此，UDCA对TCDD毒性的阻断效应得到了证实。此外，对于施用6.9μg/kg和27.5μg/kg TCDD的两组，这种效应均是剂量依赖性增加的。
实施例2：双酚A对子宫增生的影响1.实验动物和给药方案
购入切除卵巢的雌性B6C3F1小鼠(5周龄，平均体重为18-22g，在CRJ繁殖)。使这些小鼠对恒定饲养条件(即恒温24±1℃、湿度60±10％和12小时的亮/暗周期)适应1周，然后进行实验。供给动物购自Purina的固体饲料，随意进水。适应期后，将溶于玉米油中的试验物质经皮下注射一天一次(共4天)。用乙醇配制在此所用试验物质双酚A和UDCA的贮备液。将溶于0.2ml玉米油中的2mg双酚A单独或与UDCA联合给予小鼠(每天一次)。UDCA的施用剂量是0.2或2.0mg，以玉米油作为溶剂对照。2.测量子宫重量
每天一次观察实验动物的临床毒性表现，在完成实验后摘取子宫并称重。3.统计分析
结果用均值±标准偏差表示。进行AVOVA，以评价给药组的平均值分布。若在ANOVA中有显著性，则在p＜0.05和p＜0.01水平上进行学生t-检验。4.结果
表12.UDCA对双酚A所致子宫重量变化的影响 给药 试验动物数 子宫平均重量±SD 对照(玉米油) 10 7.03±1.25 双酚A(2mg/天) 10 13.5±1.75** 双酚A(2mg/天)+ UDCA(0.2mg/天) 10 11.74±1.36 双酚A(2mg/天)+ UDCA(2mg/天) 10 9.16±1.55## UDCA(2mg/天) 10 6.96±1.34
**：与对照组(给予玉米油)有显著差异，p＜0.01
##：与施用2mg/天剂量双酚A组有显著差异，p＜0.01
如以上表12所示，每天施用一次2 mg双酚A可使子宫重量增加约2倍。与0.2mg UDCA联用没有产生任何显著变化，但是联用2.0mg的UDCA将施用双酚A所增加的子宫重量降低至施用玉米油的对照水平。
总之，证实了外源性雌激素--双酚A在体内具有与雌激素相同的生理活性，其代表性的例证是引起子宫增生(可导致子宫重量增加)。UDCA对这种效应表现出了拮抗活性。
制剂1：颗粒剂
UDCA 10wt％
乳糖 65wt％
淀粉 19wt％
羟丙纤维素 5wt％
硬脂酸镁 1wt％
混合上述成分，将整个混合物用30wt％乙醇为粘合剂捏和。然后，采用常规方法对捏和后的混合物制粒，然后干燥。按1g/包的量将颗粒剂填充到包装中，得到各含100mg干燥UDCA的颗粒剂。
制剂2：片剂
采用常规方法，将上述制剂1中配制的颗粒剂压制成片剂(500mg/片)，得到每片包含50mg UDCA的片剂。
制剂3：糖浆剂
UDCA 0.6wt％
蔗糖 50wt％
羧甲基纤维素钠 0.05wt％
羟苯甲酸甲酯 0.08wt％
香料 0.1wt％
纯净水 适量
将羧甲基纤维素钠加到49.17重量份的纯净水中，然后溶胀。将蔗糖和羟苯甲酸甲酯加到所得混合物中，并加温溶解。向所得溶液中加入UDCA，然后搅拌得均匀溶液。加入香料混合。将所得溶液调至最终体积100m1，然后过滤。按33ml/瓶的量将滤液填入瓶中，得到各含200mg UDCA的糖浆。
制剂4：注射剂
UDCA 2wt％
乙醇 2wt％
聚乙二醇 0.5wt％
氯化钠 适量
加入2M氢氧化钠溶液，将上述成分调至pH6.5。然后，加入注射用蒸馏水，使总体积为100ml。工业实用性
根据本发明，UDCA具有优异的抑制环境激素所致毒性的效力，因而可用来预防或治疗因与环境激素接触所致的任何疾病，例如体重下降、生长抑制、低血糖、免疫抑制、生殖毒性、免疫毒性等。
此外，UDCA可通过对具有雌激素样活性的外源物质的拮抗活性而抑制内分泌破坏剂。